芦荟提取物C诱生小鼠肿瘤坏死因子的研究

目的 :研究芦荟提取物C(aloeextractC ,AE C)在BALB C鼠体内诱导产生肿瘤坏死因子 (tu mornecrosisfactor ,TNF)。方法 :连续 5d给小鼠注射AE C ,第 6天取血分离血清 ,应用结晶紫染色法测其TNF活性 ,观察经AE C诱生的鼠血清对多种瘤细胞的杀伤作用 ,杀伤作用的持续时间和对温度的敏感性及血清不同稀释度的杀伤效果。结果 :AE C能诱导小鼠产生TNF α ,与对照组比较作用明显 (P <0 0 1) ;并且对多种靶细胞有显著的杀伤作用 ;TNF活性 2 4h达高峰 ,第 4天下降明显 ,5d接近正常水平 ;血清标本稀释至 2 0 0倍时 ,仍具有较强的杀伤活性 ;诱生后的TNF有一定的温度敏感性。结论 :芦荟提取物C有诱生BALB C鼠产生肿瘤坏死因子的作用     

芦荟提取物C对小鼠移植性肿瘤及免疫功能的影响

目的：研究芦荟提取物C（Aloe Extract C，AE－C）对小鼠移植性肿瘤（实体瘤）的抑制作用和其对脾细胞IL－2分泌活性及NK细胞杀伤活性的影响。方法：建立AE－C的提取和主要成分含量测定法。用S180和MethA移植瘤动物模型为研究对象，经腹腔注射AE－C后，观察肿瘤组织的病理学改变并检测其脾细胞IL－2分泌活性和NK细胞杀伤活性。结果：AE－C能促使肿瘤组织大面积出血坏死及炎细胞浸润，按瘤组织坏死和炎细胞胞浸润分级积分法记录，AE－C治疗组明显高于对照组和5－FU治疗组（P＜0．01）。脾细胞IL－2分泌活性S180移植瘤AE－C治疗组与其对照组比较升高42．6％，MethA移植瘤AE－C治疗组与其对照组比较升高62．6％。NK细胞杀伤尖性AE－C治疗组较对照组有明显的升高（P＜0．01）。5－FU治疗组小鼠免疫功能明显受到抑制。结论：AE－C有抑制肿瘤和调节机体免疫功能的作用。     

芦荟提取物C对小鼠移植性肿瘤及免疫功能的影响

目的 :研究芦荟提取物C(AloeExtractC ,AE C)对小鼠移植性肿瘤 (实体瘤 )的抑制作用和其对脾细胞IL 2分泌活性及NK细胞杀伤活性的影响。方法 :建立AE C的提取和主要成分含量测定法。用S180和MethA移植瘤动物模型为研究对象 ,经腹腔注射AE C后 ,观察肿瘤组织的病理学改变并检测其脾细胞IL 2分泌活性和NK细胞杀伤活性。结果 :AE C能促使肿瘤组织大面积出血坏死及炎细胞浸润 ,按瘤组织坏死和炎细胞胞浸润分级积分法记录 ,AE C治疗组明显高于对照组和 5 FU治疗组 (P <0 .0 1)。脾细胞IL 2分泌活性S180 移植瘤AE C治疗组与其对照组比较升高 4 2 .6 % ,MethA移植瘤AE C治疗组与其对照组比较升高 6 2 .6 %。NK细胞杀伤活性AE C治疗组较对照组有明显的升高 (P <0 .0 1)。 5 FU治疗组小鼠免疫功能明显受到抑制。结论 :AE C有抑制肿瘤和调节机体免疫功能的作用。     

重组人肿瘤坏死因子(rHuTNF)单独或与干扰素(IFNs)联合治疗异种移植肿瘤

肿瘤坏死因子(TNF)是单核细胞系产生的一种蛋白质,在体外具有杀伤或抑制肺瘤细胞的活性,在体内能诱导实体性小鼠移植肿瘤细胞坏死。文献报导,TNF 的这种体外杀伤活性对转化细胞具有选择性,并且一些代谢抑制物如放线菌素 D 或干扰素(IFNs)能显著增强 TNF 的活性。TNF 这种对体内移植性动物肿瘤、对体外培养肿瘤细胞的杀伤作用以及它与干扰素(IFNs)的协同作用,使人们对它作为一种抗肿瘤药物的研究颇感兴趣。     

吐温80对温热抑瘤作用的增强效应——小鼠黑色素瘤实验研究

 目的: 研究吐温80合并41℃温热的抗肿瘤效应。方法: 接种B16黑色素瘤细胞至BALB/C小鼠不同部位建立荷瘤鼠模型, 观察荷瘤鼠死亡率、肿瘤生长曲线、血清肿瘤坏死因子和唾液酸的变化以及经血行转移的肺部瘤灶数的变化。结果: 吐温80合并41℃温热能明显地抑制小鼠黑色素瘤的生长, 延长荷瘤小鼠平均存活时间, 使肺部的转移瘤灶数大大降低;但吐温80和温热单独作用时均无此效果。荷瘤小鼠血清肿瘤坏死因子(sTNF)活性和唾液酸水平均明显高于正常BALB/C小鼠, 吐温80合并41℃、100分钟温热可显著降低sTFN活性, 并引起血清唾液酸水平的进一步升高。处理后第10周, 随着肿瘤的缩小, 唾液酸水平有明显的下降。结论: 吐温80能使温热在低于临界温度时即可发挥有效的抗肿瘤效应, 明显提高温热治疗的疗效和安全性, 是一较理想的温热合并药物。血清TNF和唾液酸的变化提示协同效应可能与肿瘤抗原的暴露和机体免疫抗肿瘤作用的活化亦有关。     

TCRγ独特型DNA疫苗诱导特异性免疫反应的实验研究

目的：观察TCRγ独特型DNA疫苗诱导BALB／c小鼠的抗人类Jurkat淋巴肿瘤免疫反应的情况。方法：碱裂解法大量提取质粒，制备DNA疫苗。选用16只BALB／c小鼠随机分为pcDNA3组、pcDNA3／TCRγV1组，双侧股四头肌内注射疫苗免疫，于第0、2、4周各免疫1次，共3次。每次免疫前及免疫开始后至第8周取鼠血，用间接免疫荧光法检测小鼠血清中抗体生成情况；RT-PCR法检测重组质粒在小鼠肌肉中的mRNA表达。结果：pcDNA3／TCRγV1组小鼠血清中全部产生了特异性抗独特型抗体，抗体滴度在第4周开始增高，第6周时达到高峰(1：160)。在pcDNA3／TCRγV1组小鼠中用RT—PCR法检测到了重组质粒在肌肉中的mRNA表达。结论：TCRγV1独特型DNA疫苗可以诱导小鼠产生特异性抗淋巴瘤细胞独特型抗体。     

BALB／C小鼠黑色素瘤肿瘤模型的建立及对荷瘤鼠的影响

目的建立小鼠不同部位黑色素瘤模型，为不同研究目的提供合适的动物肿瘤模型。方法接种B16小鼠黑色素瘤细胞于BALB／C小鼠足部、腹腔和尾静脉，建立移植瘤模型和肺部转移瘤模型。观察B16实体瘤的形态学特点，接种细胞数与肿瘤生成的关系，肿瘤生长对小鼠生存时间、血清肿瘤坏死因子（sTNF）和唾液酸（SA）的影响。结果足部接种5X10瘤细胞后10天，肿瘤进入对数生长，成瘤率近100％；腹腔接种瘤细胞数大于5000个／只，成瘤率与接种细胞数成正比；接种3X10细胞／只，10天后在小鼠腹壁和肠系膜可见散在黑色素瘤结节，荷瘤鼠sTNF和SA水平明显高于正常小鼠，且与肿瘤的大小和数量成正比，小鼠平均存活59天；尾静脉接种后3周，肺部可见大小不等转移瘤灶，两肺平均瘤灶数可达192.11士92。结论B16黑色素瘤细胞株在BALB／C小白鼠具有很高的成瘤率和转移特性，且较C57／B16小黑鼠模型具有方便、稳定和观察容易等优点，是一较理想的模型。     

肿瘤坏死因子与恶性疾病

自从Garswell等首次发现肿瘤坏死因子(Tumor Necrosis Factor,TNF)以来,TNF与临床恶性疾病的关系越来越受到人们重视。TNF分为α和β两亚型,TNF_a主要由激活的单核巨噬细胞产生,TNF9主要由T细胞和B细胞产生,前者曾称为恶液质素,后者为淋巴毒素;在氨基酸水平上,两者有30％同源的,可以与相同的TNF受体结合。TNF除了具有杀伤肿瘤细胞效应外,也是机体炎症和免疫应答的重要介质。另外,TNF能诱生其它细胞因子,间接调节免疫活性细胞而增加机体免疫防护能力,也能为其它细胞因子所诱生。TNF具有多种生物学活性,它与恶性疾病发病的关系以及临床应用愈来愈受到重视,本文就这两方面研究现状作一综述。     

山仙颗粒对Lewis肺癌瘤株转染中TNF-α和uPA的影响

目的研究山仙颗粒对Lewis肺癌瘤株转染的C57BL／6小鼠体内肿瘤坏死因子α（TNF—α）和尿激酶型纤溶酶原激活物（uPA）的影响及意义。方法40只小鼠适应性喂养1周后，随机取出10只作为空白对照组（A组）；其余的30只小鼠每只右腋皮下接种瘤细胞悬液0.2ml，再随机分成3组，每组10只，分别设为荷瘤对照组（B组）；金龙胶囊组（C组）；山仙颗粒组（D组）；4组动物分笼喂养，于接种24h后开始给药，A、B组每只小鼠每天用生理盐水0.2ml灌胃；C组用金龙胶囊悬液0.2ml灌胃；D组用山仙颗粒混悬液0．2ml灌胃，共灌胃21天。21天后脱颈椎处死小鼠，检测TNF—α与uPA水平。结果C、D组出瘤时间、移植瘤重、肺内转移灶个数、去瘤去肺后体重、血清TNF—α与血浆uPA水平与B组小鼠比较均有显著性差异（P〈0.05），C与D组肺转移灶个数比较有显著性差异（P〈0.01），其他均无显著性差异（P〉0．05）。结论山仙颗粒能使血清TNF—α水平升高和血浆uPA水平下降，从而显著抑制C57BL／6小鼠Lewis肺癌的生长和自发性肺转移。     

紫杉醇对小鼠巨噬细胞产生TNF—α的影响

目的 研究紫杉醇对小鼠巨噬细胞产生TNF－α的影响。方法 按常规方法收集纯化8－12周龄BALB／C雄性小鼠腹腔巨噬细胞，用RPMI1640培养基培养，按所用药物紫杉醇不同浓度和（或）干扰素γ进行分组并设对照组。TNF－α测定用ELISA试剂盒。结果 一定浓度的紫杉醇能够诱导巨噬细胞产生TNF－α，且随浓度的增加而增加；紫杉醇联合干扰素γ时，诱导作用明显增加。结论 紫杉醇的抗肿瘤作用与活化巨噬细胞，促进巨噬细胞产生细胞毒分子有关，若与干扰素γ联合更能发挥其免疫化学治疗作用。     

树突状细胞与肿瘤细胞融合后诱导T细胞介导的抗肿瘤效应

目的：研究树突状细胞（DC）与肿瘤细胞（SP2／0）融合作为肿瘤疫苗免疫小鼠后抑制肿瘤生长的作用及其机理。方法：BALB／C小鼠DC与SP2／0细胞体外融合,形成的杂交瘤分2次免疫接种同基因小鼠皮下,然后用SP2／0细胞攻击免疫的小鼠,观察肿瘤的生长情况及免疫小鼠脾细胞特异性CTL功能。结果：DC－SP2／0杂交瘤接种小鼠能产生明显的抗肿瘤效应,其拮抗SP2／0细胞攻击的能力明显强于用灭活的死SP2／0细胞与DC混合,和单用死SP2／0细胞免疫的小鼠及用生理盐水的对照组小鼠。DC－SP2／0杂交瘤免疫接种小鼠的脾细胞特异性CTL杀伤活性强于其它各组小鼠。结论：DC与肿瘤细胞融合后作为肿瘤疫苗接种可在体内产生明显的抗肿瘤免疫,其机理主要是特异性CTL的作用。     

转基因CTL的构建及其生物学特性的研究

目的：构建TNF—α基因转染的CTL，并对其生物学特性进行研究。方法：用重组逆转录病毒载体介导将TNF—α基因导入CTL，构建转基因CTL。检测其增殖能力，TNF—α分泌量、细胞表型，观察其对BEL7404的体内、外抗肿瘤活性。结果：转基因CTL的形态、增殖活性及细胞表型与CTL相似。但具有高效表达TNF—α的能力，72h表达量为410pg／mL。转基因CTL对BEL7404具有较高的体外杀伤作用，其杀伤活性与作用时间及效靶细胞比正向相关。转基因CTL对荷瘤裸鼠过继免疫后，移植瘤的生成延迟、生长减慢，成瘤率降低。结论：转基因CTL的构建为肿瘤过继免疫治疗提供新型的效应细胞，具有进一步研究的价值。     

瘤体内/瘤周注射TNF重组腺病毒和/或IL-2重组腺病毒对肝癌小鼠的治疗作用研究

选择两种具有协同免疫调节作用的细胞因子进行联合基因治疗是提高肿瘤细胞因子基因治疗的有效途径之一.目前对IL-2/TNF-α联合基因方案,特别是瘤体内注射途径的抗肿瘤研究尚未见报道.IL-2与TNF-α具有协同作用.因此我们分别将携带TNF-α基因和IL-2基因的腺病毒(Ad-TNF,Ad-IL-2)联合或直接注射于BALB/c小鼠肝癌内,观察其抗瘤效果,并探讨其抗肿瘤免疫机制.结果表明:1.TNF治疗组脾细胞NK、LAK、CTL活性及Mφ杀伤活性明显高于对照组,诱生的细胞因子包括IL-2、GM-CSF、IFN-γ、TNF和IL-     

视网膜色素上皮细胞异种间移植后玻璃体内肿瘤坏死因子活性变化的研究

目的：探讨视网膜色素上皮(reti—nal pigment epithelium，RPE)细胞异种间移植后排斥反应所致玻璃体内肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor，TNF)的活性变化。方法：将人眼的RPE细胞移植于不同组兔眼的视网膜下腔，行异种眼RPE细胞移植手术，术后3周内定期检测各组玻璃体内TNF的活性变化，并观察环孢菌素A(Cy—elosporin—A，CsA)对其的影响。结果：异种间移植组家兔玻璃体中TNF活性明显高于对照组，而注入CsA组家兔玻璃体中TNF活性变化不大。结论：RPE细胞移植后的玻璃体中TNF活性变化与排斥反应有关。     

瘤内/瘤周注射巨噬细胞集落刺激因子或(和)干扰素γ基因转染的巨噬细胞对肿瘤的治疗作用

目的观察巨噬细胞集落刺激因子（ＭＣＳＦ）和干扰素γ（ＩＦＮγ）基因单独或联合转染的巨噬细胞（ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ，Ｍ）对局部黑色素瘤的治疗效果及相关免疫机理。方法荷瘤小鼠经基因转染的巨噬细胞治疗后，观察其长期存活期并检测其体内抗肿瘤免疫功能。用４小时５１Ｃｒ释放法检测荷瘤小鼠脾细胞自然杀伤细胞（ＮＫ）、细胞毒Ｔ淋巴细胞（ＣＴＬ）活性，间接ＭＴＴ法检测荷瘤小鼠腹腔巨噬细胞的杀伤活性，常规方法检测脾细胞诱导上清中肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）、白细胞介素２（ＩＬ２）、γ干扰素（ＩＦＮγ）活性，局部肿瘤经治疗后行常规病理分析。结果经ＩＦＮγ基因及联合基因转染的巨噬细胞治疗后的荷瘤小鼠有２５％能长期存活，体外诱导的ＣＴＬ和小鼠腹腔巨噬细胞杀伤活性显著增强，脾细胞经诱导产生的细胞因子有不同程度的增加，与对照组相比差别显著。常规病理显示，ＭＣＳＦ和ＩＦＮγ联合基因转染的巨噬细胞治疗的小鼠肿瘤局部有大量的淋巴细胞浸润。结论ＭＣＳＦ和ＩＦＮγ基因转染的巨噬细胞瘤内瘤周注射对肿瘤有较好的治疗效果，其机制除了与巨噬细胞在局部直接接触杀伤瘤细胞有关外，宿主抗肿瘤免疫功能的增强亦起了重要的作用     

重组人MUC1-MBP融合蛋白的抗肿瘤作用

目的： 研究重组人MUC1MBP的抗肿瘤作用。方法：用重组人MUC1MBP皮下注射途径免疫健康鼠，采用MTT法测定小鼠抗MUC1特异的CTL活性；通过免疫鼠成瘤及荷瘤鼠治疗实验检测其对肿瘤的预防和治疗作用。结果：MUC1MBP免疫鼠CTL对MCF7及Lewis肺癌细胞的杀伤率分别为(47.7±4.3) %和(67.5±6.5) %；免疫鼠成瘤结果免疫组小鼠共长5个肿瘤，存活时间明显延长，对照组共长51个，平均生存时间23 d；荷瘤鼠治疗结果显示治疗组小鼠肿瘤平均体积386 mm3，对照组小鼠肿瘤平均体积4 000 mm3。结论：重组人MUC1MBP具有明显的治疗、预防肿瘤和抑制肿瘤转移的作用,有希望发展成人类抗肿瘤疫苗。     

IL—2基因转染的肿瘤细胞增强机体免疫功能的实验研究

目的：探讨小鼠接种腺病毒介导的IL－2基因转移的CT26小鼠结肠腺癌细胞后机体免疫功能的变化（包括CTL、LAK细胞、NK细胞、巨噬细胞的杀伤活性变化）。方法：体外将腺病毒介导的小鼠IL－2基因转染CT26细胞（CT26-mIL-2)，然后将CT26－mIL2细胞接种于小鼠皮下。采用4h乳酸脱氢酸释放法检测荷瘤小鼠CTL、LAK、NK细胞的杀伤活性，MTT法检测巨噬细胞的杀伤活性。结果：接种CT26－mIL－2后第14d，小鼠脾细胞NK活性和诱导后的LAK活性和CTL活性均显著高于对照组（P＜0．01）；小鼠腹腔巨噬细胞数量显著增加，杀伤活性显著增强（P＜0．01）。结论：IL－2基因转染的肿瘤细胞能诱导机体的特异性和非特异性免疫功能参与机体的抗肿瘤作用。     

温热化疗对胃癌细胞的杀伤作用

目的：评价温热化疗对人胃癌细胞的体外杀伤作用。方法：6株人胃癌细胞（AGS，MKN45，SGC7901，NCI-N87，SNU—1和SNU-16）和临床病例来源胃癌细胞，处理分常温对照、温热、常温化疗和温热化疗4组；MTT评价细胞增殖和细胞毒作用；光镜动态观察细胞基本形态变化；透射电镜和荧光染色定性观察细胞死亡形式；流式细胞术定量分析凋亡和坏死比例。结果：根据MTT和光镜观察，温热和化疗对抑制胃癌细胞增殖具协同作用；联合温热处理能够增强胃癌细胞对CDDP的敏感性，温热化疗抑制胃癌细胞增殖和杀伤胃癌细胞的药物浓度远低于常温化疗；透射电镜和荧光染色显示温热化疗杀伤AGS和SNU—1细胞包括诱导凋亡和坏死两种形式，流式定量分析显示诱导凋亡是主要形式。结论：温热和化疗抑制胃癌细胞增殖具协同作用，温热增强胃癌细胞对化疗的敏感性；温热化疗杀伤胃癌细胞包括诱导凋亡和坏死两种形式，其中凋亡是主要形式。     

肿瘤坏死因子

肿瘤坏死因子(Tumor necrosis factor TNF)是Craswell提出。他们在先后接受卡介苗和细菌内毒素的小鼠中,发现其血清有使肿瘤出血坏死的作用。后来Matthews(1978)在家兔中也观察到TNF活性。1985年东京第十四次化疗国际会议认为TNF是抗癌药研究方面的重大成果     

BALB/C小鼠免疫耐受模型建立及移植人体肺癌初步研究

目的：获得一种能移植人体肿瘤并存活的动物模型。方法：将郑氏植物蛋白（ZPP）0.1ml皮下注射BALB／C小鼠，诱导其免疫耐受性移植人体肺肿瘤组织。结果：移植肺肿瘤在模型动物体内存活，成功率可达65％（26／40），而对照组小鼠体内移植瘤全部被排斥，不能存活。结论：ZPP可引起小鼠对人体肺肿瘤细胞免疫耐受，使移植瘤成活。