地塞米松对顺铂诱导卵巢癌细胞株凋亡的拮抗作用

目的:探讨地塞米松(DEX)对顺铂(DDP)诱导卵巢癌细胞株凋亡的影响。方法:应用MTT比色法检测细胞活性,利用免疫组织化学法检测凋亡相关基因bcl-xl和caspase3的表达。结果:0.001~1μM浓度范围内的地塞米松对顺铂诱导人卵巢癌细胞株HO-8910的凋亡有抑制作用(P<0.05),提高DDP浓度能拮抗该效应;并能上调抗凋亡蛋白bcl-xl的表达,降低caspase3的表达活性(P<0.05)。结论:顺铂治疗卵巢癌前用地塞米松进行预处理后可拮抗顺铂的抗肿瘤作用,bcl-xl抗凋亡通路参与该作用。     

DIM联合顺铂诱导人卵巢癌细胞SK-OV-3凋亡机制的研究

目的:探讨顺铂(cis-diamminedichlorop latinum DDP)和3,3-二吲哚基甲烷(3,3-diindolylmethane,DIM)联合应用诱导人卵巢癌细胞SK-OV-3凋亡的机制。方法:采用免疫组化技术观察细胞内caspase3蛋白的表达,利用RT-PCR和western blot检测bcl-2、caspase3和caspase9基因和蛋白表达变化。结果:细胞培养及免疫化学染色可见各给药组与对照组比较均有不同程度抑SK-OV-3细胞增殖并诱导其凋亡作用;RT-PCR结果显示各给药组均能使caspase3和caspase9基因表达上调,bcl-2表达下调;westernblot结果表明各给药组与对照组相比caspase3和caspase9蛋白表达上调,bcl-2表达下调,且0.4mg.L-1DDP+60μmol.L-1DIM联合应用与10倍剂量DDP(4mg/L-1)单独应用效果相同。结论:DIM与DDP均可抑制PC-3细胞增殖并诱导其凋亡;其细胞凋亡机制可能与上调caspase3、caspase9基因表达,下调bcl-2表达有关;DIM与DDP联合抗瘤具有明显的减毒增效作用。     

三氧化二砷联合化疗诱导肝癌HepG2细胞凋亡作用机制研究

目的探讨三氧化二砷（As2O3）联合化疗诱导肝癌HepG2细胞凋亡的作用机制。方法体外培养人肝癌HepG2细胞株，分别给予As2O3和顺铂单独或联合处理，用细胞免疫组化酶法检测Bax、Bcl-2、Fas蛋白的表达情况；采用流式细胞仪观察人肝癌HepG2细胞株的细胞周期变化，细胞DNA含量的分布，测定不同作用时间后端粒酶活性的变化情况。结果As2O3，组肝癌HepG2细胞的Bax和Fas基因的表达明显增加，Bcl-2基因的表达明显降低；在DNA直方图上可见在G1期细胞前凋亡细胞呈现典型特征性的亚二倍体凋亡峰，使S期细胞减少，将细胞生长周期阻滞于G2/M期，联合用药组比单独用药组作用明显增强。结论As2O3及联合化疗能诱导肝癌细胞凋亡，其主要机制与增强Bax、Fas的表达，下调Bcl-2的表达，将细胞生长周期阻滞于G2/M期，阻止细胞的有丝分裂，抑制端粒酶活性有关。     

拟线粒体促凋亡多肽N7在人卵巢癌细胞对顺铂增敏作用中的研究

目的:探讨拟线粒体促凋亡多肽N7(SmacN7)能否增加人卵巢癌细胞对顺铂的敏感性及其与Caspase-3表达的关系。方法:通过细胞增殖抑制率测定及平板克隆形成试验研究顺铂单独应用组(A组),50μg/L SmacN7+顺铂组(B组)、100μg/L SmacN7+顺铂组(C组)及200μg/L SmacN7+顺铂组(D组)的细胞增殖抑制率和细胞克隆形成率;采用细胞免疫化学法检测上述分组中Caspase-3的表达。结果:单独应用顺铂时,24、48、72 h的增殖抑制率分别为(6.12±1.16)%、(13.47±1.15)%及(28.91±1.08)%。SmacN7(50～200μg/L)联合顺铂应用时,随着SmacN7浓度的增加或作用时间的延长,细胞增殖抑制率明显增加,药物作用24、48、72 h后增殖抑制率分别为(9.34±1.78)%～(49.81±2.11)%、(25.24±2.11)%～(65.54±2.27)%、(44.45±1.21)%～(82.36±2.19)%。肿瘤细胞存活率明显降低,分别为(25.13±0.52)%、(21.17±0.55)%、(18.23±0.54)%和(15.27±0.56)%。SmacN7联合顺铂应用后,Caspase-3的表达比单独应用顺铂明显增加(P=0.000)。结论:SmacN7能够明显增加人卵巢癌细胞对顺铂的敏感性。     

三氧化二砷联合化疗诱导肝癌HepG2细胞凋亡作用机制研究

目的探讨三氧化二砷(As2O3)联合化疗诱导肝癌HepG2细胞凋亡的作用机制。方法体外培养人肝癌HepG2细胞株,分别给予As2O3和顺铂单独或联合处理,用细胞免疫组化酶法检测Bax、Bcl-2、Fas蛋白的表达情况;采用流式细胞仪观察人肝癌HepG2细胞株的细胞周期变化,细胞DNA含量的分布,测定不同作用时间后端粒酶活性的变化情况。结果As2O3组肝癌HepG2细胞的Bax和Fas基因的表达明显增加,Bcl-2基因的表达明显降低;在DNA直方图上可见在G1期细胞前凋亡细胞呈现典型特征性的亚二倍体凋亡峰,使S期细胞减少,将细胞生长周期阻滞于G2/M期,联合用药组比单独用药组作用明显增强。结论As2O3及联合化疗能诱导肝癌细胞凋亡,其主要机制与增强Bax、Fas的表达,下调Bcl-2的表达,将细胞生长周期阻滞于G2/M期,阻止细胞的有丝分裂,抑制端粒酶活性有关。     

米非司酮合用顺铂对卵巢癌耐药细胞株COC1/DDP增殖及凋亡的影响

目的:探讨米非司酮合用顺铂对卵巢癌耐药细胞株COC1/DDP增殖及凋亡率的影响。方法:采用MTT法观察不同浓度的米非司酮合用顺铂对COC1/DDP细胞株增殖活力的影响,采用流式细胞术观察不同浓度的米非司酮合用顺铂对COC1/DDP细胞株凋亡率的影响。结果:对照组和顺铂组比较,米非司酮加顺铂组细胞增殖活力OD值明显下降,细胞凋亡率明显升高,且随着米非司酮浓度的升高变化愈加显著(P<0.05和P<0.01)。结论:米非司酮联合顺铂对COC1/DDP细胞增殖活力均具有显著抑制作用,米非司酮可提高顺铂化疗的敏感性,其增敏作用与促进细胞凋亡有关,且与米非司酮的浓度呈剂量依赖关系。     

人参皂苷Rh2联合顺铂对人卵巢癌SKOV-3细胞凋亡的影响

目的:探讨人参皂苷Rh2联合顺铂对于人卵巢癌细胞株SKOV-3的影响。方法:采用MTT比色法检测人参皂苷Rh2与DDP联合应用对SKOV-3细胞株增殖的影响,利用流式细胞仪分析细胞周期及凋亡情况,并计算细胞平均凋亡率,利用Western-blot技术观察SKOV-3细胞内HER-2蛋白的表达。结果:①Rh2与DDP联合应用分别作用于SKOV-3卵巢癌细胞株,单独应用DDP 350μmol/L和600μmol/L IC50降为DDP 250μmol/L和300μmol/L。②流式细胞术检测显示,DDP+Rh2组凋亡率在SKOV-3细胞系中为32.2%,SKOV-3细胞被阻止于G1期,在SKOV-3 DDP细胞中为12.5%,均显著高于仅应用DDP组细胞(P<0.05),SKOV-3 DDP细胞亦被阻止于G1期。③Western blotting结果显示,SKOV-3细胞中DDP+Rh2组HER-2蛋白表达较对照组、DDP组、Rh2组显著降低(P<0.05)。结论:人参皂苷Rh2与DDP联合应用对SKOV-3卵巢癌细胞株有促凋亡作用,并改善卵巢癌细胞株SKOV-3 DDP对DDP的敏感性。     

薏苡仁油对卵巢癌SKOV3细胞凋亡的作用及机制研究

目的 研究薏苡仁油对卵巢癌SKOV3细胞凋亡的作用及其机制.方法 采用不同浓度薏苡仁油作用于卵巢癌SKOV3细胞,MTT法观察薏苡仁油对SKOV3细胞存活率的影响.采用Hoechst33342/PI染色、AO/EB染色、DNA Ladder检测、流式细胞仪检测薏苡仁油对SKOV3细胞凋亡的影响.Western blotting检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、Capase 3、8、9的表达情况.结果 与对照组相比,400μg/mL和500μg/mL薏苡仁油浓度可在处理后24 h、48 h和72 h显著降低SKOV3细胞存活率(t值4.635～5.231,P<0.05),其作用随着时间的延长而增加.薏苡仁油低浓度50μg/m L、100μg/m L、200μg/m L作用于卵巢癌SKOV3细胞48h诱导凋亡效果较好.薏苡仁油作用于SKOV3细胞48h后,Hoechst33342/PI染色、AO/EB染色均可见典型的凋亡小体.不同浓度50μg/mL、100μg/mL、200μg/mL组薏苡仁油作用于SKOV3细胞48h后,与对照组相比较,细胞凋亡均显著增多(t值分别为2.536、3.012、4.908,P<0.05),其中200μg/m L组细胞总凋亡率高达(27.10±5.42)％.与对照组相比较,薏苡仁油浓度50μg/mL、100μg/mL、200μg/mL作用于SKOV3细胞48h后,Bax、Caspase 3、Caspase 8、Caspase 9蛋白表达均显著增高(t值2.436～5.709,P<0.05),Bcl-2蛋白表达显著下降(t值2.357～4.304,P<0.05).结论 薏苡仁油可诱导卵巢癌细胞株SKOV3凋亡,其机制可能与下调抑制凋亡蛋白Bcl-2、上调促凋亡蛋白Bax、Caspase 3、8、9的表达水平有关.薏苡仁油有可能抑制卵巢癌细胞的扩散、转移.     

吲哚胺2,3-双加氧酶在卵巢癌细胞耐药中的作用

目的 探讨吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)在卵巢癌顺铂耐药中的作用.方法 选用两种卵巢癌细胞株SKOV3和SK-OV3/DDP,采用MTT法检测细胞增殖抑制率,Transwell小室法检测肿瘤细胞侵袭能力,流式细胞术检测细胞周期变化.结果 MTI法检测发现,SKOV3细胞半数抑制浓度IC50为12 μM,在测试浓度范围...     

干扰Livin对HEC-1-A细胞化疗增敏作用的研究

目的 研究Livin在提高人子宫内膜癌HEC-1-A细胞对顺铂化疗敏感性方面的作用及可能机制。方法 将Livin的小分子干扰RNA(Livin-siRNA)转染HEC-1-A细胞,qRT-PCR及Western blot法检测转染siRNA后Livin mRNA及蛋白表达情况。CCK-8法检测转染siRNA并暴露于顺铂后,细胞增殖能力的变化。Western blot法检测干扰Livin后,相关蛋白Caspase-3、Caspase-7 、Caspase-9、Smac的表达情况。结果 抑制Livin表达并暴露于顺铂后,细胞增殖能力明显减弱(P<0.01),Caspase-3、Caspase-7 、Caspase-9、Smac蛋白的相对表达量显著增加(P<0.01)。结论 干扰Livin可显著抑制顺铂诱导下的HEC-1-A细胞的增殖能力,其化疗增敏作用是通过解除对Caspase的抑制和减少Smac降解两条途径来实现的。     

TRAIL联合紫杉醇对卵巢癌细胞凋亡影响的研究

目的:探讨TRAIL联合紫杉醇对卵巢癌3AO细胞株凋亡的影响,以进一步研究其诱导细胞凋亡的原理。方法:应用MTT法检测TRAIL和紫杉醇作用组的抑制率,并以流式细胞仪检测各组凋亡率。结果:亚毒剂量的TRAIL、紫杉醇及联合作用组致卵巢癌3AO细胞凋亡率分别为17.6%、16.1%、64.3%。单独应用组与联合应用组之间存在显著性差异(P<0.01)。结论:TRAIL在诱导卵巢癌细胞凋亡的同时,也显著提高了其对紫杉醇(taxol)的化疗敏感性。     

顺铂作用下卵巢癌敏感细胞A2780与耐药细胞A2780/DDP凋亡与自噬水平的变化及意义

目的:通过分析自噬对卵巢癌细胞顺铂敏感性的影响,探讨自噬与卵巢癌顺铂耐药性的关系,为卵巢癌治疗提供依据。方法:培养卵巢癌细胞株A2780和A2780/DDP,进行卵巢癌细胞系A2780及A2780/DDP顺铂敏感性的测定,流式细胞仪测定顺铂作用下A2780和A2780/DDP细胞的凋亡率;将10μM顺铂作用48h的A2780细胞和40μM顺铂作用48h的A2780/DDP细胞经处理,采用Western blot法检测Beclin1蛋白的表达;电镜下观察10μM顺铂作用48h的A2780细胞和40μM顺铂作用48h的A2780/DDP细胞经固定染色处理的自噬细胞活性。结果:顺铂主要通过诱导凋亡对卵巢癌耐药细胞A2780/DDP及敏感细胞A2780发挥细胞毒效应;顺铂作用下,耐药细胞的自噬活性明显增强,而敏感细胞自噬活性无明显增强。结论:顺铂诱导耐药卵巢癌细胞发生凋亡的能力较亲代敏感细胞降低,在其发生过程中,反应性自噬活性增强可能与其顺铂耐药性的形成有关,提示对肿瘤细胞的自噬水平进行监测及调控可能为逆转卵巢癌铂耐药提供新的思路。     

黄芩提取物联合顺铂对人卵巢癌细胞株SKOV-3凋亡的研究

目的:探讨黄芩提取物(Scutellaria Baicalensis)与顺铂(cisplatin,DDP)联合应用对卵巢癌细胞系SKOV-3增殖及凋亡的影响。方法:采用MTT比色法检测S.Baicalensis与DDP联合应用对SKOV-3细胞增殖的影响,吖啶橙染色观察诱导细胞凋亡情况,流式细胞仪分析细胞周期及凋亡并计算细胞平均凋亡率,Westernblot技术观察细胞内p53、ERK1/2、p-STAT3的表达。结果:300μg/mlS.Baicalensis联合5μg/ml DDP给药:①48h后可使肿瘤细胞抑制率由单独应用DDP的15.8%提高到37.3%;②吖啶橙荧光染色可见细胞呈现明显凋亡形态,其凋亡率与10μg/ml DDP组相当;③流式细胞检测结果显示,可使细胞凋亡率从15.1%提高到42.2%(P<0.05);④westernblot结果显示,p53、ERK1/2、p-STAT3表达较5μg/ml DDP组单独给药组降低(P<0.05)。结论:S.Baicalensis与DDP联合应用增强对卵巢癌细胞株SKOV-3的致凋亡效应,联合应用可达到减毒增效的效果。     

Wortmannin与ABT-737诱导卵巢癌细胞凋亡的协同作用研究

目的:探讨磷酸肌醇3-激酶(PI3K)抑制剂wortmannin单用以及与Bcl-2蛋白抑制剂ABT-737联合应用对人卵巢癌细胞系存活率和凋亡率的影响。方法:①CCK-8法分别测定Wortmannin、ABT-737单独以及联合应用对人卵巢癌细胞ES-2和SKVO-3生长的抑制率,并计算其IC50。②Annexin-V/PI法流式细胞仪检测细胞凋亡率以及对细胞周期的影响,Western blot法检测相关蛋白的表达水平,分别测定Wortmannin、ABT-737单独以及联合应用对人卵巢癌细胞ES-2和SKVO3凋亡的影响。结果:①Wortmannin和ABT-737单独作用对ES-2细胞株的IC50分别为14.12μM和31.31μM,两药联合应用的IC50为8.15μM;Wortmannin和ABT-737单独作用对SKVO-3细胞的IC50分别为16.72μM和37.56μM,联合用药的IC50为9.25μM。②0.2μM的Wortmannin作用48 h后ES-2和SKVO-3细胞的凋亡率分别为9.9%和8.7%,5μM的ABT-737作用48 h后ES-2和SKVO-3细胞凋亡率分别为10.2%和9.1%,两者联合应用对两种细胞的凋亡率分别为45.0%和53.0%,组间比较差异有统计学意义(P<0.01)。③Wortmannin和ABT-737联合应用可以明显的增加cleaved-caspase-3、细胞色素C以cleaved-PARP的表达量,Wortmannin和ABT-737联合应用可以明显的对人卵巢癌ES-2和SKVO-3细胞周期阻滞在G0/G1期。结论:Wortmannin和ABT-737能够通过线粒体途径抑制卵巢癌细胞株的生长并诱导其凋亡,且Wortmannin和ABT-737联合应用具有协同作用。     

槲皮素联合顺铂诱导宫颈HeLa细胞凋亡的实验研究

目的探讨槲皮素对HeLa细胞增殖和凋亡的影响以及联合顺铂的化疗效应。方法分别用不同浓度槲皮素、顺铂及不同浓度槲皮素联合顺铂处理HeLa细胞24 h;采用MTT法检测药物对HeLa细胞增殖的影响;流式细胞仪和Hochest 33258检测药物作用后的细胞凋亡情况;荧光显微镜观察用PI荧光标记的细胞核形态学变化。结果槲皮素能抑制HeLa细胞增殖,且呈剂量依赖性;槲皮素联合顺铂与相同浓度槲皮素单用及顺铂单用处理HeLa细胞相比,前者对HeLa细胞的抑制作用更显著(p<0.01);不同浓度槲皮素与顺铂联合处理HeLa细胞与槲皮素单用及顺铂单用相比,前者显著提高了HeLa细胞的凋亡率(p<0.01)。结论槲皮素联合顺铂比槲皮素单用及顺铂单用对HeLa细胞的抑制作用更显著,因而产生更强的抗肿瘤效果。     

芹菜素对人胃癌细胞的生长抑制和凋亡诱导作用的研究

目的:了解芹菜素对人胃癌SGC-7901细胞的生长抑制和诱导凋亡作用。方法:MTT法检测芹菜素在体外对人胃癌SGC-7901细胞的生长抑制作用;流式细胞仪检测细胞的周期分布;DAPI荧光染色和DNA Ladder实验检测细胞凋亡;Western blotting方法检测了凋亡相关信号分子caspase-3和Bcl-2的蛋白表达情况。结果:芹菜素在体外可以明显抑制人胃癌细胞的生长,并诱导细胞发生凋亡。Western blotting实验结果表明,芹菜素可以诱导SGC-7901细胞中凋亡相关信号分子caspase-3活化片段的产生并抑制Bcl-2蛋白的表达。结论:芹菜素在体外可以抑制人胃癌SGC-7901细胞的生长并诱导细胞发生凋亡,且对于caspase-3的活化及Bcl-2蛋白表达的下调作用可能是其诱导细胞凋亡的机制之一。     

β-紫罗兰酮诱导SGC-7901细胞凋亡作用

目的探讨β-紫罗兰酮对胃腺癌SGC-7901细胞的凋亡作用及其可能机制。方法采用细胞生长曲线、核分裂、Hoechst33258荧光染色、透射电镜和WesternBlot方法,观察了β-紫罗兰酮对SGC-7901细胞的生长抑制作用和细胞凋亡诱导情况。结果β-紫罗兰酮对SGC-7901细胞生长和有丝分裂有明显地抑制作用,EC50值为(174.93±12.79)μmol/L;并且可诱导SGC-7901细胞产生凋亡,激活Caspase-3片断和降低ERK1/2蛋白的表达,呈剂量-反应关系。结论β-紫罗兰酮可诱导SGC-7901细胞产生凋亡,不仅作用凋亡途经,而且还影响MAPK途经。     

苦参碱诱导NB4细胞凋亡作用及机制

目的 探讨苦参碱(Mat)诱导急性早幼粒白血病细胞株NB4细胞凋亡作用及机制。方法 不同剂量Mat(0.25、0.50、1.00 mg/mL)作用于NB4细胞(24、48、72 h),噻唑蓝法(MTT) 检测细胞增殖抑制率;Hoechst 33258染色观测细胞形态学变化;流式细胞术(FCM)检测细胞周期,Annexin V-FITC/PI双标记法测定细胞凋亡率;分光光度法检测NB4细胞内caspase-3和caspase-8活性。结果 与对照组比较,Mat可明显抑制NB4细胞增殖,诱导细胞凋亡,呈时间和剂量效应(P < 0.05);细胞形态学观察可见明显的细胞凋亡特征;与对照组比较,0.50、1.00 mg/mL Mat组G₀/G₁期细胞比例(分别为57.91%、83.00%)明显增加,S期比例(分别为40.95%、16.10%)减少;与对照组比较,0.50、1.00 mg/mL Mat组NB4细胞内caspase-3酶活性[分别为(77.41±4.01)、(111.78±4.05)]、1.00 mg/mL Mat组NB4细胞内caspase-8酶活性(44.98±7.63)明显增强(P < 0.05)。结论 Mat可抑制NB4细胞增殖并诱导细胞凋亡,其机制可能与G₀/G₁期细胞阻滞、抑制DNA合成并激活细胞内caspase-3、caspase-8凋亡途径有关。     

2-甲氧基雌二醇诱导卵巢癌细胞凋亡的研究

目的探讨2-甲氧基雌二醇（2-ME）诱导卵巢癌细胞系OVCAR-3细胞和卵巢癌原代培养细胞凋亡的作用及其机制。方法以2-ME作用于卵巢癌OVCAR-3细胞和原代培养细胞,采用MTT法检测细胞存活率、Annexin V—FITC／PI双染流式细胞术检测细胞凋亡,JC-1染色流式细胞术检测细胞线粒体膜电位（△ψm）,比色测定试剂盒检测caspase-3和caspase-8活性。结果与对照组相比,OVCAR-3细胞2-ME组存活率显著下降（100％vs70．5％）,凋亡率明显增加（5．3％VS40．5％）;卵巢癌原代培养细胞2-ME组存活率显著下降（100％vs61．8％）,凋亡率明显增加（5．4％VS36．9％）;此外,2-ME明显降低卵巢癌OVCAR-3细胞和原代培养细胞的AtOm,提高caspase-3和caspase-8活性。而预先以Z—VAD阻断caspase能逆转2-ME的效应。结论2-ME通过凋亡信号通路的内源性和外源性途径,诱导卵巢癌细胞凋亡。     

蛇床子素联合肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体诱导人卵巢癌细胞凋亡的研究进展

卵巢恶性肿瘤是女性生殖器常见的恶性肿瘤之一,据中国癌症统计数据报道,2015年中国卵巢恶性肿瘤发病率为52.1/10万,死亡率为22.5/10万[1]。在卵巢恶性肿瘤中上皮性癌最常见,约占70%[2]。因卵巢位于盆腔深部,早期病变不易发现,约75%患者出现症状时已是晚期。