细胞因子与胶原基因调控

胶原的异常合成和沉积是体内组织器官发生纤维化的病理基础，多种细胞因子具有调控胶原基因表达的作用，这其中既有正性调控作用，又有负性调控作用。本文对近些年来有关这些细胞因子的作用及作用机制进行了综述     

提高免疫组织化学表达肿瘤基因效果的方法

用免疫组化方法检测肿瘤基因 ,阳性率偏低的主要因素是ＤＮＡ双股螺旋没解开 ,碱基对不能外露。根据原位杂交技术 ,用盐酸水解蛋白质 ,高温使ＤＮＡ解链 ,快速冷却让自由单链成线团结构 (变性 ) ,再用氢氧化铝钾修复和聚集抗原 ,造就了抗原与抗体在分子表面互补性结合的环境。结果显示免疫组化法表达的肿瘤基因有较高的阳性率 ,特别是阳性物质如ＥＲ、ＰＲ受体 ,ｐ16、ｐ5 3蛋白 ,Ｋｉ6 7,ｃ ｍｙｃ等能准确的表达于细胞核。1　材料与方法1 1　材料　　 80例乳腺癌 ,5 0例肝癌 ,4 0例大肠癌 ,均属我院手术切除标本 ,常规 10 %福尔马林液固定…     

端粒酶基因在人肿瘤组织中的表达

目的 探讨端粒酶基因表达与肿瘤恶性表型及其与端粒酶活性的关系;评价端粒酶基因表达检测在肿瘤诊断中的价值。方法 用原位杂交的方法检测端粒酶基因ｈＴＲ和ｈＴＲＴ在７８例人觉癌组织,２０例癌前病变,２８例良性病变中的表达及分布情况。结果 ７８例癌中ｈＴＲ阳性率为８５％（６６／７８）,ｈＴＲＴ阳性率为８２％（６４／７８）;在癌旁组织中ｈＴＲ、ｈＴＲＴ的表达阳性率分别为３％（２／７８）、５％（４／７８）;２     

细胞因子与肿瘤淋巴管形成

在很多恶性肿瘤中,淋巴道转移是其主要的转移途径,其在肿瘤的诊断、分期和治疗中起着关键的作用.肿瘤诱导血管形成对于肿瘤生长和转移的意义已经在研究者之间达成共识.研究发现,与血管生成类似,淋巴管形成参与胞外基质退化,刺激淋巴内皮细胞增殖和迁移,以及促进管状结构的形成[1].能在细胞间传递信息和具有免疫调节的的细胞因子自然在其形成中也起到重要作用.临床上已经利用包括是肿瘤分泌的和宿主细胞分泌的细胞因子的作用机制研制药物并治疗疾病.细胞因子在淋巴管形成中的作用机制会具有更广阔的价值.     

细胞因子转基因治疗肿瘤的可能机制

本文将以几种主要的细胞因子为倒阐述其转基因抗肿瘤的作用机制，将细胞因子Ｇ－ＣＳＦ，ＩＬ－６，ＴＮＦ－ａ，ＩＦＮ－γ的基因转入到肿瘤传代细胞系或杀细胞中，再移植给同系鼠，移植后的细胞，在局部所分泌的细胞因子通过自分泌或旁分泌从以下两方面起作用：使杀杀伤性效应细胞向肿瘤局部聚集并强其功能；增强肿瘤的ＭＨＣ或肿瘤相关抗原的表达，从而提高效应细胞对肿瘤细胞的识别能力，已知每种细胞因子转基因治疗肿瘤的机制有     

基因芯片技术检测子宫内膜异位症相关细胞因子及其受体基因的表达谱

目的:研究与子宫内膜异位症(EM)发生和发展相关的细胞因子(CK)基因的表达,进一步阐明子宫内膜异位症的发病机制。方法:应用含有1200条基因的基因芯片,用同位素探针标记,探讨EM组织与正常子宫组织相关CK基因的表达谱。结果:在3例EM组织与3例正常的子宫内膜组织中,共筛选出差异表达基因119条,其中CK及CKR基因表达上调15条,包括IL1、IL2、IL6、IL8、VEGFR、TGF、EGF、FGF和EPOR等。结论:表达差异基因有助于揭示EM发生发展的分子机制,基因表达谱芯片能有效地筛选EM相关的CK及CKR基因,为了解疾病发生机制提供了高效、准确的研究工具。     

nm23基因产物／NDPK在大肠癌中的表达及其临床意义

应用免疫组化Ｓ－Ｐ方法，研究１０３例大肠癌手术标本中ｎｍ２３基因产物／ＮＤＰＫ的表达及其意义。结果显示：大肠癌原发灶中ＮＤＰＫ表达阳性率７６．７％；其中，无区域淋巴结转移者阳性率为９０．５％，伴区域淋巴结转移者阳性率６７．２％，差异具有显著性意义（Ｐ＜０．０５）；随着大肠癌浸润肠壁深度和Ｄｕｋｅｓ＇分期的进展，原发灶中ｎｍ２３／ＮＤＰＫ表达阳性率逐渐下降，统计学均具有显著性意义（分别Ｐ＜０．０１、Ｐ＜０．０５）；ｎｍ２３／ＮＤＰＫ表达阳性者术后３、５年生存率分别为６５．８％和５４．４％，明显高于ＮＤＰＫ阴性患者术后３年和５年生存率（３７．５％和２０．８％），统计学具有显著性意义（分别Ｐ＜０．０５、Ｐ＜０．００５）。我们认为：ｎｍ２３基因在大肠癌的浸润和淋巴结转移过程中发挥负性调控作用。测定大肠癌组织中ｎｍ２３基因产物／ＮＤＰＫ的表达状况，有助于对大肠癌生物学行为的进一步了解及对患者预后的判断。     

多种粘附分子基因在原发性肝癌的表达及其临床意义

目的:探讨多种粘附分子基因在原发性肝癌中的表达及其临床意义。方法:取64例用RT-PCR法半定量检测肝癌粘附分子的基因表达情况,分析其临床意义。结果:(1)原发性肝癌各粘附分子的表达率分别为:E-钙粘蛋白 90.62%、细胞间粘附分子-1 93.75%、粘附分子CD44 50.00%、粘附分子CD_44V 96.88%、整合素α₅ 100%、整合素β₁ 100%,CD44与其他粘附分子表达率的差异显著。(2)肝癌组织各粘附分子E-钙粘蛋白 、细胞间粘附分子-1 、粘附分子CD44、粘附分子CD_44V 、整合素α₅、整合素β₁ mRNA的表达量分别为:1.24±0.54、0.96±0.37、0.62±0.73、0.86±0.33、 0.97±0.49、1.41±0.24,其中粘附分子CD44与E-钙粘蛋白、整合素β₁的表达量差异显著。(3)肝癌分期与粘附分子基因mRNA表达量的关系显示:E-钙粘蛋白、粘附分子CD44的表达量随分期增高而下降,其中粘附分子CD44Ⅰ-Ⅱ期和Ⅳ期的表达量差别显著;细胞间粘附分子-1、粘附分子CD_44V,整合素α₅、整合素β₁的表达量随分期增高而增高,其中细胞间粘附分子-1Ⅰ-Ⅱ期和Ⅳ期的表达量差别显著。(4)肝癌粘附分子基因mRNA表达量与临床病理生理特点相关分析显示:肝癌粘附分子基因mRNA表达量与肿瘤大小、有无转移、有无包膜和结节数目有关,与AFP水平、肝硬化情况、肝功能状况无关。结论:肝癌粘附分子基因mRNA的表达存在明显的差异,粘附分子CD44表达缺失率高。肝癌粘附分子基因mRNA的表达与肿瘤大小、有无转移、结节数目、有无包膜相关。     

人NKX3.1基因启动子的克隆及在不同肿瘤细胞系中启动子活性的测定(英)

目的：克隆NKX3.1基因启动子并检测其启动子活性，为研究NKX3.1 基因转录调控的基本机制奠定基础。 方法： 采用PCR方法从人基因组中扩增NKX3.1基因上游 1.04 kb 启动子片段并分别克隆到报道基因载体pGL3-basic和 pEGFP-1中，通过转染细胞、荧光素酶活性测定及荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白的表达，检测其启动子活性。 结果： DNA测序结果证实克隆的 1.04 kb 启动子片段序列正确；pGL3-1.04 kb 启动子转染LNCaP细胞后，双荧光素酶活性测定M1/M2=2.7, 为pGL3-control 活性的1.5倍，为pGL3-basic活性的50倍。表明克隆的人NKX3.1基因上游 1.04 kb 片段具有较强的启动子活性。为检测此 1.04 kb 启动子在不同组织细胞中的活性，分别将pGL3-1.04 kb 启动子和pEGFP-1.04 kb启动子转染入不同的肿瘤细胞系，检测荧光素酶和绿色荧光蛋白的表达。结果显示 1.04 kb 启动子在前列腺癌细胞LNCaP中活性最高。采用TRANSFAC数据库分析，发现在 1 040 bp 片段内含有多种顺式作用元件，它们的功能性将需要进一步实验证明。 结论： 克隆的人NKX3.1基因上游 1.04 kb 片段具有较强的启动子活性，并且在前列腺癌细胞LNCaP中活性最高。     

Bioimmunoassays for proinflammatory cytokines involving cytokine-induced cellular adhesion molecule expression in human glioblastoma cell lines

Twelve human glioblastoma/astrocytoma cell lines were tested for cellular adhesion molecule expression following cytokine induction in order to identify a cell line that would be suitable for functional cytokine bioimmunoassays. Many of the glioblastoma/astrocytoma cell lines were shown to inducibly express intercellular adhesion molecule-1 (ICAM-1, CD54) and vascular cell adhesion molecule-1 (VCAM-1) following stimulation with interleukin-1 (IL-1), interleukin-1β (IL-1β), tumour necrosis factor- (TNF-), tumour necrosis factor-β (TNF-β), and interferon-γ (IFN-γ), but not with any of the several other cytokines tested. The cell line U-138MG, a human glioblastoma-derived line, was the most sensitive one to IL-1/β, TNF-/β and IFN-γ for ICAM-1 expression, comparing well with proinflammatory cytokine-induced ICAM-1 expression in the endothelial cell hybrid EA-hy926 line, and was shown to be useful for the functional assay of the biological potencies of these individual cytokines. Such bioimmunoassays, which are developed by routine ELISA techniques, should provide valuable alternatives to existing bioassays for these cytokines.     

T细胞受体库及细胞因子表达与胃癌进展及转移的关系

目的　了解在胃癌的发展过程中 ,肿瘤细胞与机体免疫系统间相互作用的特征。方法采用高敏感的放射性标记半定量RT PCR技术检测胃癌病人癌组织、非癌性粘膜组织及外周血各细胞亚群中细胞因子及T细胞受体亚家族mRNA的表达。结果　进展期胃癌外周血CD8+ T细胞中的增殖性T细胞克隆数低于早期胃癌 (P =0 .0 5 )。有淋巴结转移病例外周血CD8+ T细胞和CD4 + T细胞中的增殖性T细胞克隆数较无转移组明显减少 (P =0 .0 0 0 17、P =0 .0 16 )。有淋巴结转移病例的癌组织 ,其CD8+ T细胞中IL 6、IL 8、TNF α和CD4 + T细胞中IL 4mRNA的水平 (0 .4 3± 0 .17、0 .4 2± 0 .11、0 .18± 0 .0 5、0 .0 8± 0 .0 3)均较非癌性粘膜组织中的 (0 .0 8± 0 .0 2、0 .17± 0 .0 5、0 .0 8± 0 .0 3、0 .0 1± 0 .0 0 )增高 (P =0 .0 4 0、P =0 .0 2 0、P =0 .0 17、P =0 .0 34) ;而无淋巴结转移病例的癌组织与非癌性粘膜组织中各细胞因子的表达均未发现统计学差异。结论　胃癌病人T细胞受体库及细胞因子表达与胃癌进展及转移相关 ,进展期胃癌及发生转移的病例免疫系统受到抑制。     

乳腺肿瘤组织nucleostemin基因表达与临床病理表现的关系

目的： 研究nucleostemin（NS）基因在人类乳腺肿瘤组织中的表达及其与恶性程度、组织类型和TNM分期的关系。方法： 提取肿瘤组织RNA，用电泳与半定量RT-PCR方法检测肿瘤组织中NS基因的表达及表达量；比较NS基因表达量与乳腺肿瘤恶性程度、组织类型和TNM分期的关系。结果： 正常组织中未检测到NS基因表达，良性乳腺肿瘤组织 NS基因的表达量低于恶性肿瘤(P<0.01)，乳腺恶性肿瘤分级越高，NS基因的表达量越高(P<0.01)；TNM分期越高，NS基因的表达量越高(P<0.01)；NS基因的表达量高低与乳腺肿瘤组织类型无关(P>0.05)。结论： NS基因表达量与乳腺肿瘤组织类型无关，而与肿瘤分级、TNM分期有关，随着肿瘤分级的提高、TNM分期的提高，NS基因表达量也提高。     

青藤碱对人外周血单个核细胞IL-1β和IL-8细胞因子-基因表达的影响

目的从细胞因子基因调控研究青藤碱抗炎抗风湿的作用机理.方法分离正常人外周血单个核细胞体外加药培养,提取各组细胞总RNA,采用一步法、二步法RT-PCR技术,检测药物对LPS刺激状态下该细胞IL-Iβ、IL-8mRNA表达的影响.结果一步法RT-PCR结果表明1 mmol/L青藤碱作用6 h,对IL-1βmRNA表达抑制率分别约为(15.70±5.52)%.二步法RT-PCR结果表明,1 mmol/L、100μmol/L的青藤碱对IL-1βmRNA表达抑制率分别约为(17.07±7.69)%、(25.99±12.84)%,对IL-8mRNA表达的抑制作用分别为(2.01±7.79)%、(16.04±7.55)%.结论青藤碱能通过下词人外周血单个核细胞IL-1β、IL-8m-RNA表达发挥对类风湿性关节炎的治疗作用.     

HCV核心基因插入突变体编码蛋白对人肝癌细胞系(Huh-7)细胞基因表达的影响

目的用基因表达分析法鉴定丙型肝炎病毒(HCV)核心(Core，C)区基因插入突变体编码蛋白在人肝癌细胞系(Huh-7)表达，探讨该蛋白生物学功能及其基因表达改变与致病的关系。方法构建HCV-1bc基因插入突变体编码蛋白重组表达质粒，建立表达c基因插入突变体编码蛋白Huh-7细胞系，按Affymetrix公司实验程序制备探针、再与该公司H0u133A和Hg-u133b芯片杂交。对基因表达上调或下调≥3倍的基因，用NetAflk作进一步分析。并用半定量RT-PCR对其中3个上调基因进行鉴定。结果Microarray分析显示，HCV-1b C基因插入突变体编码蛋白比c蛋白引起更多的基因表达改变，主要集中在信号传导、蛋白酶活性、分子转运、免疫反应等，特别是免疫反应基因表达更加显著。C基因插入突变体编码蛋白表达可同时导致凋亡基因／抗凋亡基因表达上调或下调及致癌基因上调。半定量RT-PCR对有趣的致癌基因FHL2、抗凋亡基因PRKCZ和凋亡基因LGALSI的鉴定结果表明，FHL2、PRKCZ和LGALSI基因的表达比空载体转染对照组相同基因明显上调。结论Hcvc基因插入突变体编码蛋白在Huh-7细胞表达对其基因表达有很大影响，其中对免疫反应基因的影响更明显，这一结果对理解HCV C基因插入突变体编码蛋白在HCV致病过程中的作用及其研制抗HCV药物均有重大的参考价值。     

人反义VEGF基因对肾癌细胞VEGF表达的影响

目的：构建反义VEGF基因真核表达载体，研究其对肾癌细胞VEGF表达的影响。 方法： 克隆人VEGF基因，将反义VEGF基因定向克隆于质粒pcDNA3.1(-)真核表达载体，酶切鉴定；转染人肾癌细胞，G418筛选阳性克隆。RT-PCR方法检测VEGFmRNA的表达，免疫组化法检测VEGF基因的蛋白表达，MTT法测细胞生长，流式细胞术检测细胞周期。 结果： 成功构建反义VEGF基因真核表达载体；反义 VEGF组VEGFmRNA的表达受到抑制，明显低于空载体组和对照组VEGFmRNA的表达,空载体组VEGFmRNA的表达没有受到影响；反义 VEGF组的VEGF蛋白表达明显低于空载体组和对照组，空载体组和对照组VEGF蛋白的表达无显著差异；反义 VEGF组细胞生长减慢，G1期细胞比例增加，S期细胞比例减少。 结论： 人反义VEGF基因可明显降低肾癌细胞VEGF基因在转录和翻译水平的表达，抑制肾癌细胞生长，为肾癌基因治疗提供一定的实验依据。     

卵泡抑制素与乙肝表面抗原融合基因表达质粒的构建及表达

目的：构建高免疫原性的抑制素真核表达载体。方法：通过PCR扩增pCMV-S基因中的S基因片段，然后将抑制素α(1-32)片段与S的融合基因克隆到真核表达质粒peDNA13．1(-)：酶切、测序鉴定后，采用脂质体包裹法将重组质粒转染Hela细胞，用SDS-PAGE和ELISA对其表达产物进行检测。用抑制素融合表达质粒免疫大白鼠，ELISA检测血中抗抑制素抗体水平。结果：酶切鉴定和序列分析表明，融合基因的表达质粒pClS构建成功。表达质粒在HeLa细胞中获得了表达，融合蛋白的分子量约为29kD，融合蛋白具有抑制素免疫原性。重组质粒免疫使大白鼠产生了抗抑制素抗体。结论：高免疫原性的抑制素表达质粒的构建为利用抑制素基因免疫技术诱导单胎动物生多胎奠定了基础。     

NAP1基因在鼻咽癌组织中表达下调原因的初步分析

目的:分析NAP1基因在鼻咽癌组织中表达下调的原因。 方法:正常鼻咽组织及鼻咽癌组织的常规HE染色和小鼠抗人CD35单克隆抗体免疫组化检测。在光镜40倍视野(1.77 mm2) 下观察20例正常鼻咽组织及40例鼻咽癌组织中位于次级淋巴滤泡中的生发中心数目。NAP1蛋白的表达水平用免疫组化检测。同时进行NAP1基因编码区的PCR-SSCP分析及NAP1基因的5’非翻译区的CpG 岛分析。 结果:在正常鼻咽间质存在次级淋巴滤泡及其位于生发中心的滤泡树突状细胞的浸润，在鼻咽癌间质淋巴细胞成片处以及癌旁组织有少量滤泡树突状细胞存在，且数目明显少于正常鼻咽粘膜。正常鼻咽组织中生发中心的平均数目为1.2个/1.77 mm2，而鼻咽癌组织中生发中心的平均数目为0.4个/1.77 mm2。另外，NAP1蛋白的表达水平与正常鼻咽间质和鼻咽癌组织间质中位于生发中心的滤泡树突状细胞数目成正比。在NAP1基因编码区未发现点突变。在NAP1基因的5’非翻译区未发现CpG 岛。 结论:鼻咽癌组织中次级淋巴滤泡及其位于生发中心的滤泡树突状细胞数目的减少可能是NAP1基因在鼻咽癌组织中表达下调的主要原因。