CML中TCRVβ2、Vβ5和Vβ17亚家族sjTRECs的检测情况

目的检测慢性粒细胞白血病(CML)患者外周血TCR Vβ2-、Vβ5-和Vβ17-Dβ1 sjTRECs的存在情况,从而了解相应3种Vβ亚家族naive T细胞的近期胸腺输出情况.方法利用半巢式PCR扩增9例CML患者外周血单个核细胞(PBMC)、CD4+细胞和CD8+细胞DNA的Vβ2-、Vβ5-和Vβ17-Dβ1 sjTRECs,13例正常人外周血作为对照.结果 TCR Vβ2-、Vβ5-和Vβ17-Dβ1 sjTRECs在部分正常人和1例CML患者CD4+或CD8+细胞可以检测到,而在CML患者PBMC中则未能检测到.结论在CML患者Vβ2-、Vβ5-和Vβ17-Dβ1 sjTRECs检出率低,与其胸腺输出相应的TCR Vβ亚家族naive T细胞水平低下有关.     

CML中TCR Vβ2、Vβ5和Vβ17亚家族sjTRECs的检测情况

目的检测慢性粒细胞白血病（CML）患者外周血TCR Vβ2-、Vβ5-和Vβ17-Dβ1 sjTRECs的存在情况．从而了解相应3种Vβ亚家族naiveT细胞的近期胸腺输出情况．方法利用半巢式PCR扩增9例CML患者外周血单个核细胞（PBMC）、CD^4＋细胞和CD8^＋细胞DNA的Vβ2-、Vβ5-和Vβ17-Dβ1 sjTRECs，13例正常人外周血作为对照．结果TCR Vβ2-、Vβ5-和Vβ17-Dβ1 sjTRECs在部分正常人和1例CML患者CD4^＋或CD8^＋细胞可以检测到，而在CML患者PBMC中则未能检测到．结论在CML患者Vβ2-、Vβ5-和Vβ17-Dβ1 sjTRECs检出率低，与其胸腺输出相应的TCR Vβ亚家族naiveT细胞水平低下有关．     

正常人外周血和脐血中TCR Vβ亚家族sjTRECs的检测情况

目的:检测TCR23个Vβ亚家族sjTRECs在正常人外周血中的存在特点,从而进一步了解正常人胸腺近期各Vβ亚家族初始T细胞的输出情况。方法:采用半巢式PCR对4例胸腺、10例脐血和10例正常人外周血分别在2×105、5×104、1×104和1×103个单个核细胞中的23个Vβ亚家族sjTRECs进行扩增。结果:在细胞数相同的情况下,各Vβ-Dβ1sjTRECs的检出率胸腺细胞最高,其次是脐血,正常人最低。当细胞数为2×105、5×104和1×104时,正常人Vβ2、Vβ4、Vβ7、Vβ11和Vβ19亚家族sjTRECs的检出率以及检出sjTRECs的亚家族数量均显著低于脐血。当细胞数为2×105和5×104时,正常人可检测到绝大多数Vβ亚家族的sjTRECs,随着细胞数的降低,部分Vβ亚家族的sjTRECs则检测不到,而少部分Vβ亚家族的sjTRECs则在1000个细胞时仍能检测到。结论:成功建立了半定量检测23个Vβ亚家族sjTRECs的检测方法;在2×105细胞中约可以检测到80%左右的Vβ亚家族初始T细胞,而在5×104细胞中约有半数的Vβ亚家族初始T细胞可检测到,提示不同Vβ亚家族初始T细胞的出现频率有所差异。     

MDS患者外周血中TCR Vβ1-24-Dβ1 sjTRECs的分析

目的检测骨髓增生异常综合征（MDS）患者外周血中TCRVβ1-24-Dβ1 sjTRECs的存在情况。方法利用半巢式PCR扩增9例MDS患者外周血单个核细胞DNA中TCRβ链基因重排时形成的T细胞受体DNA删除环（Vβ1-24-Dβ1 sjTRECs），10例正常人外周血作为对照。结果所有TCRVβ1-24-Dβ1sjTRECs在正常人组外周血T细胞DNA中均有检出，除TCR Vβ12-Dβ1sjTRECs和TCRβ19-Dβ1sjTRECs外，其余TCRVβ-Dβ1 sjTRECs在MDS患者外周血T细胞DNA中均可检。大多数TCRVβ1-24-Dβ1sjTRECs在正常人组中的检出率较MDS患者高，但其中只有6种TCRVβ-Dβ1sjTRECs（分别是TCRVβ3、12、13、15、21、22-Dβ1sjTRECs）的检出率差异有统计学意义。结论本研究率先提供了MDS患者外周血T细胞中TCRVβ-Dβ1sjTRECs的存在情况。MDS患者TCRVβ-Dβ1sjTRECs出现频率低于正常人提示其胸腺近期输出功能存在部分缺陷情况。     

TCR Dβ-Jβ sjTRECs检测方法的建立和应用

目的：建立检测TCR Dβ-Jβ sjTRECs的方法，并了解不同T细胞受体Dβ-Jβ之间T细胞受体删除DNA环(sjTRECs)在胸腺细胞和外周血T细胞中的形成情况。方法：利用巢式PCR分别扩增10例正常人外周血单个核细胞和3例正常胸腺细胞DNA中不同的Dβ片段和Jβ重排时形成的sjTRECs的情况，PCR产物进一步进行克隆和序列分析以确定结合区的位置。结果：可检测到Dβ1与5个Jβ1基因片段、Dβ2与4个Jβ2基因片段分别形成的sjTRECs，其中以Dβ1-Jβ1S1、Dβ1-Jβ1S2和Dβ2-Jβ2S2sjTRECs最常见，PCR产物经克隆和序列分析证实其形成Dβ-jβsjTRECs的情况。结论：成功地建立了检测Dβ-Jβ-sjTRECs的方法，为分析各TCRβ亚家族的sjTRECs含量和确定TCRβ naive细胞提供了新方法。     

多发性骨髓瘤患者外周血中TCR Vβ亚家族nave T细胞水平变化

目的： 检测多发性骨髓瘤（MM）患者外周血中23个TCR Vβ亚家族的T细胞受体删除DNA环（sjTRECs）的存在特点，从而了解MM患者相应Vβ亚家族nave T细胞的近期胸腺输出情况。方法: 利用半巢式PCR分别扩增12例MM患者每5×104个外周血单个核细胞（PBMCs）中的23个Vβ亚家族sjTRECs，10例正常人外周血作为对照。结果: 在5×104个PBMCs中，检测到MM患者sjTRECs的Vβ亚家族数量约为（5.00±2.45）个，与正常人的（9.60±5.48）个相比，检出的亚家族数量明显减少（P<0.05）；23个Vβ亚家族sjTRECs在正常人中均可以检测到，而在MM患者仅检测到部分；并且Vβ2、Vβ10、Vβ16、Vβ17和Vβ21等5个亚家族sjTRECs的检出率明显低于正常水平。12例MM患者检出的亚家族数量（2-9个）不等，患者的年龄与检出的亚家族数量存在负相关（r=-0.892；P<0.01）。结论: MM患者胸腺近期输出的23个Vβ亚家族nave T细胞存在不同程度的缺失或水平降低，表明患者存在不同程度的细胞免疫功能缺陷以及T细胞谱系重建的能力和潜能受损。     

多发性骨髓瘤患者外周血中TCR Vβ亚家族na(i)ve T细胞水平变化

目的:检测多发性骨髓瘤(MM)患者外周血中23个TCR Vβ亚家族的T细胞受体删除DNA环(sjTRECs)的存在特点,从而了解MM患者相应Vβ亚家族na(i)ve T细胞的近期胸腺输出情况.方法:利用半巢式PCR分别扩增12例MM患者每5×104个外周血单个核细胞(PBMCs)中的23个Vβ亚家族sjTRECs,10例正常人外周血作为对照.结果:在5×104个PBMCs中,检测到MM患者sjTRECs的Vβ亚家族数量约为(5.00±2.45)个,与正常人的(9.60±5.48)个相比,检出的亚家族数量明显减少(P＜0.05);23个Vβ亚家族sjTRECs在正常人中均可以检测到,而在MM患者仅检测到部分;并且Vβ2、Vβ10、Vβ16、Vβ17和Vβ21等5个亚家族sjTRECs的检出率明显低于正常水平.12例MM患者检出的亚家族数量(2-9个)不等,患者的年龄与检出的亚家族数量存在负相关(r=-0.892;P＜0.01).结论:MM患者胸腺近期输出的23个Vβ亚家族na(i)ve T细胞存在不同程度的缺失或水平降低,表明患者存在不同程度的细胞免疫功能缺陷以及T细胞谱系重建的能力和潜能受损.     

AML患者外周血中TCR Vβ亚家族naive T细胞的检测

目的 检测急性髓性白血病(AML)患者外周血中TCR 23个Vβ亚家族的T细胞受体删除DNA环(sjTRECs)的存在特点,从而间接了解AML患者相应Vβ亚家族naive T细胞的近期胸腺输出情况.方法利用半巢式PCR分别扩增32例AML患者每5×104和1×104个外周血单个核细胞(PBMCs)中的23个Vβ亚家族sjTRECs,10例正常人外周血作为对照.结果在5×104和1×104两种PBMCs水平,AML患者检出sjTRECs的Vβ亚家族数分别为(5.09±3.28)和(2.59±2.06)个,与正常人的(13.70±2.67)和(5.50±2.07)个相比,两组的差异均有统计学意义(两组均为P=0.000).AML患者5×104个PBMCs中约可检测到5/23(20%)个Vβ亚家族sjTRECs,并且有13个Vβ亚家族sjTRECs的检出率明显低于正常人水平,其中Vβ10-和Vβ14-Dβ1 sjTRECs的检出率最低,而Vβ21最高.不同FAB分型AML患者间的检出差别未显示出统计学意义.32例AML患者检出sjTRECs的Vβ亚家族数量差别较大(1～15个),年龄与检出的亚家族数量呈负相关,＜30岁者的检出量高于≥30岁者,尤其在5×104个PBMCs水平差异有统计学意义(r=-0.481,P=0.005).结论 AML患者胸腺近期输出的23个Vβ亚家族naive T细胞存在不同程度的缺失或水平降低,表明AML患者存在严重的细胞免疫功能缺陷以及T细胞谱系重建的能力和潜能严重受损.     

T细胞受体Dβ-JβsjTRECs连接区多样性

目的了解T细胞受体Dβ-Jβ重排形成的T细胞受体删除DNA环(sjTRECs)连接区序列特点。方法利用巢式PCR分别扩增10例正常人外周血单个核细胞和3例正常胸腺细胞DNA中不同的Dβ片段和Jβ重排时形成的TRECs的情况,PCR产物进一步进行克隆和序列分析以确定结合区的序列。结果获得Dβ1与5个Jβ1基因片段、Dβ2与4个Jβ2基因片段分别形成的sjTRECs连接区序列,部分所形成sjTRECs的Jβ与Dβ之间存在核苷酸的随机插入(N区)等多样性。结论Dβ-Jβ sjTRECs的连接并非简单的头对头拼接方式,部分连接时存在N区而形成结合区多样性。     

实时定量PCR检测正常人外周血T细胞和胸腺细胞中sjTRECs水平

目的了解正常人外周血T细胞和胸腺细胞中信号结合T细胞受体删除 DNA环(sjTRECs)的含量,从而推测正常人中幼稚T细胞的含量和胸腺的输出功能. 方法利用实时定量PCR和TaqMan方法检测11例正常人外周血单个核细胞、7例儿童和3例成人胸腺细胞DNA中sjTRECs的水平. 结果正常人中sjTRECs含量分别为8.83±4.81/1000个外周血单个核细胞;27.31±3.23/1000个成人胸腺细胞和170 .29 ±59.52/1000个儿童胸腺细胞. 结论 sjTRECs水平与年龄有关,正常人外周血中每1000个单个核细胞中约含4.5个幼稚T细胞.     

实时定量PCR检测正常人外周血T细胞和胸腺细胞中sjTRECs水平

目的了解正常人外周血T细胞和胸腺细胞中信号结合T细胞受体删除 DNA环(sjTRECs)的含量,从而推测正常人中幼稚T细胞的含量和胸腺的输出功能. 方法利用实时定量PCR和TaqMan方法检测11例正常人外周血单个核细胞、7例儿童和3例成人胸腺细胞DNA中sjTRECs的水平. 结果正常人中sjTRECs含量分别为:8.83±4.81/1000个外周血单个核细胞;27.31±3.23/1000个成人胸腺细胞和170 .29 ±59.52/1000个儿童胸腺细胞. 结论 sjTRECs水平与年龄有关,正常人外周血中每1000个单个核细胞中约含4.5个幼稚T细胞.     

原发性血小板减少性紫癜患者T细胞受体Vβ亚家族基因的表达特点

目的：了解原发性血小板减少性紫癜（ITP）患者T细胞受体 Vβ亚家族基因表达特点。 方法： 采用反转录酶－多聚酶链反应（RT-PCR）方法检测5例ITP患者外周血T细胞TCR Vβ 24个亚家族基因表达情况，10例正常人作为对照。 结果： 正常人外周血T细胞表达全部24个TCR Vβ亚家族，而5例ITP患者外周血T细胞仅表达4-11个Vβ亚家族，主要为Vβ2（100％）和Vβ3（100％），其次为Vβ19（80％）和Vβ21（80％）部分。全部样本未检测出Vβ4、Vβ6、Vβ17、Vβ20、Vβ24亚家族表达。 结论： ITP患者外周血T细胞TCR Vβ基因谱系呈限制性表达，与其存在细胞免疫功能异常有关。     

AML-M5患者外周血naive T细胞水平和TCR Vβ谱系利用特点

目的了解急性髓性白血病M5亚型(AML-M5)患者 T细胞受体重排删除DNA环(TRECs)的含量和TCR Vβ基因谱系利用和克隆性,从而了解AML患者的胸腺近期输出功能和TCR Vβ亚家族T细胞增殖特点.方法利用实时定量PCR(TaqMan)方法检测5例M5患者外周血单个核细胞TRECs的水平,并根据外周血中CD3阳性率计算CD3细胞中TRECs水平.利用RT-PCR和基因扫描分析患者外周血单个核细胞的TCR Vβ24个亚家族基因表达和克隆性.9例正常人外周血作为对照.结果 M5患者外周血中TRECs含量为0.76±1.21/1000 CD3+细胞,明显低于正常人TRECs水平(6.84±4.71/1000 CD3+细胞,p<0.05).5例患者外周血T细胞表达不同数量Vβ亚家族(2-16个).基因扫描分析显示4例病人外周血中的一些Vβ亚家族出现克隆性T细胞, Vβ1,Vβ15和Vβ21克隆性T细胞均分别见于3例病人中.结论率先报道了AML-M5型患者胸腺近期输出naive T细胞功能明显降低,尽管整体T细胞免疫功能低下,患者仍存在优势利用和克隆性增殖Vβ亚家族T细胞,提示其具有一定地对白血病细胞相关抗原产生特异性免疫反应的能力.     

T-ALL及T细胞株相关TCR Vβ基因谱系和克隆性分析

目的了解T细胞-急性淋巴细胞白血病(T-ALL)患者外周血中的T细胞及T细胞株的TCR Vβ基因谱系及其克隆性增殖情况。方法利用RT-PCR方法扩增6个不同的T细胞株和6例初发未治T-ALL病人外周血单个核细胞中24个TCR Vβ基因的互补决定区3(CDR3)，PCR产物进一步经荧光标记和基因扫描分析CDR3长度而确定T细胞的克隆性，部分T细胞株的单克隆PCR产物进一步进行序列分析。结果与正常人外周血表达全部24个Vβ亚家族不同，6例T-ALL病人分别表达5～12个Vβ亚家族。6例病人均存在1个或多个Vβ亚家族的寡克隆或双克隆增殖T细胞，另外，还有一些Vβ亚家族多克隆模式发生改变，呈现寡克隆性增殖的趋势。T细胞株多显示为表达一个Vβ亚家族的单克隆T细胞，不同T细胞株的CDR3长度和序列不尽相同。结论T-ALL患者外周血T细胞的TCR Vβ谱系出现限制性改变，均可检测到克隆性增殖T细胞，尚需进一步鉴定其性质(肿瘤性或抗原特异性增殖)，对于检测微小残留病变和设计抗白血病独特型疫苗均有一定的意义。     

AML-M1相关TCR Vβ克隆性增殖T细胞的研究

目的：了解急性髓细胞白血病M1亚型（AML－M1）患者外周血TCR Vβ亚家族T细胞的克隆性分布特点。方法：采用RT－PCR扩增9例M1患者外 周血的单个核细胞的TCR Vβ24个亚家族基因，分析其TCR Vβ亚家族的利用情况。PCR产物进一步经基因扫描分析，了解其CDR3长度以判断T细胞的克隆性。结果：不同标本中可检测到2－5个Vβ亚家族T细胞，以Vβ2、Vβ3、Vβ17和Vβ19为常见，并在Vβ2、Vβ3、Vβ5、Vβ8、Vβ9和Vβ19中发现克隆性生长T细胞。结论：M1病人外周血TCR Vβ亚家族T细胞表达呈现明显的选择性和克隆性增殖情况，这可能与M1细胞相关抗原有关，且克隆性增殖Vβ亚家族分布以个体特异性为主。     

脐血中TCR Vβ亚家族T细胞的增殖特点

目的：了解脐血T细胞体外诱导后TCR Vβ亚家族的分布和克隆性增殖特点。方法：利用T淋巴细胞液体培养法，在不同刺激源（rhIL-2、抗CD3单抗、PHA、AML-M5细胞和bcr-abl多肽）条件下诱导脐血T细胞扩增，并利用RT-PCR分别扩增培养前后脐血T细胞的TCR Vβ24个亚家族基因的CDR3片段，了解各Vβ亚家族的表达情况，阳性的PCR产物进一步经荧光素标记和基因扫描分析产物的CDR3长度，了解T细胞克隆性。结果：脐血T细胞仅表达部分Vβ亚家族，但经体外培养后，可检测到绝大多数TCR Vβ亚家族T细胞，而经AML-M5细胞和bcr-abl多肽诱导后，TCR Vβ亚家族T细胞呈限制性表达和Vβ亚家族克隆性增殖。结论：脐血T细胞具备产生各TCR Vβ亚家族T细胞的潜能，在白血病相关抗原诱导下，具有限制性和克隆性增殖的能力。     

正常人外周血和胸腺T细胞中TCR δRec151051—Jδ1和δRec151298—Jδ1基因重排的分布特点

目的 分析正常人外周血和胸腺细胞中TCR δRec151051-Jδ1和δRec151298-Jδ1基因重排分布特点。方法 利用半巢式和巢式PCR扩增10例正常人外周血单个核细胞（PBMCs）、4例分选的外周血CD3^ T细胞和7例正常人胸腺细胞DNA的TCR δRec基因与Jδ1、Dδ3和ψJa重排的基因片段,从不同含量DNA的PCR分析,了解其重排分布频率。结果 TCRδRec151051分别与Jδ1、Dδ3和ψJa的重排和TCR δRec151298-Dδ3重排见于大多数外周血T细胞和胸腺细胞中,而TCR δRec151298与Jδ1和ψJa的重排则多见于胸腺细胞中,对不同含量的DNA的PCR分析显示δRec重排的分布频率在外周血和胸腺细胞有所不同。结论 TCR δRec151051、TCR δRec151298与Jδ1、Dδ3和ψJa的重排均存在于多数正常人T细胞中,TCR δRec151051-Dδ3最常见于成熟和未成熟T细胞中,而TCR δRec151298-Jδ1和TCR δRec151298-ψJa则主要见于未成熟T细胞中。     

苯中毒工人外周血TCR Vβ克隆性T细胞利用特点

目的:分析苯中毒工人外周血中克隆性增殖T细胞及其CDR3序列的特点.方法:利用RT-PCR方法扩增11例苯中毒工人外周血单个核细胞中24个TCR Vβ基因的CDR3, 阳性产物进一步经荧光标记和基因扫描分析CDR3长度而了解其克隆性.结果:健康者外周血中可检测到24个Vβ亚家族, 11例苯中毒工人仅检测到2～10个Vβ亚家族.11例苯中毒工人均存在1个或多个Vβ亚家族T细胞出现寡克隆及寡克隆趋势.Vβ2、4、5、6和Vβ21的寡克隆T细胞出现频率较高.结论:苯中毒工人外周血TCR Vβ亚家族T细胞出现倾斜性分布和克隆性增殖, 这可能是机体苯中毒后所引起的特异性免疫反应.     

正常人外周血和胸腺T细胞中TCR δRec151051-Jδ1和δ Rec151298-J δ 1基因重排的分布特点

目的分析正常人外周血和胸腺细胞中TCRδRec151051-Jδ1和δRec151298-Jδ1基因重排分布特点.方法利用半巢式和巢式PCR扩增10例正常人外周血单个核细胞(PBMCs)、4例分选的外周血CD3+T细胞和7例正常人胸腺细胞DNA的TCRδRec基因与Jδ1、Dδ3和ψJα重排的基因片段,从不同含量DNA的PCR分析,了解其重排分布频率.结果TCRδRec151051分别与Jδ1、Dδ3和ψJα的重排和TCRδRec151298-Dδ3重排见于大多数外周血T细胞和胸腺细胞中,而TCRδRec151298与Jδ1和ψJα的重排则多见于胸腺细胞中.对不同含量的DNA的PCR分析显示δRec重排的分布频率在外周血和胸腺细胞有所不同.结论TCRδRec151051、TCRδRec151298与Jδ1、Dδ3和ψJα的重排均存在于多数正常人T细胞中,TCRδRec151051-Dδ3最常见于成熟和未成熟T细胞中,而TCRδRec151298-Jδ1和TCRδRec151298-ψJα则主要见于未成熟T细胞中.     

脐血中TCR Vβ亚家族T细胞的增殖特点

目的了解脐血T细胞体外诱导后TCR Vβ亚家族的分布和克隆性增殖特点. 方法利用T淋巴细胞液体培养法,在不同刺激源(rhIL-2、抗CD3单抗、PHA、AML-M5细胞和bcr-abl多肽)条件下诱导脐血T细胞扩增,并利用RT-PCR分别扩增培养前后脐血T细胞的TCR Vβ 24个亚家族基因的CDR3片段,了解各Vβ亚家族的表达情况.阳性的PCR产物进一步经荧光素标记和基因扫描分析产物的CDR3长度,了解T细胞克隆性. 结果脐血T细胞仅表达部分Vβ亚家族,但经体外培养后,可检测到绝大多数TCR Vβ亚家族T细胞,而经AML-M5细胞和bcr-abl多肽诱导后,TCR Vβ亚家族T细胞呈限制性表达和Vβ亚家族克隆性增殖. 结论脐血T细胞具备产生各TCR Vβ亚家族T细胞的潜能,在白血病相关抗原诱导下,具有限制性和克隆性增殖的能力.