BMP-2与VEGF基因在同种异体骨修复骨缺损中的实验研究

目的 探讨“补肾壮骨合剂”(骨碎补、续断、自然铜、土鳖虫)在同种异体骨修复骨缺损中对骨形态形成蛋白-2(bone morphogenetic protein two,BMP-2)和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)基因的表达及影响 方法 普通家兔48只,取其中36只随机分为实验组和对照组,实验组和对照组均为18只,实验组和对照组再继续分为6组,每组各为3只;实验组和对照组均按常规1术在无菌条件把左侧桡骨中下1/3处用骨磨钻制成10mm的骨缺损模型,取另外12只备用家兔处死后取髂骨植入以上骨缺损处;实验组用“补肾壮骨合剂”复合饲料喂养,对照组用普通饲料喂养,于术后3d及1、2、4、6、8周各处死实验组和对照组普通家兔3只,取骨缺损处标本进行BMP-2和VEGF基因的实时定量聚合酶链反应(real-time PCR).结果 对BMP-2和VEGF的目的基因校正结果后,以对照组1周拷贝数为基础,其他各组与其比值:对照组和实验组在3d及1、2、4、6、8周BMP-2基因分别为0.55、1.00、2.19、3.20、2.29、1.42和1.84,8.83、3.44、2.50、6.50、6.00;VEGF基因分别为2.08、1.00、0.88、3.40、1.71、1.17和6.5、2.25、1.86、3.13、3.33、3.31,实验组与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05) 结论 补肾壮骨合剂能明显缩短骨缺损的修复时间和提高骨组织的修复质量,在对BMP-2和VEGF的释放水平和诱导成骨进程及促进骨损伤区血管化方面有显著的影响,并可以看出在骨缺损的修复过程中各个时间段二者的增长不成比例关系.     

转化生长因子β1对人脐静脉血管内皮细胞活性的影响

目的观察转化生长因子β1（TGF—β1）刺激增生性瘢痕成纤维细胞上清液对人脐静脉血管内皮细胞（HUVEC）增殖和趋化能力的影响。方法以增生性瘢痕成纤维细胞为实验组,正常皮肤为对照组,添加TGF—β1（10μg/L）为TGF—β1组,向TGF—β1组内添加丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶（Akt）阻断剂Tricirlbine（5Ixmol／L）为Akt阻断剂组,二者皆未添加的瘢痕成纤维细胞为非干扰组,利用各组细胞上清液（条件培养基）培养HUVEC,使用四甲基偶氮唑盐（MTT）法观察各条件培养基对HUVEC增殖的影响,并利用细胞划痕实验和Transwell细胞迁移实验对HUVEC的趋化情况进行评估。结果对照组吸光度值为0．91±0．34,非干扰组1．75±0．15,TGF—B,组3．26±0．58,Akt阻断剂组1．14±0．81。非干扰组吸光度值与对照组和TGF-β1组比较,差异均有统计学意义（均P〈0．01）;而Akt阻断剂组成纤维细胞增殖吸光度值明显低于TGF—β1组（P〈0．01）。细胞划痕24h后,TGF—β1组促使HUVEC划痕的闭合率较非干扰组高（P〈0．01）;而Akt阻断剂组则明显减弱HUVEC划痕闭合的速度（P〈0．01）。Transwell细胞迁移实验中,TGF—β1组迁移的细胞较非干扰组多[TGF—β1组细胞迁移数目：（1718±15）个,非干扰组：（829±2）个,P〈0．01];而Akt阻断剂组阳性细胞迁移率又明显降低[Akt阻断剂组：（935±11）个,P〈0．01]。对照组血管内皮生长因子（VEGF）（65．2±0．3）ng／L,非干扰组（87．0±0．5）ng／L,TGF—β1组（132．7±0．4）ng／L,Akt阻断剂组（70．5±0．6）ng／L。非干扰组与对照组、TGF-β1组与非干扰组、Akt阻断剂组与TGF—β1组比较,差异均有统计学意义（均P〈0．01）。结论TGF—β1可以通过刺激增生性瘢痕成纤维细胞旁分泌VEGF等细胞因子对血管内皮细胞增殖、趋化等能力产生影响。     

HBx-siRNA 下调 HepG2．2．15细胞中血管内皮生长因子的表达

目的：研究 HBx干扰质粒pSIHBV/X对肝癌细胞HepG2．2．15中VEGF表达的影响。方法将针对HBx基因的干扰质粒载体pSIHBV/X转染HepG2．2．15细胞,用Real-time PCR检测转染前后细胞 HBx、VEGF基因 mRNA 表达,Western blot法检测细胞 VEGF蛋白表达。结果Real-time PCR检测结果显示,转染后24 h、48 h、72 h实验组 HepG2．2．15细胞中 HBx基因mRNA相对表达水平分别为（121．13±8．72）、（83．17±7．930）、（56．33±6．17）;24 h、48 h、72 h实验组HepG2．2．15细胞中 VEGF基因 mRNA 相对表达水平分别为（76．26±7．16）、（59．17±6．420）、（42．17±4．33）;Western blot检测结果显示,24 h、48 h实验组 HepG2．2．15细胞中VEGF蛋白相对表达水平分别为（0．357±0．025）、（0．218±0．051）。Western blot及RT-PCR结果显示,与对照组相比实验组中VEGF mRNA 及蛋白的表达量明显下调,差异有统计学意义（P＜0．05）。结论靶向HBx的siRNA干扰质粒能抑制 HepG2．2．15细胞中VEGF mRNA和蛋白的表达。     

PDGF及IGF-IB基因在骨缺损修复过程中的表达规律

目的探讨同种异体植骨修复骨缺损的骨痂中的血小板源生长因子（PDGF）及胰岛素样生长因子（IGFIB）基因与正常骨组织中2种生长因子基因的表达规律及机制。方法选取健康普通中国家兔30只,雌性,其中18只随机分成3 d,1、2、4、6、8周实验组,每组3只;另外10只为骨缺损异体骨松质提供组（骨提供组）,2只为正常对照组;实验组均按手术要求对兔桡骨制成15mm骨缺损模型,取骨提供组同种异体兔髂骨骨松质制成颗粒状骨移植以上骨缺损处,于术后3 d,1、2、4、6、8周处死家兔取骨缺损处标本进行PDGF和IGF-IB基因片段的实时定量聚合酶链反应（RT-PCR）;正常对照组不作处理,喂养后取相同部位正常骨组织进行实时定量聚合酶链反应。结果通过PDGF和IGF-IB的目的基因结果进行校正后,以对照组正常骨组织拷贝数为基础,实验组各时间段拷贝数与其比值：正常骨组织为1.00,实验组PDGF 3 d、1、2、4、6、8周各时间段的比值基因数分别为1.70、2.54、1.72、3.63、2.64、0.97;IGF-IB基因比值分别是3.03、4.96、1.14、2.67、0.60、0.12。结论 PDGF和IGF-IB 2种生长因子在骨缺损修复过程中不同时间段其表达量是变化的,掌握其规律为临床上正确治疗骨缺损提供科学的理论依据。     

高血压合并微量白蛋白尿患者血清转化生长因子β1及肾动脉阻力指数的变化

目的观察原发性高血压合并微量白蛋白尿患者血清转化生长因子p1（TGF—p1）及肾动脉阻力指数（RRI）的变化及相关性。方法选取原发性高血压病患者92例,根据尿白蛋白肌酐比值（UACR）分为正常白蛋白尿组（UACR〈30mg／g）、微量白蛋白尿组（30mg／g≤UACR〈300mg／g）和临床蛋白尿组（UACR〉300mg／g）,并设立健康对照组。采用ELISA方法测定血清TGF—B1,彩色多谱勒超声测定肾动脉阻力指数,同时测定相关临床指标。结果正常白蛋白尿组TGF—B1为（8．9±2．9）μg／L,RRI为（0．59±O．06）,微量白蛋白尿组和临床蛋白尿组血清TGF—B1水平分别为（11．±4-4．9）μg／L、（15．5±5．6）μg／L,RRl分别为（0．64±0．06）、（0．70±0．05）,均明显高于正常白蛋白尿组（P〈0．01）。血清TGF—B1水平和RRI呈正相关（r=-0．416,P〈0．05）,微量白蛋白尿水平、TGFp1、RRI均与eGFR呈负相关（r值分别为-0．352、-0．394、-0．419,P〈0．05）。结论高血压合并微量白蛋白尿的患者血清TGF—B1水平和肾动脉阻力指数均升高,两者均与eGFR呈负相关。     

糖尿病视网膜病变患者血清和玻璃体液中细胞因子的相关性研究

目的筛选出较为可靠的细胞因子作为增殖性糖尿病视网膜病变患者的临床检测指标。方法对23例增殖性糖尿病视网膜病变患者和24例新鲜的孔源性视网膜脱离患者外周血和玻璃体液中转化生长因子β2（TGF—β2）,白细胞介素8（IL-8）,以及血管内皮生长因子（VEGF）的含量进行检测,并进行统计学分析。结果增殖性糖尿病视网膜病变患者（试验组）的玻璃体液中的VEGF和IL-8浓度与对照组相比均明显增高,而TGF．B：浓度明显低于对照组[试验组TGF-β2、IL-8、VEGF水平分别为（69．53±2．94）、（95．23±6．55）、（45．39±4．86）μg／L,对照组分别为（87．32±3．21）、（77．42±5．03）、（37．784-2．09）μg／L,P〈0．01或P〈0．05]。试验组外周静脉血中IL-8浓度（94．91±7．37）μg／L,高于对照组的（77．42±5．03）μg／L。只有玻璃体与血清中IL-8呈明显正相关（r=0．9522,P〈0．01）。结论IL-8有可能成为增殖性糖尿病视网膜病变患者临床检测指标之一。     

转化生长因子β1基因多态性与广东汉族糖尿病肾病的相关性研究

目的研究转化生长因子β1（TGF-β1）＋869T／C、＋915G／C基因多态性与广东汉族糖尿病肾病（DN）的相关性。方法采用病例-对照方法进行研究,即以DN患者为病例组,糖尿病不伴肾病患者与健康对照者两组人群分别构成两个对照组进行比较研究。采用序列特异性引物聚合酶链反应（PCR—SSP）技术检测糖尿病肾病患者45例,糖尿病不伴肾病患者53例,健康对照组50例的TGF-β1第1号外显子＋869T／C及＋915G／C位点等位基因及基因型分布,并对该基因多态性与广东汉族糖尿病肾病的相关性进行分析。结果TGF-β1＋869T／C、＋915G／C基因多态性可区分为3种类型,分别为TT、TC、CC3种和GG、GC、CC3种;＋869T／C中T、C等位基因的分布,DN组分别为0．414、0．586,糖尿病非肾病组分别为0．455、0．545,对照组分别为0．596、0．404;＋915G／C中G、C等位基因的分布,DN组分别为0．714、0．286,糖尿病非肾病组分别为0．700、0．300,对照组分别为0．768、0．232;三组数据总体比较,＋869T／C基因类型TT、TC、CC这一组数据总体上差异有显著性（P〈0．05）,说明DN组、非肾病组和对照组这三组的TT、TC、CC3种基因类型总体分布存在差异,＋915G／C基因类型差异无显著性（P〉0．05）;三组数据两两比较,差异均无显著性（P〉0．05）。结论TGF—β1＋869T／C及＋915G／C位点基因多态性与广东汉族糖尿病肾病可能无关。     

转化生长因子β1基因T869C多态性与类风湿关节炎的相关性

目的 研究转化生长因子β1（TGFβ1）基因T869C多态性与江苏地区汉族人群类风湿关节炎（RA）的相关性。方法 76例随访2年的RA患者及100例健康对照组,PCR-RFLP方法检测TG即1基因T869C多态性,比较两组间基因型及等位基因频率,并分析RA组不同基因型间临床及实验室指标的差异。结果 RA组CC基因型频率较对照组显著下降,而CT及TT基因型频率则显著升高（P〈0．05）,与对照组相比,RA组C等位基因频率下降,而T等位基因频率升高（P〈0．01）,与CC基因型相比,CT、TT基因型的RA危险度分别为2．62倍（P〈0．05）和3．60倍（P〈0．01）;RA组携带T等位基因的基因型（CT＋TT）发病年龄显著低于、CC基因型（P〈0．05）,在X线≥Ⅲ期改变比例也显著高于CC基因型（P〈0．01）。结论 TGFβ1基因多态性与RA相关,T等位基因是RA的遗传易患因子,并且与RA起病及严重程度呈正相关。     

骨缺损修复过程中TGF-β2基因的PCR定量动态分析

目的:探讨骨缺损修复过程中转化生长因子(TGF-β2)基因的动态定量变化与时间的关系.方法:实验家兔30只,随机分成6组,取右桡骨用骨磨钻制成20 mm的骨缺损模型为实验组,取自体髂骨制成大小1～2 mm的颗粒状移植于右桡骨骨缺损处.术后3天、1、2、4、6、8周处死动物取材.进行逆转录一聚合酶链反应(RT-PCR),具体观察和分析骨缺损修复过程中TGF-β2基因的动态定量变化与时间的关系.结果:实验组3天、1、2、4、6、8周时TGF-β2的相对表达量为0.57、1.00、1.40、1.44、1.59、1.27.结论:骨缺损修复过程中TGF-β2基因的动态定量变化与时间的关系,为骨折和骨缺损的治疗从分子生物学基因动态定量变化方面提供了科学理论依据.     

11O例广东汉族人转化生长因子TGFβ1—509C／T基因多态性检测分析

目的了解广东转化生长因子TGFβ1—509C／T基因的分布特点。方法应用聚合酶链反应技术对110例正常人转化生长因子TGFβ1—509C/T基因进行扩增,以Ec081I进行限制性内切酶酶切图谱分析,并结合文献进行了不同地区问的分析比较。结果转化生长因子TGF131—509C／C、C／T、T／T表型频率分别为：0．15、0．44、0．45,转化生长因子TGFB1—509C、TGFB1—509C、T基因频率分别为：0．3545、0．6455。结论转化生长因子TGF81—509C/T基因多态性在不同地区间分布存在着明显的差异。     

雌激素对骨质疏松大鼠骨折愈合过程成骨细胞血管内皮生长因子表达的影响

目的研究雌激素对骨质疏松大鼠骨折愈合过程成骨细胞血管内皮生长因子表达的影响,进一步了解雌激素对骨代谢的作用机制。方法采用80只20月龄的雌性大鼠,将其随机分为对照组和实验组,每组40只,麻醉下制作左股骨骨折模型,术后实验组每隔1d注射1次雌激素,分别于1、2、3、4周取骨痂,利用免疫组织化学染色法、原位杂交方法检测成骨细胞血管内皮生长因子(VEGF)的表达,利用骨矿分析仪测定骨痂的密度。结果 VEGF在骨折部位被多种细胞表达,且成骨细胞最明显,其表达强度随时间变化而变化,3周左右达到高峰,实验组比对照组表达更明显,实验组骨痂密度高于对照组(P<0.05)。结论雌激素可促进成骨细胞VEGF的表达,VEGF是雌激素调节骨代谢的机制之一,可促进骨质疏松骨折的愈合。     

类胰岛素样生长因子-1与明胶微球复合物对兔下颌骨缺损愈合影响的实验研究

目的探讨类胰岛素样生长因子1（IGF-1）与明胶微球（GMs）复合物对兔下颌骨缺损新骨形成的影响。方法日本成年大耳白兔共27只,随机分成3组,各组均在一侧下颌骨体部制备一13 mm×6 mm大小的单侧皮质骨缺损模型,实验组于缺损区植入IGF-1/GMs复合物,对照组植入GMs,空白对照组不作特殊处理。术后4、8、12周每组各处死3只获取标本行大体解剖观察、X线、骨密度测定、苏木素-伊红（HE）染色及骨小梁百分比测定。结果 HE染色显示实验组骨缺损早期（4周）见少量不成熟骨小梁、胶原成分及大量新生血管;8周时,各组均可见成熟的骨小梁,实验组骨小梁粗大,板层状排列,对照组骨小梁明显少于实验组;12周时实验组骨质基本接近成熟,与正常骨质无明显分界。实验组骨密度及新生骨面积百分比在各时间点明显高于对照组和空白组,差异有统计学意义。结论 IGF-1/GMs复合物能促进颌骨缺损早期修复,具有良好的生物相容性,有临床应用价值。     

双胎选择性生长受限危险因素分析及胎盘血管内皮生长因子的表达

目的 研究双胎选择性宫内生长受限（selective intrauterine growth restriction,sIUGR）胎盘血管内皮生长因子（VEGF）的表达并探讨影响妊娠结局的危险因素.方法 2010年6月至2013年6月深圳市人民医院产科分娩双胎妊娠590例,单绒毛膜双羊膜囊（monochorionic diamnotic,MCDA）双胎sIUGR 42例作为病例组,双绒毛膜双胎sIUGR 47例作为对照A组,同期分娩的无sIUGR单绒毛膜双羊膜囊双胎42例作为对照B组.分娩后收集胎盘并分别称重、检测胎盘份额、脐带插入情况.记录新生儿出生体重及围产儿结局.运用免疫组织化学法分别检测病例组和对照组胎盘组织中VEGF的表达,半定量测其表达强度.体重轻者称小胎,体重重者称大胎.结果 病例组、对照A组及对照B组围产儿死亡率分别为17.8％ （15/84）、6.4％（6/94）、1.2％（1/84）,脐带异常插入率分别为48.8％、10.6％、14.3％.病例组大、小胎胎盘重量为（521±149）g vs.（258±53）g.VEGF在病例组、对照A组大婴胎盘组织中的表达强度高于小婴（P＜0.01）.结论 单绒毛膜双羊膜囊双胎sIUGR围产儿死亡率明显升高.双胎sIUGR危险因素主要有胎盘份额分配不均衡、脐带帆状插入、胎盘血管内皮生长因子表达下降等.     

Bcl-2 与急性白血病患者骨髓组织血管新生的关系

目的通过检测急性白血病（AL）患者骨髓病理切片中血管内皮生长因子（Vascular Endothelial Growth Factor,VEGF）及Bcl-2蛋白的表达和微血管的生成情况及VEGF及Bcl-2蛋白的表达和微血管生成之间的相关性。方法免疫组织化学染色方法检测35例AL患者和35例对照组骨髓病理切片中的,Bcl-2表达;ELISA检测患者血清中VEGF-C的表达。结果对照组患者血清中VEGF-C为（126.34±21.22）pg/ml,实验组患者血清中VEGF-C为（324.45±34.12）pg/ml,35例AL患者,微血管密度（microvessel density,MVD）的平均光密度值为（0.3573±0.030）。35例对照组骨髓病理免疫组织化学片中,MVD的平均光密度值为（0.2192±0.037）。AL患者的MVD平均光密度值明显高于对照组,有显著性差异。结论 AL患者的骨髓组织中由于VEGF的表达,诱导产生更多的Bcl-2蛋白来降低AL细胞凋亡,从而增加AL的恶性程度。     

椎体成形术后椎体界面骨血管内皮生长因子mRNA表达的实验研究

目的探讨植入聚甲基丙烯酸甲酯骨水泥（PMMA）后椎体骨水泥-骨界面周围骨组织中血管内皮生长因子（VEGF）表达,了解骨质疏松性椎体压缩骨折行椎体成形术后PMMA骨水泥周围骨组织的损伤及修复情况。方法 1.模仿经皮穿刺椎体成形术,在72只兔椎体制成0.3cm×0.3cm×0.3cm的骨缺损模型,36只分别注入PMMA骨复合材料,实验组及对照组分别于术后1h,24h,3d,7d,4w,12w处死动物后取骨水泥-骨界面交界处骨组织,检测界面周围骨组织中VEGFmRNA扩增及蛋白表达情况,并与骨质疏松组作对比;2.组织切片HE染色观察,了解周围骨组织增生修复情况。结果 PMMA植入后1h及24h界面骨组织中VEGF的表达减少且低于对照组,术后3d明显增加,7d时再次降低,4～12w明显增加;HE染色提示,PMMA植入后1h可见巨噬细胞趋附,24h有多量炎性细胞浸润,3d时达高峰,7d后逐渐减少,4w时可见软骨细胞增生活跃已有软骨化骨形成,而12w则有板层骨形成。结论 1.PMMA植入椎体后有一定炎性反应,但骨水泥放热反应不会导致骨组织缺血坏死;2.界面周围骨组织修复过程中有VEGF表达,表达高峰比正常推迟4w左右。     

缬沙坦对糖尿病肾病患者血清转化生长因子TGF-β1水平的影响临床观察

目的 探讨缬沙坦对糖尿病肾病患者血清转化生长因子β1（TGF-β1）水平的临床观察。方法 选郑州大学第一附属医院收治216例糖尿病肾病患者作为观察对象,分为110例对照组和106例实验组,用酶联免疫吸附法测定血清TGF-β1水平,并进行组间比较。结果 对照组治疗前后的TGF-β1含量虽有所下降,但无统计学意义,P〉0.05,而实验组在治疗前后的TGF-β1含量有统计学意义,P〈0.05,治疗后的对照组和实验组的TGF-β1含量也有统计学差异,P〈0.05。结论 缬沙坦能抑制TGF-β1的含量,能有效的减缓或控制慢性肾损害,使其在糖尿病肾病中减缓肾小球硬化及肾间质纤维化发挥重要意义。     

转化生长因子-β1和血管内皮生长因子在鼻腔鼻窦内翻转乳头状瘤组织中的表达

目的 探讨转化生长因子-β1(TGF-β1)和血管内皮生长因子(VEGF)在鼻腔鼻窦内翻转乳头状瘤(NIP)组织的中作用.方法 采用免疫组织化学法测定100例NIP患者手术切除的NIP组织和鼻息肉组织中TGF-β1和VEGF的表达.并按病理诊断结果将100例NIP患者分为良性病变组、不典型增生组、恶变组,鼻息肉组为对照组.结果 NIP组TGF-β1和VEGF阳性表达率分别为46.0％和32.0％,均显著高于对照组(均P ＜0.05).在不同病理类型组中,TGF-β1和VEGF阳性表达率为:恶变组＞不典型增生组＞良性病变组(P＜0.05).NIP中TGF-β1和VEGF阳性表达呈显著正相关性(P＜0.05).结论 GF-β1和VEGF与NIP的发生、发展和恶变密切相关.TGF-β1在NIP组织中高表达,并通过上调VEGF的表达而促进NIP新生血管的形成.     

外源NGF促进大鼠皮肤创面模型损伤修复的机制研究

目的：探究外源NGF对大鼠创面的治疗作用及机制。方法：在SD雄性大鼠的背部脊柱的两侧手术切开形成两个2 cm × 2 cm的伤口,右边伤口处给予20 mg/ml NGF 1 ml,左边伤口给等量生理盐水作为对照组。隔天给药到第14天（第14天停止给药）,分别于d3、d7、d14统计创面伤口愈合率,并取这3个时间点的组织用免疫组化的方法检测转化生长因子（ transforming growth factor-β1,TGF-β1）、CD68-阳性巨噬细胞、增殖性细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen,PCNA）、血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF-1）的表达量。结果：NGF组的创面愈合率明显高于生理盐水组,并且NGF组TGF-β1、CD68、PCNA、VEGF-1的蛋白表达量也显著高于生理盐水组（P〈0.05）。结论：外源NGF具有促进创面愈合作用,其机制可能与趋化炎症因子、加快血管生成、促进PCNA、TGF-β1的表达相关。