固相聚丙烯试管“夹心”酶免疫法测定血清铁蛋白

作者介绍采用聚丙烯试管作固相,辣根过氧化物酶(HRP)标记铁蛋白抗体的“夹心”法,测定人体血清铁蛋白。该法简单、快速、灵敏。材料和方法:1.试管处理:每根聚丙烯试管内分别加入1ml浓度为1g/L的戊二醛,56℃保温3小时,蒸馏水清洗3次。2.抗体包被:加1ml 10mg/L兔抗人铁蛋白抗体(溶于pH9.6碳酸盐缓冲液),4℃3天。试管可保存10周,用前用洗涤液(含0.05%吐温20的生理盐水)洗3次。3.测定:每份样品(包括对照、标准)     

IgG抗-A/BELISA检测方法的初探

目的建立1种IgG抗-A/B ELISA检测方法。方法将唾液血型物质以磷酸盐缓冲液包被酶标板,10%脱脂奶粉磷酸盐缓冲液37℃封闭1 h,洗涤后加入系列稀释的待检血清,37℃孵育30 min,洗涤并加入酶标记羊抗人IgG,37℃孵育30 min,洗涤,TMB显色,2 mol/L H2SO4溶液终止反应,酶标仪读取A450/A630,以P/N≥2.1判为抗体阳性,将抗体阳性的最高稀释度作为血清IgG抗-A/B效价。结果阴性对照血清与反应系统无交叉反应;检测IgG抗-A批内变异2.3%~7.7%,批间变异5.9%~8.1%,IgG抗-B批内变异3.7%~5%,批间变异6.5%~8.7%。ELISA法检测30名孕妇IgG抗-A效价阳性率为26.67%,抗体效价检测结果与抗球蛋白法符合率73.33%;IgG抗-B效价的阳性率和符合率分别为23.33%、76.67%。结论 IgG抗-A/B ELISA检测法特异性强,精密度较高,实现了IgG抗-A/B效价检测方法由定性试验到半定量试验的转变。     

用ELISA定量测定人血清载脂蛋白A-1

血清高密度脂蛋白(HDL)的主要载脂蛋白apoA-1的定量测定在临床上具有重要意义。apoA-1的定量测定常用放射免疫法、免疫电泳法和免疫浊度法。本文作者用ELISA[一种“三明治”式酶联免疫法)定量测定人血清apoA-1,具有灵敏度高、抗体用量少、避免放射性、样本处理能力大等优点。本法所用的兔抗人apoA-1抗体均经亲和层折法纯化。聚乙烯酶标板先用纯化apoA-1抗体包被,37℃保温3小时后于4℃放置过夜;倒去包被液后用洗涤液洗涤三次,加入100μl适当稀释的标准apoA-1或待测血清样本,37℃保温2小时;倒去样本液并洗涤5次,加入100μl辣根过氧化物酶标记的纯化apoA-1抗体,置37℃保温2小时后,再次倒去抗体并如前洗涤。最后加入100μl酶反应     

用单一试剂测定血清尿酸的一个简单的动力学方法

试剂将0.525 M冰醋酸、0.3 M氢氧化钾、 3.24 mM 氯化铁、1.6 mM2,4,6-三吡啶-S-三嗪(TPTZ)和5克Brij 99溶于90%乙醇,并用90%乙醇稀释到1升.该贮存液如果避光放置在2～8℃,可以保存一年.1体积的贮存液用4体积的蒸馏水稀释即为应用液,将应用液避光存放于25℃,可以在24小时内稳定不变.它在20℃的pH是4.75±0.06.     

溴化2-氨基乙基异硫脲灭活Kell血型抗原

作者发现,人红细胞经溴化2-氨基乙基异硫脲(2-aminoethylisothiouronium bromide,AET)处理后,Kell血型抗原被特异性灭活,而其它血型抗原不受影响。用5N NaOH调节AET6％水溶液的pH到8.0(临用前配制)。1容积洗涤后的压积红细胞与4容积的上述AET溶液混合,37℃培育20分钟,然后用pH7.0磷酸盐缓冲液洗涤,直到上清液变清(4～6次),冷藏并在24小时内使用。用IgG Kell抗血清作间接抗球蛋白试验,对照研究经AET处理和不经AET处理的红细胞,发现     

用白细胞减少聚酯滤器过滤含醋酸盐添加液的少血浆浓缩血小板

为了解含醋酸盐添加液的少血浆浓缩血小板(PC)中血小板和混入的白细胞受白细胞减少滤器吸附的程度是否会改变,作者用470ml富含血小板血浆,离心后尽可能分出上层血浆,加入85～90mlseto sol或自身血浆制得PC。其中Seto sol为经过氮气中蒸汽灭菌的添加液,含14.8mM醋酸盐、10mM葡萄糖、115mM NaCl、4mMKCl、3mMMgCl_2、10mMNa_3PO_4和3mM枸橼酸三钠,pH7.1。静置1～1.5小时后将Seto sol PC或血浆PC在22～     

双抗体夹心法微量ELISA测定人血小板因子4

测定血小板因子4(PF_4)有多种方法,但是都有一定的局限性。本文介绍一种敏感性强、特异性高、重复性好的方法,即双抗体夹心微量酶联免疫吸附试验(ELISA)。测定过程如下:(1)包被:聚苯乙烯微板的每个孔加150μl缓冲液稀释的抗人PF_4抗体,置37℃孵育20小时,用PBST(磷酸盐缓冲盐水-吐温20溶液)洗4次。(2)抗原孵育:加200μl/孔含1％牛血清白蛋白的PBS,37℃1小时,板用PBST洗1次,再加入50μl/孔含已知量抗原的抗原标准液及血浆标本,37℃1小时,板用PBST洗3次。(3)标记抗体孵育:加100μl/孔用PBST稀释的辣根过氧化物酶标记     

静注免疫球蛋白制备过程中各种病毒的清除

本文报道用Cohn低温乙醇法结合聚乙二醇(PEG)制备静注免疫球蛋白(IVIG)过程中,对各种血源性病毒如:人类免疫缺陷症病毒(HIV)、乙型肝炎病毒(HBV)、水泡性口炎病毒(VSV)和Sindbis病毒(SV)的灭活情况。制备方法:收集抗-HIV阴性血浆,加入病毒,经Cohn低温乙醇法分级分离后,得(?)组份(Fr)-Ⅱ+Ⅲ或组份Fr-Ⅱ。将Fr-Ⅱ+Ⅲ或Fr-Ⅱ悬于冷水中,用HCl调至pH 5.3-5.8,使悬液离子浓度低于1/10浓度的生理盐水,加入PEG 4000于2±1℃20小时,离心收集上清(IVIG),检测病毒灭活情况。结果:(1)在血浆及Fr-Ⅱ+Ⅲ悬液中加入1/40体积的HTLV-Ⅲ溶液,并经Cohn低(?)乙醇法     

用微量C_(19)结合试验测定人及鼠血清中循环免疫复合物

作者介绍一种微量C_(1q)结合试验,用于人和小白鼠血清中循环免疫复合物的检测,并与C_(1q)结合试验的标准法作了对比。实验需要的试剂有pH8.3的硼酸盐缓冲液(0.1M硼酸,0.025M四硼酸二钠,0.075M NaCl);0.2或0.3M含有0.4%吐温20的EDTA(乙二胺四乙酸),用1N NaOH调至pH8.3;以及含0.15mM Ca~(2+)和0.05mM Mg~(2+)的pH7.2的VBS(巴比妥缓冲盐水)。人的C_(1q)制备系采用Volanakis和Stroud改良法。制备的C_(1q)用乳过氧化物酶进行放射性碘标记,(1.25-2微居里~(125)I/μgC_(1q)),保存在-70℃备用。实验当天,将~(125)IC_(ig)10微克融化后加入经56℃30分钟灭活的50微升正常人     

血清中淀粉样蛋白的酶联免疫吸附测定法

本文介绍一种酶联免疫吸附方法测定人血清中的淀粉样蛋白质(SAP)。材料和方法:血清样本(健康男性100例、女性50例)、鼠抗人SAP 血清、纯化SAP 抗体。酶免疫方法:用SAP 抗体包被ELISA 反应板同时标记辣根过氧化物酶。包被液和洗液用pH7.4的磷酸缓冲液;用此液稀释样本、标准及标记抗体时需每升中加入牛血清白蛋白10g。向96孔微量反应板孔中加入100μl 磷酸缓冲液及20∶ng/L 的SAP 抗体,25℃温育16～18小时后甩干,用洗液洗四次。加入100μl 的稀释抗原,37℃温育2小时,冲洗。然后加入100μl 的标记抗体37℃温育2小时,冲洗反应板孔,最后加入100μl 的次酚     

一种微量ELISA.Raji细胞测定法检测免疫复合物

Raji细胞放射免疫试验用于测定血清中的免疫复合物,虽是极为敏感的方法,但较为烦琐。作者将此法作了修改,采用微量ELISA Raji细胞测定法检测血清中的免疫复合物。所用Raji细胞在含小牛血清的RPMI1640培养基生长3天采用正常人血清的Cohn氏Ⅱ组分用热聚合法制备聚合的人球蛋白(AHG),-70℃保存,测定时融化后使用;用辣根过氧化物酶标记山羊抗人IgG,邻苯二胺作底物。用Heusser方法将Raji细胞包被于聚氯乙烯孔内,固定1小时后即可使用,或在缓冲液中4℃可保存1个月以上。测定时,先将板甩干,将50μl血清标本     

基于金磁微粒标记技术的可目视化蛋白质芯片检测方法的建立

目的：应用金磁微粒标记蛋白质技术,建立可目视化蛋白质芯片检测体系,比较金磁微粒和胶体金标记蛋白质技术应用于蛋白质芯片检测效果的优劣。方法：将人IgG点制于环氧基修饰的玻片上,分别与金磁微粒和胶体金标记的羊抗人IgG温育,银染显色,肉眼观察并用普通扫描仪记录结果。结果：基于金磁微粒的蛋白质芯片人IgG最佳点样浓度为0．2mg／ml,37℃温育2h,银染10～15min,检测结果信噪比高;基于胶体金的蛋白质芯片人IgG最佳点样浓度为0．1mg／ml,37℃温育1h,银染15～20min．检测结果信噪比高。结论：金磁微粒标记蛋白质技术应用于蛋白质芯片的检测,具有和胶体金一致的可目视化检测效果。且其标记技术简单,标记的蛋白质可定量。     

用“夹心”型免疫检查法测定白血病原始细胞中的铁蛋白

近年来由于测定铁蛋白敏感方法的改进,发现铁蛋白是血清中的一种正常成份。除铁负荷过多、血色沉着病及肝脏疾病外,在各种恶性疾病中,如乳腺癌、结肠癌、原发性肝细胞癌及白血病,血清铁蛋白浓度均增高。作者从人肝中制备铁蛋白,作为刺激产生抗铁蛋白的抗原和试验的标准。每只兔多部位皮下注入一定量的铁蛋白与完全福氏佐剂免疫动物,收集血清。从抗血清中用硫酸铵分离制备IgG片断并通过DEAE纤维素柱。将IgG片断连结于3.2mm直径的珠上。β-D-半乳糖苷酶标记F(ab’)_2片断。按Tanaka法稍加改良进行免疫检查。将一块用IgG固定的多乙烯苯小珠与20μl血清样本或50μl白血病细胞提出物在30℃孵     

测定β_2—糖蛋白Ⅰ的ELISA法

β_2—糖蛋白Ⅰ的检测是肾小管损害的一个新的指标,本文作者认为以前的辐射状单向琼扩法对于健康人及轻微肾小管损害病人尿的检测缺乏灵敏性,因此建立了ELISA 法。方法:收集健康志愿者和各种不同肾损害病人的血清及随机尿标本(4小时内收集、不加防腐剂)保存于-20℃、-25℃条件下。1.用1∶500稀释的兔抗β_2—糖蛋白Ⅰ抗体包被微孔板,每孔加100ul室温,暗处放置2～6h。2.用洗液(含10g/LNaCl、1ml/L 吐温-20去离子水)洗板10次,每次200μl。     

建立IgA缺陷献血者筛查的ELISA方法

目的利用兔抗人IgA建立ELISA法,初步用于检测筛查正常献血者标本中的IgA。方法用兔抗人IgA建立间接ELISA法,摸索兔抗人IgA包被浓度及HRP标记F(ab)2山羊抗人IgA抗体工作浓度等工作条件。用建立的方法,筛查1 160名正常献血者血浆中IgA。结果建立了间接ELISA法,并确立了一系列反应条件。筛查结果显示,1 160名正常献血者血浆中IgA<0.05 mg/dl者为5例,检出率为0.43%。结论初步建立了ELISA筛查IgA缺陷献血者的方法。     

布鲁氏菌血清 IgM,IgG 抗体胶体金免疫层析检测方法的建立及初步临床应用

目的　应用胶体金免疫层析技术建立一种快速检测布鲁氏菌 IgM,IgG 抗体的方法,并进行初步的性能验证。方法　采用枸椽酸三钠还原法制备胶体金颗粒,标记纯化的抗重组布鲁氏菌抗原,将鼠抗人 IgG 抗体、鼠抗人 IgM 抗体和兔抗布鲁氏菌抗体喷在硝酸纤维素膜上作为检测线和质控线,对 pH 值和抗体浓度等条件优化;评估试剂盒灵敏度、特异度、交叉反应、准确度、精密度和干扰实验;用该方法对临床的 400 份血清进行检测,试管凝集试验验证其准确性。结果　该试纸条最佳胶体金标记的 pH 值为 7.5,标记重组抗原质量浓度为 30?g/ml。方法的灵敏度和稳定性较好且与其他病原菌无交叉反应。血清总胆红素、血脂和血红蛋白浓度的增高会使试纸条显色结果减弱。对400份临床样本进行检测,其结果与试管凝集试验的符合率为 93.75%。结论　该试验建立的布鲁氏菌 IgM/IgG 抗体的胶体金免疫层析检测方法具有较好的特异度和稳定性,整个检测过程可在 15min 内完成,能够快速检测样品血清,适用于现场快速检测。     

一种使用抗RhD单抗测定临床用免疫球蛋白制品抗-D能力的竞争性放射免疫测定法

作者建立了一种使用单克隆抗-D的竞争性放射免疫测定法,利用标记的抗-D单抗和未标记的抗-D制品竞争结合抗原,从而测定预防用免疫球蛋白制品的抗-D能力。采用三种人单克隆抗-DFog-1,Brad-3和Brad-5作为~(125)I标记标准,对多种抗-D制品进行了检测,并将检测结果与自动分析法进行了比较。 首先需通过红细胞稀释曲线求得放射免疫法(RIA)中应采用的红细胞浓度。以确保一定抗原浓度。红细胞以1:1为起始浓度,进行5倍连续稀释,将110μl各稀释度的红细胞分别与10μl~(125)I标记的单克隆抗-D于37℃孵育1小时,洗涤。离心后,用γ-计数器测定结合到细胞上的放射活性,以结合的放射百分数对     

一种高灵敏度的测定血清铁蛋白的“夹心”酶免疫法

血清铁蛋白浓度是评价铁贮备的一项指标,对某些恶性疾病的诊断有一定价值。本文介绍一种将β-D-半乳糖苷酶和纯化的抗人铁蛋白Fab’段片偶联的酶免疫分析法(EIA),灵敏度可达23fg/每管。材料和方法取8ml兔抗人铁蛋白血清用Na_2SO_4和DEAE进行层析处理,将取得的IgG溶于含有0.15M NaCl的0.01M磷酸钠缓冲液(pH7.4)中,并在同一种缓冲液中透析。把117mg透析上清液加到2mg铁蛋白与1g CNBr-琼脂糖4B偶联的亲和层析柱上,用3M硫氰化钾洗脱、透析,获得5.1mgJgG。将IgG水解或Fab’,在N,N’-邻苯二顺丁烯     

红细胞上IgG的定量测定:每个红细胞上IgG分子的数目与直接和间接抗人球蛋白试验强度间的关系

本文以放射免疫法测定红细胞上的IgG分子数目,其敏感度达每个细胞12个以内,且能使非特异性结合降至最低限度,故可用于各种抗体的间接抗人球蛋白试验(IAGT)研究和大量直接抗人球蛋的试验(DAT)阳性病例。试剂:AHG试剂为单一特异性的抗IgG,用盐水稀释并进行标化,再以氯胺T标以~(125)I,吸附于胰蛋白酶处理的细胞上。抗体致敏细胞:取正常人或病人抗血清2体积,加10%红细胞盐水悬液1体积,37℃孵育1小时,洗涤4次,配制成适当浓度。抗人球蛋白试验:在12×75mm试管中,加入5%红细胞悬液及AHG试剂各1体积,120g离心1分钟,     

用ELISA(方法)测定血清淀粉样蛋白P

血清淀粉样蛋白P(SAP)呈糖基化(蛋白),在血清中以两个五聚圆盆状的复合体存在。SAP 由肝脏合成,半衰期为7.8～8.5小时,说明SAP 产生快速而持续以维持血清中稳定浓度在40～50mg/L。为更好了解SAP 的功能,需要快速的测定方法。本文介绍ELISA 测定人SAP 浓度。方法如下:用经蛋白A 层析柱和SAP(琼脂糖CL-4B 柱纯化的抗SAP 包被。同一抗体用辣根过氧化物酶标记作为二抗。反应板每孔中加100μl抗SAP 抗体(20mg/L)溶液,放25℃16～18小时,递经洗涤加100μl 受检标本温育洗涤后,加100μl 标记抗体,按常规洗涤,于492nm 波长读取吸光度。本法从混合人血清分离出的SAP 的纯度>