基于能量代谢机制的柴胡总皂苷对小鼠肝毒性的“量-时-毒”关系研究

目的:研究单次给予柴胡总皂苷致小鼠肝毒性损伤的机制及其时毒、量毒关系。方法:按小鼠急性肝毒性"量-时-毒"关系研究方法进行,"时-毒"关系研究:小鼠灌胃一定剂量(36.075 g/kg)的柴胡总皂苷提取物,分别于给药后不同时间点检测血清谷胱甘肽S转移酶(GST)、乳酸脱氢酶(LDH)水平;"量-毒"关系研究:给小鼠灌胃不同剂量(36.075、21.650、12.975、7.925、4.675 g/kg)的柴胡总皂苷提取物,于给药后2 h检测血清谷胱甘肽S转移酶(GST)、乳酸脱氢酶(LDH)水平。结果:对柴胡总皂苷致小鼠肝毒性"时-毒"关系研究显示:小鼠单次灌胃柴胡总皂苷提取物后1 h血清GST、LDH水平开始升高,与0 h组比较有极显著性差异;血清GST、LDH水平均于药后12 h达到峰值,之后逐渐恢复。对柴胡总皂苷致小鼠肝毒性"量-毒"关系研究显示:小鼠单次灌胃不同剂量的柴胡总皂苷提取物后2h血清GST、LDH水平均有不同程度升高,且呈现一定的剂量相关性。结论:小鼠单次灌服一定剂量柴胡总皂苷提取物可造成急性肝损伤,并呈现一定的时毒、量毒关系;影响肝脏能量代谢是柴胡总皂苷致小鼠肝毒性损伤的途径之一。     

吴茱萸水提组分单次给药对小鼠肝毒性“量-时-毒”关系研究

目的:研究吴茱萸水提组分单次给药致小鼠肝毒性的时毒、量毒关系。方法:取小鼠按不同时间点和不同剂量分组给药,观察小鼠死亡情况和毒性反应,检查血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST),计算肝、脾、胸腺脏器指数,光学显微镜下观察肝组织形态变化。结果:"时-毒"关系研究表明:小鼠单次灌服32.5 g/kg的吴茱萸水提组分后,血清ALT、AST值随时间不同均造成肝损害程度也不同,均可导致肝脏指数明显升高,小鼠血清ALT、AST均在给药后2 h达到高峰;肝组织病理学检查显示,吴茱萸水提组分可在给药8～72 h内对肝组织产生明显损伤。"量-毒"关系研究表明:与正常组比较,吴茱萸水提组分不同剂量组对肝组织产生不同程度的损伤,且随着剂量增大,ALT、AST升高显著,呈剂量依赖关系。结论:小鼠单次灌服吴茱萸水提组分可造成小鼠一定的急性肝损伤,其对肝损伤程度呈现有一定的"量-时-毒"关系。     

基于代谢组学的四逆汤中附子-干姜药对配伍前后毒效变化规律分析

目的 探讨附子干姜配伍前后的毒效变化规律,揭示二者配伍内涵。方法 将60只SD大鼠随机分为空白组、空白-附子组、空白-附子干姜组、模型组、模型-附子组、模型-附子干姜组,后3组采用尾静脉注射阿霉素复制心力衰竭大鼠模型,前3组尾静脉注射等量生理盐水,并对比分析附子单煎液与附子干姜合煎液对正常大鼠与模型大鼠生化指标、心肌组织病理学形态的影响;对大鼠血清样品进行代谢组学分析,运用主成分分析（PCA）和正交偏最小二乘法判别分析（OPLS-DA）筛选组间差异代谢物,并分析差异代谢通路;结合网络药理学筛选附子干姜配伍前后与增强抗心衰药效、调控心脏毒性相关的代谢物及其关联靶点、通路,采用蛋白免疫印迹法（Western blot）对筛选出的代表性通路进行验证。结果 与空白组比较,模型组脑钠肽（BNP）、肌酸激酶（CK）、乳酸脱氢酶（LDH）、肌钙蛋白（cTn）-T含量显著升高（P<0.01）,空白-附子组CK、LDH、cTn-T含量明显升高（P<0.05,P<0.01）,空白-附子干姜组CK含量显著升高（P<0.01）;与空白-附子组比较,空白-附子干姜组LDH含量明显降低（P<0.05）,病理切片显示2种煎液均可导致正常大鼠心肌组织病理损伤。与模型组比较,模型-附子干姜组BNP、CK、LDH、cTn-T含量明显降低（P<0.05,P<0.01）,模型-附子组BNP、LDH、cTn-T含量明显降低（P<0.05,P<0.01）;与模型-附子组比较,模型-附子干姜组CK含量显著降低（P<0.01）,2种煎液均可改善模型大鼠心肌组织病理学形态。代谢组学结果显示,附子单煎液与附子干姜合煎液分别可回调模型大鼠422种与459种代谢物,附子干姜合煎液对正常大鼠的代谢干扰作用弱于附子单煎液。网络药理学关联分析结果显示,干姜增强附子抗心衰药效方面,脱氧尿苷酸等3个代谢物关联到56个代谢物,82个靶点,13条通路,包括钙信号通路、肾素分泌、肾素-血管紧张素系统等;干姜影响附子心脏毒性方面,酪醇等3个代谢物关联到24个代谢物,55个靶点,14条通路,包括心肌细胞肾上腺素能信号转导、碳代谢等。Western blot验证实验结果显示,与空白组比较,模型组大鼠心肌组织中血管紧张素转换酶（ACE）、血管紧张素转换酶2（ACE2）、血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）表达显著升高（P<0.01）;与模型组比较,模型-附子组、模型-附子干姜组ACE、ACE2、AngⅡ表达显著降低（P<0.01）,与模型-附子组比较,模型-附子干姜组ACE2、AngⅡ表达显著降低（P<0.01）;与空白组比较,空白-附子组、空白-附子干姜组细胞外信号调节激酶（ERK）、蛋白激酶B（Akt）、cTn-I3表达显著升高（P<0.01）,与空白-附子组比较,空白-附子干姜组ERK、Akt、cTn-I3表达降低,但差异无统计学意义。结论 附子-干姜药对在病理状态下表现出一定程度的配伍增效关系,在正常生理状态下表现出一定程度的配伍减毒关系,二者的药效特征、配伍实质与机体生理状态密切相关。     

吴茱萸水提组分多次给药对小鼠 肝毒性的"量-时-毒"关系研究

目的:研究吴茱萸水提组分多次给药致小鼠肝毒性的时毒、量毒关系。方法:取小鼠按不同时间点或不同剂量分组,分别给小鼠灌胃吴茱萸水提组分,观察小鼠死亡情况和毒性反应,分别于药后相应时间点检查血清肝功指标和肝脏组织谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)活性,计算肝、肾脏器指数,光学显微镜下观察肝组织形态变化。结果:小鼠血清和肝组织ALT,AST在给药后1 d开始升高,3 d肝毒性明显,可持续到7 d。与正常组比较,药后7 d之内,吴茱萸水提组分在0.63～5.0 g.kg-1可造成小鼠明显的肝毒性损伤,表现ALT,AST,碱性磷酸酶(AKP),总胆红素(TBI)升高,白蛋白(ALB)降低,肝体比值增高,病理组织学检测出现不同程度的肝细胞水肿和脂肪变性、间质充血,呈现一定的量毒、时毒关系;上述变化随剂量的增加而逐渐加重,与正常对照组比较有明显差异。结论:多次给小鼠灌服一定剂量的吴茱萸水提组分可造成明显的肝损伤,并呈现一定的肝毒性"量-时-毒"关系。     

吴茱萸挥发油单次给药对小鼠肝毒性"量-时-毒"关系研究

目的:研究吴茱萸挥发油组分单次给药致小鼠肝毒性的时毒、量-毒关系。方法:取小鼠按不同时间点和不同剂量分组给药,观察小鼠死亡情况和毒性反应,检查血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST),计算肝、脾、胸腺脏器指数,光学显微镜下观察肝组织形态变化。结果:"时-毒"关系研究表明:小鼠单次灌服1.35 ml/kg的吴茱萸挥发油后,血清ALT、AST值随时间不同造成肝损害程度也不同,均可导致肝脏指数明显升高,小鼠血清ALT、AST均在给药后6 h达到高峰;肝组织病理学检查显示,吴茱萸挥发油可在给药8～72 h内对肝组织产生明显损伤。"量-毒"关系研究表明:与正常组比较,吴茱萸挥发油不同剂量组对肝组织产生不同程度的损伤,且随着剂量增大,ALT、AST升高显著,呈剂量依赖关系。结论:小鼠单次灌服吴茱萸挥发油可造成小鼠一定的急性肝损伤,其对肝损伤程度呈现有一定的"量-时-毒"关系。     

柴胡总皂苷对小鼠肝毒性“量-时-毒”关系研究

目的:研究柴胡总皂苷醇洗脱物(81.9%)单次给药致小鼠肝毒性的时毒、量毒关系。方法:取小鼠按不同时间点和不同剂量分组,观察小鼠死亡情况和毒性反应,检查血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST),计算肝、脾、胸腺脏器指数,光学显微镜下观察肝组织形态变化。结果:"时-毒"关系研究表明:按柴胡总皂苷含量计算,小鼠单次灌服74.5 mg/kg的柴胡总皂苷醇洗脱物后,小鼠血清ALT、AST均在给药后1～2 h达到高峰,48 h开始恢复,72h恢复近正常值;肝组织病理形态学检查显示柴胡总皂苷醇洗脱物给药8～24 h后可对肝组织产生明显损伤。"量-毒"关系研究表明:与正常组比较,柴胡总皂苷醇洗脱物不同剂量组(按柴胡总皂苷含量计算,分别为74.5,59.6,47.7,38.2,30.6,24.5 mg/kg)对肝组织产生不同程度的损伤,且随着剂量增大,ALT、AST升高显著,呈剂量依赖关系;肝组织病理形态学检查显示柴胡总皂苷醇洗脱物不同剂量组小鼠肝组织出现不同程度的肝细胞水肿和脂肪变性,其中高剂量组甚至出现片状坏死、小叶结构不清。结论:小鼠单次灌胃等生药量不等总皂苷含量的柴胡总皂苷醇洗脱物造成的急性肝损伤明显重于粗品,并呈现一定的时毒、量毒关系。     

基于“温补脾阳”功效的附子“效—毒—证”关联研究

目的:分别研究附子水提物预防或治疗给药对脾肾阳虚证大鼠发挥温补脾阳功效时的药效及其伴随毒副作用。方法:按15%大黄粉悬液每天给药剂量为8.9 g·kg-1·d-1,连续给药9 d,且附加冰水游泳致力竭的方法,制备大鼠脾肾阳虚证模型。预防实验组给药与造模同时进行,治疗实验组造模成功后给药,两个实验药物组均给药9 d。实验期间进行证候积分和体重称量,并检测血中TSH、IgG、C3等药效指标和LDH、CTn-I等心毒性指标的水平。结果:附子水提物能改善脾肾阳虚证大鼠的证候积分,增大脾体比值、肾体比值、肾上腺体比值和胸腺体比值,同时能升高血清中TSH、IgG、C3水平,且升高血LDH、CTn-I的水平,降低心体比值。结论:附子水提物对大黄致脾肾阳虚证大鼠具有一定的预防和治疗作用,同时均伴有一定的心脏毒性作用。     

附子及其炮制品对大鼠心脏毒性的影响

目的基于心电图变化和血清生化指标的改变,探讨附子及炮制品对大鼠心脏毒性的影响。方法根据附子不同炮制品和给药剂量对雄性SD大鼠分组大鼠,按体质量随机分为10组,即空白组,生附子低、中、高3个剂量组,白附片低、中、高3个剂量组,黑顺片低、中、高3个剂量组,每组各10只。十二指肠注射给药,对比给药前后大鼠Ⅱ导联心电图(ECG)的变化,并检测大鼠血清中肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)和B-型脑钠肽(BNP)水平。结果附子及其炮制品给药后,可短时间内显著增加心率HR、抬高S-T段、延长P-R间期(P0.05或P0.01),对QRS波群、Q-T间期的影响无统计学意义(P0.05)。生附子中剂量组和白附片中剂量组可显著提高CK和LDH水平(P0.05),附子及炮制品对BNP影响无统计学差异(P0.05)。结论生附子可引起ECG异常变化,导致不同程度的心肌损伤,并呈现一定的"量-毒"关系,炮制品黑顺片、白附片导致的心电异常较生附子减弱,有助于阐明炮制减毒的科学内涵。     

三七总皂苷对杠柳毒苷代谢产物杠柳次苷药代动力学的影响

[目的]研究三七总皂苷对杠柳毒苷代谢产物杠柳次苷药代动力学的影响。[方法]将18只SD大鼠随机分为杠柳毒苷单独给药组、杠柳毒苷与低剂量三七总皂苷配伍组、杠柳毒苷与高剂量三七总皂苷配伍组3组,每组6只。各组大鼠连续灌胃给药7 d后,采集不同时间点的血浆样品,测定血浆中杠柳次苷的含量,并计算其药代动力学参数。[结果]三七总皂苷配伍杠柳毒苷后,杠柳毒苷代谢产物杠柳次苷在大鼠血浆中的主要药动学参数C_max、T_max、AUC_0-t、AUC_0-∞与杠柳毒苷单独给药相比具有统计学差异。[结论]三七总皂苷与杠柳毒苷配伍使用可使杠柳毒苷代谢产物杠柳次苷的药代动力学行为发生改变。     

复方灵芝孢子精油软胶囊抗疲劳耐缺氧能力研究

目的： 研究复方灵芝孢子精油软胶囊抗疲劳、耐缺氧的药理作用。 方法： 昆明种小鼠随机分为5组,分别为复方灵芝孢子精油软胶囊低、中、高（385,770,1 540 mg·kg^-1·d^-1）3个剂量组、对照药红参醇提物400 mg·kg^-1·d^-1组、空白对照组,灌胃给药30 d后分别考察各组小鼠负重游泳、常压耐缺氧条件下的生存时间及负重游泳后小鼠血清尿素氮、乳酸脱氢酶、甘油三酯含量。 结果： 复方灵芝孢子精油软胶囊低、中、高剂量组能不同程度的加快运动小鼠血清尿素氮的清除、提高血清乳酸脱氢酶含量、减少运动后小鼠体内血清游离甘油三酯含量,显著的延长小鼠负重游泳时间（P<0.05,P<0.05,P<0.01）;中、高剂量组能显著延长小鼠缺氧条件下的生存时间（均P<0.05）。 结论： 复方灵芝孢子精油软胶囊具有抗疲劳、耐缺氧作用,是一种有效的抗疲劳中药复方制剂。     

柴胡总皂苷粗提物多次给药对大鼠肝毒性的“量-时-毒”关系研究

目的:研究柴胡总皂苷粗提物多次给药致大鼠肝毒性的时毒、量毒关系。方法:取大鼠按不同时间点或不同剂量分组,分别给大鼠灌胃柴胡总皂苷粗品,观察大鼠死亡情况和毒性反应,检查血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST),计算肝脏脏器指数,光学显微镜下观察肝组织形态变化。结果:"时-毒"关系研究表明:大鼠血清ALT,AST均在给药后7 d开始升高,15 d肝毒性明显,其后出现并发毒性和死亡。"量-毒"关系研究表明:在药后15 d之内,与正常组比较,51.2~125.0 g.kg-1柴胡总皂苷粗品可造成大鼠明显的肝毒性损伤,表现在ALT,AST升高,肝体比值增大,病理组织学检测出现不同程度的肝细胞水肿和脂肪变性,大剂量、长时间给药组出现片状坏死、肝小叶结构不清;上述变化随剂量的增加而逐渐加重,与空白组比较有明显差异。结论:多次、长时间给大鼠灌服一定剂量柴胡总皂苷粗提物可造成严重肝损伤甚至死亡,并呈现明显的肝毒性"量-时-毒"关系。     

基于肝药酶P450动态变化的柴胡总皂苷小鼠肝毒性剂量-时间-毒性关系研究

目的:研究单次给予柴胡总皂苷致小鼠肝毒性损伤的程度及其机制。方法:按小鼠急性肝毒性剂量-时间-毒性(量-时-毒)关系研究方法进行。时-毒关系研究:小鼠ig一定剂量(36.075 g·kg-1)的柴胡总皂苷提取物,分别于给药后不同时间点检测血清细胞色素P450(CYP450)、丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)水平,解剖,取肝脏,光学显微镜下观察肝组织形态变化;量-毒关系研究:给小鼠ig不同剂量(36.075,21.650,12.975,7.925,4.675 g·kg-1)的柴胡总皂苷提取物,于给药后2 h按时-毒实验方法进行相应处理。结果:对柴胡总皂苷致小鼠肝毒性时-毒关系研究显示:小鼠单次ig柴胡总皂苷提取物后1 h血清CYP450,ALT,AST水平开始升高,与0 h组比较均有极显著性差异,并分别于药后8,2,2 h达到峰值,之后逐渐恢复。对柴胡总皂苷致小鼠肝毒性量-毒关系研究显示:小鼠单次ig不同剂量的柴胡总皂苷提取物后2 h血清CYP450,ALT,AST水平均有不同程度升高,且呈现一定的剂量相关性。光学显微镜下观察,柴胡总皂苷提取物组小鼠肝组织出现不同程度的肝细胞水肿和脂肪变性,其中高剂量组可出现片状坏死、小叶结构不清等病变。结论:柴胡总皂苷的肝毒作用机制可表现在影响肝脏对药物的代谢能力方面。     

西红花酸对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用

目的 研究西红花酸对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用及可能的机制.方法 梗死模型,结扎大鼠左前降支冠状动脉45 min,再灌注180 min测定心肌梗死率,并于缺血前和再灌注5、60、180 min测定血清中的肌酸激酶(CK)和乳酸脱氢酶(LDH)活性.顿抑模型,结扎大鼠左前降支冠状动脉15 min,再灌注180 min测定缺血和非缺血心肌组织中Na ,K -ATP酶、Ca2 ,Mg2 -ATP酶活性、总腺苷酸(TAC)的量、能荷(EC)和血清中丙二醛(MDA)的量.并于缺血前、缺血末.再灌注5、30、90、180 min时测定心率、左心室内收缩压、舒张压、射血分数、最大和最小左心室内压变化速率(±dp/dt)、最大和最小左心室容积变化速率(±dV/dt)以及每搏功.结果 缺血前或者再灌注前给予西红花酸能够显著降低心肌梗死率.呈剂量依赖关系;并且降低血清中CK和LDH的活性.50 mg/kg西红花酸可以改善心脏功能,减轻心肌顿抑的程度,升高心肌组织ATP的量及EC.结论 西红花酸可以有效抑制因心肌缺血和再灌注引发的心肌梗死,缓解心肌顿抑,西红花酸可能是通过改善心肌能量代谢发挥其抗心肌缺血再灌注损伤作用的.     

心脏药代酶的附子-甘草配伍减毒机制

目的:基于心脏细胞色素P450(cytochrome P450,CYP450)系统考察附子与甘草配伍后对正常大鼠心脏的减毒机制研究。方法:雄性SD大鼠,随机分为空白组、诱导剂苯巴比妥组(0.08 g·kg^-1·d^-1),附子组(0.5 g·kg^-1·d^-1),甘草组(0.5 g·kg^-1·d^-1)和附子-甘草组(0.5 g·kg^-1·d^-1)。检测大鼠心肌酶天冬氨酸氨基转移酶(aspartate transaminase,AST),肌酸激酶(creatine kinase,CK)和乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)含量变化,同时观察大鼠心脏组织的病理学改变,并观察各组对药物代谢酶CYP2B1,CYP2C11,CYP2E1,CYP2J3,CYP4A1,CYP4A3,CYP4F1,CYP4F5,CYP4F6 mRNA表达水平的变化。结果:与空白组比较,附子组中大鼠血清AST,CK和LDH含量升高(P<0.05),配伍后AST,CK和LDH心肌酶的含量较附子组降低,但未出现统计学差异;同时病理学结果显示附子组大鼠出现心脏损伤,配伍后甘草可减轻由附子产生的心脏损伤作用;在基因转录水平,甘草组能不同程度地上调CYP2C11和CYP2J3 mRNA表达(P<0.05),甘草与附子配伍后能上调CYP2B1,CYP2C11和CYP2J3家族mRNA表达(P<0.05),推测配伍可促进花生四烯酸(arachidonic acid,AA)代谢生成环氧二十碳三烯酸(expxyeicosatrienoic acid,EETs),附子能上调CYP4家族中CYP4A1,CYP4A3,CYP4F1,CYP4F5和CYP4F6 mRNA表达(P<0.05),其能促进20-羟-二十烷四烯酸(20-hydroxyeicosatetraenoicacid,20-HETE)的生成,附子-甘草配伍后能削弱附子下调CYP4A3,CYP4F1,CYP4F5和CYP4F6家族mRNA表达的能力(P<0.05),抑制20-HETE的生成,减轻由附子产生的心脏毒性。结论:附子-甘草配伍后可调控心脏CYP450酶的表达,使EETs生成量增加,20-HETE含量减少,起到减毒的作用。     

Protection of Water Extract from Paeoniae Radix Rubra against Myocardial Ischemia in Mice Induced by Isoproterenol

Objective To study the protective effect of the water extract from Paeoniae Radix Rubra(WEPRR)against myocardial ischemia in mice induced by isoproterenol(ISO).Methods The mice were randomly divided into six groups:positive control,normal control,model,low-,mid-,and high-dose[0.3,0.6,and 1.2 g/(kg·d)]WEPRR groups.The mice in WEPRR groups were ig administered with WEPRR,the mice in the positive control group were ig administered with 0.98%Di’ao Xinxue Kang[(0.195 g/(kg·d)],and the mice in normal and model groups were ig administered with the same volume of physiological saline once daily for consecutive 11 d.On the day 7 from the beginning of the ig administration,the mice in the model and WEPRR groups were ip perfused with 0.02 g/(kg·d)ISO.After 15 min of the last medication,the mice were anesthetized with isoflurane gas,the blood was collected through venous sinus of eye orbit,then the mice were killed.The heart tissues were rapidly removed from the mice,washed in physiological saline,soaked in filter paper,and stored in 80℃until use.The activities of lactate dehydrogenase(LDH),creatine kinase-MB(CK-MB),creatine kinase(CK)in serum,superoxide dismutase(SOD),and the contents of malondialdehyde(MDA)in the heart of mice were determined,respectively.Results Compared with the model group,the activities of LDH,CK-MB,and CK in serum,and the SOD of mice in the positive control and WEPRR groups were increased and the content of MDA in heart was decreased.Conclusion The WEPRR has the cardioprotective activities on ISO-induced myocardial ischemia.     

不同剂量附子水煎液对慢性心力衰竭小鼠的干预作用

目的：探讨不同剂量附子水煎液对慢性心力衰竭（CHF）小鼠的影响。方法：将53只C57/6J小鼠雄性随机分为对照组、模型组、附子水煎液低剂量组、附子水煎液中剂量组、附子水煎液高剂量组,用盐酸阿霉素（Dox）腹腔注射诱导CHF小鼠模型,药物干预给予不同浓度（0.2、0.6、2 mg/kg）的附子水煎液进行灌胃治疗,1次/d,连续干预30 d,统计小鼠生存率和一般指标,评价小鼠心脏功能,观察心肌组织病理形态学的变化,检测血清中脑钠肽（BNP）和心肌肌钙蛋白I（cTnI）的含量,检测心钠尿肽（ANP）和BNP的mRNA表达水平,检测活化的天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶（Cleaved-caspase3）和凋亡蛋白Bax（Bax）的表达情况。结果：与模型组比较,不同剂量附子水煎液组小鼠心脏功能均得到改善（P<0.05）,且高剂量附子水煎剂组改善最为显著,具体表现为心肌组织横截面积增大,血清BNP和cTnI的含量降低（P<0.05）,BNP的mRNA表达水平和Cleaved-caspase3及Bax蛋白表达水平明显降低（P<0.05）。结论：附子水煎液能剂量依赖性地抑制心肌细胞凋亡,减轻小鼠心功能及其病理结构的改变,进而改善Dox诱导的CHF。