bcl—2基因反义核酸对白血病细胞药物敏感性的影响

目的：探讨ｂｃｌ－２基因反义核酸对白血病细胞药物敏感性的影响。方法：应用细胞培养，免疫标记及流式细胞仪技术，检测了ｂｃ１－２基因反义寡脱氧核糖核苷酸（ＡＳＯＤＮ）和阿糖胞苷（Ａｒａ－Ｃ）对白血病Ｋ５６２和ＨＬ－６０细胞作用和ｂｃｌ－２基因表达。结果：Ａｒａ－Ｃ（１０μｍｏｌ／Ｌ）与ｂｃｌ－２ＡＳＯＤＮ同时作用比单独用Ａｒａ－Ｃ或Ａｒａ－Ｃ与正义寡脱氧核糖核苷酸（ＳＯＤＮ）细胞存活率显著减少（Ｐ＜０００１），并且流式细胞仪检测显示ｂｃｌ－２ＡＳＯＤＮ使ｂｃｌ－２蛋白阳性率降低。结论：ｂｃｌ－２基因反义寡核苷酸能抑制该基因表达，提高白血病细胞对Ａｒａ－Ｃ的敏感性     

反义bcl-2 DNA促进裸鼠荷人鼻咽癌细胞株CNE2-baxα凋亡

目的：在裸鼠活体水平上观察ｂｃｌ－２反义寡聚核苷酸（ａｎｔｉｓｅｎｓｅ ｉｏｌｉｇｏｄｅｏｘｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ,ＡＳＯＮ）对鼻咽癌细胞株ＣＮＥ２－ｂａｘα凋亡的影响。方法;ＤＮＡ合成仪合成２２ｎｔ ＡＳＯＮ片段,ＲＴ－ＰＣＲ检测ｂｃｌ－２表达,电镜观察细胞凋亡。结果;反义ｂｃｌ－２ ＤＮＡ片段局部注射ＣＮＥ２－ｂａｘα致瘤组织,ＲＴ－ＰＣＲ检测肿瘤组织中ｂｃｌ－２表达被封闭,电镜观察视野下可见     

胶质瘤p53、bcl-2、MDM2表达与细胞增殖和凋亡的关系

目的：研究胶质瘤中ｐ５３ 、ｂｃｌ２ 、ＭＤＭ２ 表达与细胞增殖和凋亡的关系。方法：对４８ 例胶质瘤用免疫组化法检测ｐ５３、ｂｃｌ２、ＭＤＭ２ 蛋白表达;以Ｋｉ６７ 标记指数和ＡｇＮＯＲ 计数检测其增殖活性;用ＴＵＮＥＬ 法检测细胞凋亡。结果：ｐ５３、ｂｃｌ２、ＭＤＭ２ 蛋白表达阳性率分别为４７－９ ％ 、３５－８ ％ 及１２－５ ％ ,细胞增殖活性随肿瘤ｐ５３ 、ｂｃｌ２、ＭＤＭ２ 表达水平增高而增高,细胞凋亡则相反。结论：ｐ５３、ｂｃｌ２、ＭＤＭ２ 蛋白过表达与细胞增殖失控、凋亡抑制关系密切,在胶质瘤恶性进展中起重要作用。     

bcl-2、p53蛋白及PCNA表达与横纹肌肉瘤临床病理相关性研究

目的：研究横纹肌肉瘤（ＲＭＳ）中ｂｃｌ－２、ｐ５３、ＰＣＮＡ表达与其临床病理的相关性。方法：对５０例（随访４１例）横纹肌肉瘤进行免疫组化ＡＢＣ法标记。结果：ｂｃｌ－２、ｐ５３基因蛋白和ＰＣＮＡ，发现ｂｃｌ－２、ｐ５３、ＰＣＮＡ阳性表达率分别为２８％、７２％、７０％，其阳性表达与年龄、性别及不同组织类型的ＲＭＳ无关（Ｐ＞０．０５）。但与分化程度有关，ｐ５３、ＰＣＮＡ在低分化ＲＭＳ阳性率分别为８５％、９５％，显著高于高分化ＲＭＳ４２．８％和１４．３％（Ｐ＜０．０５），随访存活１年以内的ｐ５３、ＰＣＮＡ阳性率均为８６．７％，亦明显高于存活超过３年以上的阳性率３３．３％和４１．７％（Ｐ＜０．０５）。而ｂｃｌ－２在低分化ＲＭＳ阳性２０％显著低于高分化７１．４％（Ｐ＜０．０５），随访存活１年以内的阳性率１３．４％明显低于存活超过３年以上的４１．４％（Ｐ＜０．０５）。ｐ５３与ｂｃｌ－２阳性表达呈明显负相关，ｐ５３阳性率越高，而ｂｃｌ－２阳性率越低。结论：ＰＣＮＡ、ｐ５３、ｂｃｌ－２蛋白表达能比较准确地反映ＲＭＳ的生物学特性，ｐ５３、ｂｃｌ－２可作为肿瘤预后显著相关的有效指标。     

反义寡核苷酸对K562细胞株恶性表型逆转作用的研究

用人工合成的ｂｃｒ３／ａｂＬ２反义寡聚脱氧核苷酸（ＡＳＯ－ｂ）及无关寡聚脱氧核苷酸（Ｎ－ＯＤＮ）处理人急性红白血病细胞株Ｋ５６２细胞，结果造成了细胞恶性行为的改变。表现为细胞生长减慢、Ｐ２１０蛋白表达受抑、ＤＮＡ的合成减少及集落形成能力下降，从而证明了反义核酸在癌基因表达上的调控和抑制细胞恶性行为的作用。     

人类bcl-2基因在小鼠NIH/3T3细胞中的作用观察

本实验探讨了人类ｂｃｌ－２基因对小鼠ＮＩＨ／３Ｔ３细胞增殖和存活能力的影响。结果表明，人类ｂｃｌ－２基因转染对正常培养条件下的细胞的增殖和存活能力无明显影响，但能增加细胞对血清撤退和ｓｔａｕｒｏｓｐｏｒｉｎｅ（ＳＴＳ）两种致凋亡因素的抵抗作用。这一研究丰富了ｂｃｌ－２基因调控细胞凋亡的资料，并为深入研究奠定了基础     

文摘

活化巨噬细胞中ｂｃｌ－ＸＬ的生理学作用［英］／ＯｋａｄａＳ…／／ＪＩｍｍｕｎｏｌ．－１９９８，１６０．－２５９０～２５９６目的：ｂｃｌ－２家族基因参与凋亡的调控，细胞中Ｂｃｌ－２或ｂｃｌ－ＸＬ与ｂａｘ之间的表达比例可决定其存活或凋亡。已有资料表明，Ｎ...     

嵌合性硫代磷酸修饰的反义c-myc寡脱氧核苷酸对动脉平滑肌细胞增殖抑制作用的研究

目的：探讨ｃ－ｍｙｃ基因表达在血管平滑肌细胞增殖信号传导通路中的作用和采用反义ｃ－ｍｙｃ寡脱氧核苷酸抑制血管平滑肌细胞（ＳＭＣ）增殖的作用。方法：采用针对大鼠ｃ－ｍｙｃｍＲＮＡ包括ＡＵＧ在内的翻译起始区的前５个密码子的嵌合性硫代修饰的反义ｃ－ｍｙｃ寡脱氧核苷酸（ＡＳ－ＯＤＮ）,以ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ导入ＳＭＣ后,通过细胞计数和３Ｈ－ＴｄＲ掺入观察其对ＳＭＣ增殖的抑制作用。结果：ｃ－ｍｙｃＡＳ－ＯＤＮ不仅对从静止状态刺激的ＳＭＣ增殖有抑制作用,而且对处于增殖状态的ＳＭＣ的增殖也有显著抑制作用,这种抑制作用可因加入正义ｃ－ｍｙｃＯＤＮ而减弱甚至消除,而且随着剂量的增加,抑制作用越来越明显。一次性应用ｃ－ｍｙｃＡＳ－ＯＤＮ可达到较持久的作用。而正义ＯＤＮ和错配ＯＤＮ对ＳＭＣ增殖无影响。结论：ｃ－ｍｙｃＡＳ－ＯＤＮ以剂量依赖和序列特异方式抑制ＳＭＣ增殖。ｃ－ｍｙｃ基因表达在ＳＭＣ增殖的信号传导通路中起重要作用。为采用ｃ－ｍｙｃＡＳ－ＯＤＮ抑制ＳＭＣ增殖的反义战略防治再狭窄研究奠定了基础。     

c—myb对大鼠黄体细胞孕酮和雌二醇生成的影响

本文观察了反义ｃ－ｍｙｂＯＤＮ对黄体细胞ｈＣＧ诱导的Ｐ和Ｅ２产生的影响,并探讨了与二丁酰ｃＡＭＰ和ｖｅｒａｐａｍｉｌ的关系。结果发现, ｃ－ｍｙｂＯＤＮ能呈剂量相关方式抑制黄体细胞ｈＣＧ诱导的Ｐ和Ｅ２的产生。同时使ｃ－ｍｙｂ蛋白染色了性的黄体细胞百分数下降,而无义ｔａｔＯＤＮ上应的作用。当１０＾－４ｍｏｌ／Ｌ二丁酰ｃＡＭＰ与反义ｃ－ｍｙｂＯＤＮ共同作用时能明显逆转反义ｃ－ｍｙｂＯＤＮ对Ｐ、Ｅ２产生     

反义myb寡核苷酸对内皮素诱导动脉平滑肌细胞增殖抑制作用的研究

合成反义和正义ｃ－ｍｙｂ１８－ｍｅｒ，分别导入培养的ＷＫＹ主动脉平滑肌细胞（ＳＭＣｓ），同时用内皮素诱导ＳＭＣｓ增殖。反义ｃ－ｍｙｂ寡核苷酸（ＯＤＮｓ）对内皮素诱导ＳＭＣｓ的抗细胞增殖抑制作用随浓度（６０μｍｏｌ·Ｌ－１～１２０μｍｏｌ·Ｌ－１）的增加而增加。用１２０μｍｏｌ·Ｌ－１反义ＯＤＮｓ抗细胞增殖能力随时间延长而下降。免疫组化显示受抑制细胞ｍｙｂ水平较同期对照组或正义ＯＤＮｓ组低。以上为反义ＯＤＮｓ抑制外源性生长因子或细胞因子诱导靶基因的高表达和细胞增殖提供了新的线索，同时为探讨癌基因表达调控与动脉ＳＭＣｓ增殖的关系提供了一种新方法。     

bcl—2,p53蛋白及PCNA表达与横纹肌肉瘤临床病…

目的：研究横纹肌肉瘤（ＲＭＳ）中ｂｃｌ－２、ｐ５３、ＰＣＮＡ表达与其临床病理的相关性。方法：对５０例横纹肌肉瘤进行免疫组化ＡＢＣ法标记。结果：ｂｃｌ－２、ｐ５３基因蛋白和ＰＣＮＡ，发现ｂｃｌ－２、ｐ５３、ＰＣＮＡ阳性表达率分别为２８％、７２％、７０％，其阳性表达与年龄、性别及不同组织类型的ＲＭＳ无关。但民分化程度有关，Ｐ５３、ＰＣＮ在低分化ＲＭＳ阳性率分别为８５％、９５％，显著高于 化ＲＭＳ４２．     

bcl—2癌基因反义硫代磷酸寡脱氧核苷酸诱导HL60细胞凋亡

目的 不同浓度ｂｃｌ－２癌基因反义硫代磷酸寡脱氧核苷酸９ＡＳ－ＰＳ－ＯＤＮ,ＡＳＰＯ）对ＨＬ６０细胞凋亡的诱导作用。方法 ＡＳＰＯ与ＨＬ６０细胞共培养后,用吖啶橙（ＡＯ）染色法,流式细胞仪ＤＮＡ倍体分析,电镜观察、ＤＮＡ片段电沪等方法进行观察。结果 ＡＳＰＯ组与正义组比较能特异诱导ＨＬ６０细胞的凋亡,且于培养２４５小时即可出现,此时ＡＳＰＯ５、１０、２０μｍｏｌ／Ｌ浓度各组的凋亡率分别为：（９．７     

嵌合性硫代磷酸修饰的反义c-myc寡脱氧核苷酸对动脉平滑肌细胞迁移的影响

目的：血管平滑肌细胞（ＳＭＣ）迁移在血管成形术后再狭窄的发生中起着关键作用。ｃ－ｍｙｃ是对多种刺激ＳＭＣ迁移的生长因子作出迅速早期反应的基因。推测采用与ｃ－ｍｙｃｍＲＮＡ互补的寡脱氧核苷酸（ＯＤＮ）的反义战略可达到抑制ＳＭＣ迁移的目的。方法：将嵌合性硫代磷酸修饰的反义ｃ－ｍｙｃＯＤＮ通过ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ导入ＳＭＣ后,采用改良的Ｂｏｙｄｅｎｃｈａｍｂｅｒ方法检测ＳＭＣ的迁移率。结果：反义ｃ－ｍｙｃＯＤＮ作用的ＳＭＣ对１０％ＦＢＳ的化学趋化活性明显减弱,反义ｃ－ｍｙｃＯＤＮ显著抑制了ＳＭＣ迁移。而正义ｃ－ｍｙｃＯＤＮ和错配ｃ－ｍｙｃＯＤＮ处理的ＳＭＣ,与对照组相比,迁移率无差别。结论：（１）反义ｃ－ｍｙｃＯＤＮ对体外ＳＭＣ迁移的抑制具有序列特异性;（２）ｃ－ｍｙｃ基因表达在ＳＭＣ迁移的信号通路中起关键作用;（３）本研究为采用ｃ－ｍｙｃＯＤＮ的战略抑制ＳＭＣ迁移进而防止血管成形术后再狭窄的发生奠定了基础     

修饰的反义寡脱氧核苷酸对胰腺癌细胞生长和靶基因表达的抑制作用

目的观察修饰过的反义寡脱氧核苷酸（ＡＳＯＮＤ）对人胰腺癌细胞生长和靶基因表达的抑制作用。方法用人工合成与ｃ－ｍｙｃ和Ｋｉ－ｒａｓ帽区互补的修饰的反义寡脱氧核苷酸，即反义硫代正磷酸寡脱氧核苷酸（ａｎｔｉｓｅｎｓｅｐｈｏｓｏｐｈｏｒｏｔｈｉｏａｔｅｏｌｉｇｏｄｅｏｘｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ，ＡＳＰＯＤＮ）处理人胰腺癌细胞系ＰＣ－２和ＰＣ－３。多次小剂量（１０μｇ）或一次性剂量（１５μｇ）ＡＳＰＯＤＮ处理细胞后计数细胞生长率和３Ｈ掺入率，并用逆转录聚合酶链反应检测靶基因表达。结果多次小剂量ＡＳＰＯＤＮ处理后，细胞生长、３Ｈ掺入和靶基因表达的抑制可长达２周以上，到第１４天时实验组的细胞生长率仅为对照组的３８％～４３％，３Ｈ掺入率为对照组的１８％～３３％；靶基因表达明显受抑或下调，经一次性１５μｇＡＳＰＯＤＮ处理后，细胞生长、３Ｈ掺入和靶基因表达的抑制可达４天。结论与以往的研究比较，表明ＡＳＰＯＤＮ较ＡＳＯＤＮ有更强的抑制细胞生长、３Ｈ掺入、靶基因表达的作用。     

反义硫代磷酸寡脱氧核苷酸对HL60细胞Bcl-2表达的抑制作用

目的探讨Ｂｃ１－２反义硫代磷酸寡脱氧核苷酸（ＡＳ－ＰＳ－ＯＤＮ,ＡＳＰＯ）是否抑制ＨＬ６０细胞Ｂｃ１－２的ｍＲＮＡ及其蛋白的表达,以及不同浓度ＡＳＰＯ产生抑制作用的程度、效应发生和持续时间的差异。方法应用免疫细胞化学染色、流式细胞仪和ＲＴ－ＰＣＲ半定量法对与Ｂｃ１－２的ＡＳＰＯ共培养后的ＨＬ６０细胞Ｂｃ１－２蛋白及ｍＲＮＡ表达进行检测。结果Ｂｃ１－２的ＡＳＰＯ能在ｍＲＮＡ水平产生抑制作用,并减少Ｂｃ１－２蛋白的合成,且在培养２４小时即出现效应,同时随着ＡＳＰＯ剂量的增加和作用时间的延长其抑制作用更显著,但７２小时后出现回升现象。结论Ｂｃ１－２的ＡＳＰＯ能特异抑制ＨＬ６０细胞Ｂｃ１－２的ｍＲＮＡ和蛋白表达,且具浓度和时间的依赖性,同时又存在作用暂时性的问题。     

人类bcl—2cDNA在NIH／3T3细胞中的表达

将０．９１ｋｂ的含有完整开放阅读框的人类ｂｃｌ－２ｃＤＮＡ以正向克隆于逆不病毒载体ｐＬ－ＸＳＮ的ＥｃｏＲ１位点，经ＰＡ３１７细胞包装后感染ＮＩＨ／３Ｔ３细胞，筛选出Ｇ４１８抗性克隆，经免疫印迹证实人类ｂｃｌ－２ｃＤＮＡ在ＮＩＨ／３Ｔ３细胞中获得了表达，这一表达人类Ｂｃｌ－２蛋白的哺乳类细胞模型的建立探讨ｂｃｌ－２的作用机制及其与其它基因间关系的研究奠定了基础。     

针对包装信号起始区的硫代反义核苷酸抗HBV的研究

目的筛选高效特异的抗ＨＢＶ反义核酸药物。方法针对ＨＢＶ包装信号ε起始区设计并合成硫代反义寡聚核苷酸（ｓ－ａｓＯＤＮ）片段，通过ＥＬＩＳＡ检测法、ＭＴＴ法、电子显微镜等观察，研究此ｓ－ａｓＯＤＮ对ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ和ＨＢｃＡｇ表达，以及对细胞毒性，细胞形态的影响。结果针对ε起始区的ｓ－ａｓＯＤＮ显著抑制ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ和ＨＢｃＡｇ的表达，其中，对ＨＢｅＡｇ和ＨＢｃＡｇ的抑制率分别为３８．１％和５８．７％高于Ｓ基因起始区（３２．１％和３７．２％，Ｐ＜０．０１），对ＨＢｓＡｇ抑制率为８２％，低于Ｓ基因起始区（９３．４１％），在实验浓度下ｓ－ａｓＯＤＮ对细胞无毒性，对细胞形态无影响。结论ＨＢＶ包装信号区是反义核酸抗ＨＢＶ复制研究的重要的靶序列选择区域。     

硫代反义寡核苷酸体外对HDV的抑制作用

观察硫代反义寡核苷酸（Ｓ－ＡＳＯＤＮ）体外对ＨＤＶ的抑制作用。方法在ＨＤＶ／ＨＢＶ感染人胎肝细胞中加入不同浓度的针对ＨＤＶ ＳｔｅｍⅠ区６８４－６９８位核苷酸的１５聚Ｓ－ＡＳＯＤＮ,分别采用ＥＬＩＳＡ和斑点杂交法检测上清液中ＨＤＡｇ和细胞中ＨＤＶ ＲＮＡ。结果ＨＢｓＡｇ、ＨＤＡｇ在感染后第２天至第１６天均可测出,以第４天至第１２天达高峰,加入Ｓ－ＡＳＯＮＤ（２、４、６μＭＯＬ／ｌ）ＲＧ ２ＧＤ ,     

c—myc反义寡核苷酸对PDGF所致肺血管平滑肌细胞增殖的影响

ｃ－ｍｙｃ原癌基因是细胞增殖调控中的一种关键基因。文中报道了硫代磷酸修饰的ｃ－ｍｙｃ反义寡核苷酸（ＯＤＮＳ）对血小板源性生长因子（ＰＤＧＦ）刺激的肺动脉平滑肌细胞（ＳＭＣ）增殖及ｃ－ｍｙｃ基因表达的影响。Ｎｏｒｔｈｅｍ杂交结果表明：反义ＯＤＮＳ能显著下调ＰＤＧＦ刺激的ｃ－ｍｙｃ基因表达：３Ｈ－ＴｄＲ试验及细胞生长分析表明：反义ＯＤＮｓ能显著抑制ＰＤＧＦ刺激的ＳＭＣ增殖。同义００Ｎｓ无上述作用。     

乳腺癌中凋亡与细胞增殖及Rb,bcl—2,c—myc蛋白表？…

目的：了解人乳腺癌中凋亡与细胞增殖的关系，以及与相关基因蛋白表达的关系及其预后意义。方法：用免疫组化ＬＳＡＢ法检测了９０例腺标本（包括１３例良性乳焦和７７例乳腺癌）中Ｒｂ、ｂｃｌ－２和ｃ－ｍｙｃ的蛋白表达，并计数了癌组织中的凋亡指数（ＡＩ、ＴＵＮＥＬ法）和有丝分裂指数（ＭＩ）结果：ＡＩ与ＭＩ呈正相关；ＡＩ、Ｍ少Ｒｂ蛋白表达与肿瘤大小和组织学分级有关，ＡＩ、ＭＩ低和ｂｃｌ－２的高表达与５年生存率有关