高效提取二相性白假丝酵母菌总RNA实验研究

目的:探讨高效、简便提取白假丝酵母菌孢子相及菌丝相细胞总RNA的方法.方法:采用液氮法、超声法及玻璃珠(直径0.55 cm)法提取白假丝酵母菌的孢子相和菌丝相细胞总RNA,紫外分光光度计检测所提取的二相性白假丝酵母菌总RNA的OD260及OD280,琼脂糖凝胶电泳检测所提取的二相性白假丝酵母菌总RNA的完整性.结果:液氮法、超声法及玻璃珠法提取白假丝酵母菌孢子相总RNA的浓度分别为(1.021±0.145)g/L、(0.923±0.031) g/L、(1.121±0.175) g/L,纯度分别为1.697±0.087、1.474±0.064、1.897±0.047;液氮法、超声法及玻璃珠法提取白假丝酵母菌菌丝相总RNA的浓度分别为(0.357±0.260) g/L、(0.287±0.023)g/L、(0.523±0.056) g/L,纯度分别为1.548±0.047、1.474±0.064、1.874±0.064;电泳结果显示,应用玻璃珠法提取的孢子相和菌丝相总RNA 28S rRNA、18S rRNA、5S rRNA三条带均明显显示,而采用液氮法、超声法提取的总RNA三条带不明显.结论:RNAiso Plus试剂联合直径为0.55 cm的玻璃珠法提取的白假丝酵母菌孢子相及菌丝相细胞的总RNA浓度及纯度均较液氮法和超声法好,值得推广.     

白假丝酵母菌DNA提取方法的研究

目的建立一种提取白假丝酵母菌DNA的有效方法。方法采用蜗牛酶消化破壁形成原生质体,饱和酚/氯仿抽提法提取基因组DNA,用琼脂糖凝胶电泳及PCR反应等进行鉴定。结果提取物经琼脂糖凝胶电泳检测到DNA主带,基本无DNA碎带,提取的DNA浓度为(1.18±0.36)μg/μl,纯度好(OD260/OD280>1.7),不用RNase酶处理,无需任何纯化即可用于PCR扩增。结论本研究中提取DNA的方法简便易行,提取物可适用于各种分子生物学研究。     

白假丝酵母菌致食物中毒机理的研究

目的 研究白假丝酵母菌致食物中毒的机理.方法 首先提取白假丝酵母菌的毒性物质,明确其性质,再进行小白鼠灌胃试验和家兔灌胃试验.结果 白假丝酵母菌毒素为热不稳定外毒素,能使小白鼠疲倦、厌食、竖毛、发绀、颤抖、呼吸加快、腹泻、脱水甚至死亡;能使家兔心跳、呼吸加快、呕吐、腹泻.结论 白假丝酵母菌能产生热不稳定外毒素,引发食物中毒.     

婴幼儿口腔感染白假丝酵母菌的耐药性分析

目的 探讨婴幼儿口腔感染白假丝酵母菌的药物敏感性,为临床治疗真菌感染提供依据.方法 用VITEK32型全自动细菌分析系统对我院2007～2009年临床分离的157株婴幼儿口腔感染白假丝酵母菌进行鉴定,药敏试验采用纸片扩散法,判断标准按NCCLS2006年版进行.结果 157株婴幼儿口腔白假丝酵母菌对氟康唑最为敏感,敏感率为98.1%;其次为酮康唑96.8%、伊曲康唑86.0%;对咪康唑的敏感率最低,仅为55.4%.结论 氟康唑应作为治疗婴幼儿口腔白假丝酵母菌感染的首选药物.     

白假丝酵母菌GPI锚定蛋白的研究进展

GPI锚定蛋白(glycosylphosphatidylinositol-anchored protein)是白假丝酵母菌重要的细胞表面蛋白,对白假丝酵母菌的黏附、形态转换和细胞壁合成等有着重要影响.近年来,随着对白假丝酵母菌研究的深入,GPI锚定蛋白越来越多的重要功能逐渐被发现.本文从白假丝酵母菌GPI锚定蛋白的概念入手,从家族分类和功能分类两个角度对GPI锚定蛋白的研究现状进行综述,并对GPI锚定蛋白未来的研究方向进行展望.     

54株白假丝酵母菌感染及药敏分析

目的 了解海南省人民医院白假丝酵母菌的感染情况,分析该医院临床分离的白假丝酵母菌对抗常见真菌药物氟胞嘧啶、两性霉素、氟康唑、伊曲康唑、伏立康唑的体外敏感性,为控制该菌感染和指导临床合理使用抗真菌药物提供参考.方法 收集、分离、鉴定临床送检标本,用微量稀释法测定临床分离白假丝酵母菌对5种抗真菌药物的敏感性,结果用各个药物的最低抑菌浓度(MIC)表示,并对这些白假丝酵母菌感染患者的病历进行统计分析.结果 共检出54株白假丝酵母菌,其对氟胞嘧啶、两性霉素、氟康唑、伊曲康唑、伏立康唑的敏感性分别为85.2％,98.1％,33.3％,22.2％,31.5％.结论 白假丝酵母菌对两性霉素敏感性最高.     

化脓性关节炎穿刺液中分离出白假丝酵母菌

2011年4月收治化脓性关节炎患者1例,从穿刺液中分离到1株白假丝酵母菌,现报告如下。病历资料患者,男,32岁。两年前,右膝关节曾受过外伤。1年前,因右膝关节疼痛,活动受限,曾到当地私人诊所、乡镇卫生院等多处求治,均诊断为"化脓性关节炎",多次穿刺,抽出5～10ml淡黄色、半     

白假丝酵母菌对宿主的应激反应

白假丝酵母菌是临床最常见的条件致病真菌之一,近年来引起人们的广泛关注。白假丝酵母菌在侵染宿主时会遇到各种环境条件如温度、pH、渗透压及氧化损伤等的改变,如何适应这些环境条件对白假丝酵母菌在宿主中生存及发挥其致病性至关重要。本文总结了白假丝酵母菌应对宿主的应激反应通路,提示进一步深入研究白假丝酵母菌应激反应通路有助于发现新的抗真菌药物靶点。     

临床分离一株具有荚膜的白假丝酵母菌

[目的]观察白假丝酵母菌临床菌株的荚膜结构并探讨其形成条件.[方法]临床标本直接涂片染色镜检和用沙保氏琼脂平板、琼脂斜面及沙保氏液体培养基培养、用涂片革兰染色和Hiss荚膜染色镜检、出芽试验、厚膜孢子形成试验、糖发酵试验、小白鼠与家兔试验、扫描电镜与透射电镜观察等进行鉴定.[结果](1)该临床分离菌为革兰阳性、念珠状菌;能形成芽管、假菌丝、厚膜孢子;能发酵葡萄糖和麦芽糖产酸又产气;发酵蔗糖产酸不产气;不发酵乳糖.(2)人阴道分泌物涂片、感染小白鼠及家兔体内及沙保氏液体培养基培养均可形成荚膜,荚膜层的厚度可因不同环境及培养时间的长短而有差异,但均≥0.2 μm,边界明显.沙保氏液体培养物经离心(1 500 r/min,15 min,3次)荚膜层仍然可见.[结论]该菌株可被鉴定为具有荚膜的白假丝酵母菌.     

白假丝酵母菌感染及分型方法的研究进展

白假丝酵母菌,是人体正常菌群之一,在口腔、皮肤、肠道、阴道、肛门等中均可分离到,同时是引起人体真菌感染的主要条件致病菌。随着医学科学的发展,各种新药物、新技术如广谱抗生素、激素、各种导管插管技术等的广泛使用,导致深部真菌病的发病率愈来愈高,以白假丝酵母菌感染为主。     

白色念珠菌天冬氨酸蛋白酶与菌株毒力的研究

目的：观察分泌型天冬氨酸蛋白酶（secreted aspartic proteinase,SAP)与念珠菌致病性的关系。方法：从住院病人中分离培养出50株念珠菌，鉴定菌种后采用限制氮盐的培养基半定量测定天冬氨酸蛋白酶，并筛选蛋白酶阳性或阴性菌株。经证实为系统感染的10株菌株腹腔感染健康小鼠。结果：白色念珠菌天冬氨酸蛋白酶阳性率高达90%。类星型和伪热带次之。蛋白酶阳性或阴性的念珠菌对健康小鼠均无致病性。结论：天冬氨酸蛋白酶在正常条件下并不能增加白念菌的侵蚀性和致病力。     

老年患者白假丝酵母菌基因分型与药敏试验分析

目的了解老年慢性阻塞性肺炎（COPD）患者白假丝酵母菌基因分型及药敏结果差异。方法对320株白假丝酵母菌进行25SrDNA基因分型,用ATB Fungus3进行药敏实验。结果320株白假丝酵母菌分成了A、B、C3型。A型对5-氟胞嘧啶耐药率高于B型和C型;C型对两性霉素全都敏感,敏感率高于A型和B型;C型对氟康唑、伊曲康唑的耐药率高于A型和B型;B型对伏立康唑耐药率高于A型和C型。结论白假丝酵母菌PCR分型法有较强的特异性,且快速简便;白假丝酵母菌基因型别对不同药物的敏感率有影响。     

白念珠菌分泌型天冬氨酸蛋白酶的研究进展

白念珠菌为现代医学最重要的机会性致病酵母菌,严重威胁着患者的生命。分泌型天冬氨酸蛋白酶是白念珠菌分泌的一种酸性蛋白酶家族,与白念珠菌毒力密切相关,由于它至少含有10个成员,各成员之间多方面的差异和错综复杂的关系给科研工作者明确白念珠菌蛋白酶的致病机制带来了困难。近年来,大量研究证实了分泌型天冬氨酸蛋白酶各成员对温度、pH值等培养方面有不同的要求,基因突变技术的发展,进一步明确了基因表达调控与机体感染部位、感染状态之间的关系及转录活化因子在蛋白酶各成员表达中的作用。     

树突状细胞与白念珠菌感染的研究进展

白念珠菌是一种机会性致病菌,宿主对白念珠菌的识别和免疫应答是其免疫系统与白念珠菌相互作用的结果。树突状细胞在抗白念珠菌感染免疫中起重要作用,可以通过产生不同的细胞因子诱导CD4+T细胞向不同类型的Th细胞分化,从而产生不同的免疫应答,最终影响白念珠菌感染的结局。本文对白色念珠菌的易感性、免疫应答机制及树突状细胞与白念珠菌的联系进行了综述,为进一步研究白念珠菌等感染性疾病的发病机制和治疗提供了新思路。     

差异显示PCR技术在念珠菌基因表达研究中的应用

目的:探讨差异显示PCR技术(DD-PCR)在念珠菌基因表达研究中的方法学要点.方法:将临床阴道来源的白色念珠菌氟康唑敏感菌株435体外诱导氟康唑耐药性,于诱导80d得到耐药子代435-2,采用长引物差异扩增、银染显示差异条带、反式点杂交预筛选及非放射性法标记探针的改良的DD-PCR,比较435与435-2在有药及无药培养基中的表达差异.结果:在435-2含药培养组中得到较435-2、435无药培养组表达明显增强的片段N2、N3、N12,分别与数据库中白色念珠菌的醇脱氢酶基因ADH1、拓扑异构酶基因TOP2及多药耐药基因CDR1基因有高度同源性;半定量RT-PCR中证实了ADH1、CDR1基因在耐药株中的高表达.结论:ADH1、CDR1基因的高表达与白色念珠菌氟康唑耐药性形成相关,ADH1可能是新的耐药基因;改良的DD-PCR技术降低了假阳性率的产生,使确证步骤更加便捷,在念珠菌研究领域有很好的应用前景.     

阴道白假丝酵母菌基因型与体外药物敏感性研究

目的 研究不同基因型阴道假丝酵母菌对克霉唑、咪康唑和制霉菌素的体外药物敏感性.方法 以特异引物PCR法(INT-PCR)对151株致病白假丝酵母菌进行基因分型,参考美国临床和实验室标准协会(CLSI)抗真菌药敏实验标准(M27-A方案)以微量稀释法检测不同基因型菌株的药物敏感性.结果 根据扩增条带中是否存在450 bp和840 bp片段可将白假丝酵母菌分为A、B、C 3种基因型;克霉唑和咪康唑对A基因型菌株的最小抑菌浓度(MIC)值明显高于C基因型菌株,差异有统计学意义(P＜0.05);制霉菌素对不同基因型菌株的MIC值间差异无统计学意义(P＞0.05).结论 不同基因型白假丝酵母菌株对抗真菌药物的敏感性有明显差异,这种差异可能是临床上假丝酵母菌性外阴阴道炎治疗效果存在个体差异的原因之一.     

过氧化氢对白色念珠菌超微结构及通透屏障影响的研究

本文用电镜观察和对同位素标记物漏出检测的方法,研究了一定浓度的H_2O_2对C。albicans超微结构及其通透屏障的影响。电镜观察到经H_2O_2处理的C.albicans超微结构及表面形态发生改变,并伴有内容物漏出的征象。漏出物dpm值检测进一步证明,H_2O_2可引起C.albicansDNA漏出,且DNA漏出的量与细胞存活数间呈负相关,提示H_2O_2对C.albicans通透屏障的破坏,造成其内DNA漏出是细胞致死的重要原因之一。     

黄芩苷对白念珠菌DNA合成的抑制作用

目的 :观察黄芩苷对白念珠菌DNA合成的影响。方法 :采用试管稀释法测定黄芩苷对白念珠菌的最低抑菌浓度 (MIC) ;运用3 H -TdR掺入法观察不同浓度黄芩苷对白念珠菌DNA合成的抑制作用。结果 :黄芩苷对白念珠菌的MIC值为 1.0mg/ml;黄芩苷能明显抑制白念珠菌DNA的合成 (P <0 .0 0 5 ) ,且随药物浓度升高 ,白念珠菌DNA的合成呈下降趋势。结论 :黄芩苷可能通过抑制白念珠菌DNA的合成而达到抗菌作用。     

Study of Candida Albicans Vaginitis Model in Kunming Mice

The model of vaginal candidiasis in Kunming mice was constructed in order to search for the optima construction conditions and provide an economic animal model of Candida albicans (C. albicans) vaginitis. Estrogen benzoate (E2) was given to mice at different concentrations ranging from 0.0 to 0.05 mg/mouse (4 levels) beginning 72 h prior to vaginal inoculation, then mice were in- oculated intravaginally with various concentrations of stationary-phase C. albicans blastoconidia (ATCC90028) (5 levels) in 20 μL of phosphate-buffered saline (PBS) in each E2 level. General state, scores of genital pathology, the hyphae and vaginal fungal burden (CFU) in vaginal lavage fluid, the hydrops rate of uterus and vaginal tissues for pathological section in mice were observed and ob- tained at day 2, 4, 7, 14 and 21 after inoculation. The results showed the infection rate in mice was related to the dosage of E2 and concentration of C. albicans blastoconidia. Additionally there was better cross-effect between the two treated factors. The infection rate was about 80% on the day 4, and could reach 100% on the day 7 until the end of experiment after inoculated intravaginally in groups of E2I3, E2 0.025 mg/mouse injected hypodermically and inoculated intravaginally with 5×104 C. albicans blastoconidia, and large amount of hyphae and blastoconidia could be observe in superfi- cial layer tissue and canal of vaginal by PAS. From the results in our experiment it was concluded that E2I3 was the optima construction condition in kunming mice.     

白假丝酵母菌不同菌株荚膜的对比性观察

目的:观察白假丝酵母菌标准菌株(CCCMC1a、ATCC 14053)与临床分离菌株(C1-1、C1-2、C1-3、C1-4)于不同条件下荚膜层的厚度变化。方法:(1)将实验菌种沙保氏琼脂36小时培养物用生理盐水配成约含1×109个/ml的菌悬液,家兔耳缘静脉注射,1ml/只,同时用BALB/c小鼠腹腔注射,0.5ml/只;待实验动物发病后解剖动物,分别取家兔肾组织印片及小鼠腹腔液涂片进行Hiss荚膜染色镜检,用显微测微计测量荚膜层的厚度,各菌株随机计数40个酵母细胞的荚膜层的厚度值,取各菌株荚膜层厚度的均值进行比较。(2)实验菌株沙保氏液体培养物与同一菌株的抗血清作荚膜肿胀实验及血清交叉实验,Hiss荚膜染色镜检。荚膜层厚度的测量与计算方法同前。结果:(1)标准菌株与临床分离菌株在家兔及小白鼠体内均可形成荚膜,荚膜层的厚度可因不同菌种(株)和不同环境而有差异(均值在0.25~0.58μm不等;P<0.01或<0.05),边界明显。(2)用全菌抗血清作荚膜肿胀实验,可见菌细胞的荚膜明显加宽,且菌株之间可出现交叉阳性。结论:白假丝酵母菌的荚膜厚度可因不同菌种(株)和不同环境而有差异;荚膜肿胀实验显示各菌株除与相应抗血清作用出现荚膜肿胀实验阳性外菌株之间还可出现血清交叉阳性。