脑蛋白水解物注射液新工艺研究

<正> 本文报道了脑蛋白水解物注射液制备新工艺。新鲜猪脑经去异物、去脂肪筋膜,用注射用水漂洗后制成匀浆,在 pH 7.2～7.5于40～45℃经胰酶水解20～24小时制得水解液,用 H3P04调至 pH 5.7～5.8中和,浓缩后过滤,滤液用5 mol/L NaOH 调至 pH 6.4～6.6于5～10℃沉淀24小时,于10℃以下过滤,滤液用6 mol/L HCl 调至 pH 4.5,按原料量加2%的针用活性炭、20%白陶土于80～90℃;搅拌30分钟,趁热过滤。滤液加701树脂,搅拌至 pH 升至5.5,迅速滤去树脂。滤液用截留分子量小于1万的超微过滤器过滤,滤液用 NaOH(C·P)调至pH 6.5～7.5,稀配至所需含量,除菌过滤、灌封,灭菌即得。     

用稳定转化细胞制备的重组JEV颗粒抗原是有效的非感染性抗原和亚单位免疫原

将乙型脑炎病毒 ( JEV) Pr M和 E基因序列插入真核表达载体 p CDNA- 3构建成质粒 p CDJE2 - 7,转化到 COS- 1细胞中 ,经抗生素筛选后得到表达亚病毒颗粒的 JE- 4B细胞。培养 4～ 5天后 ,离心收集胞外颗粒。用1 0 %聚乙二醇 - 80 0 0浓缩沉淀或者390 0 0 rpm 4℃离心 4小时 ,于 TN缓冲液重悬。用 0 .1 % Triton X- 1 0 0对聚乙二醇沉淀的胞外颗粒进行处理后用于抗原捕获ELISA试验。对于细胞培养液离心或聚乙二醇沉淀得到的胞外颗粒、聚乙二醇沉淀的病毒以及 JEV感染的 COS- 1细胞培养液进行两步纯化 :经过蔗糖梯度速率区带离心…     

大孔树脂制备肝素钠的工艺研究Ⅳ.中试实验

在小试的基础上进行大孔树脂制备肝素钠的中试实验,并按药典标准对硷盐水洗脱法的产品质量作了考查。实验部分材料和方法1.试剂及原料:猪肠粘膜(固体含量8～10%)。试剂除丙酮为化学纯外,均为工业品。用于洗脱的食盐水和沉淀的酒精应作如下处理:食盐于240℃烘1小时;食盐溶液及酒精加     

含糖酯的缓释消炎痛栓

取Witepsol H-15(19.5～49.5 g)及蔗糖脂肪酸酯(SE)(0～30 g)放入烧杯中,置90℃油浴中熔融,然后加入消炎痛(IM)(0.5 g)溶解或混悬于基质,冷却至60℃,倾入栓模(1 ml容积),迅速放冰箱冷至5℃。随着SE含量的增加,栓剂的软化点也增高。用Muranishi法测体外释放,表明SE含量超过52.5%时得到缓释曲线,不含SE或含20%、30%SE的栓剂在1小时已释放40～50%,此时含52.5%SE的栓剂仅释放20%,至5小时才释放50%,含SE60%的栓剂1小时仅释放5%,5小时也仅释放20%。体内吸收试验用雄性兔,体重2.8～     

脂肪酶丰富的酶制剂制造方法

脂肪酶丰富的酶制剂是通过使用氯仿:丁醇(9:1容积)的混合液处理已绞碎的胰脏而得到的。这种局部脱脂了的胰脏于0～4℃放置24～96小时,随后用丙酮处理使其脱脂脱水,脱水物用水:乙醇(95:5容积)混合液提取,提取液与丙酮混合,分离所得的沉淀并干燥之。或将水醇提取液冷冻干燥。     

苄醚氧化为醛

苄醚、DMSO、49%HBr于110℃反应4～48h,得到相应的苯甲醛。10例收率78%～94%。     

用灭活口蹄疫病毒浓缩物制备的疫苗的稳定性和效力

作者用预先以PEG6000处理的含1%公牛血清的BHK21细胞悬浮培养液生产口蹄疫病毒(FMDV)OEFS 1860株,以0.05%乙酰哌嗪在37℃处理24小时灭活。将澄清悬液以7%PEG6000在4℃处理2小时,再以每分钟2,000转离心30分钟,取沉淀悬浮于pH7.6的0.05M Tris-HCl和0.15M NaCl溶液中浓缩50倍,以SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳纯化病毒,制成3种病毒浓缩制剂。其中2种分别添加最终浓度为25%的公牛血清和每ml含5,000激肽释放酶灭活剂单位的抑肽酶。这两种浓缩病毒和第3种无添加剂的病毒,按容量加0.3%氯仿,贮存于液氮中两     

加热聚乙二醇法:另一种血浆分层方法

用聚乙二醇(PEG)作沉淀剂制备的血液制品证明是无毒和无热原的,并已用于制备免疫球蛋白、浓缩因子Ⅷ和人白蛋白。本文介绍用加热PEG法制备白蛋白的过程。 ACD血浆经4℃解冻,于pH6.5加39％PEG4000溶液至最终浓度为12%,离心后,沉淀再悬于12%PEG溶液,再离心,沉淀用于制备免疫球蛋白。两次离心上清合并,于pH6.5加锌酸钠0.01mol/l,搅拌下加热75℃30分钟或过滤分离沉淀。上清或滤液经石棉板过滤,调pH至4.6,加固体PEG4000至最终浓度为22%,分离白蛋白沉淀,并溶于蒸馏水(pH7.0)至蛋白浓度为8％,对4℃蒸馏水透析,除去PEG,调节蛋白浓度至5&,加锌酸钠及乙酰色氨酸钠,再经0.2μm过滤,     

不同灭活方法对百日咳菌苗的效力、毒性和稳定性的影响

本文报道了加热、甲醛、戊二醛、硫柳汞和丙酮等灭活方法对百日咳菌苗的效力、毒性和稳定性的影响。作者用百日咳杆菌134和509株作为菌种,培养后收获菌体,每批250ml,共有5批,分别经如下处理:(1)56℃处理10分钟;(2)加最终浓度为0.1%的甲醛于37℃作用2小时;(3)加最终浓度为0.05%的戊二醛置室温10分钟;(4)加最终浓度为0.02%的硫柳汞于37℃作用24小时;(5)丙酮处理Ⅰ法[A(Ⅰ)TP]:经丙酮室温处理3次后加CaCl_2和P_2O_5灭活;丙酮处理Ⅱ法[A(Ⅱ)TP]:经丙酮室温     

加热灭活的乙型肝炎疫苗对成人的安全性和免疫原性

将高滴度HBsAg阳性血清经聚乙二醇沉淀、羟化磷灰石吸附及溴化钾等密度梯度离心后,于102℃处理2分40秒,再65℃10小时两次加热灭活,最后用磷酸铝吸附,即为加热灭活的乙型肝炎疫苗。将174名受种者分成7组:3组于第0、1和6个月分别注射5μg、3μg和1μg疫苗;3组于第0和6个月分别注射3μg和1μg疫苗;另1组分别于第0、1和2个月注射3μg疫苗。两针接种程序组中,1μg和3μg组初免后的血清阳转率为15～25%,第6个月加强免疫后提高到50～60%,但并未达到3μg接种     

制备加热灭活的乙型肝炎疫苗时可灭活10~(15)黑猩猩感染剂量的乙型肝炎病毒

作者采用HBeAg阳性和HBeAg阴性的无症状HBV携带者的血浆制备乙型肝炎(HB)疫苗。用Freon113提取血浆中的类脂质后,合并澄清血浆,并以PBS稀释,用5%的聚乙二醇(PEG)6000于4℃沉淀过夜。经离心除去含有大量Dane颗粒的沉淀物,而上清液于pH3.5,6%PEG 6000,4℃过夜。在4℃用PBS使沉淀物再悬浮,调pH至7.4。超速离心3.5小时,用PBS使沉淀物再悬浮,经103℃加热90秒钟,48000g离心1小时,去掉不溶解蛋白。制品在加入0.005%Tween-80后,除菌过滤并以磷酸铝吸附。最后,每安瓿含3μg HBsAg和25mmol磷酸铝,经65℃加热     

一种制备单纯疱疹病毒亚单位疫苗的简单的新方法

作者介绍了一种用硫酸铵沉淀来制备单纯疱疹病毒(HSV)亚单位疫苗的新方法,该法具有蛋白损失率低、疫苗制剂抗原性高等优点。作者用1型HSV HSZP株感染鹌鹑胚胎细胞(QEC)、然后用非离子去垢剂NP-40处理感染细胞、再用低速离心(800×g)去除细胞核。上清液在30%的蔗糖垫上100000×g离心3小时以去除病毒核壳体。再加福尔马林,得到感染细胞抽提物。用硫酸铵沉淀病毒和细胞糖蛋白以及蛋白质,低速离心(2000×g,4℃)20分钟,用蒸馏水溶解沉淀。在     

HPLC法同时测定人体血浆中氟尿嘧啶及其前体药替加氟的浓度

目的:建立同时测定氟尿嘧啶及其前体药替加氟在人体血浆中浓度的 HPLC 方法。方法:以阿昔洛韦为内标,血浆样品用硝酸银(10%)沉淀蛋白质,采用 Zorbax-ODS C_(18)分析柱(4.6 mm×250 mm,5μm),检测波长为265 nm,流动相:0.01 mol·L~(-1)磷酸盐(用2 mol·L~(-1)氢氧化钠溶液调节 pH 为8.0)-甲醇(97:3),流速1.0 mL·min~(-1),柱温为45℃。结果:氟尿嘧啶、替加氟分别在0.1～20μg·mL~(-1)(r=0.9998)和0.2～40μg·mL~(-1)(r=0.9998)浓度范围内线性关系良好,最低检测浓度分别为5和10 ng·mL~(-1),方法回收率分别为97.2%～101.3%和98.3%～102.6%,日内、日间 RSD 小于6%。结论:方法灵敏、快速、准确,并适用于临床上氟尿嘧啶及前体药替加氟浓度监测。     

HPLC-荧光法测定肾移植患者血浆中霉酚酸的浓度

目的:建立以高效液相色谱-荧光法测定肾移植患者血浆中霉酚酸浓度的方法。方法:样品用5%硫酸锌的甲醇饱和溶液沉淀蛋白后,取上清液进样20μL进行测定,色谱柱为Zorbax Eclipse XDBC18,流动相为乙腈-甲醇-0.2mol·L-1甘氨酸缓冲液(pH9.0)=18∶2∶80,柱温为25℃,流速为1.0mL·min-1,激发波长(EX)为342nm,发射波长(EM)为425nm。结果:霉酚酸血药浓度在0.5～40mg·L-1范围内线性关系良好,最低定量限为0.5mg·L-1;方法回收率为98.23%～101.00%,萃取回收率为91.56%～94.46%,日内、日间RSD分别为0.64%～3.22%和5.12%～6.10%。结论:本方法灵敏、快速、准确、方便,可用于霉酚酸的血药浓度测定。     

浓缩HIV-1感染性颗粒的改进方法

目前,大家正致力于提高1型人类免疫缺陷病毒( HIV- 1 )检测系统的敏感性,浓缩HIV感染者样本中的病毒是一种方法。聚乙二醇( PEG)沉淀是广泛用于各类病毒的有效方法,作者重新评估了用PEG浓缩HIV- 1的方法并优化了低滴度HIV的浓缩方法。　　作者用HIV- 1 ( LAV- 1 BRU株)感染Molt- 4细胞系,收获HIV- 1。取分子量为1 0 0 0、1 50 0、2 0 0 0、4 0 0 0、6 0 0 0及2 0 0 0 0的PEG加0 .9% Na Cl溶液分别配制浓度为2 %～30 % ( w/v)的PEG溶液。将50 0 μlHIV- 1病毒悬液与等体积PEG溶液混合,在4℃培育1、3、1 6、1 8及2 4小时,并…     

一种简单的制备人血清白蛋白方法

作者报告一种简单的通过两步沉淀分离白蛋白的方法,特别适用于制备临床用白蛋白。第一步沉淀:将经过三倍稀释的血浆先调pH至5.75加乙醇42％(v/v),温度降至-5℃,连续搅拌一小时以上,然后高速离心,废弃沉淀(或用于进一步分离免疫球蛋白和其他血浆蛋白成份     

用聚乙二醇和Ⅰ~(125)标记的A蛋白快速测定含IgG的循环免疫复合物

[Stevens WJ et al:Immunol Letters3(1):1,1981(英文)] 本文报告了用市售制剂快速测定含IgG的循环免疫复合物(CIC)的方法。其操作过程主要为:将血清用PBS(pH7.4)1:1稀释,取100μl与等量的5％的PEG(分子量6,000,溶于PBS中)混合,放4℃1小时,3,000g 4℃沉淀1小时,去上清,加0.5ml 2.5％的PEG(溶于0.1％吐温20 PBS中)混悬,再3,000g     

附子多糖提取纯化工艺研究

目的:通过对附子多糖类成分的含量测定,探讨附子最佳提取、纯化工艺。方法:采用蒽酮-硫酸法测定附子多糖含量,并应用正交实验筛选最佳提取工艺,应用单因素实验筛选出最佳纯化工艺。结果:附子多糖最佳提取工艺为:附子粗颗粒200g,加10倍量水,浸泡30分钟,煎煮2次,每次2小时,滤布滤过,滤液低速离心(3000转/分,5分钟),取上清液加乙醇使含醇量为80%;纯化工艺为:取沉淀加水溶解,过滤,滤液加乙醇使含醇量为80%,放置24小时,取沉淀用丙酮洗涤三次,每次50mL,沉淀加水溶解后用三氟乙酸法除蛋白3次,挥干溶剂,50℃减压干燥得附子多糖粉末。结论:验证实验证实此种提取纯化工艺是合理的。     

乳酸杆菌抑制剂——鳞毛蕨植物的间苯三酚衍生物

本文报告6种鳞毛蕨属植物所含间苯三酚衍生物对乳酸杆菌和酵母菌的抑制作用。所有材料均采集于7～8月,它们的根茎经粉碎后用有机溶剂(乙醚、乙醇、甲醇)提取,以饱和的氢氧化钡水溶液处理,再用盐酸酸化至PH4～5沉淀而得到总的间苯三酚衍生物,得量为0.5～3.0％,因植物品种和生长条件不同而有差异。部分材料还用5％碳酸钠水溶液提取,再经酸化而沉淀之。从欧州鳞毛蕨(Dryopteris filix-mas(L.)schott.根茎中分离得到两个单体:绵马酚及白绵马素。抗菌试验采用系列稀释法,乳酸杆菌为3～4天培养物,每毫升含菌5百万,酵母     

酵母SOD分离纯化及其酶学性质的研究

目的发酵培养Y12 酵母菌分离制备酵母SOD并研究其部分酶学性质。方法用已筛选出的一株Y12 酵母菌对其在优化培养条件下发酵培养得到湿菌体 ,破壁抽提得SOD粗酶液 ,采用硫铵盐析、丙酮沉淀、SephadexG 10 0凝胶过滤和QAE SephadexA 5 0离子交换柱层析 ,分离得到酵母SOD并测定其部分酶学性质。结果Y12 酵母菌SOD产量达 12 6 3u·g-1湿菌体 ,分离得到酵母SOD ,该酶属Cu、Zn SOD ,比活力为 10 73 5u·mg-1,活力回收率为 5 4 1% ,紫外吸收峰在2 5 7 2nm ,分子质量为 32 4 5 6u ,亚基分子质量为 16 2 2 7u。结论此酵母SOD与文献中报道的动物血红细胞Cu、Zn SOD基本相近。