DNA修复酶基因MGMT启动子区异常甲基化与食管癌的关系

背景与目的： 分析食管癌组织中MGMT启动子区CpG岛甲基化状态和食管癌发病风险的关系,探讨MGMT基因启动子的异常甲基化在食管癌筛查及早期诊断中的意义。 材料与方法： 对江苏淮安的91例新发食管癌病例的癌组织、癌旁组织及外周血血浆样本提取DNA,应用甲基化特异性PCR(MSP)分析MGMT启动子区CpG岛的甲基化状态;对食管癌组织和癌旁组织提取总RNA,采用SYBR GREEN I 实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定MGMT的mRNA水平。 结果： MGMT启动子区CpG岛异常甲基化与食管癌发病风险增高有关联 (OR=7.750, 95％CI=2.736～21.955);MGMT启动子区CpG岛甲基化状态与MGMT mRNA水平无显著相关;血浆循环DNA中MGMT启动子区CpG岛甲基化与癌组织中MGMT启动子区CpG岛甲基化相关(P<0.01),血浆循环DNA中MGMT启动子区CpG岛甲基化检出率与癌组织中MGMT启动子区CpG岛甲基化检出率中度相关(Kappa=0.603, P<0.01)。 结论： MGMT基因的启动子区CpG岛的异常甲基化与食管癌发病风险增加有关;检测血浆循环DNA中MGMT基因启动子的异常甲基化,可为食管癌的筛查、早期诊断提供有价值的信息。     

胃癌BRCA1基因甲基化与BRCA1 mRNA表达的关系研究

目的：探讨乳腺癌易感基因1（BRCA1）启动子CpG岛甲基化与BRCA1 mRNA表达的相关性及其意义。方法采用甲基化特异性PCR技术检测37例胃癌组织和对应癌旁组织及6例正常胃组织中BRCA1基因启动子CpG岛甲基化状态;采用逆转录PCR技术检测37例胃癌组织和对应癌旁组织及6例正常胃组织中BRCA1 mRNA 表达水平。结果胃癌组织中 BRCA1基因启动子 CpG 岛总甲基化率为48.6%（18/37）,显著高于癌旁组织[5.4%（2/37）]和正常胃组织[0.0%（0/6）],差异有统计学意义（χ2=17.541、5.021,P均〈0.05）。胃癌组织中BRCA1 mRNA阳性表达率为48.6%（18/37）,显著低于癌旁组织[94.6%（35/37）]和正常胃组织[100.0%（6/6）],差异有统计学意义（χ2=19.215、5.520,P均〈0.05）。BRCA1基因启动子CpG岛甲基化与BRCA1 mRNA表达成负相关（ r=-0.515,P〈0.05）。结论 BRCA1基因启动子CpG岛甲基化可能是导致BRCA1 mRNA失表达的主要原因之一。     

新疆哈萨克族食管癌survivin启动子区CpG岛甲基化状态及其临床意义

目的： 检测消化道肿瘤早期相关基因survivin mRNA在哈萨克族食管癌组织中的表达及其启动子区CpG岛甲基化状态,并进一步探究survivin启动子甲基化是否参与了食管癌的发生。方法：提取哈萨克族食管癌患者癌组织及远端无癌组织RNA,RT-PCR检测组织中survivin mRNA的表达水平,甲基化特异性PCR (methylation specific PCR,MSP)检测survivin启动子区CpG 岛的甲基化状态。结果：在20对食管癌组织标本中,癌组织中survivin mRNA阳性表达率 (95%)明显高于远端无癌组织 (65%) (P＜0.05)。癌组织及远端无癌组织中survivin基因启动子区CpG岛多为杂合型甲基化,且两种组织间甲基化状态无明显差异 (P＞0.05)。结论：survivin mRNA表达水平的增高在哈萨克族食管癌的发生、发展过程中起到了一定的作用,但其表达与启动子区CpG岛甲基化无关,提示甲基化并未直接调控该基因的表达并促进哈萨克族食管癌的发生发展。     

食管癌组织APC基因启动子区5-′CpG岛甲基化模型的研究

目的:探讨原发性食管癌组织中结肠腺瘤性息肉(APC)基因启动子区5-′CpG岛甲基化的状况及其与临床病理特征之间的关系。方法:实时荧光甲基化特异性聚合酶链反应检测182例食管癌及癌旁组织中APC基因启动子区5-′CpG岛甲基化状况。单因素分析采用Kaplan-Meier法,多因素分析采用Cox比例风险模型。结果:在182例食管癌组织中,APC基因启动子区5-′CpG岛甲基化率为54.40%(99/182),在182例相对应的癌旁组织中,甲基化率为9.90%(18/182),差异有统计学意义,P<0.05。APC基因启动子区5-′CpG岛甲基化分别与淋巴结转移、肿瘤远处转移、临床分期及不良预后差异有统计学意义,χ2=76.669,P=0.000。单因素结果提示,远处转移、分期及APC基因启动子区5-′CpG岛甲基化与食管癌患者的生存期相关,P值均<0.05。Cox多因素分析提示,APC基因启动子区5-′CpG岛甲基化是独立的预后因素,P<0.05。结论:APC基因启动子区5-′CpG岛甲基化在食管癌的发生发展中起重要作用,APC基因可能是食管癌新的肿瘤分子标志。     

涎腺腺样囊性癌中Runx3基因启动子区5'-CpG岛的甲基化演进规律

目的 研究涎腺腺样囊性癌(SGACC)中Runx3基因启动子区5'-CpG岛甲基化的关键位点和演进规律.方法 以定量甲基化特异性PCR(qMSP)检测41例SGACC及配对的癌旁正常涎腺组织中Runx3基因启动子区5'-CpG岛(3478 bp)10个位点的甲基化状态,分析Runx3基因甲基化与SGACC临床病理特征的关系,用Logistic模型分析Runx3基因及各位点甲基化在SGACC中发生的危险度.用Western blot法检测19例SGACC及其相应癌旁正常涎腺组织中Runx3蛋白的表达,分析Runx3基因甲基化对Runx3蛋白表达的影响.结果 SGACC及其相应癌旁正常涎腺组织中,Runx3基因启动子区CpG岛(3478 bp)第1～10个位点的甲基化阳性率分别为42.69%～85.69%和22.17%～59.43%,正常涎腺组织中Runx3基因各位点的甲基化率均显著低于SGACC(P＜0.01).其中第1、2位点甲基化程度最高,向转录起始点方向甲基化程度逐渐减弱,在转录起始点位置(第7、8位点)甲基化程度最低,向3'端方向甲基化程度又略微升高.Logistic模型分析结果显示,Runx3甲基化是SGACC发生的一个重要因素,Runx3甲基化从5'端向转录起始点方向演进,转录起始点区可能是Runx3甲基化的关键位点.Western blot检测结果显示,SGACC组织中Runx3蛋白的表达量显著低于相应的癌旁正常涎腺组织(P＜0.01).结论 SGACC组织中Runx3基因甲基化从5'端向转录起始点方向演进,转录起始点部位可能是Runx3基因甲基化的关键位点.Runx3基因甲基化是引起Runx3蛋白表达下调的原因之一,与SGACC的发生有关.     

新疆哈萨克族和汉族食管癌患者金属硫蛋白-3 CpG岛甲基化的研究

目的： 检测分析和比较新疆哈萨克族和汉族食管癌及癌旁组织中金属硫蛋白-3 (metallothionein-3,MT-3)基因启动区CpG岛的甲基化情况,为寻找新疆哈萨克族食管癌诊断治疗的分子标记物提供线索。方法：采用甲基化特异性聚合酶链反应 (methylation specific polymerase chain reaction,MSP)的方法,检测33例哈萨克族和30例汉族食管癌患者食管癌组织和癌旁组织中MT-3 基因启动子区CpG岛的甲基化发生状况。 结果：33例哈萨克族食管癌组织和癌旁组织标本中MT-3基因启动子区甲基化发生率分别为66.7% (22/33)和27.3% (9/33),差异有统计学意义 (χ2=10.280,P=0.001);30例汉族食管癌组织和癌旁组织标本中MT-3基因启动子区甲基化发生率分别为56.7% (17/30)和26.7% (8/30),差异亦有统计学意义 (χ2=5.554,P=0.018)。哈、汉民族之间癌组织和癌旁组织MT-3基因启动子区甲基化率的差异均无统计学意义 (χ2=0.666,P=0. 414;χ2=0.003,P=0.957)。 结论：MT-3基因启动子区CpG岛的甲基化可能与食管癌的发生与发展有关,但不是哈族食管癌患者的特异性致病因素。     

MSP法检测胃癌组织中RASSF1A基因启动子区甲基化改变

目的:探讨抑癌基因RASSF1A启动子区CpG岛甲基化与胃癌及临床病理特征的关系.方法:采用甲基化特异性PCR(methylation-specific PCR,MSP)法检测60例胃癌组织及相应癌旁组织和30例对照组织中RASSF1A基因启动子区甲基化状态.结果:胃癌组织中RASSF1A基因启动子区CpG岛甲基化率为65.0%(39/60),显著高于癌旁组织6.7%(4/60),及对照组0%(0/30)(P＜0.01).胃癌组织中不同年龄、性别、分化程度及淋巴结转移与否的RASSF1A基因甲基化率的差异均无统计学意义.结论:胃癌中RASSF1A基因启动子区的高甲基化提示其与胃癌的发生密切相关,MSP法对RASSF1A基因启动子区甲基化的检测有望成为胃癌早期监测的重要方法.     

BRCA1基因甲基化及甲硫氨酸合成酶与乳腺癌发病的关系

背景与目的:启动子异常甲基化是肿瘤发生的早期事件,肿瘤组织中存在的DNA甲基化异常可以概括为广泛低甲基化伴局部高甲基化.甲硫氨酸合成酶(methionine synthase,MS)是参与甲基供体生成的关键酶,为DNA的甲基化提供甲基.本研究探讨抑癌基因BRCA1 mRNA在乳腺癌组织中的表达及启动子区甲基化状态,及MS基因mRNA表达与BRCA1基因甲基化的关系.方法:应用RT-PCR及甲基化特异性PCR(methylationspecific PCR,MSP)技术检测乳腺癌组织、相应癌旁组织(距癌>3 cm)和乳腺良性病变组织中BRCA1 mRNA的表达及其启动子甲基化状态,并检测MS mRNA的表达水平.结果:乳腺癌组织、癌旁组织及良性病变组织BRCA1mRNA表达差异有统计学意义(P<0.05);乳腺癌组织中BRCA1基因启动子区甲基化检出率明显高于癌旁组织和良性病变组织(χ2=7.631,P<0.05),BRCA1基因启动子区甲基化与散发性乳腺癌组织学分级、雌激素受体(estrogen receptor,ER)相关(P<0.05).乳腺癌组织MS基因表达量明显低于乳腺良性病变及乳腺癌旁组织(P<0.05).MS mRNA的表达与BRCA1基因甲基化的发生有相关性(r=0.419,P<0.05).结论:BRCA1甲基化能够增加乳腺癌的患病风险,MS基因可能通过影响部分肿瘤相关基因发生甲基化而调控其表达.     

肝细胞癌ASC基因启动子区甲基化及其mRNA表达研究

目的:探讨肝细胞肝癌(HCC)ASC基因启动子区甲基化与mRNA表达及其临床病理特征的关系.方法:运用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)和实时荧光定量PCR技术,检测58例肝细胞癌及其相应癌旁组织、15例肝硬化肝组织、5例慢性病毒性肝炎肝组织和5例正常肝组织中ASC基因启动子区甲基化状态及其mRNA的表达水平.结果:58例肝细胞癌组织中有40例(69.0%)发生ASC基因启动子区甲基化,其相应癌旁组织中有27例(46.6%)发生该基因启动子区甲基化,而在肝硬化、肝炎和正常肝组织中均未检测到该基因启动子区甲基化.ASC基因在肝细胞癌组织中甲基化频率高于其相应癌旁组织(P=0.015).ASC基因启动子区甲基化与肿瘤直径(P=0.001)、生长方式(P=0.003)以及国际抗癌联盟第6版TNM(TNM6)分期(P=0.001)有关.以ASC基因在正常肝组织中的表达量为参照,58例肝细胞癌组织中有33例出现ASC基因mRNA低表达或表达缺失,其相应癌旁组织中有14例出现低表达或表达缺失,而在肝硬化及肝炎肝组织中ASC基因mRNA均呈正常表达.与癌旁组织相比,肝细胞癌组织中ASC基因mRNA表达明显下调(P<0.05).在发生ASC基因启动子区甲基化的40例肝细胞癌组织中有26例出现mRNA低表达.结论:ASC基因启动子区甲基化是肝细胞癌中的频发事件,可能在肝细胞癌的进展中起重要作用.     

乳腺癌组织中Maspin蛋白表达与maspin基因启动子甲基化关系的研究

背量与目的:探讨乳腺癌与maspin基因失活之间的关系.材料与方法:采用免疫组织化学方法检测30例乳腺癌患者癌组织、癌近旁组织和癌远旁组织中Maspin蛋白的表达情况,用亚硫酸氢钠测序法检测乳腺癌组织maspin启动子CpG岛的甲基化情况.结果:乳腺癌组织中的Maspin蛋白表达明显低于癌近旁组织(P<0.05)和癌远旁组织(P<0.01),乳腺癌组织maspin基因启动子CpG岛甲基化率为98.72%.结论:乳腺癌的发生与nmspin基因失活关系密切,启动子异常甲基化可能是maspin基因在乳腺癌中失活的重要途径.     

Runx3 基因甲基化与胃癌发生和转移的关系

 目的 探讨Runx3基因启动子甲基化与胃癌发生发展过程的关系。方法 采用逆转录一聚合酶链反应（RT-PCR）检测80例胃癌组织及肿瘤周围粘膜组织中Runx3mRNA的表达，同时用甲基化特异性PCR（MSP）方法检测Runx3基因启动子甲基化情况。结果 80例胃癌组织标本中Runx3基因的表达（0．5971±0．1013）较肿瘤周围组织中表达明显下调（0．8297±0．2912），差异有统计学意义（P〈0．05）。正常粘膜组织中未发现有Runx3基因启动子的甲基化，80例胃癌组织中有43例检测到Runx3基因启动子的甲基化，胃癌组织Runx3基因启动子甲基化率显著增高（P〈0．（15）。胃癌标本中Runx3 mRNA的表达与其病理临床特征密切相关，在低分化和有淋巴结转移胃癌组织标本中Runx3mRNA的表达显著下调（P〈0．05）。结论 Runx3基因启动子甲基化是导致Runx3基因失活的主要原因之一并且与胃癌的发生、发展密切相关。     

胃癌组织runt相关转录因子3基因表达与其甲基化状态的关系

目的 探讨胃癌组织中DNA甲基化调控机制对runt 相关转录因子3(Runx3)基因表达的影响.方法 采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测70例胃癌组织及其配对的正常胃黏膜组织中Runx3 mRNA表达,Westen blot法检测Runx3蛋白表达,甲基化特异性PCR(MSP)法检测Runx3基因启动子的甲基化状态;应用RT-PCR法检测 DNA甲基转移酶1(Dnmt1)mRNA表达,分析Runx3基因甲基化与Dnmt1 mRNA表达之间的相关性. 结果胃癌组织中Runx3 mRNA表达(0.5740±0.3580)明显低于其配对的正常胃黏膜组织(1.7250±0.4080, P<0.05),胃癌组织Runx3蛋白表达亦明显低于其配对的正常胃黏膜组织(P<0.05).在Runx3 mRNA表达下调的56例胃癌组织中,有28例(50.0%)呈启动子高甲基化状态.胃癌组织中,Runx3甲基化阳性者的Dnmt1 mRNA表达量明显高于Runx3甲基化阴性者(P<0.05),Runx3基因启动子甲基化与Dnmt1转录表达呈正相关(r＝0.64,P<0.05).结论 Runx3基因启动子高甲基化是其基因表达下调的原因之一,可能参与胃癌的发生发展;Dnmt1高表达可能影响Runx3启动子区域甲基化改变.     

Pokemon mRNA与c-myc蛋白在乳腺癌组织中的表达及其相关性

目的探讨人乳腺癌中原癌基因c-myc和Pokemon mRNA在乳腺癌组织中的表达及其与乳腺癌发生、转移的关系。方法收集本院2008年1月至10月45例浸润性导管癌组织标本、20例癌旁乳腺组织标本和20例正常乳腺组织标本,均为女性,年龄23～69岁。所有标本均经临床病理确诊。采用原位杂交法检测Pokemon mRNA表达,采用免疫组织化学法检测c-myc表达。采用卡方检验和等级相关法进行统计分析。结果 (1)Pokemon mRNA的阳性表达率在乳腺癌组织、癌旁乳腺组织和正常乳腺组织中分别是71.11%(32/45),30.00%(6/20)和20.00%(4/20),3者间差异有统计学意义(P=0.000)。c-myc阳性表达率在乳腺癌组织、癌旁乳腺组织和正常乳腺组织中分别是86.67%(39/45),60.00%(12/20)和50.00%(10/20),3者间差异有统计学意义(P=0.004)。(2)乳腺癌细胞质Pokemon mRNA表达和乳腺癌细胞质c-myc表达都与乳腺癌腋窝淋巴结转移有关(P=0.012,P=0.027)。(3)乳腺癌细胞质Pokemon mRNA表达与c-myc表达有关联性(r=0.585,P0.000)。结论 Pokemon mRNA和c-myc蛋白可能参与乳腺导管癌的发生和转移。Pokemon mRNA表达和c-myc表达两者间有相关性。     

新疆哈萨克族食管癌患者ALDH1L1基因甲基化及其与预后的关系

目的： 探讨新疆哈萨克族食管癌患者ALDH1L1基因甲基化状态及其与食管癌发生及预后之间的关系。方法：采用联合亚硫酸氢钠限制性内切酶分析(COBRA)法检测28例哈萨克族食管癌及癌旁组织标本中ALDH1L1基因启动子区甲基化状况,建立Cox回归模型分析临床病理指标、ALDH1L1基因甲基化水平等因素与预后的关系。结果：28例哈族食管癌患者癌组织和癌旁正常组织的ALDH1L1基因启动子甲基化率分别为71.43% 和39.28%,差异有统计学意义(P<0.05)。预后因素分析表明肿瘤浸润程度、TNM分期、淋巴结转移、癌组织ALDH1L1基因甲基化水平是影响哈萨克族食管癌预后的独立危险因素。癌组织ALDH1L1基因无甲基化患者术后生存时间长于完全甲基化患者(P<0.05)。结论：癌组织ALDH1L1基因启动子区甲基化状态与新疆哈萨克族食管癌的发生及预后有关。     

乳腺癌患者外周血及癌组织RASSF1A基因甲基化水平检测临床意义分析

目的：观察乳腺癌、乳腺良性肿瘤患者组织及血浆中RASSFlA基因启动子区异常甲基化状态,并探讨其临床意义。方法：应用甲基化特异性PCR检测2011—06—01—2012—12-31潍坊市人民医院116例乳腺癌和85例乳腺良性肿瘤患者组织及血浆中RASSFlA基因甲基化状态,分析其与患者临床病理因素的关系。结果：116例乳腺癌组织RASSFlA基因启动子甲基化率为71．55％（83／116）,血浆中RASSFlA甲基化率为53．45％（62／116）。85例良性肿瘤组织RASSFlA基因启动子甲基化率为12．94％（11／85）,血浆中未检测出甲基化的RASSFIA。癌组织中RASSFIA甲基化与患者年龄（．）x^2=0．008,P=0．930）、病理类型（x^2=0．010,P=0．995）、临床分期（x2=0．216,P=0．642）和淋巴结转移（x2=0．007,P=0．933）不相关,差异无统计学意义;而血浆RASSFlA甲基化与患者临床分期（x^2=4．796,P=0．029）、淋巴结转移（x^2=5．163,P=0．023）相关,差异有统计学意义。血浆RASSFlA启动子甲基化鉴别诊断乳腺癌与乳腺良性肿瘤的灵敏度为53．45％,特异度为100．00％,准确度为73．13％。结论：乳腺癌患者RASSFlA基因甲基化水平明显升高,检测血浆中RASSFIA基因启动子区甲基化水平有助于乳腺癌与乳腺良性肿瘤的鉴别诊断。     

结肠癌患者血清RUNX3基因甲基化状态及其意义

目的检测结肠癌患者外周血清中RUNX3基因启动子区域甲基化状态,探讨循环DNARUNX3基因甲基化对早期诊断结肠癌及其预后分析的价值。方法采集8例健康志愿者、12例结肠良性病变和52例结肠癌患者的外周血清,以甲基化特异性聚合酶链反应（MSP）检测RUNX3基因启动子区域CpG岛甲基化状态,并分析其与结肠癌患者临床病理特征之间的关系。结果 8例健康志愿者中检出率为0,12例结肠良性病变患者中有2例（16.7%）为不完全甲基化,52例结肠癌患者血清RUNX3基因启动子区域异常甲基化29例,检出率为55.8%,差异有统计学意义（P〈0.001）;且RUNX3基因启动子区域甲基化与淋巴结转移及临床分期相关。结论 RUNX3基因启动子区域CpG岛异常高频甲基化在结肠癌患者外周血清中检出率较高,对结肠癌早期诊断与预后分析提供了新的思路。     

BP1和C-erB-2在乳腺癌中的表达

目的研究BP1与C-erbB-2基因在乳腺癌组织中的表达及其相互关系。方法采用RT-PCR方法及免疫组织化学方法检测62例乳腺癌及配对癌旁组织中BP1、C-erbB-2基因的表达及雌激素受体（ER）、孕激素受体（PR）的表达。运用x^2检验对各组间差别及相互关系进行分析。结果BP1在乳腺癌和癌旁组织中的阳性表达率分别为64．5％（40／62）和0．05％（3／62）,前者明显高于后者,差异具有统计学意义（P〈0．050）;BP1阳性表达率在ER阳性乳腺癌组织中为（47．3％）（18／38）,在ER阴性乳腺癌组织中为91．7％（22／24）,两者之间差异有统计学意义（P〈0．050）;BP1阳性表达率在Ⅰ期乳腺癌中为36．3％（4／11）,在Ⅱ期乳腺癌中为64．3％（27／42）,在Ⅲ期乳腺癌中为100％（9／9）,三者间差异有统计学意义（P〈0．050）。在乳腺癌组织中C-erbB-2阳性表达率为46．8％（29／62）,C-erbB-2与BP1共阳性者23例,共阴性者16例。结论BP1基因在乳腺癌组织中表达高于癌旁组织,BP1表达与乳腺癌雌激素受体状态及组织学分级有关,与C-erbB-2共表达。