HLA—Ⅱ血清学分型与微量SSP法基因分型的比较分析

目的 验证微量序列特异性引物（SSP）技术进行HLA－Ⅱ类移植配型的准确性并探讨血清学分型错误发生的原因。方法 采用聚合酶链反应结合微量SSP技术（简称微量PCR－SSP法）以及单克隆抗体血清学分型技术对血清样品进行HLA分型并比较其结果。结果 （1）微量PCR－SSP法检测的110例样本中，99例检出HLA－DR的396个等位基因、11例检出HLA－DQ的22个等位基因，检出10％的单倍型个体；（2）两种方法对比研究发现单克隆抗体血清学分型检出错误和漏检率较高，其误差在DR和DQ分别为38．81％和50．75％；（3）错误发生和易混淆的抗原为：DR15／16、11／12、13／14、8、12和DQ5／6、8／9。结论 微量SSP法可以准确检定血清学易漏检和发生错误的抗原等位基因。     

PCR-SSP/PCR-SBT-HLA高分辨等位基因分型比较

[目的]为了预测无关捐献者干细胞移植(HSCT)后GVHD的发生及程度和选择相容的干细胞捐献者,通过同时采用PCR-序列特异性引物扩增技术(squence specific primer, PCR-SSP)和PCR-直接碱基序列分析基因分型技术(sequence based genotyping,PCR-SBT)的方法,提高HLA基因分型的准确性和分辨水平.[方法]采用PCR-SSP和PCR-SBT分别对57份捐献者血样进行HLA-A、B和DRB1位点的高分辨等位基因分型(即识别基因的编码达到*后4位数).[结果]PCR-SBT实验中有27份DNA的基因分析结果模棱两可,PCR-SSP实验中有10份DNA的基因分析结果模棱两可.经两种方法相互佐证实验后,57份样本均获得结果一致、清楚和精确的HLA-A、B、DRB1位点高分辨基因分型.[结论]PCR-SSP和PCR-SBT是HLA高分辨基因分析的标准方法,两种方法具有实验互补意义,若同时应用两种方法能够有效改善HLA等位基因高分辨分型的准确性和重复一致率.     

Ⅰ型糖尿病HLA—DRB1等位基因分析

应用ＰＣＲ／ＳＳＰ基因分型方法鉴定ＨＬＡ－ＤＲＢ１与北京地区胰岛素依赖型糖尿病的关系。证明ＩＤＤＭ的ＤＲ９频率较对照人群明显升高；而ＤＲ３在ＩＤＤＭ中虽有升高，但无统计学意义。糖尿病患者ＤＲ２频率明显降低，上述结果表明ＤＲ９、ＤＲ３与ＩＤＤＭ易感呈正相关，而ＤＲ２与ＩＤＤＭ抗性相关。     

HLA—DR4基因与类风湿关节炎的关联性研究

目的探讨人类白细胞抗原HLA-DR4基因与类风湿关节炎(RA)的关联性.方法采用特异性引物聚合酶链反应(PCR-SSP)方法对山东地区汉族人群132例类风湿关节炎患者及130例正常健康者的HLA-DR4基因进行分析,并测定其基因频率.结果 HLA-DR4基因在132例类风湿关节炎患者中的基因频率(46.2%)显著高于其在130例正常对照组中的基因频率(19.2%,x2=21.624,P＜0.01).结论 HLA-DR4基因与山东地区人群的类风湿关节炎易感性有关联.     

HLA-Ⅱ血清学分型与微量SSP法基因分型的比较分析

目的验证微量序列特异性引物(SSP)技术进行HLA-Ⅱ类移植配型的准确性并探讨血清学分型错误发生的原因。方法采用聚合酶链反应结合微量SSP技术(简称微量PCR-SSP法)以及单克隆抗体血清学分型技术对血清样品进行HLA分型并比较其结果。结果(1)微量PCR-SSP法检测的110例样本中,99例检出HLA-DR的396个等位基因、11例检出HLA-DQ的22个等位基因,检出10%的单倍型个体;(2)两种方法对比研究发现单克隆抗体血清学分型检出错误或漏检率较高,其误差在DR和DQ分别为38.81%和50.75%;(3)错误发生和易混淆的抗原为:DR15/16、11/12、13/14、8、12和DQ5/6、8/9。结论微量SSP法可以准确检定血清学易漏检和发生错误的抗原等位基因。     

支气管哮喘HLA—DRB1等位因素分析

目的：用分子生物学的方法探讨LA－DRB1等位基因与免疫遗传的关系。方法：应用序列特异性引物聚合酶链反应（PCR－SSP）基因分型方法鉴定HLA－DRB1与天津地区支气管哮喘（asthmaAS)的相关性。结果：表明支气管哮喘患者的DR3较健康对照明显升高（11．76％vs33%,x^2=4.25,P&;lt;0.05);而DR^6(13)在支气管哮喘患者中虽有升高,但无统计学意义（8．82％vs4.44%,x^2=1.25,P&;gt;0.05);支气管患者DR2（15）频率明显降低（5．88％vs16.67%,x^2＝4．26,P＜0．05）。结论：表明DR3与支气管哮喘易感性呈正相关,而DR2(15)与支气管哮喘抗性相关。     

HLA-DRB1等位基因与内蒙古汉族儿童过敏性紫癜相关性的研究

目的：探讨过敏性紫癜（AP）的遗传背景及免疫学发病机制，为明确AP的病因学及预后提供免疲学方面的资料，同时也为探索其免疫治疗提供有价值的线索。方法：采用分析性研究策略和聚合酶链反应——序列特异性引物分型技术（PCR--SSP）对80例内蒙古地区汉族儿童AP病人和108倒正常汉族儿童进行HLA—DRB1等位基因型别分析。结果：汉族儿童HLA—DRB1各等位基因均被检出。HLA—DRB1＊010x、HLA—DRB1＊120x的基因频率在AP患儿组较正常对照组明显升高（分别为13．75％vs4．16％、12．50％VS5．56％，），HLA—DRB1＊080x的基因频率在AP患儿组较正常对照组明显降低（2．50％VS8．33OA）。这些基因频率在两组间的分布经统计学检验差异有显著性。其它HLA--DRB1等位基因频率在两组间的分布经统计学检验差异无显著性。结论：HLA～DRB1＊010x、HLA--DRB1＊120x与AP的易感性呈正相关。可能是AP的易感基因。HLA—DRB1＊080x与AP的易感性呈负相关，可能是AP的保护基因。     

武汉籍汉族类风湿关节炎患者HLA—DRB1＊04、＊01基因分型和临床相关性研究

为探讨人类白细胞抗原（HLA）－DRBA1＊04、＊01基因与武汉籍汉族类风湿关节炎（RA）的相关性。采用聚合酶链反应－序列特异性引物法（PCR－SSP）,对78例RA患者和126例健康者的HLA－DRB1＊01、＊04基因型进行检测,结果显示RA患者DR4基因频率为52．5％,对照组为21．6％,2组有显著性差异（P＜0．01）,DR1基因频率两组无差异（P＞0．05）。RA患者HLA－DR4的主要亚型为DRB1＊0405（32．1％）与对照组（6．3％）有显著性差异（P＜0．01）,DR,阳性的RA患者的并了压痛数、关节肿胀数、类风湿因子（RT）阳性率、关节侵蚀性病变明显高于DR4阴性的患者（P＜0．01）。提示HLA－DR4基因与RA患者易感性及疾病严重性相关,其主要亚型为DRB1＊0405、DRB1＊0401,DR1基因检测可作为一项病情严重程度及预后判断的辅助指标。     

广西汉族婴幼儿海绵状静脉畸形与HLA-DQA1,DQB1等位基因相关性研究

目的:探讨广西汉族婴幼儿海绵状静脉畸形与HLA-DQA1,DQB1等位基因相关性.方法:用聚合酶链反应-序列特异性引物(PCR-SSP)方法,对广西汉族海绵状静脉畸形患儿52例和汉族健康正常人103例的HLA-DQA1,DQB1基因进行检测分析.结果:与正常对照组相比,广西汉族海绵状静脉畸形患儿HLA-DQA1*0103、DQA1*0401 、DQA1*0601基因频率显著降低(OR=0.883,χ2=5.037,P=0.025;OR=2.856,χ2=4.255,P=0.039,OR=3.459,χ2=4.043,P=0.044).结论:HLA-DQA1*0103、DQA1*0401、DQA1*0601等位基因与广西汉族婴幼儿海绵状静脉畸形的遗传易感性相关联.     

皖北地区类风湿关节炎与HLA—DR4基因亚型的关联性研究

目的研究人类白细胞抗原基因中的HLA—DR4基因亚型与皖北地区汉族人群类风湿关节炎（rheumatoid arthritis，RA）的发病及临床表现的关联性。方法采用特异性引物聚合酶链反应技术，检测皖北地区汉族人群102例RA患者及40例健康人HLA-DR4基因亚型，分析其与RA发病及临床表现的关联性。结果①对HLA—DRβ1基因亚型研究结果发现仅仅HLA-DRβ1＊0405基因与RA有显著关联，2组比较差异有统计学意义（P〈0．05），表明HLA—DRβ1＊0405基因是皖北地区汉族人群RA易感基因的主要亚型。②HLA—DRβ1＊0405阳性组晨僵时间明显比阴性组长（P〈0．05），RF滴度阳性组明显比阴性组高，肺部病变阳性组比阴性组增多，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论皖北地区RA易感性与HLA-DRβ1＊0405基因相关。HLA-DRβ1＊0405基因与晨僵时间、RF有关，HLA-DRβ1＊0405阳性患者更容易发生肺间质纤维化。     

PCR-SSP法HLA-A、B基因分型与血清学分型的比较

目的比较聚合酶链反应-序列特异性引物(PCR-SSP)进行HLA-Ⅰ类A、B抗原位点分型的准确性,并探讨血清学分型错误发生的原因。方法用PCR-SSP以及单克隆抗体血清学分型技术对HLA-A、B分型并比较。结果34例样本PCR-SSP基因分型无假阳性和假阴性出现。PCR-SSP法与血清学比较,血清学检出错误或漏检率分别为HLA-A位点23.5%,B位点26.5%。血清学发生错误或易混淆的抗原有:A2和A68、A32和A33,B5、B60和61。结论PCR-SSP法进行HLA-A、B抗原等位基因分型具有分辨率高、特异性强、重复性好、实验过程简捷快速、分型结果较血清学更加准确可靠的优点。     

河南地区汉族人群乙肝后肝硬化遗传易感性与HLA-DRB1等位基因相关性的研究

目的 探讨河南地区汉族人群乙肝后肝硬化遗传易感性与人类白细胞抗原DRB1等位基因多态性的关系，为探寻乙肝后肝硬化的易感基因和抵抗基因提供线索。方法 应用聚合酶链反应-序列特异性引物技术，对62例河南汉族乙肝后肝硬化患者、90例慢性乙型肝炎患者及62例正常健康人进行了HLA-DRB1等位基因检测，应用统计学软件SPSS10．0对三组实验结果进行X^2检验。结果 在乙肝后肝硬化组中HLA-DRB1 1201／1202等位基因频率显著升高，与慢性乙型肝炎组及健康组对比，差异均有统计学意义，而HLA-DRB1＊1301／1302、1501／1502等位基因实验组与两组对照组相比较均无统计学差异。结论HLA-DRB1＊1201／1202等位基因可能为河南地区汉族人群乙肝后肝硬化形成的易感基因。     

微量序列特异性引物聚合酶链反应-HLA分型技术在肾移植中的应用

目的 探讨适用于临床肾移植的组织配型新技术。方法 建立微量序列特异性引物聚含酶链反应（微量SSP法）的方法，对肾移植供、受者SSP-HLA-DRB/DQB 基因分型，并与单克隆抗体一步法分型结果进行对比研究。结果 应用两种方法对142份标本进行HLA-Ⅱ类抗原/基因分型，结果完全相符，微量SSP 法不但快速、需血量少，而且分辨率高、结果准确。结论 微量SSP法具有快速、准确、省血等优点，适合在临床器官移植配型中推广应用。     

用核酸序列测定法对1型糖尿病HLA－DPB1，DQB1基因分析

目的：研究山东地区汉族人1型糖尿病与HLA－DPB1和HLA－DQB1等位基因的相关性。方法：采用基于核酸序列测定的基因分型技术对52型1例糖尿病患者及38名正常对照者进行了DPB1和DQB1基因分析。结果：DPB1 2201（P＜0．01）和DQB1 0201（P＜0．01）,0303（P＜0．05）及0604（P＜0．05）等位基因频率在糖尿病患者组显著高于对照组,而DPB10402（P＜0．01）和DQB10301（P＜0．01）等位基因在糖尿病患者组显著低于对照组。结论：DPB12201和DQB10201,0303及0604等位基因可能是山东地区汉族人1型糖尿病的易感性等位基因,而DPB10402和DQB10301等位基因可能是山东地区汉族人1型糖尿病的保护性等位基因。     

自身免疫性肝炎与人类白细胞抗原Ⅱ类等位基因的相关性

目的探讨分析自身免疫性肝炎（autoimmune hepatitis,AI H）与人类白细胞抗原（human leucocyte antigen,HLA-DRB1）Ⅱ类等位基因的相关性,评估易感基因与AI H临床及实验室特征关系。方法采用序列特异性多聚酶链反应（polymerase chain reaction with sequence specific primers,PCR-SSP）技术,对已确诊的38例AI H患者和41例健康对照者进行HLA-DRB1等位基因分析。结果携带HLA-DRB1＊04和HLA-DRB1＊03等位基因的AI H患者出现频率（18.42%和14.47%）明显高于健康对照组（7.31%和4.87%,χ2分别为9.52和7.40,P均〈0.05）,组间比较差异有统计学意义。携带HLA-DRB1＊05等位基因在AI H患者中出现等位基因频率（5.76%）低于健康对照组（14.63%）,两组相比差异同样有显著性（χ2=5.89,P〈0.05）。携带其他等位基因的患者在与健康对照组比较中两组间出现频率虽有不同,但经较正P值后差异无显著统计学意义（χ2=0.18,P〉0.05）。HLA-DRB1＊04和HLA-DRB1＊03等位基因在AI H患者中出现的频率与临床肝硬化的表现存在着一定的联系。结论HLA-DRB1＊04和HLA-DRB1＊03等位基因与AI H有一定相关性,HLA-DRB1＊05可能为AI H的抗性保护基因。基因型的检测有助于对临床的诊断和治疗提供实验数据。     

HLA—Ⅰ类等位基因与中国汉族人白癜风的相关性

①目的探讨HLA-I类等位基因与中国汉族人白癜风的相关性。②方法采用聚合酶链反应-序列特异性引物(PCR-SSP)方法,检测187例汉族人白癜风患者和252例正常对照组进行HLA-I类等位基因频率。③结果白癜风患者HLA-A*2501、-A*30,-B*13、-B*27与-Cw*0602等位基因频率较对照组显著升高,HLA-A*66等位基因频率则较对照组显著降低;HLA-A*2501、-A*30、-B*13、-B*27与-Cw*0602等位基因频率在泛发型白癜风患者中显著升高。④结论HLA-A*2501、-A*30、-B*13、-B*27与-Cw*0602等位基因可能是白癜风易感基因或与易感基因相连锁;HLA-A*66等位基因可能具有保护作用;局限性、泛发型白癜风在其遗传背景上可能存在差异。     

反复腹痛患儿及其级家庭成员的HLA-DQA1、DRB1、DQB1等位基因分布

目的探讨反复腹痛患儿及其家族成员人类白细胞抗原(HLA)-DQA1、DRB1、DQB1等位基因频率的分布.方法收集完整的7个反复腹痛患儿及其一级和二级家族成员49人的血液标本,用聚合酶链反应-序列特异性引物(PCR-SSP)方法进行HLA-DQA1、DRB1、DQB1基因分型检测.结果反复腹痛患儿家族HLA-DRB1、DQA1等位基因与其反复腹痛症状存在对应的"链性现象".结论 HLA-DRB1*09、HLADQA1*0302及HLA-DQA1*0601等位基因可能与反复腹痛症状相关.     

HLA—DRB1基因多态性与乙型病毒性肝炎的相关性研究

目的探讨河南地区汉族慢性乙型肝炎患者与HLA-DRB1基因多态性的相关性。方法采用聚合酶链反应/序列特异性引物技术对河南地区90例慢性乙肝患者和62例健康对照者进行HLA-DRB1等位基因的检测,应用统计学软件SPSS10.0对两组实验结果进行χ2检验。结果在慢性乙肝组中,HLA-DRB11301/1302出现的频率明显下降,与对照组相比其差异有统计学意义;1501/1502,1201/1202在两组间出现的频率相比无明显差异。结论HLA-DRB11301/1302等位基因可能是河南乙型肝炎人群中清除HBV病毒的抗病基因。