丙戊酸钠诱导髓系白血病细胞分化、凋亡作用及其机制研究

目的研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂丙戊酸钠(VPA)诱导髓系白血病细胞体外分化和凋亡作用及其机制。方法采用四甲基偶氮唑盐(MTT)微量酶反应比色法增殖抑制实验和锥虫蓝拒染法检测VPA对细胞增殖的抑制,流式细胞仪检测细胞表面分化抗原的表达和细胞凋亡,Western印迹法检测组蛋白H3的9位赖氨酸残基(H3-Ac-lys9)的乙酰化水平变化。结果VPA抑制U937和K562髓系白血病细胞增殖,并呈时间-剂量依赖效应。在VPA较低浓度下(0.5～1mmol/L)作用6d后,VPA诱导U937细胞分化,其细胞表面髓系分化抗原CD11b表达明显上调,细胞形态呈终末分化改变。VPA与全反式维甲酸和(或)粒细胞集落刺激因子联合应用,诱导分化作用更为显著。在VPA较高浓度下(2mmol/L),VPA诱导U937细胞磷脂结合蛋白结合力明显上升,细胞呈现凋亡状态。而同样条件下VPA不能诱导K562细胞出现显著的分化和凋亡。U937和K562细胞在H3-Ac-lys9的乙酰化水平存在差异。VPA能够上调U937细胞H3-Ac-Lys9乙酰化,而K562细胞未观察到类似调变作用。结论VPA诱导U937细胞分化和凋亡,其作用与U937细胞的H3-Ac-lys9乙酰化水平及其对VPA处理后的上调有关。     

组蛋白去乙酰化下调对肾细胞癌BNIP3基因表达的影响

目的探讨肾细胞癌中线粒体促凋亡蛋白BNIP3表达下调机制。方法运用CCK-8法及流式细胞技术检测组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古霉素A（TSA）对肾癌细胞株786-O、ACHN、A498增殖、凋亡的影响;运用实时荧光定量PCR（Q-PCR）和蛋白质免疫印记（Western blot）技术检测TSA对肾癌细胞BNIP3表达的影响;运用染色质免疫沉淀（ChIP）技术检测TSA对肾癌细胞BNIP3基因启动子区组蛋白H3乙酰化状态的影响。结果经TSA处理后,3种肾癌细胞增殖均受到显著抑制（PBNIP3 mRNA（PBNIP3基因启动子区组蛋白H3呈去乙酰化状态,TSA恢复了其乙酰化状态;A498的BNIP3基因启动子区组蛋白H3呈乙酰化状态。结论BNIP3基因启动子区组蛋白去乙酰化是其在肾癌中表达下调的主要机制,并可能参与了肾癌的发生发展。     

姜黄素和TSA对胃癌c-myc表达影响

目的了解姜黄素和TSA对胃癌c—myc基因表达影响,探讨组蛋白乙酰化／去乙酰化的动态平衡在胃癌基因表达和调控中的意义。方法进行胃癌细胞株SGC-7901和MGC803培养,然后加入不同浓度的组蛋白乙酰化酶抑制剂姜黄素和组蛋白去乙酰化酶抑制剂TSA分别进行干预,RT—PCR检测c—myc的mRNA的表达。结果通过RT—PCR的检测我们发现随着姜黄素的浓度增加及TSA浓度的减小c—myc的表达受到抑制（P〈0．01）。结论姜黄素与TSA对c—myc表达影响作用是相反的。     

姜黄素和TSA对胃癌c—myc表达影响

目的了解姜黄素和TSA对胃癌c—myc基因表达影响,探讨组蛋白乙酰化／去乙酰化的动态平衡在胃癌基因表达和调控中的意义。方法进行胃癌细胞株SGC-7901和MGC803培养,然后加入不同浓度的组蛋白乙酰化酶抑制剂姜黄素和组蛋白去乙酰化酶抑制剂TSA分别进行干预,RT—PCR检测c—myc的mRNA的表达。结果通过RT—PCR的检测我们发现随着姜黄素的浓度增加及TSA浓度的减小c—myc的表达受到抑制（P〈0．01）。结论姜黄素与TSA对c—myc表达影响作用是相反的。     

曲古菌素A调节NB4细胞组蛋白乙酰化和p21WAF1/CIP1表达

目的研究去乙酰化酶抑制剂曲古菌素A(trichostatinA，TSA)对人急性早幼粒细胞白血病细胞NB4组蛋白H3乙酰化水平的调节作用及对细胞周期素依赖性激酶抑制剂p21^WAF1/CIP1。表达的影响。方法应用300、150、75、37．5、18．75nmol／L浓度的TSA分别作用NB4细胞4、8、12、24、48h，提取细胞的总mRNA和总蛋白，采用RT-PCR技术检测p21^WAF1/CIP1表达情况，并用免疫印迹技术(Western blot)观察组蛋白H3的乙酰化水平变化及p21^WAF1/CIP1蛋白的表达水平。结果TSA对组蛋白H3乙酰化作用随时间改变而变化；在低浓度时就可引起组蛋白H3的乙酰化。TSA对p21^WAF1/CIP1 p21^WAF1/CIP1蛋白表达的影响呈时间和剂量依赖性。结论TSA能够明显上调NB4细胞组蛋白H3的乙酰化水平，促进细胞周期依赖性激酶抑制剂p21^WAF1/CIP1的表达。     

HDAC1 Expression and Effect of Curcumin on Proliferation of Raji Cells

Curcumin ( Cur) , a yellow pigment derivedfromtraditional Chinese herbal medicine ,shows avariety of pharmacological effects ,such as anti-vi-rus ,anti-tumor ,anti-inflammatory and anti-arteri-osclerosis action.In vitrostudy showed that cur-cumin can inhibit the proliferation of tumor cellsandinduce apoptosis via a number of pathways andregulate many tumor surface markers at differentlevels such as at the levels of DNA,RNAand pro-tein[1].Yoshida found that the HDAC1inhibited thetrichostati…     

组蛋白高乙酰化介导的Egr-1结合促进gdnf基因高转录

目的探讨大鼠C6 胶质瘤细胞中gdnf 基因启动子II 区组蛋白H3K9 高乙酰化引发该基因高转录的机制。方法采用
ChIP-PCR技术检测了大鼠C6星形胶质瘤细胞和正常星形胶质细胞中gdnf基因启动子II区转录因子Egr-1结合位点处H3K9
的乙酰化水平以及Egr-1与该启动子的结合能力;利用Real-time PCR和ChIP-PCR技术,检测了组蛋白乙酰基转移酶抑制剂姜
黄素（Curcumin）和去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素A（TSA）处理对C6 胶质瘤细胞中gdnf 基因启动子II 区Egr-1 结合位点处
H3K9的乙酰化水平、Egr-1与之的结合能力以及该基因转录水平的影响。结果较之正常星形胶质细胞,C6胶质瘤细胞中gdnf
基因启动子II 区Egr-1 结合位点处H3K9 的乙酰化水平显著升高,并且Egr-1 与之的结合能力也显著升高（P<0.01）。当
Curcumin显著降低了Egr-1结合位点处H3K9乙酰化水平时,Egr-1与启动子II区的结合量以及gdnf基因mRNA的表达量都显
著下调（P<0.05）;而当TSA显著升高了Egr-1 结合位点处H3K9 乙酰化水平时,Egr-1 与启动子II 区的结合量以及gdnf 基因
mRNA的表达量都显著升高（P<0.05）。结论在大鼠C6胶质瘤细胞中gdnf基因启动子II区H3K9高乙酰化介导的Egr-1结合
量升高可能是其高转录的原因。
     

曲古霉素A对人肾细胞癌Caki-1细胞体外生长的影响

目的:观察组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古霉素A(trichostatin A,TSA)体外对人肾细胞癌Caki-1细胞生长情况、乙酰化组蛋白H3的水平以及基因P21cip1/waf1 mRNA表达的影响,并探讨其可能的作用机制.方法:四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测TSA对Caki-1细胞生长的影响;蛋白质印迹法检测TS...     

HDAC1 expression and effect of curcumin on proliferation of Raji cells

Summary Histone deacetylase (HDAC₁) has a high expression in many cancer cells and curcumin can inhibit the growth of cancer cells. This paper was designed to investigate the expression of HDAC₁ of Raji cells and the effect of curcumin on their proliferation and apoptosis. Raji cells were treated with 3. 125–50 μmol/L curcumin for 8–48 h and the growth inhibition rates of Raji cells were measured by MTT. The expression of HDAC₁ on Raji cells were examined by mRNA, Western blot at 24 h various concertrations (1.6–50 μmol/L). Curcumin could selectively inhibit the proliferation of Raji cells in a dose and time dependent manner, with the inhibition rate being 52.47%–82.18% (P<0.01). The up-regulation of HDAC₁ expression was observed within 24 h after the treatment with curcumin as shown by RT-PCR and Western blot. With the increase of concentration, the expression was down-regulated in a dose dependent manner. It is concluded that the expression of HDAC₁ plays an important role in the proliferation and apoptosis of Raji cells and curcumin can inhibit the growth of Raji cells at various concentrations and promote the apoptosis of Raji cells. WU Qing, female, born in 1970, M. D., Ph. D. This project was supported by a grant from the National Natural Sciences Foundation of China (No. 30271672).     

曲古霉素A对肺腺癌细胞NCI-H1299增殖抑制作用及机制

目的观察组蛋白去乙酰化酶（histone deacetylase）抑制剂曲古霉素A（trichostatin A,TSA）对体外培养肺腺癌NCI-H1299细胞生长情况及相关基因表达的影响,并探讨其可能的作用机制。方法MTT法检测不同浓度（0.1、0.2、0.4、2.0μmol/L）的TSA对人肺腺癌NCI-H1299生长的影响,流式细胞术检测处理后NCI-H1299细胞周期分布及凋亡率的变化;Western印迹法检测处理后人肺腺癌NCI-H1299组蛋白H4乙酰化水平的变化;Real-TimePCR检测处理后人肺腺癌NCI-H1299、p21、cyclin B1、Bcl-2和Bax的表达。结果TSA体外能明显抑制NCI-H1299细胞生长,且抑制作用呈明显的剂量、时间依赖性。0.4μmol/L TSA诱导后,流式细胞术检测示细胞阻滞于G2/M期;TSA可明显提高NCI-H1299组蛋白乙酰化水平,并诱导p21和Bax的mRNA表达和抑制Bcl-2和cyclin B1的mRNA表达。结论TSA可通过诱导细胞凋亡及细胞周期阻滞而发挥体外抗肺腺癌细胞株作用,其作用机制可能涉及组蛋白乙酰化水平以及诱导调控相关基因p21、Bax、Bcl-2和cyclin B1。     

曲古霉素A对人子宫内膜癌HEC-1B细胞增殖和凋亡的作用及相关机制

【目的】探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古霉素A(trichostatin A,TSA)对人子宫内膜癌HEC-1B细胞增殖和凋亡的作用及其可能机制。【方法】应用不同浓度的TSA处理子宫内膜癌HEC-1B细胞72 h,Western blotting法检测细胞内组蛋白H4乙酰化水平及p21蛋白,荧光定量PCR方法检测p21基因mRNA表达,MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡率。【结果】经TSA作用后,人子宫内膜癌HEC-1B细胞内组蛋白H4乙酰化水平增加,p21基因mRNA及蛋白表达增加;同时细胞生长受到抑制,细胞凋亡增加。【结论】TSA通过提高组蛋白乙酰化水平,增加p21基因表达,抑制子宫内膜癌HEC-1B细胞的增殖和诱导细胞凋亡。     

Regulation of Histone Acetylation and Apoptosis by Trichostatin in HL-60 Cells

TrichostatinA(TSA),akindoftypicalhistonedeacetylaseinhibitor(DAIS),wasisolatedfromthemetablitesofStreptomyceshygroscopicus.Recently,TSAwasfoundtoinducedifferentiationand/orapoptosisinsolidtumorsandleukemiccells.InvivoresultsshowedthatTSAcouldselectivelyin…     

Islet-1诱导C3H10T1/2细胞向心肌样细胞分化过程中对心肌特异蛋白基因上组蛋白乙酰化的促进作用

目的研究Islet-1诱导C3H10T1/2细胞定向分化为心肌样细胞过程中表达增加的心肌特异蛋白基因GATA4、NKX2.5、MEF2c上组蛋白乙酰化水平的变化情况。方法 Islet-1基因慢病毒感染小鼠骨髓间充质干细胞C3H10,Western blot检测转染后乙酰化的组蛋白H3表达情况,逆转录及实时荧光定量PCR时序性检测出心肌特异性蛋白基因GATA4、NKX2.5、MEF2c的mRNA表达达高峰的时间点,采用染色质免疫共沉淀技术(chromatin immunoprecipitation,CHIP),用CHIP级乙酰化H3抗体免疫沉淀与其所结合的DNA,采用实时荧光定量PCR扩增抗体所富集的心肌特异性蛋白基因GATA4、NKX2.5、MEF2c启动子区域的DNA量,比较感染组和未感染组与抗体所结合的上述3种心肌特异蛋白基因的表达情况。结果感染高表达Islet-1的C3H10T1/2细胞组蛋白H3的乙酰化水平较未感染组升高3.04倍(P<0.05),在心肌特异性蛋白基因GATA4、NKX2.5、MEF2C的mRNA表达达高峰的2周时间点,乙酰化的H3抗体所结合的心肌特异性蛋白基因GATA4、NKX2.5、MEF2c与未转染Islet-1的细胞组相比较,表达增加(P<0.05)。结论高表达Is-let-1之后C3H10T1/2细胞定向分化为心肌样细胞过程中表达增加的心肌特异蛋白基因上组蛋白乙酰化水平增高。     

新型靶向组蛋白去乙酰化酶抑制剂的抗肿瘤作用及其机制

探讨3种新型靶向组蛋白去乙酰化酶(HDAC)抑制剂D16,D22,D29的抗肿瘤活性作用及其抑制人宫颈癌细胞增殖的机制。MTT法检测D16,D22,D29对MCF-7、HCT-116、A549、HeLa以及K562的增殖抑制作用;测定D16,D22,D29对HDAC及其HDAC-1的酶活抑制作用;流式细胞术观察D16,D22,D29对HeLa细胞周期及凋亡诱导作用;Western blot测定D16,D22,D29对HeLa细胞中乙酰化组蛋白H3(Ac-H3),p21^cip/WAF的蛋白表达影响。结果显示,D16,D22,D29明显抑制多种肿瘤细胞株的增殖,有效抑制HDAC及其HDAC-1的活性,其效果优于阳性对照药Vorinostat(SAHA),并诱导HeLa细胞产生G₁期细胞周期阻滞及凋亡,Ac-H3及p21^cip/WAF的蛋白水平明显上升。D16,D22,D29具有一定的抗肿瘤活性,其机制与诱导细胞周期阻滞和凋亡产生,促进p21^cip/WAF的蛋白表达有关。     

三丁酸甘油酯对K562 白血病细胞的体外作用

目的观察组蛋白去乙酰化酶抑制剂三丁酸甘油酯(tributyrin，TB)对K562白血病细胞增殖、凋亡的影响，并进一步探讨其作用机制。方法用细胞计数及台盼兰拒染法观察TB对K562细胞增殖及活力的影响，通过细胞形态观察、流式细胞术分析观察TB对K562细胞体外诱导凋亡的情况，RT—PCR技术分析p2l^WAFl表达的改变。结果(1)TB抑制：K562细胞的增殖。(2)TB诱导K562白血病细胞的凋亡，影响细胞周期的进程，使细胞周期阻滞于G2／M期。(3)在TB引起的K562细胞增殖抑制及凋亡过程中，p2l^WAFl表达增加。结论TB抑制K562白血病细胞的增殖并诱导凋亡，阻滞细胞周期进程于G2／M期，p2l^WAFl在此过程中发挥作用。     

Induction of myelogenous leukemia cells with histone deacetylase inhibitors through down-regulating the Daxx protein expression

The effects of two different histone deacetylase （HDAC） inhibitors, sodium butyrate （NAB） and trichostatin A （TSA）,on apoptosis of human leukemic cells in vitro and the molecular mechanisms were investigated. The experiments were divided up 5 groups： control group, NaB group, TSA group, NaB＋Z-VAD-FMK group and TSA＋Z-VAD-FMK group. The apoptosis rate was determined by mor- phological analysis and flow cytomytry. The expression of Daxx, Bcl-2, and Bcl-xl proteins was detected by Western blot. NaB and TSA could induce the apoptosis of HL-60 and K562 cells, and Z-VAD-FMK caused a marked decrease in apoptosis induced by HDAC inhibitors. HDAC inhibitors could down-regulate the expression of Daxx protein, but had no significant influence on the expression of Bcl-2 and Bcl-xl proteins. The results suggested that NaB and TSA induce distinct caspase-dependent apoptosis of human leukemic cells through down-regulating the expression of Daxx protein in vitro.     

曲古抑菌素A单用及联用伊马替尼对K562R细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨曲古抑菌素A( trichostatin A,TSA)对耐伊马替尼细胞株K562R的增殖和凋亡的影响.方法:采用3-(4,5-二甲基-2-基)-5（3-羧基甲基苯基）-2-（4-磺酸苯基）-2H-四氮唑细胞毒试验法观察细胞增殖抑制,细胞凋亡率采用流式细胞仪凋亡试剂盒检测.结果:TSA单用能抑制K562R细胞的...     

曲古抑菌素A和紫杉醇对子宫内膜癌细胞凋亡和微管稳定性的影响

目的 探讨曲古抑菌素A(TSA)和紫杉醇(PTX)体外对人子宫内膜癌细胞凋亡和微管稳定性的影响及其机制.方法 将浆液性乳头状子宫内膜癌Ark2细胞、低分化子宫内膜样腺癌KLE和AN3细胞各分为TSA、PTX单独作用组(TSA组、PTX组)和联合作用组(TSA+PTX组),并设空白对照组,以锥虫蓝拒染法观察药物对细胞增殖的影响,膜联蛋白V、Hoechst染色法检测细胞凋亡率,流式细胞仪测定线粒体膜电位(MMP),蛋白质印迹法检测半胱天冬酶9(caspase-9)、多聚ADP核糖聚合酶(PARP)和乙酰化微管蛋白的表达.结果 TSA、PTX对Ark2、KLE和AN3细胞均有抑制作用,二药联用后抑制作用更强.药物作用后4 d,TSA、PTX、TSA+PTX和对照组Ark2细胞凋亡率膜联蛋白V染色法检测分别为4.25%±0.25%、12.12%±0.62%、16.56%±0.74%和46.78%±2.68%,Hoechst染色法检测分别为3.39%±0.12%、6.00%±0.25%、10.05%±0.53%和22.30%±1.25%,TSA+PIX组明显高于其他各组(均P＜0.05).药物作用后24 h,Ark2和KLE细胞的TSA+PTX组caspase-9、PARP的裂解明显增加;Ark7.和AN3细胞的TSA+PTX组MMP消失率(16.80%±0.92%、11.28%±0.78%)明显高于TSA组(4.96%±0.47%、6.46%±0.62%)和PTX组(5.34%±0.45%、5.61%±0.56%)(均P＜0.05);Ark2和KLE细胞的TSA+FIX组乙酰化微管蛋白表达明显增加.结论 TSA和PTX可通过促进子宫内膜癌细胞中乙酰化微管蛋白表达和增强微管稳定性而产生协同抗肿瘤作用.     

组蛋白乙酰化修饰调控流感病毒复制中间体dsRNA引起的IL-6激活表达

目的研究组蛋白乙酰化修饰在流感病毒复制中间体dsRNA引起IL-6 表达中的调控作用。方法以病毒复制中间体
dsRNA为诱导物,利用组蛋白去乙酰化酶（HDAC）抑制剂、DNA甲基转移酶（DNMT）抑制剂或HDAC siRNA分别处理A549细
胞,双荧光素酶报告系统分析IL-6启动子活性、RT-PCR检测mRNA转录水平以及ELISA检测蛋白表达。结果dsRNA可激活
IL-6启动子活性、增强mRNA转录水平和蛋白的分泌表达,用HDAC抑制剂TSA处理或HADC siRNA干扰均可显著增强IL-6
启动子活性和mRNA转录,同时,HDAC抑制剂TSA和DNA甲基转移酶抑制剂DAC在调控IL-6表达过程中无协同作用。结
论在流感病毒复制中间体dsRNA引起IL-6表达上调过程中受到组蛋白乙酰化修饰调控。