基质金属蛋白酶在视网膜缺血再灌注损伤中早期的表达及意义

目的 :观察基质金属蛋白酶 - 9(MMP— 9)及其抑制剂 - 1(TMP— 1)在大鼠视网膜缺血再灌注损伤 (RIR)早期的表达 ,探讨MMP - 9是否参与视 -血屏障 (RBR)病理损伤过程。方法 :将 38只无眼疾Wistar大白鼠随即分为两组 :正常组和缺血再灌注对照组 ,采用前房灌注加压法建立视网膜缺血再灌注模型 ,其中缺血再灌注对照组分别按 0、3、2 4h不同时间段处死动物 ,利用免疫组化法检测MMP - 9、TIMP - 1的表达 ;电镜观察BRB硝酸镧示踪。结果 :正常组视网膜未见MMP - 9及TIMP - 1表达 ,对照组再灌注后3hMMP - 9表达增高 ,2 4h呈强阳性表达且全层分布 ,TIMP - 1呈微弱表达 ,再灌注后 3h可发现硝酸镧颗粒 ,2 4h明显增多。结论 :视网膜缺血再灌注后视 -血屏障的损害与MMP - 9活性表达增高呈正相关性 (P<0 0 1) ,提示细胞外基质降解、再塑可能是视网膜缺血再灌注病理损伤的又一个重要组成部分。     

视网膜缺血再灌注后c-fos、c-jun蛋白表达

目的:观察大鼠视网膜缺血再灌注(RIR)后,凋亡即刻基因cfos、cjun在视网膜各层细胞中的表达变化,进一步明确凋亡即刻基因和RIR损伤发生机制的关系。方法:采用视网膜中央动脉结扎方法诱导大鼠视网膜缺血60min,解除结扎,建立RIR模型。缺血60min,再灌注0,1,3,6,12,24h作视网膜石蜡切片,cfos,cjun免疫组化观察。结果:正常对照组和缺血组未见cfos、cjun表达,RIR后,视网膜神经节细层(ganglioncelllayer,GCL)和内核层(innernuclearlayer,INL)1h开始少量表达(P<0.05),3h达到高峰(P<0.05),6h开始下降(P<0.05),24h几乎趋于正常组表达(P>0.05)。而外核层(outernuclearlayer,ONL)几乎无阳性表达。结论:cfos、cjun参与RIR损伤发生,RIR中视网膜节细胞层和内核层细胞存在凋亡征象,尤以3h组最为显著。     

诱导型热休克蛋白70在大鼠视网膜的表达及其对视网膜缺血再灌注损伤的保护作用

目的　检测锌离子诱导的HSP70 在大鼠视网膜的表达及HSP70 对视网膜缺血再灌注损伤的保护作用。方法　生理盐水前房加压灌注制作视网膜缺血再灌注 (RIR)损伤模型 ,腹腔注射硫酸锌诱导HSP70 表达 ,作为实验组 ;腹腔注射HSP表达抑制剂 -Quercetin(槲皮素 ) ,为实验对照组 ;另取大鼠不行任何处理作正常对照组。不同时间段作视网膜HSP70 免疫组化染色 ,视网膜病理 (HE)染色、神经节细胞 (RGCs)计数 ,视网膜透射电镜观察 ,比较各组差异。结果　实验组在注射硫酸锌后 10h即见视网膜节细胞层有HSP70 阳性表达 ,16h达高峰 ,7d后仍呈弱阳性表达 ,HSP70 主要在RGCs胞浆表达 ;正常对照组及实验对照组均呈阴性表达。RIR后实验组和实验对照组均有RGCs损失 ,其中RIR后 2 4h ,实验组RGCs计数多于实验对照组且有统计学意义 (P <0 .0 5 ) ,RIR后 3d、7d差异有显著性 (P <0 .0 1) ;透射电镜观察显示实验组损伤轻于实验对照组。结论　腹腔注射锌离子可诱导大鼠视网膜的HSP70 表达 ,腹腔注射槲皮素可抑制此作用 ,HSP70 主要在RGCs胞浆表达 ;HSP70 能提高RGCs对RIR损伤的耐受性     

大鼠视网膜缺血再灌注损伤中生存素和半胱氨酸蛋白酶-3及白细胞介素-1α的动态变化及意义

目的 研究大鼠视网膜缺血再灌注(RIR)损伤过程中生存素(Survivin)、半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)及血清中白细胞介素-1α(IL-1α)的动态表达及意义.方法 建立大鼠视网膜缺血再灌注损伤动物模型:选用SD大鼠42只,随机分为两组:A对照组6只;B实验组36只(每个时间段6只).B组采用结扎单侧颈总动脉的方法诱导大鼠视网膜缺血60 min,恢复视网膜血供,建立1、6、12、24、48、72 h 的RIR模型.A组仅暴露单侧颈总动脉不结扎.结果 ①视网膜缺血再灌注后对视网膜的损伤,在形态学上表现为视网膜内层细胞减少,层次变薄.②缺血再灌注12 h凋亡细胞数开始逐渐增加,24 h细胞凋亡数达到高峰,之后又逐渐减少.③实验组在RIR 1 h后视网膜神经节细胞层(GCL)和内核层(INL) Caspase-3表达开始出现,再灌注6 h明显升高,12 h达高峰,与对照组相比差异有统计学意义(P <0.01).Survivin表达延迟于Caspase-3 的表达,再灌注12 h开始增加,24 h后达到高峰,以后逐渐降低,与对照组相比差异有统计学意义(P <0.01).④IL-1α正常对照组有较低表达,在缺血再灌注后1 h表达升高,6 h达到高峰,并且持续到12 h后开始发生降低,72 h后基本上降为正常.结论 ①视网膜缺血再灌注后对视网膜的损伤,在形态学上表现为视网膜内层细胞减少,层次变薄.②细胞凋亡可能是视网膜缺血再灌注后视网膜损伤的主要方式,其发生与Survivin和Caspase-3的变化存在密切的关系.③ IL-1α在缺血再灌注早期即开始升高,参与了缺血再灌注的损伤过程.     

川芎嗪对SD大鼠视网膜缺血再灌注损伤的影响

目的 :观察川芎嗪对大鼠视网膜缺血再灌注损伤的影响。方法 :采用前房灌注生理盐水 ,形成13 0mmHg ( 17 3kpa)高眼压 ,诱导大鼠视网膜缺血 60min ,解除高眼压 ,建立RIR模型。治疗组 ,在缺血前3 0min和再灌注开始时 ,予川芎嗪 80mg/kg腹腔注射。对照组予等量生理盐水。缺血 60min ,再灌注 3 0min、2 4h、 72h测定视网膜丙二醛含量 ,再灌注 168h作光镜观察。结果 :川芎嗪治疗组视网膜中丙二醛含量较对照组显著性降低 (P <0 0 1)。组织病理学显示川芎嗪治疗组损害减轻。结论 :川芎嗪对视网膜缺血再灌注损伤具有防护作用     

大鼠视网膜缺血再灌注后IL-1β的免疫组化研究

目的：观察大鼠视网膜缺血再灌注(retinal ischemia reperfusion，RIR)后，白细胞介素1β(IL—1β)多肽在视网膜表达变化。方法：采用前房灌注生理盐水，形成130mmHg(17．3kPa)高眼压，诱导大鼠视网膜缺血60min，解除高眼压，建立RIR模型。缺血60min，再灌注12h、48h作视网膜冰冻切片，IL—1β免疫组化观察。结果：正常对照组未见IL—1β表达，RIR后12h、48h视网膜神经节细层可见IL—1β表达。结论：IL—1β多肽在蛋白质水平参与RIR损伤发生。     

AQP4和VEGF在大鼠视网膜缺血／再灌注损伤中表达的规律及相关性分析

目的研究水通道蛋白-4（AQP4）和血管内皮生长因子（VEGF）在视网膜缺血／再灌注（RIR）损伤机制中的表达规律,探讨二者在RIR损伤机制中有无相关性。方法运用提高眼内压的方法建立大鼠RIR模型,将56只Wistar大鼠随机分为术后6、12、24、48、72h,7d组和正常对照组,用免疫组化法、平均光密度分析和Pearson法观察二者的表达水平及相关性。结果AQP4在RIR损伤6h后出现表达上调,24h后达高峰,除7d组外,其余实验组AQP4的表达与正常对照组相比均有显著性差异fP〈0．01）。VEGF表达在RIR损伤后12h开始增加,48h达高峰,具有显著性差异（P〈0．01）。AQP4和VEGF在12-72h呈正相关,且24、48h的相关性更佳。结论AQP4和VEGF在RIR损伤中可能通过协同作用影响视网膜的水代谢。     

大鼠视网膜缺血再灌注损伤后bcl-2和bax mRNA的表达变化及其意义

目的:探讨大鼠视网膜缺血再灌注损伤后bcl-2和baxmRNA的表达变化及其意义。方法:采用升高眼内压的方法,制作实验性视网膜缺血再灌注大鼠模型。将30只Wistar大鼠随机分为正常组(n=4)和缺血再灌注组(n=16),其中缺血再灌注组又分为再灌注后2、6、24、72h等4个时间段(每时间段4只)。应用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测视网膜组织中bcl-2和baxmRNA的表达变化。结果:视网膜组织内bcl-2mRNA的表达水平在缺血再灌注损伤后2h时即开始下降,6h时降至最低,持续至第72h,与正常组相比有显著差异(P<0.01)。与bcl-2的表达相反,baxmRNA的表达呈上升趋势,6h时达最高,72h时仍显著高于正常组(P<0.01)。结论:bcl-2和bax可能参与了缺血再灌注损伤所造成的视网膜细胞的凋亡过程。     

姜黄素对自发性高血压大鼠缺血再灌注后视网膜细胞凋亡及p53表达的影响

[目的]探讨姜黄素对自发性高血压大鼠缺血再灌注后视网膜细胞凋亡及凋亡相关基因p53表达的影响和意义。[方法]制作大鼠视网膜缺血再灌注(retinal ischemia reperfusion,RIR)模型,将自发性高血压大鼠(spontaneously hypertensive rat,SHR)随机分为假手术组(SH)、缺血再灌注组(IR)、姜黄素处理组(CU)和对照组(SC),每组又分为再灌注后2h、6h、24h、72h和7d等5个亚组(n=9)。用TUNFL(terminaldeoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick end labeling)法观察大鼠视网膜和视网膜毛细血管细胞凋亡,分光光度法检测视网膜Caspase-3酶表达活性,用免疫组织化学SP法检测再灌注后不同时段视网膜组织中p53蛋白表达变化。[结果]与IR组比较,CU组能显著减少视网膜和视网膜毛细血管的细胞凋亡数量(P<0.01),抑制p53蛋白表达(P<0.01)。[结论]姜黄素对SHR视网膜缺血再灌注损伤有保护作用,调控凋亡相关基因p53蛋白的表达可能是其作用机制之一。     

地塞米松对缺血再灌注鼠视网膜电图的影响

目的观察地塞米松对大鼠视网膜缺血再灌注损伤 (retinalischemiareperfusion ,RIR)视网膜电图 (ERG)的影响。方法应用前房灌注液体升高眼内压的方法 ,建立RIR模型 ,并随机分为防治组和对照组 ,防治组大鼠地塞米松用药从缺血前 6天开始 ,剂量为 1mg/kg ,溶于 1ml生理盐水中腹腔注射 ,给药持续 8天 ,对照组用同体积的生理盐水代替。两组缺血 60分钟后分别再灌注 3 0分钟、2 4小时、72小时 ,进行视网膜电图。结果防治组ERG标化b波振幅显著高于对照组 (P <0 .0 1 )。结论地塞米松对RIR有一定防治作用     

复方益肾解毒汤对大鼠急性肾缺血再灌注损伤的机制研究

目的 探讨益肾解毒汤对大鼠急性肾缺血再灌注的保护作用及机制研究。方法 48只雄性大鼠随机分为4组:假手术组、肾缺血再灌注组（RIR组）、益肾解毒汤+肾缺血再灌注组（Drug+RIR组）、姜黄素+肾缺血再灌注组（Cur+RIR组）。术后24、96 h取大鼠目内眦采血,比较各组大鼠血清中肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)水平;取术后24 h大鼠肾脏组织,比较各组肾脏损伤评分;比较假手术组、RIR组和Drug+RIR组3组炎症因子NF-κB水平。结果 与假手术组比较,RIR组、Drug+RIR组和Cur+RIR组血清Scr、BUN、肾小管损伤评分均升高,Drug+RIR组高于Cur+RIR组,但均明显低于RIR组（P<0.05）;且比较术后96 h RIR组、Drug+RIR组2组血清Scr、BUN,Drug+RIR组肾功能指标恢复更快。结论 复方益肾解毒汤对大鼠肾脏缺血再灌注损伤有明显保护作用,其机制可能与NF-κB相关炎症因子的表达有关。      

Protective effect of nitric oxide pathway in resveratrol renal ischemia-reperfusion injury in rats

BACKGROUND: Nitric oxide (NO), synthesized from L-arginine by the enzyme nitric oxide synthase (NOS), seems to play an ambiguous role during tissue ischemia-reperfusion (I/R) injury. This study was designed to investigate the effects of resveratrol, a polyphenolic phytoalexin, in renal ischemia reperfusion (RIR) injury in rats. METHODS: Forty-eight rats were randomized into six groups. Group 1: sham operated (C); group 2: right nephrectomy (UNI); group 3: UNI + 45 min of ischemia and 24 h of reperfusion in the contralateral kidney; group 4: UNI + RIR + L-NAME (10 mg/kg, i.p.); group 5: UNI + RIR + resveratrol (5 mg/kg, p.o.); group 6: UNI + RIR + resveratrol + L-NAME. At the end of the reperfusion period, rats were sacrificed. Thiobarbituric acid reactive substances (TBARS), reduced glutathione (GSH) levels, catalase (CAT), and superoxide dismutase (SOD) activities were determined in renal tissue. Serum creatinine and blood urea nitrogen (BUN) were measured for the evaluation of renal function. Tissue and urine nitrite levels were measured to assess total nitric oxide levels. RESULTS: Ischemic control animals demonstrated severe deterioration of renal function, altered renal morphology, reduced total nitric oxide levels and a marked renal oxidative stress. CONCLUSIONS: Pretreatment of animals with resveratrol markedly attenuated renal dysfunction, morphological alterations, improved nitric oxide levels, reduced elevated TBARS levels and restored the depleted renal antioxidant enzymes, However, treatment with L-NAME attenuated this protection afforded by resveratrol indicating that resveratrol exerts its protective effect through NO release.     

盲肠结扎穿刺致脓毒性肺损伤大鼠血清MMP-9水平研究

目的 观察盲肠结扎穿刺（CLP）手术致大鼠脓毒性急性肺损伤（ALI）血清基质金属蛋白酶9（MMP-9）、IL-1、IL-8和IL-10表达的变化,探讨MMP-9在ALI形成及预后判断的作用机制.方法 50只SD大鼠随机分为假手术组（SHAM组）（n=8）和CLP手术组42只（6h n=8、12h n=8、24h n=10、48h n=16）.动物成模在各对应时间点取材,检测各组生存率、肺湿重系数、肺组织病理评分,以及MMP-9、IL-1、IL-8、IL-10血清水平.结果 MMP-9蛋白水平在CLP后24小时出现明显上升,显著高于对照组（P＜0.01）,48小时进一步升高（P＜0.01）;IL-1、IL-8、IL-10在CLP术后升高,48小时组均显著高于对照组（P＜0.01）;CLP术后大鼠明显肺损伤出现于24小时并持续加重,48小时组内大鼠均出现严重肺损伤;MMP-9与肺损伤病理程度存在正相关（r=0.704,P＜0.01）,相关性高于IL-1（P＜0.01）、IL-8（P＜0.01）和IL-10（P＜0.05）.结论 CLP手术致大鼠脓毒性ALI血清MMP-9显著升高,MMP-9升高水平与肺损伤病理程度呈显著正相关,提示MMP-9可能在脓毒症后肺损伤的形成过程中扮演着关键性角色,对肺损伤的早期诊断和预后判断具有潜在价值.     

MMP-2、MMP-9在大鼠肾缺血再灌注损伤早期的表达及意义

目的探讨大鼠肾缺血再灌注后肾组织中MMP-2、MMP-9的表达及在肾缺血再灌注损伤中的作用机制。方法48只健康雄性SD大鼠,分组建立大鼠肾缺血再灌注损伤模型,应用免疫组化二步法检测MMP-2、MMP-9表达的变化,测定肾组织髓过氧化物酶(MPO)活性及血清肌酐(Scr)水平,以反映中性粒细胞浸润及肾功能损害的程度变化。结果MMP-2、MMP-9蛋白在假手术组呈少量散在表达或不表达,缺血45min再灌注6h有少量表达,再灌注12、24、72h呈阳性表达,以24h达高峰(P<0.05),多表达在皮质深层近曲小管及髓质区。与假手术组比较,缺血再灌注各组Scr水平和MPO的活性升高,且随再灌注时间延长而进一步升高,24h达高峰(P<0.01)。MMP-2和MMP-9蛋白的表达变化与Scr水平呈显著性正相关关系(r分别为0.763和0.874,P<0.01);与MPO活性也呈显著性正相关关系(r分别为0.752和0.693,P<0.01)。结论肾缺血再灌注后肾组织中MMP-2、MMP-9表达增加,提示MMP-2、MMP-9可能与早期肾缺血再灌注后损伤及加重有关。     

血必净对水下爆炸致兔急性闭合性肝损伤早期干预的效果研究

目的探讨血必净对水下爆炸致兔急性闭合性肝损伤早期干预的效果研究。方法健康新西兰兔15只,随机分为对照组、损伤组和用药组（给予血必净）,以水下爆炸致兔急性闭合性肝损伤,用酶联免疫法检测爆炸后0、4、12、24 h血清中丙氨酸氨基转移酶（ALT）、白细胞介素（IL）-6、基质金属蛋白酶（MMP）-9的浓度。结果爆炸后4 h各组间ALT差异有统计学意义（P < 0.05）,损伤组水平高于对照组（P < 0.05）;爆炸后12 h各组间IL-6水平差异有统计学意义（P < 0.01）,损伤组水平高于对照组和用药组（P < 0.05~P < 0.01）;爆炸后24 h MMP-9水平各组间差异有统计学意义（P < 0.05）,损伤组水平高于对照组和用药组（P < 0.05）;损伤组爆炸后4 h与爆炸后12 h和24 h MMP-9间水平差异有统计学意义（P < 0.05）,用药组爆炸后4 h与爆炸后12 h MMP-9间水平差异有统计学意义（P < 0.05）。结论血必净对水下爆炸致兔急性闭合性肝损伤有保护作用。     

新生鼠缺血脑组织MMP-9、TIMP1表达及其意义

目的:观察新生大鼠缺血脑组织基质金属蛋白酶-9(matrix metallo proteinase system-9,MMP-9)、基质金属蛋白酶组织抑制物1(TIMP1)表达情况及其作用。方法:75只7 d龄Wistar大鼠随机分为正常对照组、缺氧缺血组(模型组)、假手术组。采用左侧大脑中动脉结扎术建立脑缺氧缺血组模型,24 h后用免疫组化法观察新生大鼠缺血脑组织MMP-9、TIMP1表达水平。结果:MMP-9、TIMP1在三组脑组织中均有表达,但组间差异有统计学意义(P<0.01);模型组缺血脑组织MMP-9、TIMP1表达水平较假手术组及对照组均显著升高(P<0.01)。其中模型组缺血脑组织MMP-9与TIMP1表达水平呈显著正相关(P<0.01);正常对照组和假手术组脑组织MMP-9与TIMP表达水平之间无显著相关性(P>0.05)。结论:MMP-9、TIMP1在新生鼠缺血脑组织表达明显增加,可能参与新生鼠缺血脑组织损伤的发生。     

缺血再灌注大鼠脑内基质金属蛋白酶的动态变化

目的 研究局灶性脑缺血再灌注后基质金属蛋白酶(MMPs)的变化。方法 应用含明胶的定量酶谱技术,检测大鼠局灶性脑缺血再灌注7 d内MMP-2和MMP-9的表达。结果 MMP-9(92 kd)在假手术组和手术组非缺血侧没有或仅有极低量的表达,手术组缺血侧再灌注3 h后开始出现MMP-9表达,24、48 h较假手术组显著升高(P<0.05,P<0.01),并显著高于其它各组(P<0.05)。MMP-2(72 kd)在各组缺血侧与非缺血侧均有表达,48 h缺血侧开始较假手术组升高(P<0.05),7 d到达高峰;3 h和24 h与7 d相比,有显著性差别(均P<0.01)。各组非缺血侧之间无显著差别(P>0.05)。结论 脑缺血再灌注后MMP-9和MMP-2的水平升高;MMP-9上调可能与缺血再灌注后的炎症损伤有关,MMP-2可能与炎症反应损伤后的修复过程相关。     

促红细胞生成素及其受体在大鼠视网膜光损伤后的表达

目的 观察大鼠视网膜光损伤后促红细胞生成素（EPO）及其受体（EPOR）的表达变化。方法 选用32只雄性SD大鼠,其中29只建立视网膜光损伤大鼠模型（光损伤组）,另3只作为正常对照组。取正常对照组大鼠视网膜组织以及光损伤组大鼠光损伤后0、6、12、24、48、72 h和7、14 d的视网膜组织,分别采用Western blotting和RT-PCR法检测EPO、EPOR蛋白和mRNA的表达,并采用免疫组织化学法定位观察EPO和EPOR蛋白表达。结果 Western blotting检测显示：视网膜光损伤后,EPO和EPOR蛋白表达增加,光损伤后48 h达到高峰;光损伤组EPO蛋白的相对表达量在光损伤后12、24、48、72 h显著高于正常对照组（P<0.05或P<0.01）,光损伤组EPOR蛋白的相对表达量在光损伤后6、12、24、48、72 h和7、14 d显著高于正常对照组（P<0.05或P<0.01）。RT-PCR检测显示：视网膜光损伤后,EPO和EPOR mRNA表达增加,分别于光损伤后24 h和48 h达到高峰;光损伤组EPO mRNA的相对表达量在光损伤后12、24、48、72 h和7、14 d显著高于正常对照组（P<0.05或P<0.01）,光损伤组EPOR mRNA的相对表达量在光损伤后6、12、24、48、72 h和7、14 d显著高于正常对照组（P<0.05或P<0.01）。免疫组织化学定位观察显示：视网膜光损伤后24 h,光感受器内外段EPOR蛋白表达略增强,EPO蛋白表达相对较弱。结论 大鼠视网膜光损伤后EPO和EPOR蛋白及mRNA表达增加,有一定的时效性,提示内源性EPO和EPOR参与视网膜光损伤的修复机制。