脂质体白细胞介素Ⅱ对小鼠b16黑色素瘤肺转移反脾细胞增殖的影响

小鼠尾静脉注射B16黑色素瘤细胞,腹腔注射脂质体白细胞介素Ⅱ和未包裹白细胞介素Ⅱ(IL—2),连续10d,检测小鼠肺湿重、肺转移结节数和ConA诱导的脾细胞DNA掺入量。结果表明,IL—2可抑制小鼠B16黑色素瘤肺转移,促进ConA刺激的脾细胞增殖,并与剂量明显相关。脂质体包裹IL—2可使其生物活性提高约5倍。对免疫功能受抑小鼠作用更为明显。     

黄芪多糖对小鼠B16-BL6黑色素瘤肺转移的影响

目的 探讨不同剂量的黄芪多糖对小鼠B 16-BL6黑色素瘤肺转移的影响及机制.方法 采用B 16-BL6小鼠人工肺转移模型研究不同剂量黄芪多糖对黑色素瘤肺转移的影响;测量给药后小鼠免疫器官指数的变化探讨其可能的机制.结果 高剂量组的黄芪多糖能够显著抑制小鼠B16-BL6黑色素瘤肺转移,并能增加小鼠脾脏指数.结论 高剂量黄芪多糖可能通过增强免疫达到抗黑色素瘤细胞肺转移的作用.     

脾虚对B_(16)黑色素瘤肺转移的影响

用大黄复制的小鼠脾虚模型,观察了脾虚小鼠免疫状态和肿瘤转移之间的关系。实验发现,脾虚小鼠的肺表面转移瘤明显多于对照组。ConA诱导的淋巴细胞增殖反应,碳粒廓清速率均明显下降,脾脏和胸腺也明显萎缩。而抗体生成明显多于对照组。用扶正方药四君子汤(红参、甘草、茯苓、白术)治疗,可使萎缩的脾脏和胸腺恢复到正常水平,并能增强ConA诱导的淋巴细胞增殖反应,显著抑制肿瘤的肺转移。本文提示,脾虚小鼠肿瘤肺转移增加与宿主免疫状态有密切关系。     

丁酸钠对黑色素瘤荷瘤小鼠的作用及机制探究

目的:探讨表观遗传修饰抑制剂-小分子化合物丁酸钠对B16黑色素瘤的作用及其机制,为临床黑色素瘤的治疗提供新视角。方法:观察丁酸钠在体内、外对黑色素瘤B16的作用效果,采用MTT法检测不同浓度丁酸钠体外处理后细胞的凋亡率;流式细胞术检测肿瘤相关巨噬细胞的浸润情况;western-blotting检测肿瘤相关巨噬细胞因子的表达。结果:一定浓度的丁酸钠能有效地在体内、外对鼠源B16黑色素瘤产生抑制效应;与对照组相比,1.0 g/kg组、2.0 g/kg组、3.0 g/kg组的巨噬细胞分化都受到不同程度的抑制,其中5.0 g/kg组抑制效应最明显,差异具有统计学意义(P<0.01),同时下调肿瘤相关巨噬细胞因子的表达。结论:丁酸钠能通过抑制肿瘤相关巨噬细胞的分化、增殖及下调促瘤巨噬细胞因子而抑制体内、外鼠黑色素瘤的生长,有助于促进对临床黑色素瘤表观遗传治疗的研究。     

GHGKHKNK八肽对小鼠黑色素瘤细胞B16-F10侵袭和转移的抑制作用

目的：观察GHGKHKNK八肽对小鼠黑色素瘤B16-F10细胞侵袭和转移的抑制作用,为开发具有我国独立的知识产权、针对性强的抗癌小肽类药物奠定临床前的实验基础。方法：MTT法检测GHGKHKNK八肽对小鼠黑色素瘤B16-F10细胞的细胞毒作用；应用C57BL/6J小鼠，尾静脉注射小鼠黑色素瘤B16-F10细胞建立人工肺转移模型，通过免疫组化分析检测GHGKHKNK八肽对小鼠黑色素瘤B16-F10细胞肺转移瘤形成的影响。结果：1×10^-4mol•L^-1 GHGKHKNK八肽作用48 h对小鼠黑色素瘤B16-F10细胞的增殖抑制率为17.4%；高剂量组（500 μg•kg^-1•d^-1）GHGKHKNK八肽明显抑制小鼠黑色素瘤B16-F10细胞的肺转移。结论： GHGKHKNK　八肽具有 抑制小鼠黑色素瘤B16-F10细胞生长和侵袭转移的作用。     

鼠粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子基因转染小鼠黑色素瘤B16F1细胞

目的：探讨基因转移载体脂质体介导转染的鼠粒细胞－巨噬细胞集落刺激因子（mGM-CSF)基因在B16F1细胞的表达动态及表达产物的生物活性。方法：脂质体和质粒DNA复合，转染10^6 B16F1细胞，连续5d换细胞培养液，并检测其中的mGM-CSF含量。采用[^3HTdR]渗入法，测定DA1G细胞和转染后第一天收获的以1：10对倍稀释到1：640的上清液及[^3HTdR]混合培养后，渗入到DA1G细胞的[^3HTdR]量（cpm)，以分析表达产物的生物活性。结果：转染B16F1细胞的mGM-CSF基因得到有效表达。但随着时间的推移，表达由第1天的135ng/ml下降到第5天的42.2ng/ml。渗入到DA1G细胞的[^3HTdR]量（cpm)随上清液的稀释而逐步下降，由1：10稀释度的9371下降到1：640时的3251。和DMEM混合培养的DA1G细胞的[^3HTdR]渗入量（cpm)仅为472。结论：脂质体作为基因转移载体可有效地介导mGM-CSF基因转染B16F1细胞，并获得有生物活性的表达。     

三氧化二砷对黑色素瘤B16细胞端粒酶活性影响

目的:研究三氧化二砷(As2O3)对黑色素瘤B16细胞端粒酶活性的作用,探讨砷及其化合物治疗黑色素瘤的作用机制,为其治疗黑色素瘤提供新的理论和实验依据.方法:用TRAP-ELISA和TRAP-PAGE银染法检测黑色素瘤B16细胞(简称B16)端粒酶活性.结果:As2O3对黑色素瘤B16细胞端粒酶活性的抑制有明显的浓度和时间依赖关系.结论:As2O3对黑色素瘤B16细胞端粒酶活性表达的抑制作用随药物浓度的增加或作用时间的延长而增强.     

川芎嗪诱导iNOS和NO表达抗荷黑色素瘤鼠肺转移

目的探讨川芎嗪对小鼠黑色素瘤肺转移的抑制和iNOS、NO表达的增强作用。方法用黑色素瘤B16-F1细胞接种C57BL/6J小鼠造模,川芎嗪注射液100、200mg/(kg·d)灌胃20d后,检测小鼠肺、脾重量及血清iNOS和NO含量,计数其肺表面转移瘤结节数。结果川芎嗪能减少小鼠肺转移灶数目,增加其血清iNOS和NO含量。结论川芎嗪能抑制小鼠黑色素瘤的肺转移,机制可能与增强iNOS的表达和NO的合成有关。     

基因工程干扰素γ对小鼠Lewis肺癌转移及脾细胞增殖的影响

Ｃ（５７）ＢＬ／６Ｎ小鼠尾静脉注射Ｌｅｗｉｓ肺癌细胞１×１０５后，腹腔注射基因工程干扰素γ（ｒＩＦＮ－γ）１万、５万、２０万ｕ·ｋｇ（－１），连续１０ｄ；小鼠肺湿得减少０．６％、１５．３％、２０．１％；肺转移结节数减少６．６％、３６．７％、５５．０％；ＣｏｎＡ诱导的脾细胞ＤＮＡ掺入量增加３．０％、２５．７％、５２．５％。小鼠环磷酰胺５０ｍｇ·ｋｇ（－１）ｉｐ３ｄ后，尾静脉注射瘤细胞，实验处理同上，小鼠肺湿重减少５．３％、１８．１％、２７．６％；肺转移结节数减少１６．３％、４５．６％、６９．６％；脾细胞ＤＮＡ掺入量增加１７．１％、７２．４％、９０．９％。本文结果表明，ｒＩＦＮ－γ可抑制小鼠Ｌｅｗｉｓ肺癌肺转移，促进ＣｏｎＡ刺激的脾细胞增殖，并与剂量呈正相关。对环磷酰胺处理后免疫功能受抑小鼠的作用更为明显。     

三羟异黄酮抑制黑色素瘤B16细胞增殖作用的机制研究

目的:研究三羟异黄酮抑制黑色素瘤B16细胞增殖作用的分子机制.方法:以4',5,7三羟异黄酮处理黑色素瘤B16细胞1～4天后,以生长曲线反映其增殖活力,以B16细胞形态、黑色素含量及以流式细胞仪检测细胞周期变化等观察三羟异黄酮对黑色素瘤B16细胞的抑制增殖作用.结果:用10、30、90 μmol/L的三羟异黄酮作用肿瘤细胞均有不同程度的抑瘤作用(P<0.05～P<0.01).表现为黑色素生成能力增加,细胞生长缓慢,可使B16细胞阻断在S期.结论:三羟异黄酮不同剂量对体外黑色素瘤B16细胞增殖有明显的抑制作用.     

和厚朴酚对小鼠黑色素瘤B16细胞增殖以及黑色素合成的影响

目的探讨和厚朴酚对小鼠黑色素瘤B16细胞增殖以及细胞内黑色素合成的影响。方法体外培养小鼠B16细胞,MTT法检测和厚朴酚对B16细胞增殖的影响;DAPI染色法观察和厚朴酚对B16细胞细胞形态的影响;NaOH裂解法检测和厚朴酚对黑色素含量的影响。结果和厚朴酚浓度为51、0、204、0、80μmol/L作用B16细胞,在不同的用药时间122、4和48 h,和厚朴酚对B16细胞增殖的IC50分别为23.41、3.1和11.4μmol/L;同时和厚朴酚作用B16细胞12 h后,经DAPI染色,B16细胞呈现典型的凋亡形态;另外采用204、0、80μmol/L的和厚朴酚分别作用B16细胞,B16细胞内黑色素合成量也呈现降低的趋势。结论和厚朴酚能有效地抑制B16细胞增殖,且其抑制作用具有时间和浓度依赖性;药物作用后的B16细胞呈现凋亡形态并出现凋亡小体;和厚朴酚对B16细胞内黑色素合成也呈现抑制作用但不明显。     

白花蛇舌草总黄酮对黑色素瘤A375和B16细胞增殖抑制作用的研究

目的观察白花蛇舌草总黄酮（FOD）对体外培养黑色素瘤A375和B16细胞增殖的影响。方法体外培养黑色素瘤A375和B16细胞,分别使用浓度为6.25、12.5、25、50、100 mg.L-1的FOD作用24、48 h,通过MTT比色法检测细胞生长的抑制作用。结果 12.5 mg.L-1的FOD作用A375细胞48 h后,细胞增殖能力明显受抑制（P〈0.05）,25 mg.L-1的FOD作用A375细胞24 h后,细胞增殖能力也明显受抑制（P〈0.05）;25 mg.L-1的FOD作用B16细胞48 h后,细胞增殖活力明显下降（P〈0.05）,50 mg.L-1的FOD作用B16细胞24 h后,细胞增殖活力也明显降低（P〈0.05）;分别作用24 h和48 h后,两组随着浓度的升高,不同浓度对细胞的增殖能力抑制差异有统计学意义（P〈0.05）;随着浓度的增高和作用时间的延长,细胞的增殖能力随着下降。结论 FOD能有效抑制黑色素瘤A375和B16细胞增殖,且具有一定的时-效和量-效关系。     

川芎嗪对小鼠脾淋巴细胞增殖反应的影响

川芎嗪对小鼠脾淋巴细胞增殖反应的影响与剂量有关。在１００～１０００μｇ／ｍｌ时，川芎嗪对正常小鼠和荷瘤小鼠脾淋巴细胞增殖反应有明显的抑制作用。在亚适浓度ＣＯｎＡ（２μｇ／ｍｌ）作用下，正常小鼠和荷瘤小鼠脾淋巴细胞对川芎嗪的反应性不同，荷瘤小鼠湛服川芎嗪后，其淋巴细胞￣３Ｈ－ＴｄＲ掺人量明显增加，对ＰＨＡ刺激的反应性不因荷瘤而降低，提示川芎嗪具有免疫调整作用。     

IL-24对小鼠黑色素瘤B16细胞的抑制作用

[目的]研究携带IL-24基因的真核表达质粒对小鼠黑色素瘤B16细胞的凋亡和体外增殖的影响.[方法]采用重组DNA技术构建含有IL-24基因的真核表达质粒pEGFP-N1-IL-24,用脂质体法将pEGFP-N1-IL-24转染B16细胞,用荧光显微镜观察其表达,在生物显微镜下观察细胞的形态学变化,用吖啶橙/溴化乙锭（AO/EB）法检测细胞凋亡,用MTT比色法检测B16细胞的体外增殖能力.[结果]荧光显微镜下观察到pEGFP-N1-IL-24可在B16细胞中表达;生物显微镜下显示转染IL-24基因的B16细胞皱缩、成团;AO/EB法检测显示转染IL-24的B16细胞核染色质着橘黄色或橙红色,并呈固缩状;MTT比色法显示IL-24明显抑制B16细胞的生长,与对照组相比较差异有统计学意义（P〈0.05）.[结论]外源性IL-24基因在体外对小鼠黑色素瘤B16细胞有显著的诱导凋亡和抑制增殖的作用.     

IL-17对黑色素瘤B16F10细胞增殖和侵袭的影响

目的:探讨白细胞介素-17(IL-17)对小鼠黑色素瘤B16F10细胞增殖和侵袭的影响。方法:体外培养小鼠黑色素瘤B16细胞,选择对数生长期的细胞,在培养基中加入一定浓度的IL-17,并设空白对照组,MTT法检测IL-17对B16细胞增殖能力的影响;transwell侵袭实验检测IL-17对B16细胞侵袭能力的影响;明胶酶谱法分析IL-17处理后细胞MMP-2和MMP-9的表达活性。结果:IL-17处理组与对照组相比,B16细胞的增殖能力无变化(P>0.05)。transwell侵袭实验显示,IL-17处理组B16细胞穿膜细胞数明显增多(P<0.01)。明胶酶谱实验显示,IL-17处理后细胞MMP-2和MMP-9的表达活性增强(P<0.01)。结论:IL-17对黑色素瘤B16F10细胞的增殖能力无影响,但可促进细胞侵袭,可能通过增强MMP-2和MMP-9的活性而发挥作用。     

利凡诺对B16黑色素瘤细胞生长及MMP-2、MMP-9表达的影响

目的:观察利凡诺对体外培养的B16黑色素瘤细胞生长状态及基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达的影响,研究利凡诺的抗肿瘤转移作用。方法:用噻唑蓝(MTT)法检测利凡诺对B16黑色素瘤细胞的生长抑制率;酶联免疫吸附法检测细胞培养上清的MMP-2蛋白相对含量;免疫细胞化学染色检测MMP-2、MMP-9蛋白表达情况。结果:MTT法检测结果显示,不同浓度的利凡诺对细胞都有明显抑制并伴有时间及浓度依赖性;6.25、12.5μg.ml-1的利凡诺组在72 h与同时段对照组比有显著差异(P<0.05);利凡诺各药物组的MMP-2、MMP-9蛋白阳性表达随药物浓度的增加而减弱。结论:利凡诺可以抑制B16细胞的生长,并且具有潜在的抑制肿瘤侵袭和转移的作用。     

应用AFLP法检测小鼠黑色素瘤B16基因组的变异

目的 应用AFLP技术检测小鼠黑色素瘤B16的遗传改变。方法 肿瘤及正常组织基因组DNA经限制性内切酶酶切,连接特异性接头,采用20条与接相识别的引物进行扩增,扩增产物经含溴化乙锭的1．5％琼脂糖凝胶电泳,紫外透视仪分析,照相。结果 20条引物均扩增出清晰条带,20条引物扩增结果显示B16瘤细胞株与移植瘤基因组间无差异。17条引物扩增结果显示肿瘤与正常组织间无差异,3条引物扩增结果显示肿瘤与正常组织间有差异,表现为扩增带的丢失或增加。结论 黑色素瘤的发生可能与基因组不稳定性有关。     

逆转录病毒介导的HyTK基因转移及杀伤恶性黑色素瘤细胞的…

用逆转录病毒载体将单纯疱疹病毒胸苷激酶基因导入恶性肿瘤细胞，随后应用药物丙氧鸟苷可选择性杀死肿瘤细胞。本研究中我们将ＨｙＴＫ基因克隆到逆转录病毒载体ＬＸＳＮ中，并初除其中的ＳＶ４０早期启动子，构建成重组逆转录病毒载体ＬＨｙＴＫ／Ｎ，并用该重组病毒转染小鼠恶性黑色素瘤细胞系Ｂ１６细胞，经ＰＣＲ方法检测证明ＨｙＴＫ基因已成功地导入了肿瘤细胞中，且不含可复制的辅助病毒。     

小鼠B16黑色素瘤转移前后免疫器官的动态观察

本文报道49只小鼠(C_(57)BL)的B_(16)黑色素瘤,在发生转移前后淋巴结、脾脏、胸腺的形态变化。发现最早于接种后第4天即转移至同侧腘窝淋巴结,第6天至腹股沟淋巴结,第16天后全部淋巴结受累。本实验表明细胞免疫活性增强对肿瘤转移有抑制作用,而体液免疫活性增强对肿瘤转移可能具有促进作用。