瘤内注射活卡介苗抗瘤机理探讨——Ⅰ.阻断小白鼠巨噬细胞机能对瘤内注射活卡介苗抗瘤作用的影响

<正> 活卡介苗瘤内注射不仅具有显著的抗动物肿瘤的作用,而且在临床实践上也有着重要的实用价值。这一点已为实验肿瘤学家和临床肿瘤学家所公认。在我们实验室也证实国产卡介苗(丹麦_2)冷冻干燥制剂瘤内注射对小鼠实体型肉瘤180有40%的抑瘤率。活卡介苗瘤内注射对机体和肿瘤都有深刻的影响,它的应用在理论上对在位(in situ)肿瘤免疫反应的研究也起了推动作用。其作用机理问题目前众说纷纭,不少人强调卡介苗对巨噬细胞的介导作用,认为卡介苗能促进巨噬细胞的分裂,增加消化酶的含量,增强吞噬功能。为了探讨卡介苗瘤内注射作用机理,我们做了下述实验。     

瘤内注射活卡介苗抗瘤机理探讨——Ⅱ 瘤内注射卡介苗后小鼠对同种和不同种肿瘤的抵抗力

<正> 如前文所述,阻断巨噬细胞机能非但不减弱瘤内注射卡介苗的抗瘤作用,在一定程度上还增强瘤内注射卡介苗在雌性小鼠的抗瘤作用。那末,卡介苗瘤内注射究竟怎样发挥抗瘤作用呢? 关于这个问题,我们曾将各种看法归纳为五个方面,并提出卡介苗瘤内注射具有以卡介苗作为佐剂的自身瘤苗的作用。为了能对阐明这个问题提供一些线索,我们作了以下实验。     

瘤内注射活卡介苗抗瘤机理探讨 Ⅲ、阻断巨噬细胞机能对瘤内注射活卡介苗小鼠对同种和不同种肿瘤抵抗力的影响

用给瘤内注射卡介苗的小鼠注射硅胶悬液使巨噬细胞中毒、死亡的方法进行的实验表明,阻断巨噬细胞的机能在一定程度上减弱瘤内注射卡介苗小鼠对同种和不同种肿瘤的抵抗力;可是,这种减弱是不显著的,特别是对不同种肿瘤的抵抗力的减弱更不显著。这一结果似乎说明,巨噬细胞可能通过参与抗原信息的传递,特别是肿瘤抗原信息的传递,在卡介苗瘤内注射引起的免疫反应感受阶段,特别是特异性免疫反应的感受阶段发挥一定的作用。然而,巨噬细胞的作用是有限的,即除了通过巨噬细胞以外,必然还通过其它更主要的途径来传递免疫信息。     

在卡介苗瘤组织匀浆混合液免疫的同时应用胸腺素对其后移植的小鼠前胃鳞状细胞癌的抑制作用

以津白Ⅰ号同系小鼠作为实验动物。除生理盐水对照组外,分三组(卡介苗组、卡介苗瘤组织匀浆混合液组、卡介苗瘤组织匀浆混合液加胸腺素组)进行免疫。免疫一周后用悬液法接种前胃鳞状细胞癌,观察肿瘤生长情况。结果显示:1)卡介苗无明显抑瘤效果;2)卡介苗瘤组织匀浆混合液有一定的抑瘤效果,但效果不稳定;3)卡介苗瘤组织匀浆混合液加胸腺素,当短期应用胸腺素时,无明显效果,但当长期应用胸腺素时,则表现出明显的效果。一般地说,胸腺素能促进前T细胞转变为T细胞,增加T细胞的量;特殊地说,在卡介苗瘤组织匀浆混合液免疫的同时应用胸腺素,推测还能改变T细胞的质的组成,增加特异的针对该肿瘤的T细胞的量。     

人内皮抑素基因治疗卵巢癌裸鼠移植瘤的研究

目的探索人内皮抑素基因治疗人肿瘤的可行性：方法将人卵巢癌(SKOV3)瘤组织或其细胞移植于裸鼠皮下，建立成裸鼠移植瘤模型；用高保真PCR从含有人内皮抑素基因的重组质粒中扩增出与人生长激素信号肽序列融合的人内皮抑素编码区，将此基因克隆入pGEM-T载体中，经序列测定证明其序列的正确性；将此基因克隆入真核表达载体pcDNA3。经免疫荧光试验证明能在CPS-1细胞中表达。结果用重组质粒注射已形成移植瘤的裸鼠，能显著抑制移植瘤的生长；将基因注射与肿瘤移植同时进行，基因注射不仅能部分抑制移植瘤的形成，而且能抑制移植瘤的生长。结论本研究构建的分泌型表达人内皮抑素的重组质粒可以用于肿瘤的基因治疗研究。     

树突状细胞诱导抗卵巢癌免疫抑制裸鼠SKOV3移植瘤生长并预防其发生

目的：研究树突状细胞（DC）体外诱导抗肿瘤免疫能否预防裸鼠移植瘤发生及抑制裸鼠移植瘤生长。方法：以粒／巨噬细胞集落刺激因子（GM－CSF）及白介素－4（IL－4）刺激卵巢癌患外周血DC；以人卵巢癌细胞系SKOV3细胞粗提物刺激DC；DC激活同源混合T淋巴细胞增殖分化为细胞毒性T细胞（CTL）；CTL预防性接种于裸鼠皮下，观察进一步接种的SKOV3移植瘤发生；观察CTL抑制已接种于裸鼠的SKOV3移植瘤生长。结果：DC诱导的CTL不仅能抑制裸鼠人卵巢SKOV3移植瘤生长，而且能预防该移植瘤发生。结论：肿瘤抗原激活的DC作为一个概念上的抗肿瘤疫苗有可能在卵巢癌的预防及治疗中发挥重要作用。     

白头翁体内抗肿瘤作用的实验研究

以荷Ｓ１６０瘤小鼠及艾氏腹水型小鼠为模型，研究了白头翁注射液（ＰＷＡＥ）的体内抗肿瘤作用。ＰＷＡＥ有明显的抗体内移植瘤和延长荷瘤小鼠存活期作用，并且ＰＷＡＥ还能降低荷瘤小鼠脾指数，升高胸腺指数，使之趋向正常值。提示ＰＷＡＥ不仅能抑制体内肿瘤生长，还能提高机体的免疫能力。     

复方中药CCM-AT13抗胃癌的作用机制

目的 研究复方中药CCM-AT13对裸鼠胃癌荷瘤模型的治疗作用及机制。方法 通过建立裸鼠移植瘤模型与瘤体内局部注射药物,采用大体、组织学、亚细胞学与细胞增殖动力学指标观察CCM-AT13,5-F与华蟾素对移植瘤的治疗效果。研究CCM-AT13作用机制。结果 CCM-AT13具有较强的肿瘤细胞杀伤作用和抑制作用,抑瘤率为91.2%,抑瘤效果明显强于5-FU与华蟾素;CCM-AT13不仅可引起肿瘤组织坏死,抑制细胞增殖,还可增强局7部免疫力,促进纤维组织增生。结论 CCM-AT13具有较强的抗肿瘤效果。有较大的临床应用价值。为临床治疗胃癌提供了新的思路与方法。     

溶瘤病毒治疗妇科晚期恶性肿瘤的初步结果

据文献报道,动物鹿肠道溶瘤病毒不仅具有溶解P615、H615移植瘤细胞的能力,而且在体内外具有杀伤人癌细胞(HeLa细胞、AGzy-83-a等)能力。抑瘤的机理,经电镜观察及免疫学证实,病毒不仅直接作用于瘤细胞,还可刺激机体使其免疫力增强。本文选     

超声辐射微泡治疗小鼠皮下H22肝癌移植瘤的疗效

目的：研究超声辐射微泡对小鼠皮下H22肝癌移植瘤的治疗作用。方法：建立小鼠H22肝癌腹水瘤皮下移植瘤模型，随机分对照组、单纯超声治疗组和超声微泡组。观察肿瘤生长情况，计算瘤重，对治疗后肿瘤组织进行病理学检查，了解肿瘤细胞坏死和凋亡情况，并进行定量分析。结果：相对于对照组，超声微泡组肿瘤生长延缓，肿瘤坏死面积显著增加，凋亡肿瘤细胞数明显增多（P〈0．05）。结论：超声辐射微泡可显著抑制H22肝癌移植瘤的生长，除杀灭肿瘤细胞外，还可诱导瘤细胞凋亡。     

丙戊酸对卵巢癌裸鼠移植瘤血管形成的影响

目的探讨丙戊酸(VPA）对卵巢癌裸鼠移植瘤血管形成的影响。方法建立人卵巢癌裸鼠皮下转移瘤模型,将24只裸小鼠随机分为对照组、VPA组、顺铂（DDP）组、VPA+DDP 4组,每组6只。观察并记录各组裸鼠及其皮下移植瘤的生长情况,绘制肿瘤生长曲线、计算肿瘤体积、肿瘤生长抑制率。采用免疫组化SP法检测各组裸鼠皮下移植瘤中CD105 和sFlk-1的表达水平。结果① 治疗组裸鼠移植瘤的体积较对照组明显变小;② 各治疗组肿瘤组织的CD105表达较对照组均明显下降(P＜0.05),sFlk-1表达较对照组均明显增高(P＜0.05)。结论VPA对卵巢癌裸鼠移植瘤有明显抑制作用,其作用机理可能与抑制肿瘤血管形成有关,与DDP联合应用其抑瘤作用增强。     

Apoptin对人膀胱癌裸鼠皮下移植瘤的抑瘤作用研究

目的探讨Apoptin质粒对人膀胱癌裸鼠皮下移植瘤的抑瘤作用。方法皮下注射T24细胞,建立裸鼠移植瘤模型,于肿瘤直径0.5cm大小时,多点注射脂质体包裹质粒pApoptin-EGFP,设立空质粒组、生理盐水组作为对照组,观察裸鼠肿瘤生长情况;5周后处死,绘制肿瘤生长曲线,计算抑瘤率,肿瘤组织石蜡包埋,常规切片,TUNEL法检测移植瘤凋亡情况。结果成功建立移植瘤模型,注射脂质体包裹pApoptin-EGFP质粒能明显抑制移植瘤生长;TUNEL检测凋亡率为(23.24±6.12)%,与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.01)。结论Apoptin通过诱导凋亡能明显抑制人膀胱癌裸鼠皮下移植瘤生长。     

清热解毒经验方对子宫内膜癌移植瘤的作用及TAMs表达的影响

目的探讨清热解毒经验方对子宫内膜癌移植瘤的作用及对肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)表达的影响。方法对子宫内膜癌细胞进行传代培养,建立裸鼠子宫内膜癌移植瘤模型,采用免疫组织化学染色的方法研究子宫内膜癌裸鼠移植瘤组织中TAMs的表达。结果孕激素组及成瘤前中药组、成瘤后中药组肿瘤生长速度均明显低于空白对照组(P0.05),孕激素组及成瘤前中药组、成瘤后中药组肿瘤生长速度比较,差异无统计学意义(P0.05)。TAMs在肿瘤组织中的表达,孕激素组、成瘤前中药组、成瘤后中药组与空白对照组比较明显降低(P0.05);孕激素组与成瘤前中药组、成瘤后中药组比较明显降低。(P0.05)。结论清热解毒经验方具有抑制肿瘤生长的作用,其可能是通过抑制TAMs在肿瘤组织中的表达而发挥抑制肿瘤生长的作用。     

人骨肉瘤裸鼠胫骨原位移植动物模型

目的 进一步探讨采用人来源的骨肉瘤组织进行原位移植形成骨肉瘤动物模型的可行性。方法 通过将组织完整的肿瘤组织原位移植到裸鼠胫骨,建立一种人骨肉瘤原位移植模型。从第3代人骨肉瘤皮下移植瘤中获得完整的肿瘤碎片,植入18只裸鼠的胫骨近端。移植后4周处死动物进行尸检,并对局部肿瘤生长和转移进行大体和病理检查。结果 最终16只裸鼠发生了局部胫骨内骨肿瘤,2只裸鼠术后5 d内死亡,造模2周后裸鼠下肢可见肿瘤状组织形成。裸鼠胫骨移植瘤不仅在X射线上具有人类原发骨肉瘤的特征,而且在病理切片和免疫组化上也表现出了人类原发骨肉瘤的特性。结论 人骨肉瘤可以在裸鼠胫骨进行原位移植,且这种模型可能与临床相似,可用于肿瘤局部生长、转移形成和治疗的研究。     

新城疫病毒对裸小鼠人肺腺癌移植瘤的抑瘤作用

目的 观察新城疫病毒（NDV）对裸小鼠人肺腺癌移植瘤的抗肿瘤作用。方法 建立人肺腺癌细胞系在裸小鼠体内移植瘤动物模型,瘤体内1次局部注射NDV病毒作抗肿瘤研究,同时设PBS对照。观察5周,绘制肿瘤生长曲线,处死后量瘤并作光电镜观察其病理学改变。结果 NDV对裸小鼠人肺腺癌移植瘤的生长有明显地抑制作用（抑瘤率为71.62%)。NDV组与对照组瘤重均值之间差异显著（P＜0.01）。对照组14％的肿瘤发生肝及肺的转移。电镜下可见肿瘤细胞内NDV粒子出芽。结论 NDV对裸小鼠有俩腺癌移植瘤有明显地抑瘤作用。其抑瘤作用与NDV选择性地在肿瘤细胞内增殖并导致肿瘤细胞凋亡及溶解肿瘤细胞有关。     

蛇毒抗人癌裸小鼠移植瘤的初步试验

蝮蛇全毒对３个人癌裸小鼠移植瘤的实验治疗结果表明，它对人肝癌移植瘤有一定的治疗作用，肿瘤抑制率为６３．７％，而对人肺腺癌及人肺鳞癌移植瘤均无效。眼镜蛇全毒对上述３个移植瘤均无抗肿瘤作用。从蝮蛇全毒分离的４个组分中，Ｄ组分保持着对人肝癌移植瘤的抗癌活性，并观察到该组分引起的移植瘤细胞核的病理变化。     

人大肠癌裸鼠皮下移植瘤模型的建立

目的：建立人大肠癌裸鼠皮下移植瘤模型的方法。方法：从新鲜的人大肠癌标本上切取肿瘤组织,移植于裸鼠皮下,原代移植成功后再进行传代,观察裸鼠摄食、活动状况、成瘤时间、成瘤率、潜伏期、肿瘤生长情况、移植瘤大小及组织病理学变化。结果：原代肿瘤移植成功率为40%,传代肿瘤移植成功率为75%,原代移植肿瘤及传代移植肿瘤组织形态学特征均与患者原发肿瘤保持一致。结论：初步建立了一种有效的人大肠癌裸鼠皮下移植瘤模型,为大肠癌的研究奠定了基础。     

云芝提取物的抗肿瘤作用及其作用时相问题

肿瘤移植前10天开始给小鼠用药,分别于肿瘤移植后12天、22天处死小鼠,剥离肿瘤衡重。对皮下移植的小鼠腹水型肝癌,无论是陕西云芝提取物还是白山云芝发酵提取物都无明显的抑制作用;而对皮下移植的小鼠腹水型肉瘤180,在肿瘤移植后第12天(即用药后第22天)两种提取物均显示明显的抑瘤作用(抑瘤率分别为55.5%和69.7%)。可是,在肿瘤移植后第22天(即用药后第32天),两种提取物的抑瘤作用反倒大大减弱(抑瘤率分别为35.6%和-14%)。一般认为,云芝提取物不能直接杀伤瘤细胞,它是通过增强机体的非特异性免疫反应来发挥其抗瘤效果的。据此可以推测,当云芝提取物的抗肿瘤作用达到了顶峰时仍未死亡的瘤细胞是那些成功地逃脱了机体的免疫系统的攻击而幸存下来的瘤细胞。不难想像,这些瘤细胞之所以能够幸存下来,必然具有相应的抵抗或躲避免疫系统攻击的能力。因而,它们能“肆无忌惮”地以更快的速度增殖。     

β-葡糖醛酸酶在恒河猴组织中的分布

采用2周龄强制断奶和3周龄自然断奶的2组裸鼠用皮下塞入法将手术切除的人肿瘤组织（肿瘤表面组织和深部组织）作异体移植,并将已长成的人肿瘤的异体瘤切除以残瘤的形式继续在裸鼠皮下增殖,观察移植瘤在不同周龄的裸鼠以及肿瘤组织取材差异的成瘤影响和残瘤的生长特性。结果表明,2周龄裸鼠移植瘤的成瘤性较2周龄裸鼠为优,在相同移植天数,2周龄的成瘤期比3周龄的裸鼠提前了约4d, 成瘤率也提高了一倍以上（P＜0．01）,移植时取肿瘤表面组织比肿瘤深部组织的成瘤提高3倍以上（P＜0．005）,残瘤的传代率100％,且成瘤期只有8d,结果提示,使用2周龄的裸小鼠可提高移植瘤的成瘤率,如接种时选择肿瘤表面组织更可提高移植瘤的成瘤率,在移植瘤成瘤后用残瘤的方式传代时,可使成瘤期提前。     

恶性肿瘤的免疫疗法(各论)

主动免疫疗法一、卡介苗简史晚近,当人们发现机体接种瘤细胞后所出现的网状内皮系统的活跃,和接种卡介苗(BCG)后的反应极其相似时,很自然地就将卡介苗和肿瘤治疗问题联系起来了。随后又发现卡介苗还是良好的免疫刺激剂,能加速对组