茅苍术提取物含药血清对大鼠心肌细胞氧化损伤的保护作用

目的利用中药血清药物化学及血清药理学方法,探讨茅苍术保护心肌细胞氧化损伤的物质基础。方法测定和比较茅苍术提取物及其灌胃给药前后大鼠空白和含药血清中的入血成分,然后体外培养H9c2大鼠心肌细胞,建立H2O2氧化损伤模型,以细胞形态、LDH释放量、SOD活力、MDA水平及细胞相对凋亡情况为指标,考察茅苍术提取物及其含药血清对心肌细胞损伤的影响。结果茅苍术提取物在血清中出现11个移行成分,其中7个为原型成分,另外4个可能为代谢产物。H2O2损伤组与正常对照组相比,细胞皱缩并且变圆,数量明显减少,LDH释放量及MDA水平明显升高,SOD活性降低,细胞凋亡率增加;与H2O2损伤组相比,阳性Vc对照组、茅苍术提取物及其含药血清作用组的细胞数目增多,LDH释放量和MDA水平均有不同程度的降低,SOD活性升高,凋亡细胞数目减少。结论茅苍术提取物的11个入血成分可能为茅苍术保护心肌细胞氧化损伤的物质基础。     

基于“肠外翻-心肌细胞”联用模型的益气活血方药效学作用评价及机制探讨

该研究首先建立过氧化氢(H2O2)诱导大鼠胚胎心肌细胞株(H9c2)氧化损伤模型,并筛选出益气活血方肠吸收液体外心肌保护作用的浓度范围,优选出4个剂量进行实验;通过考察益气活血方肠吸收液对H9c2的保护作用,从而为临床防治与氧化应激损伤相关心脏疾病提供参考;并通过对H9c2心肌细胞活力、细胞形态、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)等指标进行考察,对益气活血方肠吸收液作用机制进行初步评价探讨。结果显示,益气活血方肠吸收液对H2O2诱导H9c2心肌细胞损伤具有较好的保护作用,且呈现出一定的浓度依赖性,可提高SOD的活性,减少MDA的释放,从而降低异常细胞的形成,增强心肌细胞抗氧化能力,提高细胞活力,具有一定的保护作用。     

麸炒前后茅苍术挥发油对缺氧/复氧损伤心肌细胞的抗氧化与抗凋亡作用

目的:考察茅苍术挥发油对缺氧/复氧(H/R)损伤H9c2心肌细胞的抗氧化与抗凋亡活性,并比较生品和麸炒品的作用差异。方法:以连二亚硫酸钠(Na_2S_2O_4)诱导H9c2缺氧/复氧损伤模型,噻唑蓝(MTT)法检测细胞活力,4′,6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)染色评估细胞凋亡,酶联免疫吸附测定(Elisa)法检测细胞培养液中超氧化物歧化酶(SOD)、乳酸脱氢酶(LDH)和丙二醛(MDA)的含量;实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测细胞中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3 (Caspase-3)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)和Bcl-2同源的水溶性相关蛋白(Bax)mRNA的表达;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞中裂解的Caspase-3(cleaved Caspase-3)、BAX、BCL-2的蛋白表达。结果:与正常对照组比较,模型对照组心肌细胞的存活率显著降低,SOD活力、Bcl-2 mRNA、蛋白表达明显降低,LDH、MDA含量、Caspase-3 mRNA、Bax mRNA、cleaved Caspase-3、BAX蛋白表达明显升高(P<0.05)。生品及麸炒茅苍术挥发油1μg/mL～100μg/mL能够提高H9c2心肌细胞的存活率;提高SOD的活力,降低LDH和MDA的含量;上调Bcl-2 mRNA和蛋白的表达,下调Caspase-3、Bax mRNA的表达;下调cleaved Caspase-3、BAX的蛋白表达,与同剂量的生品挥发油比较,麸炒品挥发油具有更好的作用。结论:茅苍术挥发油对H/R损伤心肌细胞具有抗氧化和抗凋亡的作用,麸炒品挥发油的作用优于生品挥发油。     

活血温通方对缺氧心肌细胞氧化应激和凋亡的影响

[目的]观察活血温通方对缺氧诱导H9c2心肌细胞损伤的保护作用。[方法]采用H9c2心肌细胞进行缺氧无血清刺激,同时加入活血温通方含药血清和空白血清处理4 h后,检测细胞活力、Caspase 3和Caspase 8活性、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、丙二醛(MDA)含量,并进行二氢乙啶(DHE)染色观察活性氧(ROS)变化,以及Hoechst染色观察细胞凋亡情况,对比分析各组之间差异。[结果]与对照组比较,缺氧组H9c2心肌细胞活力、SOD和CAT活性显著下降(P0.01),Caspase 3和Caspase 8活性、MDA含量明显升高(P0.01),同时累积的ROS含量和细胞凋亡数量增多(P0.01)。活血温通方含药血清能提升细胞活力、增加SOD、CAT活性(P0.01),明显降低MDA水平、Caspase 3和Caspase 8活性(P0.01),同时减少ROS累积,抑制心肌细胞凋亡(P0.01)。[结论]通过抑制细胞凋亡、减轻氧化应激,活血温通方一定程度上可以保护心肌细胞免受缺氧损伤。     

基于中药血清药物化学及血清药理学方法探讨荭草保护心肌细胞氧化损伤的物质基础

目的:应用中药血清药物化学及血清药理学方法探讨荭草保护H9c2心肌细胞氧化损伤的物质基础。方法:通过比较荭草提取液、给药后含药血清和空白血清的超高效液相色谱(UPLC)指纹图谱,寻找荭草的入血成分;建立体外培养的H9c2心肌细胞H2O2氧化损伤模型,以荭草含药血清对氧化损伤心肌细胞存活率、乳酸脱氢酶(LDH)漏出率、丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活力的影响为评价指标,并采用吖啶橙(AO)和溴化乙锭(EB)双荧光染色法观察荭草含药血清对H2O2氧化损伤的心肌细胞形态学的影响,研究荭草含药血清对氧化损伤心肌细胞的保护作用。结果:灌胃给予荭草提取液后,从大鼠血清中发现25个移行成分,其中有9个为荭草中的原型成分,16个可能为其在体内转化的代谢产物;与模型组相比,荭草含药血清各剂量组能明显降低氧化损伤心肌细胞LDH漏出率、MDA含量(P<0.05),显著升高T-SOD活性和细胞存活率(P<0.05或P<0.01),有效抑制细胞凋亡。结论:荭草含药血清中的移行成分及其代谢产物可能是荭草保护心肌细胞氧化损伤的物质基础。     

益气活血药水提物与水提醇沉物对H9c2心肌细胞缺氧损伤的药效比较研究

目的:研究益气活血药水提物与水提醇沉物对大鼠心肌细胞缺氧损伤的药效影响,并筛选出最佳的提取工艺。方法:建立体外心肌细胞缺氧模型,选取水提法及水提醇沉法制备的益气活血药进行干预,观察缺氧损伤后心肌细胞活力、细胞生存率、细胞形态学及上清中乳酸脱氢酶LDH释放量的变化情况,比较2种提取物的药效学差异。结果:益气活血药水提物与水提醇沉物均可一定程度上增加缺氧心肌细胞的活力,水提法益气活血药减轻LDH外漏优于水提醇沉法(P0.01)。结论:益气活血药对H9c2心肌细胞缺氧损伤具有保护作用,且同剂量下以水提物为佳。     

肉桂对慢性缺氧心肌细胞的保护作用研究

目的:研究肉桂通过调控低氧诱导因子1α(HIF-1α)表达,对慢性缺氧心肌细胞的保护作用。方法:将心肌细胞H9c2分为空白对照组、缺氧组、肉桂低剂量组、肉桂中剂量组、肉桂高剂量组。CCK-8法检测各组细胞增殖情况,TUNEL法检测各组细胞凋亡情况。应用试剂盒检测各组细胞超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量和硫代巴比妥酸反应产物(TBARS)水平; Western blot检测心肌肌钙蛋白T(cTnT)、肌酸激酶同工酶MB(CK-MB)、肌红蛋白(Myo)、HIF-1α和血管内皮因子(VEGF)表达。结果:缺氧处理后显著降低了心肌细胞H9c2增殖活力、SOD活性,且增加了细胞凋亡指数、MDA和TBARS含量(均P<0.05)。缺氧处理后显著降低了心肌细胞H9c2的cTnT、CK-MB、Myo、HIF-1α和VEGF表达量(均P<0.05)。各剂量肉桂组能够不同程度的逆转缺氧对心肌细胞H9c2上述指标的影响。结论:肉桂通过调控HIF-1α表达保护缺氧诱导的大鼠心肌细胞损伤。     

风轮菜总黄酮不同极性部位的抗氧化作用研究

目的：探讨风轮菜总黄酮的不同极性部位对缺氧/复氧诱导的H9c2心肌细胞损伤的保护作用。方法：建立缺氧/复氧H9c2心肌细胞损伤模型,对风轮菜总黄酮10%甲醇部位（2#）、20%甲醇部位（3#）、30%甲醇部位（5#）进行药物浓度筛选,采用MTT法测定细胞存活率。收集培养细胞及其上清液测定乳酸脱氢酶（LDH）、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）及过氧化氢酶（CAT）的活性和丙二醛（MDA）的含量。结果：与正常对照组比,模型组H9c2心肌细胞经过缺氧4h复氧24h造模后,细胞活力显著降低。与模型组比较,2#、3#、5#给药组显著增加H9c2心肌细胞活力。与正常对照组比较,模型组的SOD、GSH-Px及CAT的活性均显著降低,而LDH活性、MDA含量均升高,2#、3#、5#给药组可呈浓度依赖性显著增加SOD、GSH-Px及CAT活性,降低LDH活性及MDA含量。结论：2#、3#、5#对缺氧/复氧诱导的H9c2心肌细胞损伤具有保护作用,其与增强细胞清除氧自由基能力、降低脂质过氧化物的产生有关。     

红花水提物对乳鼠心肌细胞H_2O_2所致损伤的保护作用及ESR谱研究

目的:观察红花水提物对体外培养大鼠乳鼠心肌细胞H2O2损伤的保护作用及电子自旋共振(ESR)波谱的影响。方法:建立心肌细胞H2O2损伤模型,实验分5组,空白对照组,模型对照组:H2O2(1 mmol.L-1)孵育1 h;红花水提物500,100,20 mg.L-1剂量组:分别给予不同浓度的红花水提物,预处理24 h,然后换为H2O2(1 mmol.L-1)孵育1 h。实验结束后分别收集细胞上清液测定乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(NOS)和黄嘌呤氧化酶(XOD)活性,用自旋捕集技术结合电子自旋共振波谱技术(Electron Spin Res-onance,简称ESR)检测各组细胞悬液中氧自由基信号的强弱。结果:红花水提物各剂量组能够明显提高H2O2损伤后的心肌细胞的搏动频率,使细胞存活率提高,减少心肌细胞LDH的释放,降低培养液中MDA和XOD的含量,同时提高SOD,NO和GSH-Px的活性,使细胞悬液中的ESR氧自由基信号明显减弱。结论:红花水提物对体外培养乳鼠心肌细胞具有保护作用,其机制与其减少活性氧产生、增强氧自由基的清除、增强内源性抗氧化酶的活性有关。     

参芪益心干预阿霉素诱导的心肌细胞凋亡机制研究

目的 探讨参芪益心方干预阿霉素诱导的心肌细胞凋亡的机制.方法 用SD大鼠制备含药血清.用阿霉素诱导H9c2心肌细胞凋亡建立模型.将细胞设置为空白对照组、模型组、含药血清高剂量组(8％)、含药血清中剂量组(4％)、含药血清低剂量组(2％)和卡托普利组.含药血清提前预处理,阿霉素造模72h后进行试验检测,免疫组化检测Bax...     

八味沉香散对缺血再灌注损伤心肌细胞SOD、MDA和凋亡影响的研究

目的 观察八味沉香散对缺血再灌注损伤大鼠心肌细胞H9C2 SOD活力、MDA浓度以及细胞凋亡的影响.方法 H9C2细胞随机分为6组:正常组、缺血再灌注组(I/R组)、八味沉香散提取物(水提)高、中、低剂量组(240、120、60μg/mL)、曲美他嗪组(240μg/mL).以体外缺糖缺氧再复糖复氧建立缺血再灌注损伤模型...     

附子及附子、干姜配伍对H2O2导致心肌细胞损伤的抗氧化作用

目的 观察附子及附子、干姜配伍对H2O2诱导的乳鼠心肌细胞抗氧化作用.方法 取1～3 d乳鼠的心肌细胞,常规培养,观察心肌细胞形态学,以免疫组化进行心肌细胞纯度鉴定.实验分为对照组、模型组、附子水煎液组20 mg/mL,附子干姜水煎液组20 mg/mL,预处理2h后,用1 mmol/LH2O2氧化损伤2h,检测培养液中心肌细胞跳动频率,丙二醛（MDA）及超氧化物歧化酶（SOD）活性.结果 与模型组相比,用附子水煎液和附子干姜水煎液预处理后的心肌细胞跳动频率增加（P＜0.01）,附子干姜水煎液组SOD活性明显提高（P＜0.01）.结论 附子干姜水煎液对H2O2诱导的心肌细胞损伤具有一定的保护作用.     

白藜芦醇对过氧化氢损伤心肌细胞的保护作用及其机制研究

目的探讨白藜芦醇对H2O2所致心肌细胞损伤的保护作用。方法采用H2O2处理培养的乳鼠心肌细胞,造成氧化应激模型,应用MTT法观察白藜芦醇对心肌细胞活力的影响,SOD及MDA试剂盒检测细胞培养液中SOD与MDA含量,并通过流式细胞仪检测乳鼠心肌细胞的凋亡情况。结果①损伤模型组与空白对照组比较,心肌细胞活力明显降低,心肌细胞凋亡率明显增加,而MDA活性明显升高,SOD活性明显降低;②不同浓度白藜芦醇可显著性提高受损心肌细胞活力,减少心肌细胞的凋亡,同时可显著降低培养液中MDA活性,而升高SOD活性。结论白藜芦醇可减轻H2O2对心肌细胞的损伤程度,对心肌细胞具有保护作用,其机制可能与其抗心肌细胞氧化和抗凋亡有关。     

5种中药注射剂对多柔比星所致心肌H9c2损伤保护作用

目的:考察5种中药注射剂对多柔比星(DOX)作用下H9c2心肌细胞损伤的保护作用。方法:应用H9c2心肌细胞筛查体系,通过检测细胞存活率、过氧化物岐化酶(SOD)活性和氧化代谢产物(MDA)含量,考察参麦注射剂、丹参注射剂、冠心宁注射剂、香丹注射剂和黄芪注射剂等5种中药注射剂对暴露于1.7×10-4至2.2×10-9M浓度DOX下H9c2心肌细胞的存活率的影响。结果:黄芪注射剂和香丹注射剂能提高DOX作用下心肌细胞的存活率,有效地缓解DOX所引起的心肌细胞MDA浓度增高,提高SOD酶活性且不影响DOX的体外抗肿瘤活性。结论:黄芪注射剂和香丹注射剂能降低DOX对心肌细胞的毒性作用,可能是通过增加抗氧化物酶活力,减少氧化产物生成,从而减轻氧化应激损伤这些途径实现的。     

四君子汤(生晒参/红参)对H2O2诱导H9c2心肌细胞凋亡的保护作用研究

该研究首先筛选了四君子汤(红参)等药液组体外干预H9c2心肌细胞的给药浓度,优选其中高、中、低3个剂量组进行后续实验;建立了体外H₂O₂诱导H9c2心肌细胞凋亡模型以考察四君子汤(生晒参/红参)对其保护作用,从而为优选用于临床治疗缺血性心脏病的四君子汤中的人参炮制品提供参考,以更好地体现其疗效;并考察其对SOD,MAD和LDH等指标影响以初步阐明作用机制。结果表明,四君子汤中用红参较生晒参对H₂O₂诱导心肌细胞损伤保护作用为好,二者均可提高SOD活性,减少MDA产生和LDH释放,从而明显减少心肌细胞凋亡数量,起到一定的保护作用。     

重楼对小鼠急性肝损伤保护作用的研究

目的:探讨重楼醇提物和水提物对四氯化碳(CCl4)所致小鼠急性肝损伤的保护作用。方法:小鼠随机分为9组,分别每天给予不同剂量的药物:重楼醇提物高、中、低剂量组(3.9、2.6、1.3 g/kg)、水提组的高、中、低剂量组(7.2、4.8、2.4g/kg)和联苯双酯(0.15 g/kg),正常组和模型组给予生理盐水。7d后,除正常对照组外各组小鼠腹腔注射0.1%CCl4制备急性肝损伤模型,16h后取血检测血清ALT、AST活性;测定肝组织匀浆中MDA含量和SOD、GSH的活性及观察肝脏病理学变化。结果:醇提组高剂量(3.9g/kg)和水提物高、中、低剂量(7.2、4.8、2.4g/kg)组均能降低CCl4所致急性肝损伤小鼠血清ALT、AST活性(P<0.01,P<0.05),降低肝脏MDA的含量、增强SOD和GSH活力(P<0.01,P<0.05),并能明显改善肝组织的病理学损伤。结论:重楼水提物对CCl4所致小鼠急性肝损伤具有较好保护作用。     

灯盏乙素对过氧化氢致血管内皮细胞损伤的作用及其机制研究

目的：探讨灯盏乙素对过氧化氢（H2O2）损伤的血管内皮细胞的保护作用。方法：体外培养血管内皮细胞,将细胞分为6组,即正常对照组（control）,氧化损伤组（H2O2组）,氧化损伤加入维生素E对照组（VitE＋H2O2）,氧化损伤加入灯盏乙素组（scutellarin1＋H2O2,scutellarin2＋H2O2,scutellarin3＋H2O2）。用VitE及不同浓度灯盏乙素预先培养血管内皮细胞24 h,然后加入1 mmol.L-1 H2O2继续培养24 h,MTT法检测细胞存活率;检测SOD,GSH-PX,CAT活力。结果：不同浓度灯盏乙素呈能够降低H2O2对抗氧化酶SOD,GSH-PX,CAT活力的影响,各指标差异有显著性（P〈0.01）。结论：灯盏乙素可保护过氧化氢诱导的血管内皮细胞的损伤,其作用可能与抗氧化、增强抗氧化酶SOD、GSH-PX、CAT的活力有关。     

木豆叶提取物对H_2O_2诱导的H9c2细胞氧化损伤的保护作用及机制研究

目的研究木豆叶提取物(ECCL)对H2O2诱导的H9c2细胞氧化应激损伤的保护作用及其机制。方法建立H2O2诱导的H9c2细胞氧化损伤模型,于H2O2刺激前加入PI3K信号通路阻断剂LY294002(LY)预处理10 min,加入20、50μg/m L ECCL预处理24 h。MTT法检测细胞存活率,比色法测定上清液中乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)水平和超氧化物歧化酶(SOD)的活性,Western blotting检测细胞内p-Akt、p-e NOS蛋白表达。结果与模型组比较,ECCL可明显增加H9c2细胞H2O2损伤后细胞存活率(P0.01),增加SOD活力,降低MDA、LDH水平,增加p-Akt和p-e NOS蛋白表达(P0.05、0.01),LY可阻断ECCL对H9c2的上述作用。结论 ECCL能够减轻H2O2所致的H9c2细胞损伤,可能是通过激活PI3K通路促进其下游因子Akt和e NOS磷酸化发挥作用。     

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??OBJECTIVE To study the protective effects and mechanisms of aqueous extract from Descurainia sophia on doxorubicin(Dox)-induced cardiomyocyte injury.METHODS The Dox induced H9c2 cell apoptotic model was established, then the cells were divided into normal group (NC), model group (Dox), positive group (resveratrol,RSV), and different doses of aqueous extract of Descurainia sophia (DS). The viability of H9c2 cells was detected by MTT assay. The apoptosis rate, mitochondrial membrane potential and reactive oxygen species (ROS) level were detected by flow cytometry. The levels of T-SOD, LDH, MDA and GSH-PX were measured. And the protein expression levels of caspase-3, Bcl-2, Bax and p53 were detected by western blot, HPLC-MS identification of aqueous extract from Descurainia sophia.RESULTS After treating with DS products, the survival rate of H9c2 was increased (P<0.01), the apoptosis rate was significantly decreased (P<0.01),mitochondrial membrane potential was significantly increased (P<0.01), the level of ROS was significantly decreased (P<0.05), T-SOD and GSH-PX activities were significantly increased (P<0.01), the levels of LDH and MDA content were significantly decreased(P<0.01). Moreover, DS reduced the expression of caspase-3 (P<0.01), regulated the expression of Bax/Bcl-2 (P<0.01), decreased the expression of p53 (P<0.05). Seven components were identified from DS by HPLC/MS analysis.CONCLUSION DS can effectively protect cardiomyocyte, and its mechanism is probably associated with correcting functional disorders of oxidative stress of cardiomyocytes, and inhibit mitochondrial apoptotic pathway.