大肠杆菌O157：H7实验感染动物排菌动态检测

目的检验大肠杆菌O157：H7胶体金免疫层析检测试纸条在感染动物排菌中的应用效果。方法将牛和小鼠采用灌胃攻毒方式实验感染大肠杆菌O157：H7,用大肠杆菌O157：H7胶体金免疫层析检测试纸条与细菌鉴别培养基分别培养检测感染动物粪便中的O157：H7的排菌量和持续时间。结果牛在感染大肠杆菌O157：H7后的第2天开始从粪便排菌,第4～6天达到峰值,排菌时间可持续28 d;小鼠在感染O157：H7后的第4小时开始从粪便排菌,第6小时达到峰值,排菌时间可持续15 d。结论大肠杆菌O157：H7胶体金免疫层析检测试纸条与细菌鉴别培养基培养计数的检测结果一致,试纸条更简便、快捷、直观,在1～5 min内可得出检测结果。     

大肠杆菌O157∶H7实验感染动物排菌动态检测

目的 检验大肠杆菌O157∶H7胶体金免疫层析检测试纸条在感染动物排菌中的应用效果.方法 将牛和小鼠采用灌胃攻毒方式实验感染大肠杆菌O157∶H7,用大肠杆菌O157∶H7胶体金免疫层析检测试纸条与细菌鉴别培养基分别培养检测感染动物粪便中的O157∶H7的排菌量和持续时间.结果 牛在感染大肠杆菌O157∶H7后的第2天开始从粪便排菌,第4～6天达到峰值,排菌时间可持续28 d;小鼠在感染O157∶H7后的第4小时开始从粪便排菌,第6小时达到峰值,排菌时间可持续15 d.结论 大肠杆菌O157∶H7胶体金免疫层析检测试纸条与细菌鉴别培养基培养计数的检测结果一致,试纸条更简便、快捷、直观,在1 ～5 min内可得出检测结果.     

中国四地区凉拌菜中E.coli O157∶H7调查分析

目的通过对我国中南、华东、东北和西北各地区凉拌菜E.coli O157∶H7监测,了解我国凉拌菜E.coli O157∶H7的污染状况,为食源性疾病的控制提供良好的科学依据。方法采集各地区凉拌菜样本,经mEC肉汤、改良麦康凯肉汤增菌、mini-VIDAS免疫检测快速筛选和免疫磁珠富集后,接种改良山梨醇麦康凯琼脂和CHROmagar O157显色培养基分离,最后进行生化和血清学鉴定。结果在采集的1080份凉拌菜样本中检出3株E.coli O157∶H7阳性或疑似菌株。结论肉类和果蔬类凉拌菜均存在E.coli O157∶H7污染的潜在威胁;县乡级食品卫生监督工作亟需加强。     

肠出血性大肠杆菌O104:H4型感染研究进展

肠出血性大肠埃希菌感染(肠出血性大肠埃希菌肠炎)又名肠出血性大肠杆菌感染性腹泻或产志贺毒素大肠埃希菌性胃肠炎[1](以下称本病),系由肠出血性大肠杆菌(EHEC)引起的肠道传染病. 1历史 Riley等人首次从患者粪便中分离到O157:H7大肠杆菌,同时还从患者曾经就餐的汉堡包连锁店的冷冻的生牛肉馅中也分离到O157:H7大肠杆菌,从而确认O157:H7大肠杆菌是当时感染性腹泻暴发的原因,而O157:H7大肠杆菌也被称之为肠出血性大肠埃希杆菌.1999年我国部分地区发生了EHEC O157:H7感染性腹泻的暴发.EHEC可引起出血性肠炎和病死率较高的溶血性尿毒综合征(HUS)、血栓性血小板减少性紫癜(TTP)等并发症.     

2～5岁儿童种接大肠杆菌O157O特异性多糖结合疫苗的安全性和免疫原性

大肠杆菌O157：H7可引起严重肠炎和溶血性尿毒病，尤其对幼儿和老年人。与志贺菌的情况相似，血清抗大肠杆菌O特异性多糖IgG抗体能通过裂解肠道细菌而提高免疫力。成人Ⅰ期临床试验显示，大肠杆菌O157O特异性多糖与重组绿脓杆菌外毒素A结合制成的疫苗（O157-rEPA）安全且具有免疫原性。此项Ⅱ期临床试验旨在确认2～5岁儿童接种O157-rEPA的安全性和免疫原性。     

用多糖间接血凝试验检测肠出血性大肠杆菌O157抗体的初步研究

目的：探讨多糖间接血凝（IHA）检测感染肠出血性大肠杆菌（EHEL）O157：H7患血清中抗O157抗体的价值。方法：用酚－水法提取O157：H7脂多糖和醋酸水解法制备多糖抗原，致敏绵羊红细胞后以IHA检测各种肠道致病菌抗血清及健康人和非腹泻患血清的抗体反应。结果：制备的多糖抗原糖含量为33％，不含核酸，蛋白质＜0．3％，具有鲎试剂凝集活性。以O157多糖IHA检测O157单克隆抗体呈高效价凝集（1：1280），H7多克隆抗体呈低效价凝集（1：8），其它各种肠道致病菌抗血清的凝集效价均小于1：2，从30名健康人和30名非腹泻患儿的血清中未查出O157抗体；204名非腹泻成人患中，有1人的凝集效价为1：8，其余的均小于1：2，吸收抑制试验表明凝集反应为特异性。结论：以多糖IHA检测抗O157抗体可试用于人群O157：H7感染的抗O157抗体流行率调查及肾溶血性尿毒综合征的免疫诊断。     

大肠杆菌O157:H7感染的临床分析

1999年及2000年夏秋季江苏省苏北某地及其接壤地区出现感染性腹泻患者,且有肾功能衰竭（肾衰）发生,病死率高,经检验证实该组病例系由大肠埃希菌（Escherichia coli）O157：H7引起的出血性肠炎（HC）和溶血性尿毒综合征（HUS）。该菌又称肠出血性大肠埃希菌（EHEC）O157：H7,简称大肠杆菌O157：H7,我们就该病流行期间76例临床诊断患者的临床表现作一分析。     

产志贺毒素大肠埃希菌产超广谱β-内酰胺酶基因型的研究

目的 探讨产志贺毒索大肠埃希菌产超广谱β-内酰胺酶（extended spectrum β-lactamases，ESBLs）类型及耐药机制。方法采用纸片琼脂扩散法筛选36株产志贺毒素大肠埃希菌产ESBLs菌株，接合传递实验、质粒谱分析、PCR检测耐药基因和DNA序列分析产ESBLs菌株的表型和基因型。结果双纸片扩散法证明有2株产志贺毒素大肠埃希菌产ESBLs，美国株E．coli 5 nonO157：H7和中国株E．coli 27O157：H7对头孢他啶等第三、第四代头孢菌素和氨基糖苷类抗生素耐药。并能通过5．8kb的质粒传递给受体菌。PCR检测含有blaTEM基因。DNA同源分析表明861bp的blaTEM DNA片段与blaTEM-1 DNA片段同源。结论产志贺毒索大肠埃希菌美国株和中国株产生相同类型的ESBLs。表现出对第三、第四代β-内酰胺酶类抗生素耐药。     

吖啶橙对产肠毒素大肠杆菌中共存质粒的消除实验研究

近20年来,越来越多的肠道病原菌被发现携带质粒,而且其耐药性、致病力与特异性的质粒控制有关。因此,探寻阻止有害质粒DNA复制的特效药物,去除细菌体内的毒力质粒和R质粒,使产毒耐药菌变为无毒敏感菌,这在质粒流行病防制上具有重要意义。鉴于国内这方面的研究甚少。我们以吖啶橙(AO)为消除剂,选择4株耐药性产肠毒素大肠杆菌(ETEC)为供试菌,对其内共存的肠毒素质粒(Ent)和R质粒进行消除试验。其结果报道如下。     

肠出血性大肠杆菌O157：H7的快速可视化检测

目的应用环介导等温扩增（loop-mediated isothermal amplification,LAMP）技术和羟基萘酚蓝（Hydroxynaphthol blue,HNB）指示剂建立肠出血性大肠杆菌（EHEC）O157∶H7快速可视化检测方法。方法针对EHEC O157∶H7脂多糖编码基因rfbE保守区设计LAMP引物及环引物,反应体系加入染料HNB作为LAMP扩增的指示剂,结合LAMP浊度仪优化扩增条件,根据HNB的颜色变化进行结果判定,并评价检测方法的特异性和灵敏度。结果本方法最低检出限约为100拷贝/反应管,高于普通PCR;检测特异性高,仅EHEC O157∶H7反应管HNB颜色由紫罗兰变成天蓝色,而肠产毒性大肠杆菌（ETEC）、肠致病性大肠杆菌（EPEC）、肠侵袭性大肠杆菌（EIEC）、肠聚集性大肠杆菌（EAEC）、宋内志贺菌、福氏志贺菌均不发生变色反应;体系的扩增效率高于普通PCR,40 min内出结果。结论建立的基于颜色判定的EHEC O157∶H7 LAMP检测方法具有特异、灵敏、设备要求简单等特点,适用于EHEC O157∶H7现场快速检测。     

应用酶联免疫吸附实验检测肠出血性大肠杆菌O157∶H7

目的制备和纯化O157∶H7抗原,免疫家兔和豚鼠,获得高效价的抗O157∶H7免疫血清并进行纯化及酶标记。建立对O157∶H7感染患者快速诊断方法,做到早期发现及时治疗,有效控制疫情的蔓延。 方法ELISA双抗体夹心法检测O157∶H7抗原。步骤包被特异性抗体,加处理后的粪便等标本,然后加入抗O157∶H7酶结合物,最后加入底物显色。结果本课题所研制的抗O157∶H7酶结合物只对O157∶H7呈阳性反应,而与其他相关细菌无交叉反应。结论应用酶联免疫吸附试验（即双抗体夹心法）对肠出血大肠杆菌O157∶H7抗原的检测较常规法实验程序简捷、快速、敏感。临床和现场验证结果表明,其方法具有灵敏度高,特异性强操作简单等特点,为肠出血性大肠杆菌O157∶H7的鉴定及快速诊断提供了一种新的检测手段。     

细菌性痢疾杆菌种群分布特征及耐药分析

目的：了解本地区细菌性痢疾杆菌种群、血清型分布,并对菌株进行耐药分析,为细菌性痢疾的预防和临床治疗提供指导。方法对2008年5月～2012年12月期间我院感染病科300例确诊细菌性痢疾病例培养的菌株以及药敏试验结果进行回顾性分析。结果300例确诊病例中,男189例;女111例。检测出3个痢疾杆菌种群：福氏志贺菌（B群）290株,宋内氏志贺菌（C群）9株,痢疾志贺菌（ A群）1株,分别占96．68％、3．00％和0．33％。福氏志贺菌为优势菌株。检测出福氏痢疾杆菌6个血清型以及7个血清亚型。6个血清型主要为X型变种,其次为II型．其中137例患者进行了药物敏感试验,常见药物的耐药情况：氨苄青霉素耐药率100％,复方新诺明耐药率98．44％,诺氟沙星51．79％,主要敏感抗生素：头孢曲松钠95．59％,头孢哌酮钠89．71％。结论淮北地区3种痢疾杆菌株流行,以福氏痢疾杆菌为优势株,其中福氏痢疾杆菌血清型以X型为主,其次为II型。志贺氏菌对各种抗生素均有不同程度耐药,其中氨苄青霉素和复方新诺明最为严重,第三代头孢菌素敏感性较高。     

应用酶联免疫吸附实验检测肠出血性大肠杆菌O157:H7

目的:制备和纯化O157:H7抗原,免疫家兔和豚鼠,获得高效价的抗O157:H7免疫血清并进行纯化及酶标记.建立对O157:H7感染患者快速诊断方法,做到早期发现及时治疗,有效控制疫情的蔓延. 方法ELISA双抗体夹心法检测O157:H7抗原.步骤:包被特异性抗体,加处理后的粪便等标本,然后加入抗O157:H7酶结合物,最后加入底物显色.结果本课题所研制的抗O157:H7酶结合物只对O157:H7呈阳性反应,而与其他相关细菌无交叉反应.结论应用酶联免疫吸附试验(即双抗体夹心法)对肠出血大肠杆菌O157:H7抗原的检测较常规法实验程序简捷、快速、敏感.临床和现场验证结果表明,其方法具有灵敏度高,特异性强操作简单等特点,为肠出血性大肠杆菌O157:H7的鉴定及快速诊断提供了一种新的检测手段.     

将2a型福氏痢疾杆菌和群抗原基因导入口服伤寒杆菌菌苗株Ty21a

鉴于伤寒杆菌Ty21a菌苗株可作为宋内痢疾杆菌Ⅰ相抗原决定簇的载体,又因引起痢疾的菌型多为福氏2a型(F_2a型),故作者试图研制一种携带痢疾杆菌F_2a O抗原的伤寒杆菌Ty21a口服菌苗,以防御该型菌引起的痢疾。本文报道了Ty21a-F_2a杂交株的构建及其初步检定结果。作者首先构建编码F_2a型痢疾杆菌和群抗原的基因,然后将该质粒转移到缺乏半乳糖表异构酶的伤寒杆菌Ty21a株内。携带这种重组质粒的伤寒杆菌Ty21a株经免疫学和生物化学分析,表明可表达F_2a型痢疾杆菌和群抗原。用这个菌株免疫小鼠,小鼠能防     

对一株耐头孢哌酮的大肠杆菌质粒的研究

从一严重感染、经多种抗生素治疗无效而死亡病人的肺部分离到一株多重耐药物性的大肠杆菌。这株菌对头孢哌酮及其它几种抗生素高度耐药。通过对此菌进行染色体原位电泳、转化实验、限制性内切酶谱分析及ＭＩＣ值的测定．从此菌中分离出四个具有不同分子量及耐药性的质粒。其中三个质粒都对头孢哌酮表现高水平的耐药性；三个质粒对β－内酰胺类抗生素与β－内酰胺酶抑制剂的复合制剂也耐药。提示：此大肠杆菌对多种抗生素的耐药性是由质粒介导的。对其中二个质粒构建了其ＤＮＡ物理图谱。     

痢疾杆菌耐药性质粒的转移与扩散的研究

为探讨痢疾杆菌耐药性的转移及扩散方式,作者在检测痢疾杆菌的耐药状况及质粒携带情况的基础上,进行了耐药质粒的接合传递和质粒ＤＮＡ的转化试验。结果９０．２４％的痢疾杆菌具有多重耐药性,８３．５４％携带有质粒ＤＮＡ条带。弗氏志贺氏菌的接合传递阳性率为６０．７８％,索氏志贺氏菌为１６．７％,弗氏志贺氏菌的Ｒ质粒传递能力强干索氏志贺氏菌,接合传递过程中存在耐药标记的分离现象;质粒ＤＮＡ转化率为２７．５％,弗     

儿科危重急症急救讲座 第二十四讲 重型感染性腹泻病（下）——沙门菌感染与中毒型痢疾

出血性大肠杆菌肠炎1982年在美国俄勒冈州和密歇根州发生因食汉堡包引起的食物中毒事件中,肠出血性大肠杆菌（E H E C）被明确为致病菌。E H E C能引起人的血性腹泻者目前公认有O157∶H7、O26∶H11和O111三个血清型,而O157∶H 7占绝大部分。本讲以O 1 5 7∶H 7肠炎为代表讲述。     

湛江地区淋球菌质粒谱与耐药性关系的研究

为了解湛江地区淋球菌流行株质粒谱,并探讨其与耐药性的关系。对广东省湛江地区1998－1999年分离鉴定出的98株淋球菌流行株,应用碱裂解和溶菌酶双重处理,进行质粒抽的及质粒谱分型研究。利用K－B法测定淋球菌流行株对10种抗生素的敏感性,结果检出4种不同分子量的质粒,其中分子量为4．2kb和7．4kb的质粒检出率较高,分别为67．32％和59．16％,质粒谱型共12种,以7．4kb 4.2kb,39.5kb 7.4kb 4.2kb.39.5kb 4.2kb三种类型为主,分别占21．42％,17．34％和15．30％,耐药谱型42型,以CPLXR,TCR＋CPLXR,CPLXR＋CRR菌株为主,分别占12．24％,12．24％和7．14％,将三型主要的耐药谱与相应的质粒谱进行比较,结果CPLXR菌株39．5kb 4.2kb质粒谱为主,TCR＋CPLXR菌株以7．4kb 4.2kb质粒谱为主,CPLXR＋CRP菌株以7．4kb和39．5kb 7.4kb 4.2kb质粒谱为主,从而提示湛江地区淋球菌流行株的质粒谱与其相应的耐药谱之间有一定的关系。     

从两株大肠杆菌分离的不耐热肠毒素的免疫和理化特性

本文比较了从两株大肠杆菌(人型 H10407株和猪型711株)提纯的肠毒素(LT)的亚单位结构和免疫学的相互关系,作者还进行了 LT 质粒的株间转移试验;即将H10407株的 LT 质粒转移到711株上,从而使一个菌株能同时表达两种质粒的特性。     

志贺菌减毒疫苗株表达的4型产肠毒素性大肠杆菌菌毛和不耐热肠毒素突变体诱导的免疫应答

志贺菌和产肠毒素性大肠杆菌 ( ETEC)是引起245 7T株的gua BA突变株 )为载体株 ,以 p GA2质粒为 ETEC基因的表达载体。将编码 4型不同 ETEC菌毛 ( CFA/ 、CS2、CS3、CS4)和脱毒的人 ETEC不耐热肠毒素 ( LT)变体 ( LTh)的突变体 ( LTh K63)的操纵子分别克隆到 p GA2质粒中 ,再将每个质粒分别电穿孔到 2 a型福氏志贺菌疫苗株 CVD1 2 0 4中 ,构建表达 CFA/ 、 CS2、 CS3、 CS4菌毛和LTh K63抗原的 CVD1 2 0 4株。　　菌株培养过夜后制成 1 0 9CFU/1 0 0 μl的菌液。将豚鼠分为 7组 ( A～G) ,鼻内接种 ,每鼠 1 0 0 μl…