牙龈卟啉单胞菌感染血管平滑肌细胞的超微结构观察

目的:观察牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,Pg)对大鼠胸大动脉平滑肌细胞黏附及入侵情况,探讨Pg对血管平滑肌细胞的损伤途径,为牙周病在动脉粥样硬化发病机制中的研究提供依据.方法:用感染复数(multiplicity of infection,MOD为100∶1 Pg感染大鼠胸大动脉平滑肌细胞,分别于8、16 h TEM观察Pg对血管平滑肌细胞的黏附和入侵能力.结果:Pg感染大鼠胸大动脉平滑肌细胞16h时,Pg能利用表面菌毛黏附于血管平滑肌细胞表面并入侵胞质内.结论:Pg能够黏附于大鼠胸大动脉平滑肌细胞,并入侵细胞质,定植于细胞内.     

EB病毒和牙龈卟啉单胞菌协同感染与妊娠期慢性牙周炎的相关性研究

目的：研究妊娠期女性EB病毒（Epstein?Barr virus,EBV）和牙龈卟啉单胞菌（Porphyromonas gingivalis, Pg）的协同感染情况和牙周炎严重程度的关系。方法收集36例患慢性牙周炎（妊娠期慢性牙周炎组）的妊娠期女性和36例牙周健康（妊娠期牙周健康组）的妊娠期女性唾液样本,应用巢式PCR技术检测EBV感染率,应用16S rRNA为基础的PCR技术检测Pg感染率,结合口腔临床检查收集的牙周临床指标,对EBV和Pg的协同感染与牙周炎严重程度的相关性加以分析。结果妊娠期慢性牙周炎组和妊娠期牙周健康组EBV、Pg感染率的检出率差异无统计学意义（P＞0.05）,2组EBV和Pg协同感染的检出率差异具有统计学意义（χ2=4.800,P=0.028）。EBV和Pg协同感染与探诊出血指数相关（t=3.058,P=0.003）,与牙周袋深度和附着丧失无关（P＞0.05）。结论 EBV和Pg协同感染与妊娠期慢性牙周炎的相关性仍需进一步研究。     

牙龈卟啉单胞菌感染对血管内皮细胞与单核细胞黏附的影响

目的：研究Pg感染对人脐静脉内皮细胞（HUVEC）与单核细胞黏附的影响。方法：建立Pg感染HUVEC细胞株EA．hy926的体外模型,虎红染色法观察Pg381和Pg33277菌株感染HUVEC 6 h和24 h后,HUVEC与人单核细胞株THP-1细胞黏附量的变化。结果：培养6 h时Pg381感染组的THP-1细胞黏附量相对值为0．210±0．025,高于Pg33277感染组（0．078±0．024,P＜0．05）和空白对照组（0．062±0．022,P＜0．05）,Pg33277感染组和空白对照组无差异。24 h时3组间无差异（P＞0．05）。结论：Pg381感染HUVEC后能显著促进其与单核细胞的黏附。     

2种益生菌对口臭致病菌抑菌作用的体外研究

摘要 目的 研究体外共培养时,保加利亚乳杆菌（actobacillus delbrueckii subsp. Bulgaricus,Lb)和唾液链球菌（Streptococcus salivarius,Ss）对代表性口臭致病菌牙龈卟啉单胞菌(P.gingivalis,Pg）、具核梭杆菌（F.nuclearum,Fn)的抑菌作用。方法:将Lb、Ss分别与Fn、Pg各1 ml 混合,厌氧培养6h、12 h、24 h 和48 h。记数不同时间点各菌的菌落形成单位( CFU )。益生菌与致病菌采用不同接种顺序进行竞争排斥实验。结果 各时间点与Lb、Ss混合培养的Fn、Pg 菌量均较单菌培养显著降低( P<0.05或P<0. 01)。竞争排斥实验结果与益生菌及致病菌接种顺序相关,Lb、Ss作为早期定植菌及与Pg同时接种时,对Pg生长有抑制作用。结论 Lb、Ss对Fn和Pg 生长有显著拮抗作用,同时两种益生菌的代谢产物中存在有效的抑菌物质,对Pg生长有显著拮抗作用,提示益生菌有望应用于今后的口臭临床治疗。     

青春期龈炎龈下菌斑中牙龈卟啉单胞菌的检测

目的:检测青春期龈炎患者龈下菌斑中牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,Pg)的存在情况,探讨青春期Pg与牙龈健康状况的关系。方法:14～17岁青春期龈炎患者及牙龈健康者各36例,采用16SrRNA聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)检测2组受检者的龈下菌斑样本中Pg的存在,并用电泳凝胶成像分析软件检测各电泳条带的平均灰度值,计算Pg的相对含量;同时检测并记录受检者的各牙周指数测值,观察其与Pg相对含量的相关性。数据用SPSS11.5软件包作统计学分析。2组Pg阳性检出率的比较采用χ2检验;Pg的相对含量以及Pg阳性检出者与阴性检出者的牙龈炎严重度的比较采用Wilcoxon秩和检验;Pg的相对含量与各牙周指数之间的相关关系采用Spearman相关分析。结果:青春期龈炎组与牙龈健康组的龈下菌斑中Pg的阳性检出率分别为47.22%和25.00%,两者之间具有显著性差异(P<0.05);青春期龈炎组与牙龈健康组的Pg在龈下菌斑中的平均相对含量分别为48.02%和21.46%,统计学上有高度显著性差异(P<0.01);在青春期龈炎组Pg阳性个体中,Pg的相对含量与牙龈指数(gingivalindex,GI)、龈沟出血指数(sulcusbleedingindex,SBI)、探诊深度(probedepth,PD)数值的高低呈正相关;青春期龈炎组中,Pg阳性检出者的GI、SBI数值高于阴性检出者,两者之间具有高度显著性差异(P<0.01)。结论:青春期个体的龈下菌斑中有Pg的定植,且与牙龈健康状况有密切关系。     

17-β雌二醇对牙龈卟啉单胞菌作用下人牙周膜细胞表达白细胞介素6、8的影响

目的 观察17-β雌二醇(estradiol,E2)对牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,Pg) W83作用下人牙周膜细胞(human periodontal ligament cells,hPDLC)白细胞介素(interleukin,IL)6和IL-8表达的影响.方法 原代培养hPDLC,传至第4代,分别以①10-10 mol/L E2(E21组);②10-7 mol/L E2(E22组);③感染复数为10∶1的Pg( Pg1组);③感染复数为100∶1的Pg(Pg2组);⑤感染复数为100∶1的Pg+ 10-10 mol/L E2(Pg2 +E21组);⑥感染复数为100∶1的Pg+10-7 mol/LE2(Pg2+ E22组)处理hPDLC 12和24h;以0.1％无水乙醇为对照组,酶联免疫吸附测定法榆测细胞IL-6和IL-8蛋白的表达水平,实时荧光定量反转录聚合酶链法检测24 h mRNA水平.采用单因素方差分析比较各组IL-6、IL-8蛋白和mRNA表达水平的组间差异,最小显著性差异事后比较检验进行组间差异的两两比较,采用独立样本t检验分析各组12和24 h IL-6、IL-8表达水平的差异,检验水准为双侧α=0.05.结果 Pg2组24h时IL-6蛋白表达水平[(2482.88±26.53) ng/L]显著高于Pg1组[(734.09±87.90)ng/L]、对照组[(425.8±77.25) ng/L]和12 h时的Pg2组[(1157.50±234.65) ng/L,P=0.000];Pg2组24 h时IL-8蛋白表达水平[(4965.81±1072.55) ng/L]显著高于Pg1组[(803.51 ±162.08) ng/L,P=0.007]、对照组[(400.75±2.27) ng/L,p=0.005]和12h时的Pg2组[(1431.12 ±82.78)ng/L,P=0.001].E2对hPDLC IL-6和IL-8的表达无显著调节作用.与感染复数100∶1的Pg单独作用相比,E2和Pg联合处理24 h显著促进了hPDLC IL-6的表达水平,而未影响IL-8的表达水平:Pg2 +E21组、Pg2+ E22组IL-6 mRNA相对于磷酸甘油醛脱氢酶的表达水平(分别为0.49±0.15、0.53±0.16)显著高于Pg2组(0.19±0.06) (P =0.021,P=0.036),两组IL-6蛋白水平[分别为(5512.66±1022.07)、(6988.78±2279.13) ng/L]亦显著高于Pg2组[(3138.46±183.72) ng/L](P=0.012,P=0.000).结论 PgW83促进hPDLC IL-6和IL-8的表达呈剂量和时间依赖性;无牙周致病菌感染时E2对hPDLC IL-6和IL-8的表达无显著调节作用;而在牙周感染Pg时E2可能与Pg协同直接促进hPDLC产生IL-6,从而可能促进了牙周炎症过程.     

不同fimA基因型牙龈卟啉单胞菌黏附和侵入口腔上皮细胞能力的比较

目的 通过比较临床分离的不同fimA型牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,Pg)菌株黏附和侵入KB细胞的能力,探讨不同fimA基因型Pg菌株之间致病力差异的原因.方法 应用培养法和抗生素保护法测定不同fimA型Pg菌株黏附和侵入KB细胞的能力,扫描电镜观察不同fimA型Pg对KB细胞的黏附情况.结果 所有菌株均可黏附和侵入KB细胞,黏附率为0.523%～37.125%,侵入率为0.017%～3.750%;各fimA型Pg菌株之间黏附和侵入KB细胞的能力差异无统计学意义(P>0.05);各株Pg之间、4株Ⅱ型菌株之间、5株Ⅳ型菌株之间,黏附和侵入KB细胞的能力差异有统计学意义(P<0.01).结论 Pg的fimA型与其对KB细胞的黏附和侵入能力无相关性,提示可能存在其他影响不同fimA型Pg致病力差异的因子.     

不同fimA基因型牙龈卟啉单胞菌黏附和侵入口腔上皮细胞能力的比较

目的 通过比较临床分离的不同fimA型牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,Pg)菌株黏附和侵入KB细胞的能力,探讨不同fimA基因型Pg菌株之间致病力差异的原因.方法 应用培养法和抗生素保护法测定不同fimA型Pg菌株黏附和侵入KB细胞的能力,扫描电镜观察不同fimA型Pg对KB细胞的黏附情况.结果 所有菌株均可黏附和侵入KB细胞,黏附率为0.523%～37.125%,侵入率为0.017%～3.750%;各fimA型Pg菌株之间黏附和侵入KB细胞的能力差异无统计学意义(P>0.05);各株Pg之间、4株Ⅱ型菌株之间、5株Ⅳ型菌株之间,黏附和侵入KB细胞的能力差异有统计学意义(P<0.01).结论 Pg的fimA型与其对KB细胞的黏附和侵入能力无相关性,提示可能存在其他影响不同fimA型Pg致病力差异的因子.     

免疫低下豚鼠伴放线放线杆菌和牙龈卟啉单胞菌感染特征

目的　研究免疫低下对青少年牙周炎(JP)特异性病原菌感染的影响。方法　二次60Co全身照射制备免疫低下豚鼠及正常豚鼠各36只,随机分组,下前牙龈沟接种伴放线放线杆菌(Aa)和/或牙龈卟啉单胞菌(Pg),于2、3、 6周分批处死,进行组织病理学及破骨细胞计数对比研究。结果　免疫低下Aa、Pg、Aa+Pg组2、3周时牙周破坏明显,重于免疫正常组,破骨细胞计数高于免疫正常组,有统计学差异(P<0·05)。结论　免疫低下加重Aa、Pg对牙周组织破坏,机体免疫状态是JP发生发展的重要环节。     

牙周炎患者基础治疗后牙龈卟啉单胞菌的定植研究

目的 通过对牙周炎患者龈下菌斑中牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalu,Pg)的检测,探讨慢性牙周炎(chronic periodontitis,CP)和侵袭性牙周炎(aggressive periodontitis,AgP)患者牙周基础治疗后Pg的定植规律.方法 选取90例CP患者和90例AgP患者,在牙周基础治疗前、治疗后6周、12周共采集龈下菌斑样本1620个,运用AmpliFluor终末点定量聚合酶链反应方法 检测Pg含量.结果 治疗后6周CP和AgP组Pg活动位点分别为61(22.6%)和66(24.4%)个,两者差异无统计学意义(P>0.05);治疗后6周Pg活动位点在治疗前检测的牙周临床指数高于Pg静止位点.治疗后12周两组Pg活动位点分别为96(35.6%)和18(6.7%)个,差异有统计学意义(P<0.05);治疗后12周Pg活动位点在治疗后6周时检测的牙周临床指数高于Pg静止位点.结论 在牙周基础治疗后6周时,CP和AgP患者Pg定植均已开始,仉是两组定植规律存在一定差异.在牙周基础治疗后,治疗前牙周组织炎性反应严重的龈下位点Pg易于定植.     

不同fimA基因型牙龈卟啉单胞菌黏附和侵入口腔上皮细胞能力的比较

目的 通过比较临床分离的不同fimA型牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,Pg)菌株黏附和侵入KB细胞的能力,探讨不同fimA基因型Pg菌株之间致病力差异的原因.方法 应用培养法和抗生素保护法测定不同fimA型Pg菌株黏附和侵入KB细胞的能力,扫描电镜观察不同fimA型Pg对KB细胞的黏附情况.结果 所有菌株均可黏附和侵入KB细胞,黏附率为0.523%～37.125%,侵入率为0.017%～3.750%;各fimA型Pg菌株之间黏附和侵入KB细胞的能力差异无统计学意义(P>0.05);各株Pg之间、4株Ⅱ型菌株之间、5株Ⅳ型菌株之间,黏附和侵入KB细胞的能力差异有统计学意义(P<0.01).结论 Pg的fimA型与其对KB细胞的黏附和侵入能力无相关性,提示可能存在其他影响不同fimA型Pg致病力差异的因子.     

红色复合体与逆行性牙髓炎的相关性研究

目的：研究牙龈卟啉单胞菌（Porphyromonas gingivalis,Pg）、福赛坦氏菌（Tannerella forsythus,Tf）和齿垢密螺旋体（Treponema denticola,Td）与逆行性牙髓炎的相关性。方法：采集逆行性牙髓炎患牙的牙髓组织（40例）,应用SYBR Green实时荧光定量聚合酶链反应法定量监测患牙牙髓组织中Pg、Tf、Td三种微生物以及总的细菌量。结果：逆行性牙髓炎患牙牙髓组织中Pg、Tf和Td的检出率分别为22.5%、82.5%和47.5%,三种微生物之间具有协同致病效应,OR值及95%可信区间为2.83（1.26～6.38）。结论：红色复合体（Pg、Tf、Td）与逆行性牙髓炎牙髓组织的感染密切相关。     

F.nucleatum和P.gingivalis对种植体周龈沟液sICAM-1表达的影响

目的 :研究种植体周围龈沟中F .nucleatum (Fn)和P .gingivalis(Pg)对其龈沟液 (PISF)可溶性细胞间黏附分子 -1(sICAM -1)表达的影响。方法 :用PCR法检测种植体周龈沟中的细菌标本 ,根据Fn和Pg检出情况将 3 2名患者的 5 1枚钛种植体分为 3组 ,考察mPLI和PD ,用 periopaper滤纸条收集PISF ,用ELISA方法检测sICAM -1。结果 :检出Pg和 (或 )Fn组与未检出Pg和Fn组之间的PD值有统计学差异 (P <0 .0 5 ) ,单独检出Fn组的sICAM -1与未检出和同时检出Pg及Fn组之间有统计学差异 (P <0 .0 1)。 结论 :细菌是调节PISF中sICAM -1表达水平的重要因素 ,Fn可能是上升调节的作用 ,Pg是一种下降调节的作用     

牙龈卟啉菌和牙垢密螺旋体在不同深度牙周袋内的分布

目的:建立检测牙龈卟啉菌(Porphyromonas gingivalis,Pg)和牙垢密螺旋体(Treponema denti-cola,Td)的实时荧光定量PCR方法,探讨Pg和Td的定植量与牙周状况的关系.方法:建立SYBRGreenⅠ荧光实时定量PCR法检测Pg和Td细菌数量的方法.采集43例慢性牙周炎患者的龈下菌斑并检测Pg和Td的检出率和细菌量,同时记录取样位点的牙周探诊深度.结果:在102～107范围内细菌数与Ct值有良好的线性关系,最低检测到Pg和Td的DNA模板为100拷贝.Pg和Td在慢性牙周炎患者中的阳性检出率、共同检出率和两种细菌数量均随着牙周探诊深度的增加而升高,多组探诊深度间有统计学差异.结论:慢性牙周炎的牙周状况与Pg和Td的细菌数量密切相关.     

侵袭性牙周炎患者血清抗牙龈卟啉菌表面抗原抗体滴度和亲和力的研究

临床上通过检测抗牙龈卟啉菌(Porphyromonas gingivalis,Pg)表面抗原脂多糖(lispopolysaccharide，LPS)的血清抗体滴度和亲和力来评估体液免疫反应在侵袭性牙周炎(aggressive periodontilis，AgP)中抵御Pg的作用。研究表明，在评估体液免疫反应在抵御牙周致病菌的作用时，抗体滴度更有价值。然而，抗体水平和亲和力之间的关系目前尚存有争议。此研究旨在探讨AgP患者血清中抗Pg表面抗原的IgG抗体的滴度和抗体亲和力之间的关系。     

慢性牙周炎唾液牙龈卟啉单胞菌的定量PCR检测

目的:定量检测慢性牙周炎患者、牙周健康人群唾液中牙龈卟啉单胞菌的含量,比较其在各组人群分布的差异。方法:应用SYBR Green模式的实时荧光定量PCR技术,针对Pg特异基因Arg-gingipain设计引物,检测20例慢性牙周炎和20例牙周健康者唾液内Pg的含量,t检验分析比较在各组人群中Pg定植的差异。结果:慢性牙周炎患者唾液中,Pg的检出数目为(1.78×10³~1.99×10⁵),检出率为85%;牙周健康者唾液中,Pg的检出数目为(2.19×10³~2.30×10³),检出率为10%。Pg在慢性牙周炎和牙周健康者唾液中检出数目和检出率的差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:慢性牙周炎唾液中,牙龈卟啉单胞菌较正常人群明显升高,在今后的研究及防治中,不仅要观察龈沟液中的牙龈卟啉单胞菌,也应注意其在唾液中含量的变化。     

唾液乳酸杆菌w22a和种植体周围炎致病菌体外作用的初步研究

目的:研究唾液乳酸杆菌w22a的潜在益生性和与种植体周围炎致病菌:牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,Pg)、中间普氏菌(Pevotellaintermedia,Pi)、具核梭酸杆菌(Fusobacteriumncleatum,Fn)的体外作用,为乳酸杆菌w22a作为益生菌应用于种植体周围炎的防治提供实验依据。方法::通过检测w22a代谢产物成分、w22a对抑菌物质的耐受性等,初步探讨其口腔益生特性;并通过自聚和共聚实验、抑菌实验研究唾液乳酸杆菌w22a和种植体周围炎致病菌Pg、Pi、Fn的体外作用。结果:发现唾液乳酸杆菌w22a可产生有机酸、过氧化氢等抑菌物质,并能产生胞外多糖;w22a能够耐受一定浓度的抗生素和溶菌酶;w22a在体外有自聚集和与Pg、Pi、Fn发生共聚集的能力;其代谢产物对于Pg、Pi、Fn的生长具有不同程度的抑制作用。结论:唾液乳酸杆菌w22a能够对Pg、Pi、Fn产生生长抑制作用,具有口腔益生性,有望作为益生菌用于种植体周围炎的防治。     

不同fimA基因型牙龈卟啉单胞菌对人脐静脉内皮细胞产生血管细胞黏附分子1和细胞间黏附分子1的影响

目的 观察不同fimA基因型牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,Pg)对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVEC)产生血管细胞黏附分子1(vascular cell adhesion molecule-1,VCAM-1)和细胞间黏附分子1(intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1)的影响,探讨Pg在动脉粥样硬化发生、发展中的可能作用.方法 实验分别以PgATCC33277 (Ⅰ fimA ) 、WCSP115 (Ⅱ fimA)、W83 (Ⅳ fimA)和大肠杆菌脂多糖刺激HUVEC作为T1、T2、T3组(3个实验组)和阳性对照组,未受刺激的HUVEC作为阴性对照组;标准条件下厌氧培养上述3型Pg,将其以及大肠杆菌脂多糖分别与 HUVEC共同孵育2、6、24 h,采用流式细胞术检测HUVEC表面ICAM-1和VCAM-1的蛋白表达量,并通过激光共聚焦显微镜观察ICAM-1和VCAM-1的表达分布情况.结果 Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ fimA型Pg刺激HUVEC后,细胞表面ICAM-1表达均增强(P<0.05),2、6、24 h表达量分别为Ⅰ fimA:60.27±5.43、80.81±1.44、85.94±2.56;Ⅱ fimA:86.69±8.81、90.19±0.00、96.18±0.48,Ⅳ fimA:59.66±0.40、85.79±4.86、96.04±2.07.除2 h时ⅠfimA与Ⅳ fimA型Pg刺激的HUVEC表面ICAM-1表达量差异无统计学意义外,其他各时间点Ⅱ、Ⅳ fimA型Pg的刺激作用均强于Ⅰ fimA型Pg(P<0.05).本研究条件下,Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ fimA型Pg刺激HUVEC后2、6、24 h表达VCAM-1的水平均较低,各实验组与对照组间相比差异均无统计学意义(P>0.05).激光共聚焦显微镜观察显示,Pg刺激下HUVEC表达ICAM-1和VCAM-1增加,在Ⅱ、Ⅳ fimA型Pg刺激下,HUVEC中ICAM-1和VCAM-1荧光点相对较多且分布范围广.结论 牙周主要致病菌Pg毒力和致病性与其fimA基因型相关,Ⅱ fimA和Ⅳ fimA型Pg 有较强的上调HUVEC表达细胞黏附分子的能力,可能导致血管内皮功能紊乱.

Abstract：

Objective To investigate the effect of Porphyromonas gingivalis(Pg) with different fimA genotypes on vascular cell adhesion molecule-1(VCAM-1) and intercellular adhesion molecule-1(ICAM-1) production by human umbilical vein endothelial cells(HUVEC). Methods In the present study, PgATCC33277(type Ⅰ fimA genotype), WCSP 115(type Ⅱ fimA genotype), W83(type Ⅳ fimA genotype), and Escherichia coli-lipopolysaccharide (Ec-LPS) were designed as experimental group 1, 2, 3, and positive control group, respectively, to stimulate HUVEC, and the un-stimulated HUVEC were analyzed as negative control group. The three strains of Pg were cultured anaerobically in standard condition, and then the Pg cells and Ec-LPS were co-cultured with HUVEC for 2, 6, and 24 h, respectively. The amount of ICAM-1 and VCAM-1 produced by HUVEC was detected with flow cytometry(FCM). The expression of ICAM-1 and VCAM-1 by HUVEC were assayed with confocal laser scanning microscope(CLSM). ResultsThe expression of ICAM-1 on the surface of HUVEC were intensified after infected by Pg with Ⅰ, Ⅱ, and Ⅳ fimA genotypes (P<0.05). The amounts of ICAM-1 were 60.27±5.43, 80.81±1.44, and 85.94±2.56 for Pg with type Ⅰ fimA genotype, 86.69±8.81, 90.19±0.00, and 96.18±0.48 for Pg with type Ⅱ fimA genotype, 59.66±0.40, 85.79±4.86, and 96.04±2.07 for Pg with type Ⅳ fimA genotype at 2, 6 and 24 h after infection, respectively. The up-regulation effects caused by Pg with type Ⅱ and Ⅳ fimA genotypes were stronger than those caused by Pg with type Ⅰ fimA genotype at different time points except at 2 h(P<0.05). Under the present experimental condition, infected by Pg with type Ⅰ, Ⅱ and Ⅳ fimA genotypes stimulated low expression of VCAM-1 by HUVEC, it showed no significant differences among all the groups (P>0.05). Expression of ICAM-1 and VCAM-1 in Pg infected HUVEC were confirmed by CLSM. Infection of HUVEC with Pg resulted in more fluorescence staining of ICAM-1 and VCAM-1 compared with that in uninfected HUVEC cultures. Conclusions The virulence and pathogenicity of Pg is associated with its fimA genotypes, Pg with type Ⅱ and Ⅳ fimA genes possess stronger ability to stimulate HUVEC to up-regulate the expression of cell adhesion molecules, which may lead to disorders in vascular endothelial function.     

牙龈卟啉单胞菌入侵血管内皮细胞的实验研究

目的:体外观察牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,Pg)对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)增殖的影响,观察Pg对HUVEC的入侵能力,从而探讨Pg对内皮细胞功能损伤的途径,以期为牙周病在动脉粥样硬化(Atherosclerosis,As)发病机制中的作用提供依据。方法:用感染复数(multiplicity of infection,MOI)1:10,1:100PgATCC33277分别干预HUVEC 4h、8h、12h、24h,未受Pg ATCC33277干预的HUVEC作为阴性对照组,倒置显微镜下观察HUVEC形态,CCK-8法测定HUVEC细胞的增殖情况,透射电镜下观察Pg ATCC33277对HUVEC的入侵情况。结果:在24h内,与对照组相比,受Pg ATCC33277感染的HUVEC的细胞形态未见明显影响,仍呈典型的"铺路石"单层贴壁生长,Pg ATCC33277对HUVEC细胞增殖未见明显影响,透射电镜下观察发现Pg ATCC33277可以黏附HUVEC细胞膜表面,入侵HUVEC,直接定植或以空泡的形式存在于细胞的胞质中。结论:Pg可以入侵内皮细胞,以在细胞内定植的方式逃避宿主的防御反应,内皮细胞的形态和增殖未见明显改变,从而形成第二次慢性感染过程,进一步影响内皮细胞正常功能的发挥。     

不同fimA基因型牙龈卟啉单胞菌对牙龈成纤维细胞表达白细胞介素-8的影响

目的:研究不同fimA基因型牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis, Pg)对人牙龈成纤维细胞表达IL- 8的影响,探讨fimA基因型与Pg致病力差异之间的关系.方法: Pg ATCC 33277(Ⅰ型),WCSP115(Ⅱ型),WCSP1.5(Ⅲ型),W83(Ⅳ型)分别与牙龈成纤维细胞在标准条件下共同孵育,于孵育后1、3、6、12 h收集细胞和上清,应用实时荧光定量RT- PCR和ELISA法分别检测牙龈成纤维细胞IL- 8 mRNA和蛋白的动态表达.结果:与对照组比较,各fimA型Pg对牙龈成纤维细胞IL- 8 mRNA和蛋白的表达均有明显的促进作用(P<0.01);其中ⅡfimA型组IL- 8 mRNA和蛋白的表达量明显高于其它fimA型组,不同时间点IL- 8 mRNA相对表达量分别为20.42±2.21～103.01±12.50,蛋白分泌水平为(137.46±4.97～323.24±13.74) pg/ml;而Ⅲ fimA型Pg组的表达水平弱于其它fimA型组,IL- 8 mRNA相对表达量为3.61±0.39～12.88±1.56,蛋白分泌水平为(44.83±3.68～189.19±87.34) pg/ml, 差异有统计学意义(P<0.05).结论:Pg可促进牙龈成纤维细胞IL- 8 mRNA和蛋白的表达,且各fimA型Pg的促进作用有所差异.提示: fimA基因型的不同可能是Pg的致病力差异的基因基础.