改良CTAB法提取连钱草基因组DNA

目的:建立高质量的连钱草基因组DNA的提取方法.方法:在传统十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)法的基础上加以改良,比较不同浓度CTAB对提取的连钱草基因组DNA质量的影响,并对所得的DNA采用紫外分光光度计、电泳和PCR扩增等方法进行检测.结果:用2%浓度的CTAB处理所获得的基因组DNA质量较好,蛋白质残留少,RNA消...     

两种提取白桂木基因组DNA方法的比较研究

[目的]寻找适合白桂木基因组DNA的提取方法。[方法]采用改良的CTAB法及试剂盒法提取白桂木基因组DNA。用紫外分光光度法、琼脂糖凝胶电泳法检测白桂木DNA纯度、浓度,比较两种方法的适用性。[结果]试剂盒法能够较好去除多糖及其他次生代谢产物。[结论]试剂盒法更适合从白桂木中提取高质量的DNA。     

泰山白花丹参干叶片高质量DNA的提取

目的为了从富含多酚和多糖的泰山白花丹参干叶片中分离出适用于AFLP分析的高质量基因组DNA。方法比较了4种DNA提取方法,获得了一种以CTAB法为基础的分离高质量完整DNA的简便、快速方法。CTAB-freeBuffer清洗,4倍CTAB抽提和固体PVP和VC防止氧化。结果使用该方法从泰山白花丹参干叶片中分离的DNAA260/A280为1.86,由此法所得的DNA可直接用于AFLP分析。结论该技术可有效地从富含多酚和多糖的药用植物组织中分离出高质量DNA。     

提取道地药材基因组DNA方法的探讨

目的为研究道地药材的遗传多样性、种类鉴定和基因指纹图谱的构建等提供技术保证。方法以道地中药材板桥党参（板党）、五鹤续断药源植物的鲜嫩叶片为材料,采用改进的CTAB法从中提取出基因组DNA,检测其提取效果。结果使用改进的CTAB法从鲜叶中提取板党、五鹤续断的基因组DNA浓度较高,能满足PCR反应的要求。结论自行改进的CTAB法提取道地药材板党、五鹤续断基因组DNA效果较好。     

血液基因组DNA提取方法的改良简

目的 探讨改良血液样品基因组DNA的提取方法,制备纯化的高分子量DNA。方法 将312份新鲜血液样品随机分为2组:A组(90份)和B组(222份)。A组采用常规基因组DNA提取方法。B组采用改良的基因组DNA提取方法,其基因组DNA提取方法改良之处:1)在血液样品中加入细胞裂解液CL后采用手工震荡,并离心2min 40s;2)震荡混匀后将样品分装成3管,然后将缓冲液GS加入第1管吹打溶解后吸取上清,并加入第2管,再吹打溶解后吸取上清加入第3管,继续吹打溶解;3)加入缓冲液GB后再58℃水浴过夜16h。结果 改良的血液样品DNA提取方法能够提高产率,提高纯度,获取更多高分子量的DNA,相对于常规基因组DNA提取方法有显著提高。结论 改良的血液基因组DNA提取方法操作简便,能有效地避免操作导致DNA链断裂,提高DNA的完整性及纯度。     

外周血基因组DNA提取方法比较

目的建立快速经济有效提取微量外周血基因组DNA的方法。方法采用酚/氯仿提取法、NaCL沉淀法和试剂盒法,直接从人外周血中提取基因组DNA,并以此为模板,进行肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)基因片段的扩增及鉴定。结果酚/氯仿法和试剂盒法提取的DNA量大,需血量少,用于PCR扩增结果稳定。结论酚/氯仿提取外周血DNA稳定、高效、经济,可用于批量临床标本的制备。     

玻璃珠法提取基因组DNA

基因组DNA的分析在科研、临床以及法医界等都得到广泛的应用,以DNA样本为研究对象的PCR、Southern Blot、RFLP等技术手段被广泛采用。因此建立一种经济、快捷高质量的DNA提取方法是非常必要的。我室曾报告过全血[1]、小块组织[2]以及口腔黏膜脱落细胞[3]DNA提取方法。本文利用玻璃珠对细胞的机械破碎作用,建立一种简单、快捷从组织中制备高质量DNA的方法并与目前常用的蛋白酶K组织DNA提取方法进行了比较。1材料与方法1.1材料样品为胃镜下剪取的病人胃黏膜(病例来自天津医科大学总医院,30例,男15例,女15例,均为慢性胃炎病人),玻…     

百合鳞叶总DNA提取方法的改进

目的建立一种适合RAPD分析的百合鳞叶总DNA提取方法。方法在传统CTAB提取方法上,对其进行改良,进一步优化提取方法。结果用改良CTAB法提取的总DNA的OD260/OD280在1.6-2.0之间,电泳条带清晰,其含量和纯度完全满足RAPD分析的要求。结论该方法提取百合鳞叶总DNA简便实用。     

人类外周血基因组DNA提取方法的比较分析

目的:对2种提取外周血基因组DNA的实验方法进行了比较,建立一种本实验室有效的外周血基因组DNA的提取方法.方法:采用常规试剂盒和本实验室设计的2种外周血液DNA提取法.结果:本实验室使用的外周血基因组DNA提取方法与试剂盒提取外周血基因组DNA的纯度比较无明显差异.结论:本实验室使用的外周血液DNA提取方法简便、有效、经济,满足于基因组的研究.     

改良CTAB法提取石斛总DNA

植物总DNA的提取是分子生物学研究的基础,虽然提取植物总DNA的方法有很多[1～4],对石斛总DNA的提取也有一些报道[3～4],然而按这些方法所提取出来的DNA并不能达到预期的效果.     

8个不同种质忍冬叶中绿原酸含量测定

目的:以绿原酸的含量为指标,评价不同种质忍冬叶的质量,为忍冬种质的划分和忍冬叶的开发应用提供理论依据。方法:采用高效液相色谱法。结果:8个种质忍冬叶绿原酸含量为0.79%~2.43%。结论:不同种质忍冬叶中绿原酸含量存在差异。其中含量达到《中国药典》中金银花标准的有24,32,34三个种质,含量在1%以上的有19,21,27,36四个种质,种质17叶片中绿原酸含量最低。     

高质量植物基因组DNA的分离

为了从富含多酚和多糖的药用植物组织中分离出高质量基因组DNA ,本文通过改良几种已经存在的分离方法 ,获得了一种以CTAB法为基础的分离高质量完整DNA的简便、快速方法。使用该方法从人参、西洋参及三七的新鲜或干燥根组织分离DNA时 ,A2 60 /A2 80 为 1.8左右 ,分子量大小约为 2 1.2kb ,由此所得的DNA可直接用于AFLP分析 ,即用EcoRⅠ /MseⅠ消化DNA后 ,用DNA的限制酶切片段经T4DNA连接酶连接 ,再用巢式PCR扩增 ,构建出可重复的、多态性丰富的人参、西洋参、三七基因组DNAAFLP指纹图谱。结果表明 ,该技术可有效地从富含多酚和多糖的药用植物组织中分离出高质量和高分子量DNA ,此法亦有望用于其它植物DNA的分离。     

金银花的文献出处及相关药用名称药用部位考证

现今临床所用金银花,单指植物忍冬的花,而非茎、叶、藤枝或全草.早期的“忍冬”、“忍冬藤”等名称,并非专指忍冬花部,少数早期文献如《新修本草》等虽有关于植物忍冬花部的简要记述,但主要是作为植物辨识特征对开花时间和花朵形状进行的描述,并未提及花部入药,且无“金银花”之名,不能作为现今中药金银花的原始出处.首次出现“金银花”药名的文献应为宋《苏沈良方》,首次记载单以忍冬之花入药的文献为宋《外科精要》.第九版《中药学》教材、《中华本草》等认为中药金银花出自《新修本草》或《履巉岩本草》的结论,与文献记载不符,应予更正.     

忍冬藤与其伪品金银忍冬藤、连翘茎的鉴别研究

目的:对忍冬藤与其伪品金银忍冬藤、连翘茎进行比较和鉴别。方法:按生药学常规方法对忍冬藤、金银忍冬藤及连翘茎在基源、性状、显微方面进行比较和鉴别。结果:忍冬藤、金银忍冬藤及连翘茎在基源、性状及显微特征方面均存在一定差异。结论:性状鉴别和显微鉴别方法简便、可靠,为保证忍冬藤药材质量提供了有效的鉴别方法。     

金银花中绿原酸和木犀草苷的薄层色谱鉴别方法研究

目的 建立金银花中绿原酸和木犀草苷的薄层色谱鉴别方法.方法 参照〈中国药典〉2010年版一部附录Ⅵ B试验TLC法,分别考察供试品样品的制备,展开剂的选择,以及显色方法.结果 以水为溶剂热回流提取制备试验样品,以乙酸乙酯-丙酮-甲酸-水（7∶3∶1∶1.2）为展开剂,分别喷以5%的三氯化铝乙醇溶液,至紫外光灯（365 nm）下观察鉴定木犀草苷.喷以1%三氯化铁试液与1%铁氰化钾试液（1∶1）混合溶液的上清液,显色鉴定绿原酸.结论 所建立的方法简便可行,重现性好,可用于金银花中绿原酸和木犀草苷的鉴定.     

金银花nrDNA ITS区聚合酶链反应条件的研究

目的:金银花nrDNA ITS区序列G C含量为68%,用常规的PCR方法扩增效果差.本研究通过改变扩增程序及使用改性剂的方法显著提高了金银花nrDNA ITS区的扩增效率.方法:分别从金银花叶及药材中提取总DNA,通过优化扩增条件,对nrDNA ITS区进行扩增,并比较了两种优化方法的差别及适应性.方法1:提高变性温度至97℃;方法2:添加混合改性剂(DMSO 4%-甘油10%).结果:与方法1相比,方法2可降低变性温度5 ℃,升高退火温度9 ℃,降低镁离子浓度至0.5 mmol/L,降低Taq DNA聚合酶用量至0.1 U(30 μl体系),PCR产物量显著提高,且可消除植物DNA粗提物中杂质的干扰.结论:通过提高退火温度及添加改性剂可克服高G C含量金银花nrDNA ITS区序列扩增的困难,该方法的建立有助于解决植物来源DNA模板的PCR扩增问题.     

日本毛连菜水洗部位降血糖、调节血脂作用研究

目的：探讨日本毛连菜水洗部位降血糖及调节血脂药理作用。方法：采用肾上腺素致小鼠生理性高血糖,以及四氧嘧啶致小鼠糖尿病等模型,观察日本毛连菜水洗部位对模型动物血糖、血清总胆固醇（TC）、三酰甘油（TG）、低密度脂蛋白（LDL-C）、高密度脂蛋白（HDL-C）的影响;采用比色法分析水洗部位的化学成分。结果：与模型组比较,日本毛连菜水洗部位低剂量显著降低四氧嘧啶致糖尿病小鼠血糖值（P〈0.05）,高剂量显著降低肾上腺素致糖尿病小鼠血糖值（P〈0.05）,给药组小鼠三酰甘油、低密度脂蛋白含量显著下降（P〈0.05）,高密度脂蛋白含量显著升高（P〈0.05）;水洗脱部位含多糖4 097 mg/100 g生药材,含黄酮913 mg/100 g生药材。结论：日本毛连菜水洗部位对糖尿病小鼠具有显著降血糖作用,同时可以调节糖尿病小鼠血脂水平。     

反相高效液相色谱法定量分析旋覆花中1, 5-二-O-咖啡酰奎尼酸

目的 建立旋覆花药材中1,5-二-O-咖啡酰奎尼酸含量的HPLC测定方法。方法 色谱柱为Agilent Eclipse XDB-C18色谱柱（4.6 mm × 250 mm, 5 μm）;流动相甲醇-0.1 %冰醋酸水溶液 〔32∶ 68 （0 min）~32∶ 68 ( 15 min )~36∶ 64 ( 40 min )〕梯度洗脱;检测波长320 nm;柱温30 ℃;流速1.0 ml/min。结果 1,5-二-O-咖啡酰奎尼酸在0.62～12.48 μg（r = 0.999 9）具有良好的线性;平均加样回收率（n = 6）为100.9 %（RSD = 1.13 %）,方法精密度、稳定性、重复性好。10批药材中1,5-二-O-双咖啡酰奎尼酸的含量范围为1.03 %～2.09 %,平均含量为1.53 %。结论 该定量分析方法可用于旋覆花药材的质量控制。     

大孔吸附树脂分离纯化金银花中总有机酸的研究

目的研究大孔吸附树脂富集、纯化金银花中总有机酸的工艺条件参数。方法以静态饱和吸附量、静态洗脱率为考察指标,比较了6种大孔吸附树脂分离、纯化金银花总有机酸的工艺。以总有机酸收率和质量分数为指标,对最佳树脂吸附工艺条件进行了筛选。结果在考察的6种树脂中,HPD100型树脂具有最佳的吸附及洗脱参数。结论本实验所筛选出的HPD100型树脂综合性能较好,适于金银花总有机酸的分离纯化。     

远志属4种药用植物不同干燥方法叶材料DNA提取方法研究

目的:以远志属药用植物为例,对经过不同干燥方法的叶片材料进行DNA提取方法优化研究。方法:在改良CTAB法的基础上,对水浴时间、水浴温度、沉淀时间进行优化。结果:降低水浴温度为45℃,延长水浴时间为5 h,延长沉淀时间为1 h,可以从常温干燥并保存1年的叶片材料和腊叶标本叶材料中提取到用于PCR反应的DNA。结论:硅胶干燥叶片用改良CTAB法可以得到满足后续PCR反应的DNA;对常温干燥并保存1年的干叶片和腊叶标本叶材料,一定时间的低温水浴是提取到满足后续PCR实验DNA的关键。