骨髓间充质干细胞体外转化为骨骼肌细胞的初步观察

目的观察骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells，MSCs)经5．氮杂胞苷(5-Aza)诱导分化为成骨骼肌肌细胞的过程。方法分离纯化4～6周龄SD大鼠的骨髓MSCs，以5-Aza作用24h。于作用1周后的不同时相点，观察细胞形态变化，免疫组织化学染色观察细胞内结蛋白(desmin)、骨骼肌肌动蛋白(actin)、肌球蛋白重链(MHC)、肌生成素(myogenin)表达。结果经5-Aza诱导后14d，部分细胞表达desmin；诱导后24d，细胞表达myogenin、MHC、actin。细胞形态和排列方式发生明显变化，可见有肌管样细胞出现。结论MSCs经5-Aza诱导后可以向成骨骼肌细胞定向分化。     

脐血干细胞肌源性诱导后移植细胞间连接的研究

目的 研究犬脐血间质干细胞(MSCs)肌源性诱导后移植,移植细胞是否与宿主细胞形成功能性整合,检测细胞间连接的形成. 方法 通过分离、纯化、培养脐血MSCs,Laz-Z转染标记,5-氮杂胞苷(5-azacytidine,5-aza)肌源性诱导,将36只杂种犬随机分为两组,建立犬心肌梗死模型.细胞移植组经冠状动脉和局部注射,将约107个MSCs移植到犬急性心肌梗死模型;对照组用同样的方法注射等量的生理盐水.两组分别于2、4和8周时取组织切片,用免疫组织化学法检测细胞问连接.结果 脐血MSCs呈梭形或纺锤形,克隆样生长;5-aza诱导后肌源性分化,可表达α-actin( ),desmin( ),connexin43( ).移植的细胞可存活8周以上,移植细胞、移植细胞和宿主心肌连接处有cadherin和connexin43的阳性表达;而对照组仅有cadherin和connexin43的表达. 结论 脐血MSCs可在体外诱导为心肌样细胞,移植后能与宿主心肌形成有效连接,从而具有通讯联系.     

成肌分化因子和5-氮杂胞苷联合诱导骨髓间充质干细胞向骨骼肌细胞分化的实验研究

目的研究大鼠骨髓间充质干细胞（mesenchymal stem cells，MSCs）在体外定向分化为骨骼肌细胞的干预条件。方法取健康4周龄Wistar大鼠MSCs制成细胞悬液接种于培养瓶中，置于37C、5％CO2恒温培养箱中培养，倒置相差显微镜下观察，细胞布满瓶底即为1代，取第3代MSCs，以5-氮杂胞苷10μmol／L、成肌分化因子0．1ng／ml、转化生长因子β1 0.1ng／ml、胰岛素样生长因子12ng／ml进行联合诱导，使之分化。诱导后第9天，收集细胞，行MTT比色法、流式细胞仪和免疫组织化学检测鉴定细胞。结果原代培养的MSCs呈贴壁生长，3～5d呈集落样生长，5～7d后有体积不等的多突成纤维细胞、较大的扁平多角形细胞、中等的多角形细胞和较小的三角形细胞。培养12d后，细胞融合，铺满瓶底，MSCs形态变化不明显。联合诱导后，部分细胞死亡，生长缓慢；7d后见细胞明显增殖，体积逐渐增大，呈椭圆形、梭形或不规则形状；14d后，大量增殖的长梭形细胞开始增多；18～22d后，肌管数量增多，体积增大，核数亦明显增多，初生肌管与长梭形成肌细胞呈平行排列，间隔分布。MSCs免疫组织化学法测定CD44反应阳性，胞质呈棕褐颗粒，核周明显，CD34呈阴性反应；诱导后MSCs结蛋白、骨骼肌特异肌球蛋白均为阳性表达。流式细胞仪测定MSCs和诱导后MSCs大部分处于G0／G1期，分别占79．4％、62．9％，而G2／S／M期仅占20．6％、36．1％。根据MTT绘制生长曲线，可见MSCs生长速度明显高于诱导后的MSCs。两种细胞并未达到平台期，都有继续增殖的趋势。结论在体外，MyoD、5-氮杂胞苷可以诱导MSCs向骨骼肌细胞定向分化，并伴有结蛋白和骨骼肌肌球蛋白阳性表达；定向诱导后MSCs增殖期比例大，向骨骼肌细胞分化纯度更高。     

基质细胞衍生因子受体4在肌损伤组织肌卫星细胞的表达

目的 探讨注射心脏毒素后肌损伤的肌卫星细胞中基质细胞衍生因子受体4(CXC chemokinereceptor 4,CXCR4)的表达情况,为进一步研究肌肉退行性疾病的分子学发病机制和治疗方法提供理论依据.方法 取C57雄性小鼠12只,于左侧股四头肌局部注射心脏毒素(5 μg/只),建立小鼠肌损伤模型:右侧股四头肌作为自身对照.于注射后1、4 d及1、2、4、6周处死小鼠,分离两侧股四头肌,取材行HE染色、免疫组织化学染色及RT-PCR检测分析CXCR4表达情况.结果 HE染色示肌肉组织从损伤修复到再生的全过程.免疫组织化学染色检测示注射心脏毒素后1、4 d和1、2、4、6周,肌肉组织内CXCR4表达分别为1 955.6±150.3、2 223.2±264.3、2 317.6±178.7、3 066.5±269.6、1 770.9±98.7和1 505.7±107.1,与正常肌肉组织(640.3±124.0)比较,差异均有统计学意义(P<0.001).RT-PCR检测显示,正常肌肉组织、注射心脏毒素后1、4 d和1、2、4、6周肌肉组织内CXCR4 mRNA表达分别为0.349±0.006、0.822±0.013、0.882±0.025、1.025±0.028、1.065±0.041、0.837±0.011和0.777±0.015;肌损伤后各时间点与正常肌肉组织比较,差异均有统计学意义(P<0.001).结论 CXCR4可能在肌肉损伤修复过程中起重要作用.     

人脐带间充质干细胞向心肌样细胞分化的显微形态学研究

目的 观察人脐带间充质干细胞(MSCs)向心肌样细胞分化过程中的显微形态学改变及其意义,为心肌细胞的移植探索新的细胞来源.方法 从人脐带华尔通氏胶分离、培养MSCs,倒置相差显微镜、扫描电镜和透射电镜观察细胞分化前后细胞形态的变化及超微结构,用免疫组化的方法检测分化的心肌样细胞是否表达心肌肌钙蛋白I(troponin I)、心肌肌钙蛋白T(troponin T)和心肌结蛋白(desmin). 结果 扫描电镜观察到人脐带MSCs经5-aza和DMSO诱导后体积变大变长,呈杆状细胞且细胞浆中可见肌丝样结构出现;透射电镜可以观察分化的细胞浆中有肌丝的存在.同时分化的细胞表达心肌细胞的标记troponin I、troponin T和desmin. 结论 人脐带间充质干细胞可以分化为心肌样细胞,可以作为心肌细胞移植的来源.     

骨形态发生蛋白对兔骨髓间充质干细胞成软骨分化的定向诱导作用

目的研究骨形态发生蛋白(BMP)对兔骨髓间充质干细胞(MSCs)的定向诱导作用,探讨MSCs的成软骨能力。方法分离并培养兔MSCs,BMP诱导MSCs向软骨细胞分化,观察其形态学改变及碱性磷酸酶(ALP)活性。将诱导后的MSCs接种PGA无纺网体外培养2周,将MSCsPGA无纺网复合体植入裸鼠背部皮下,2个月后取材,进行组织学观察。结果经BMP诱导后,MSCs的形态由长梭形向多角形和三角形转化,群体倍增时间约为3.0d。诱导5、10d后,ALP活性为0.282±0.015,0.502±0.012,明显高于对照组0.265±0.010,0.315±0.021(P<0.01),ALP染色阳性。MSCsPGA无纺网复合体植入裸鼠后,组织学可见软骨陷窝,陷窝内可见核蓝染的成软骨细胞,证实MSCs具有体内成软骨能力。结论经BMP诱导的MSCs向软骨细胞分化和增殖,在裸鼠体内可形成软骨组织。     

骨髓间充质干细胞向“类精子”分化的动物实验鉴定

目的:鉴定骨髓间充质干细胞(MSCs)异体移植后是否分化为“类精子”。方法:①制作睾丸去势的动物模型:取4周龄雄性白色BALB/c小鼠40只,用环磷酰胺腹腔注射法制作睾丸绝育的动物模型,随机分成实验组和对照组各20只;②制备种子细胞(MSCs):取5~6周龄雄性灰色129小鼠10只,以Percoll密度梯度离心法和贴壁法相结合的方法分离、培养、纯化MSCs。待细胞生长至数量足够多时,用生理盐水制备成浓度为1×106/ml的细胞悬液;③异种系小鼠MSCs睾丸异体移植:实验组用盲打法给每只小鼠睾丸注射上述制备的129小鼠的MSCs悬液。对照组睾丸注射生理盐水;④移植后的观察:另取8~10周龄雌性白色BALB/c小鼠40只,分别与实验组和对照组的40只雄性小鼠按雌雄1∶1合笼,观察雌鼠受孕情况。结果:实验组:有8只雌鼠分别于合笼后31~46(平均38.5)d怀孕,受孕率为40%,产下的小鼠皆为白色。对照组:1只雌鼠怀孕,受孕率为5%,产下的小鼠为白色。子代鼠皆为白色,提示129小鼠的MSCs未能分化为有功能的“类精子”,使BALB/c小鼠的子代携带129小鼠的基因而呈现预想中的黑白相间的“花色”。两组受孕率差异有显著性(P<0.05),提示MSCs对睾丸损伤有促进愈合作用。结论:异品系的MSCs睾丸移植后未能分化为有功能的“类精子”,但对睾丸损伤有促进愈合作用。     

人甲状腺未分化癌细胞系TA-K裸鼠原位移植模型的建立

目的 建立人甲状腺未分化癌裸鼠自发转移模型。观察移植后肿瘤生长情况和转移规律。方法 用微量注射器于裸小鼠甲状腺侧叶内（甲状腺原位移植组）和皮下（皮下对照组）注入等体积不同浓度的人甲状腺未分化癌细胞系TA-K细胞悬液，观察动物体重，一般状态，颈部情况及记录生存时间，并动态观察肿瘤局部生长和转移情况；取甲状腺，气管，食管，颈部及纵膈淋巴结，肺和骨组织行病理组织学检查，并取移植瘤组织常规进行染色体分析，结果 甲状腺原位移植组于注射人甲状腺未分化癌细胞系TA-K细胞悬液后24-34d裸鼠先后出现呼吸困难，实验侧甲状腺肿物呈膨胀性生长，侵及颈前肌及周围组织，压迫气管造成呼吸困难，病理组织学检查证实原位移植成瘤率为100%，颈部淋巴结转移率为5/10，肺转移发生率为3/10，骨转移发生率为1/10。移植瘤组织染色体分析证实为人类肿瘤。皮下移植组见移植瘤有完整包膜，未见侵犯局部肌层，也无局部和淋巴结转移。结论 利用裸鼠甲状腺原位TA-K细胞微量注射法，可以成功建立人甲状腺未分化癌裸鼠原位移植模型。该模型是较为理想的用于研究甲状腺癌转移的动物模型。     

骨髓间充质干细胞分化为心肌细胞的实验研究

目的 探讨骨髓间充质干细胞(MsCs)定向分化为心肌细胞的可行性，建立一种以干细胞移植为主治疗心肌梗死的治疗策略。方法利用Percoll分离骨髓细胞培养获得MsCs；用5-氮杂胞苷(0．1、1、5、10、50和100μmol/L)定向诱导24h，分别在诱导培养的第14d和21d，检测细胞中的α-横纹肌肌动蛋白表达。将培养的MSCs，移植于急性梗死心肌组织内，4周后进行组织学和免疫组织化学染色，并用超声检测室壁运动和心功能改变。结果骨髓间充质干细胞经5-氮杂胞苷诱导，培养21d后，5和10μmol/L 5-氮杂胞苷诱导后的MSCs有一部分细胞表达α-横纹肌肌动蛋白，并一些细胞自发性跳动；细胞移植4周后，在缺血心肌有一部分MSCs与宿主心肌细胞形成连接并分化为具有典型的肌小节和表达α-横纹肌肌动蛋白阳性的心肌细胞。结论MsCs可以分化成心肌细胞。     

兔自体骨髓间充质干细胞体内复合移植的成骨研究

目的 观察兔自体骨髓间充质干细胞（MSCs)体内复合移植的成骨能力，以寻求理想的MSCs载体。方法将10只新西兰大白兔随机分成A、B两组，从自体骨髓中分离出MSCs，体外培养并扩增后分别与相同大小的小牛脱钙骨（DBCB），自固化磷酸钙人工骨（CPC）复合移植于两组大白兔左侧骶棘肌中，同时右侧骶棘肌分别植入相同大小的DBCB，CPC作空白对照；16周后取出标本，观察成骨情况并行组织学检查。结果 A组5例：MSCs DBCB侧均发现有新骨组织形成，单纯DBCB侧3例被完全吸收，降解，2例大部分吸收，降解；B组5例；MSCs CPC侧和单纯CPC侧均未见骨组织形成，植入物也无明显吸收，结论 自体骨髓MSCs在适合载体负载下可在体内自动分化成骨，DBCB是MSCs的良好载体之一。     

Skin epithelial cells in mice from umbilical cord blood mesenchymal stem cells

The purpose of this study was investigation of the potential to isolate mesenchymal stem cells (MSCs) from human umbilical cord blood (UCB) and differentiate them into epithelial cells in mouse skin tissues. Mononuclear cells (MNCs) from UCB (UCB-MNCs) were isolated and induced to MSCs in culture. UCB-MSCs were transfected with pEGFP and labeled with PKH26 dye. eGFP-transfected and PKH26-labeled UCB-derived MSCs were purified by flow cytometry to gate purified eGFP(+) PKH26(+) cells and transplanted at a single clone level into injured nude Balb/C mice by tail vein injection. The phenotype of cultured UCB-MSCs, the expression of human cytokeratins and the expression of eGFP(+) PKH26(+) cells in mouse skin tissues were examined by flow cytometry. Human HLA-1 antigen and cytokeratin 10 (CK10) were detected by direct immunofluorescence on mouse skin tissue sections and flow cytometry. Sry gene (sex-determining region of Y chromosome) was detected by PCR reaction. The results showed that MSCs were isolated from UCB and had heterogeneous morphology and growth potential. Moreover, UCB-derived MSCs localized into mouse skin tissues and differentiated into skin epithelial cells confirmed by in vivo cell tracking and human antigen detection. At two weeks after transplant, a number of eGFP(+) PKH26(+) cells were detected in recipient mouse skin tissues. The detection of sry gene and HLA-1 antigen further confirmed that the human UCB-derived cells were present in recipient mouse skin tissues. Human cells localizing to mouse skin and differentiating into skin epithelial cells were demonstrated by cytokeratins (CK) 8 and 10 expression during flow cytometry, and CK10 expression on injured skin tissue section by direct immunofluorescence. CONCLUSION: UCB-derived MSCs localized to injured skin in vivo and differentiated into epithelial phenotypes. The results demonstrate that UCB-derived MSCs contribute to skin tissue regeneration in vivo and may be an ideal cell source for therapy of skin epithelial tissue injury, including burns.     

小鼠骨髓间充质干细胞移植异体睾丸的研究

目的:研究小鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)移植异体睾丸。方法:①分离5~6周龄的BALB/c小鼠胫骨、股骨,冲出骨髓,用Percoll密度梯度离心法和贴壁法分离、培养、纯化MSCs。②取第3代MSCs,用Hoe-chest33342标记并观察,制备细胞悬液。③用睾丸网注射法将标记的MSCs移植入异体小鼠睾丸内,于各时相点取睾丸组织,在3个位点连续制作快速冰冻切片,镜下观察。结果:①传至3代即可得到数量较多的纯化的MSCs。②在荧光显微镜下,标记的MSCs细胞核呈亮黄色。③用睾丸网注射法行小鼠MSCs移植异体睾丸成功,未见免疫排斥反应发生。移植后1、3d,只在中间的切片上见到MSCs,细胞核呈亮黄色,两侧的切片未查到MSCs,移植后1d细胞较集中,移植后3d细胞散在分布;移植后6、9、12d,3个位点的切片均见MSCs,部分MSCs排列呈管状;移植后15、18d,MSCs的核荧光有所减弱;移植后21d,荧光消失。结论:用睾丸网注射法将小鼠MSCs移植异体睾丸获得成功,未见免疫排斥反应发生,移植后的MSCs存活。     

骨髓间充质干细胞移植在哮喘小鼠肺组织中的作用

目的：探讨外源性骨髓间充质干细胞（MSCs）移植后在哮喘小鼠肺组织中的分布及对气道炎症的影响,为以MSCs为基础的哮喘疾病的防治提供实验依据.方法：取30只雌性BALB/c 小鼠随机分成空白对照组、哮喘组和MSCs处理组.在无菌条件下取绿色荧光蛋白（GFP）转基因小鼠骨髓MSCs,体外扩增并鉴定.哮喘组和MSCs处理组应用卵白蛋白（OVA）腹腔注射（第0、7、14天）和雾化吸入（第15~21天）制备慢性哮喘模型.第14天通过尾静脉注射将表达GFP的MSCs移植入MSCs处理组小鼠.于末次激发哮喘后24h,取3组动物支气管肺泡灌洗液（BALF）和外周血,计数细胞总数和嗜酸粒细胞数,取肺组织行病理切片,HE染色观察肺部气道炎症情况,并通过荧光显微镜观察MSCs在哮喘小鼠肺组织中的分布,Image-proplus图像分析软件测量支气管壁厚度和平滑肌厚度.结果：GFP转基因小鼠骨髓中分离的MSCs表达MSC特异性标志物并表达GFP.MSCs处理组和哮喘组小鼠BALF中细胞总数以及外周血和BALF嗜酸粒细胞百分比均高于空白对照组,但MSCs处理组上述指标明显低于哮喘组,差异有统计学意义（P〈0.05）.与哮喘组比较,MSCs处理组小鼠肺组织病理学变化改善,支气管壁厚度和平滑肌厚度均显著降低（P〈0.05）.结论：外源性MSCs体内移植能集中分布于哮喘小鼠肺组织并通过减少哮喘气道嗜酸粒细胞侵润等方式抑制哮喘小鼠的气道炎症.     

骨髓间质干细胞与胚胎嗅鞘细胞联合移植治疗大鼠脊髓损伤的实验研究

目的：观察人骨髓间质干细胞（MSCs）与胚胎嗅鞘细胞（OECs）联合移植治疗大鼠脊髓损伤的效果，探讨共移植的OECs对MSCs分化的影响。方法：采用Allen’s法制作大鼠脊髓损伤模型．随机分为MSCs移植组（A组）、OECs移植组（B组）、MSCs与OECs联合移植组（C组）及PBS注射组（D组），术后1-5周采用BBB评分、经颅磁刺激运动诱发电位及组织学方法检查脊髓损伤修复情况。结果：术后2周起，A、B、C组BBB评分和诱发电位潜伏期与D组比较恢复明显，C组与A、B组相比亦有显著性差异（P〈0．05），术后5周时C组损伤区有较密的神经轴突分布，近端可见大量成束再生轴突；A、B组损伤区及近端再生轴突分布稀疏；D组损伤区及近端少见轴突。C组移植的MSCs中Nestin及NF表达阳性的比率较A组高（P〈0.05）。结论：联合移植OECs可促进MSCs向神经元方向转化，提高MSCs分化为神经元的比例；MSCs与OECs可以在脊髓损伤修复中发挥协同作用，联合细胞移植是提高脊髓损伤修复效果的可行方法。     

神效散外用对急性软组织损伤后肿瘤坏死因子-α、白细胞介素-1β的影响

目的:探究神效散外用对急性软组织损伤后肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-β(IL-1β)的影响.方法:将50只大鼠随机分为5组,神效散高、中、低剂量组,空白敷贴阴性对照组,扶他林阳性对照组,建立局部软组织损伤模型,连续给药7 d后,检测血清和肌肉组织中TNF-α和IL-1β的含量.结果:第4天时,每组血清中T...     

神经生长因子基因转染间充质干细胞移植对损伤脊髓保护的实验研究

目的 探讨神经生长因子(NGF)基因转染间充质干细胞(MSCs)移植对损伤脊髓的保护作用.方法 近交系Wistar大鼠(n=56),随机分为治疗组、空白组、对照组,采用改良的Allen打击法造成脊髓损伤(SCI)的模型;分离培养同种异体MSCs,纯化、扩增后,MSCs经绿色荧光蛋白(GFP)标记并被NGF基因转染后重新悬垂(1×108/ml)于SCI 7 d后移植入受损硬脊膜下.对照组注射等量的磷酸盐缓冲液(PBS),分别在MSCs移植后24 h和1、2周后取损伤脊髓段冰冻切片,.在荧光显微镜下观测移植细胞的分布情况;观测MSCs移植后胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和NGF表达的变化;进行神经功能(BBB)评价. 结果 MSCs移植后可向损伤脊髓中心聚集,SCI后.治疗组GFAP和NGF的表达明显高于对照组(P<0.05);BBB评分显示治疗组和对照组神经功能差异有统计学意义. 结论 NGF基因转染的MSCs移植促进了脊髓神经功能的恢复,移植后具有一定的分布规律.     

骨髓基质细胞经不同移植途径在损伤脊髓中的迁移

目的 观察骨髓基质细胞(BMSCs)经不同移植途径在损伤脊髓中的迁移和分布规律.方法 40只Wistar大鼠随机分成4组,以改良Allen法制备脊髓损伤模型.第3代BMSCs经CM-Dil荧光染料标记后按不同途径移植.A组:脊髓损伤后行第四脑室注射移植;B组:脊髓损伤后行损伤区蛛网膜下注射移植;C组:脊髓损伤后行损伤区远端蛛网膜下注射移植;D组:脊髓损伤后行股静脉注射移植.分别于移植后24 h、1、2、3、4周取损伤脊髓段作冰冻切片,倒置荧光显微镜下观测移植的BMSCs在损伤脊髓中心的聚集情况.结果 移植后24 h:除B组外脊髓损伤区未发现红色荧光;移植后1周,A、C组移植的BMSCs开始向脊髓损伤区迁移;移植后2周,除D组外,各组BMSCs迁移、聚集在损伤脊髓的中心;移植后3-4周,脊髓损伤区BMSCs数量减少,B组减少速度更快.结论 经第4脑室、硬脊膜下移植的BMSCs能迁移聚集在损伤脊髓的中心,经静脉移植的BMSCs极少迁移到损伤脊髓的中心.     

骨髓间质干细胞体外定向肌样分化的研究

目的 研究兔骨髓间质干细胞经5—氮杂胞苷诱导，在体外定向肌样分化的情况。方法 取兔胫骨骨髓，分离并培养骨髓间质干细胞，用5—氮杂胞苷苦(10μmol/L)定向诱导，分别在培养的第7、14、2l、28天用免疫组织化学的方法检测细胞中的肌球蛋白重链，取未经5—氮杂胞苷诱导正常培养的细胞为对照组。结果 兔骨髓间质干细胞经5—氮杂胞苷诱导，在其培养的第21、28天免疫组织化学染色方法检测细胞中的肌球蛋白重链呈阳性，而在其培养的第7、14天以及对照组，免疫组织化学染色方法检测细胞中的肌球蛋白重链呈阴性。结论 骨髓间质干细胞是骨髓来源的具有多向分化潜能的干细胞，在5—氮杂胞苷的定向诱导下，可以肌样分化。     

兔组织工程肌的构建与研究

目的　探讨用同种异体兔成肌细胞和小肠黏膜下层( small instestinel submucosa,SIS)复合,体外培养构建兔组织工程肌。　方法　取出生7d内幼兔四肢肌组织,经多步酶消化法与差速贴壁法获得足量、纯净成肌细胞,用Brd U标记,与SIS体外复合培养构建组织工程肌,植入15只异体兔体内修复腓肠肌1.5 cm×1.0 cm大小的骨骼肌缺损作为实验组;用单纯SIS修复对侧同样骨骼肌缺损作为对照组。术后4、6和8周各处死5只动物取材,行大体和组织学观察、局部细胞免疫定量分析和免疫组织化学检测。　结果　体外培养成肌细胞与SIS均复合良好,体内植入4周见材料与周围肌组织接合紧密,周围炎性反应明显;6周和8周材料开始部分降解,炎性反应逐渐减轻。局部细胞免疫定量分析显示实验组和对照组4、6周评分与8周评分比较有统计学意义( P<0 .0 5 )。实验组4、6和8周均可见材料周围新生肌组织形成,Brd U及肌球蛋白免疫组织化学染色阳性,对照组染色结果呈阴性。　结论　成肌细胞与SIS复合构建的组织工程肌,植入体内可存活、增殖并形成新的肌组织     

Implanted mouse bone marrow-derived cells reconstruct layered smooth muscle structures in injured urinary bladders

This study is a preliminary investigation to determine if bone marrow-derived cells, when implanted into freeze-injured urinary bladders, differentiate into smooth muscle cells and reconstruct smooth muscle layers. Bone marrow cells were harvested from femurs of male ICR mice and cultured in collagen-coated dishes for 7 days. After 5 days of culture, the cells were transfected with green fluorescent protein (GFP) genes for identification in recipient tissues. Three days prior to implantation, the posterior urinary bladder walls of female nude mice were injured with an iron bar refrigerated by dry ice. Seven days after the culture and 3 days after the injury, adherent, proliferating GFP-labeled bone marrow-derived cells (1.0 x 10(5) cells) were implanted into the injured regions. For controls, a cell-free solution was injected. At 14 days after implantation, the experimental urinary bladders were analyzed by histological, gene expression, and cystometric investigations. Just prior to implantation, the injured regions did not have any smooth muscle layers. After 14 days, the implanted cells surviving in the recipient tissues were detected with GFP antibody. The implanted regions had distinct smooth muscle layers composed of regenerated smooth muscle marker-positive cells. The implanted GFP-labeled cells differentiated into smooth muscle cells that formed into layers. The differentiated cells contacted each other within the implanted region as well as smooth muscle cells of the host. As a result, the reconstructed smooth muscle layers were integrated into the host tissues. Control mice injected with cell-free solution developed only few smooth muscle cells and no layers. Cystometric investigations showed that mice with implanted the cells developed bladder contractions similar to normal mice, whereas control mice did not. In summary, mouse bone marrow-derived cells can reconstruct layered smooth muscle structures in injured bladders to remediate urinary dysfunction.