氧化应激对血管内皮细胞Grx表达的研究

目的采用体外实验，研究人脐静脉血管内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells．HUVEC）是否受氧化应激而高表达Grx。方法体外分离培养HUVEC；用不同浓度H2O2处理HUVEC，MTT法检测HUVEC活力。RT—PCR半定量检测GrxmRNA表达水平的差异。结果成功获得体外培养的HU—VEC；300-500mol／L H2O2均在不同程度上抑制细胞增殖（P〈0.05）。RT—PCR结果表明，GrxmRNA的表达随着200umol／L H2O2作用时间的增加而增加，30min时与正常对照组差异显著（P〈0．01）；不同终浓度H2O2作用30min结果表明，300umol／L H2O2作用可使GrxmRNA的表达量最高（P〈0．01）。结论建立了分离培养HUVEC的方法；氧化应激可上调HUVEC Grx mRNA表达，且HUVEC内Grx的表达与H2O2刺激呈时间剂量依赖关系。     

丙氨酰谷氨酰胺二肽对人脐静脉内皮细胞ECV304缺氧缺糖损伤的保护作用

目的 观察丙氨酰谷氨酰胺二肽（丙谷二肽）对人脐静脉内皮细胞ECV304缺氧缺糖损伤的保护作用,并探讨其可能的作用机制。方法 在以低氧低糖培养人脐静脉内皮细胞ECV304为细胞损伤模型的基础上,以噻唑蓝（MTT）比色法优化丙谷二肽的最佳作用浓度,显微镜观察细胞形态变化,流式细胞术检测线粒体膜电位。自动生化分析仪测定乳酸脱氢酶（LDH）活性,比色法检测谷胱甘肽（GSH）、丙二醛（MDA）的浓度,RT-PCR方法检测细胞内肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-6 (IL-6)、热休克蛋白70 (HSP70)、葡萄糖调节蛋白78 (GRP78) 和缺氧诱导因子-1α (HIF-1α) mRNA的表达。结果 丙谷二肽能够使细胞在缺氧缺糖应激下存活率增加,线粒体损伤减轻,LDH分泌降低,GSH产生增加,HSP70和HIF-1α mRNA的表达增加。结论 丙谷二肽对细胞缺氧缺糖损伤有明显的保护作用,这种保护作用可能与保护线粒体、维持细胞膜结构完整、上调细胞中应激基因HSP70和HIF-1α的表达有关。     

川芎嗪对人脐静脉内皮细胞ECV304增殖的影响

川芎为活血化瘀代表性中药，临床应用甚广。川芎嗪(Tranethylpyrazine，TMP)为川芎主要有效成分之一。前期研究表明，川芎嗪注射液能抑制Lewis肺癌荷瘤小鼠移植瘤的生长和肺转移，可降低肿瘤组织微血管密度和抑制肿瘤细胞血管内皮生长因子(VEGF)的表达。本试验旨在进一步探讨川     

HSV-2感染ECV304的形态学变化

目的观察人脐静脉内皮细胞（ECV304）受到单纯疱疹病毒2型（HSV-2）感染后的连续病变过程及形态学特征。方法采用ECV304传代培养,接种HSV-2后用相差显微镜、组织染色观察贴壁生长细胞的病变全过程。结果接种HSV-2后,ECV304于1d逐渐出现细胞肿胀、变圆、胞浆颗粒增多粗大;2d逐渐出现细胞融合,细胞核着色变浅。结论HSV-2接种后在ECV304出现的形态学变化,造成细胞死亡的主要形式是细胞坏死,未见明显的细胞凋亡现象。     

过氧化氢对原代人结肠上皮细胞谷氧还蛋白表达的影响

目的采用体外研究方法探讨过氧化氢（H2O2）对原代人结肠上皮细胞谷氧还蛋白（Grx）表达的影响。方法体外分离培养原代人结肠上皮细胞;通过相同浓度H2O2或不同浓度H2O2刺激原代人结肠上皮细胞,使细胞处于氧化应激状态,应用MTT比色法检测不同浓度的H2O2对细胞活力的影响,半定量RT—PCR检测H2O2对细胞Grx基因表达的影响。结果400μmol／L以上的H2O2降低细胞活力,300μmol／L浓度的H2O2在一定时间内随刺激时间的延长Grx基因表达相应增加（P〈0．05）,且在各时间点与对照组相比,H2O2组Grx基因表达均显著增加,在30min时表达量最多;在300μmol／L以下,随着H2O2浓度的增加,Grx基因表达水平亦相应增加（P〈0．05）,而500μmol／L浓度的H2O2组Grx基因表达与400μmol／L组相比有所下降（P〈0．05）。结论H2O2引起的氧化应激可明显上调原代人结肠上皮细胞Grx基因的表达,可能在基因水平上参与了对抗H2O2的的作用,但另一方面也赋予了细胞良好的抗凋亡能力,值得深入探讨。     

丹酚酸B配伍丹皮酚对H_2O_2诱导的人脐静脉内皮细胞氧化损伤模型Bcl-2、Bax、caspase-3 mRNA及蛋白表达的影响

目的探讨丹酚酸B配伍丹皮酚对过氧化氢（H2O2）诱导的人脐静脉内皮细胞氧化损伤模型Bcl-2、Bax、caspase-3 mRNA及蛋白表达的影响。方法采用H2O2造成人脐静脉内皮细胞氧化损伤模型,利用SYBR GreenRT-PCR方法检测药物作用内皮细胞后凋亡相关基因Bcl-2、Bax、caspase-3 mRNA的表达变化,Western blot法检测内皮细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、caspase-3的表达。结果丹酚酸B配伍丹皮酚能够使损伤内皮细胞中Bcl-2基因mRNA水平上升,而Bax、caspase-3基因的表达降低,与Western blot方法检测蛋白含量的结果较为一致,且数据比较差异有高度统计学意义（P〈0.01）。结论丹酚酸B配伍丹皮酚是通过调节Bcl-2、Bax基因及蛋白的表达,抑制下游分子caspase-3的活化而起到保护血管内皮细胞的作用。     

EDA-A1基因突变体对人脐静脉内皮细胞 ECV304增殖及细胞周期的影响

目的：研究少汗型外胚层发育不良症 EDA‐A1基因突变体对人脐静脉内皮细胞（ECV ）周期和增殖活性的影响。方法构建 EDA‐A1基因编码序列（CDS）突变体和野生型的真核表达载体 pcDNA3．1（‐）‐EDA‐A1‐M /W ,转染人脐静脉内皮细胞,逆转录 PCR（RT‐PCR）扩增 EDA‐A1基因,蛋白免疫印迹法（Western blot）法检测 EDA‐A1蛋白表达,M TT 法、流式细胞术检测EDA‐A1基因突变体对 ECV 细胞增殖和细胞周期的影响。结果 RT‐PCR 、Western blot 结果显示,野生型组和突变体组 ECV细胞表达 EDA‐A1基因及其蛋白,而空质粒转染组[pcDNA3．1（‐）]和空白对照组细胞无表达。与对照组（空质粒租）相比,突变体组 ECV 细胞增殖活性下降,生长抑制率为45．70％（P＜0．01）,野生型细胞增殖活性无明显改变（P＞0．05）。突变体组中有更多细胞进入 G0/G1期、S 期;野生型组 S 期细胞增多,G2/M 期细胞明显减少（P＜0．05）。结论突变体和野生型 EDA‐A1基因对 ECV 细胞增殖和细胞周期有不同的生物学功能。     

氨氯地平对ox-LDL诱导的人脐静脉内皮细胞MCP-1 mRNA表达的影响

目的观察氨氯地平对氧化型低密度脂蛋白（ox—LDL）诱导的人脐静脉内皮细胞（hUVEC-12）单核细胞趋化蛋白1（MCP-1）mRNA表达的影响,以进一步探讨氨氯地平抗动脉粥样硬化的作用机制。方法筛选ox—LDL与hUVEC-12细胞孵育合适的处理浓度与时间,然后用不同浓度氨氯地平（0、0．1、1．0、10．0μmol／L）预孵育hUVEC-12后,与ox—LDL共同孵育,RT—PCR检测细胞MCP-1 mRNA表达的变化情况。结果筛选出ox—LDL与hUVEC-12共同孵育的合适浓度为50mg／L,时间为24h。氨氯地平可下调MCP-1 mRNA的表达,并且对其表达的影响呈现浓度依赖性。结论氨氯地平可下调ox—LDL诱导的人脐静脉内皮细胞MCP-1 mRNA的表达。     

热休克蛋白对H2O2损伤BPAECs的保护作用及其机制探讨

从牛肺动脉内皮细胞（ＢＰＡＥＣｓ）探讨热休克蛋白对肺损伤的保护作用。热处理可减轻过氧化氢所致ＢＰＡＥＣｓ存活率的下降，过氧化氢酶和超氧化物歧化酶活性的降低及脂质过氧化物的增加，增强ＢＰＡＥＣｓ的抗氧化能力，放线菌酮可阻断热处理诱导的ＰＢＡＥＣｓ７０－ＫＤ热休克蛋白的合成，消除其保护作用。     

熊果苷拮抗H2O2损伤的研究

目的通过体外细胞学实验观察熊果苷拮抗H2O2的作用.方法体外培养人脐静脉内皮细胞ECV-304,将细胞分为对照组、损伤组和熊果苷组,熊果苷组提前12h加入熊果苷,500μmol/L H2O2诱导细胞氧化应激状态.光镜实验比较各组细胞形态学的变化;MTT实验比较各组细胞增殖活力的改变.结果光镜下可见,对照组细胞结构清晰,呈单层铺路石状紧密排列;损伤组细胞变形、皱缩、排列紊乱、脱落明显,胞浆内出现空泡;熊果苷组细胞形态结构基本清晰,但细胞有轻度肿胀,其它接近于正常对照组;MTT结果显示,与损伤组相比,熊果苷能明显保护ECV-304细胞增殖活力(P<0.05).结论本实验结果提示,熊果苷可以抵御H2O2所致ECV-304细胞氧化应激损伤.     

硫化氢对H2O2损伤PC12细胞的保护作用

目的 探讨硫化氢对氧化应激损伤PC12细胞的保护作用.方法 以H2O2损伤PC12细胞为氧化应激损伤的模型,甲氮甲唑蓝法检测细胞增殖状况;Hoechst荧光染色观察细胞形态和核形态;碘化丙啶染色、流式细胞术检测细胞凋亡.结果 硫化氢可明显减少H2O2诱导的PC12细胞核呈浓染致密的固缩形态或颗粒状荧光的细胞数;200和400 μmol/L硫化氢均可降低200和400 μmol/L H2 O2作用24 h后对PC12细胞生长的抑制率,明显抑制200和400 μmol/L H2O2作用24 h后对PC12细胞凋亡的诱导作用.结论 硫化氢对氧化应激损伤PC12细胞具有保护作用.     

枸杞黄酮对H2O2损伤的血管内皮细胞NO及NOS作用的研究

目的：研究枸杞黄酮对过氧化氢(H 2 O2)损伤的血管内皮细胞一氧化氮(NO)及一氧化氮合酶(NOS)作用。方法以人脐静脉内皮细胞(HUVEC)为研究对象,建立 H 2 O2诱导 HUVEC 的氧化损伤模型。实验分为正常对照组、H 2 O2组、维生素C(VitC)组、枸杞黄酮低、中、高浓度组(枸杞黄酮100 mg/L、200 mg/L 和400 mg/L 预处理)。用 MTT 法观察枸杞黄酮对 H 2 O2损伤的血管内皮细胞活性的影响,观察枸杞黄酮类化合物对氧化应激损伤细胞过氧化物丙二醛(MDA)、人总一氧化氮合成酶(TNOS)、诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)、及 NO 的作用。结果(1)MTT 结果表明 H 2 O2损伤后内皮细胞生长抑制率(IR)为38.8%;枸杞黄酮低、中、高浓度组 IR 分别为34.0%、30.7%、25.5%,与 H 2 O2组比较差异有统计学意义(P <0.01);(2)与正常对照组相比较,H 2 O2组细胞 NO 活性降低,而 TNOS、iNOS、MDA 生成增加。与 H 2 O2组相比较,枸杞黄酮低、中、高浓度组中NO、TNOS、iNOS、MDA 的变化则相反,与枸杞黄酮呈剂量依赖性(P <0.01)。结论枸杞黄酮对 H 2 O2所致人血管内皮细胞损伤有保护作用,且保护效果与枸杞黄酮呈一定相关性。     

银杏黄酮苷元对人脐静脉内皮细胞ECV304增殖的影响

目的：体外观察银杏黄酮苷元（GA）对人脐静脉内皮细胞ECV304增殖作用的影响,初步探讨其对内皮细胞的保护作用。方法：分别设对照组、空白组和实验组;实验组设GA6.25、12.5、25、50、100、500 mg/L共6个浓度孵育ECV304 48 h,25 mg/LGA与ECV304共同孵育6、12、24及48 h共4个时间点,采用MTT比色法观察GA对人脐静脉内皮细胞ECV304增殖的影响。结果：6.25～50 mg/L GA与ECV304共同培养48 h,细胞形态基本正常,细胞增殖率均大于100%,与对照组（未加药）比较差异显著（P〈0.05）,且各组细胞增殖率随药物浓度增加而增加,P〈0.05;GA25 mg/L和脐静脉内皮细胞ECV304共培养6～24 h,各组细胞增殖率随作用时间延长而增加,各组间比较差异显著（P〈0.05）。结论：银杏黄酮苷元促进人脐静脉内皮细胞ECV304增殖的作用具有时间和浓度效应,提示GA具有保护血管内皮细胞的作用。     

黄芪注射液对高糖所致ECV304细胞损伤的保护作用

目的： 探讨高糖对人脐静脉内皮细胞的损伤作用及其高糖导致细胞损伤的途径,为寻找出更为有效的糖尿病治疗途径提供理论依据。方法： 将体外培养人脐静脉内皮细胞(ECV304细胞)分为高糖组(葡萄糖终浓度35 mmol•L^-1)、黄芪保护组(葡萄糖终浓度35 mmol•L^-1+黄芪终浓度500 mg•L^-1)、甘露醇高渗对照组(简称甘露醇组,甘露醇终浓度35 mmol•L^-1)和正常细胞组,在35 mmol•L^-1的高糖条件下处理ECV304细胞24 h后检测细胞内Ca²⁺浓度、线粒体膜电位的测定并对不同处理组的细胞制作扫描电镜图片,观察细胞及线粒体形态的改变。结果： 高糖组细胞内Ca²⁺浓度显著高于正常细胞组、黄芪保护组、甘露醇组(P<0.05);高糖组的线粒体膜电位显著低于正常细胞组、黄芪保护组、甘露醇组(P<0.05)。黄芪保护组和甘露醇组细胞内Ca²⁺浓度高于正常细胞组(P<0.05),线粒体的膜电位显著低于正常细胞组(P<0.05)。黄芪保护组细胞内的Ca²⁺浓度虽低于甘露醇组,但无显著性差异（P>0.05）;黄芪保护组的线粒体膜电位显著地高于甘露醇组(P<0.05)。电镜下可见,黄芪保护组线粒体形态完好,线粒体内的嵴清晰可见,高糖组的线粒体出现肿胀,线粒体内的嵴消失。黄芪保护组可见到细胞的核分裂相,高糖组坏死细胞增多。甘露醇组细胞形态正常,线粒体的形态正常,线粒体内的嵴清晰可见。结论：黄芪对高糖导致的ECV304细胞损伤,尤其是线粒体损伤有较好的保护作用。     

红景天苷对H2O2诱导子鼠心肌细胞凋亡的影响

目的探讨红景天苷对H2O2诱导子鼠心肌细胞凋亡的影响及其可能的作用机制。方法在原代培养的SD大鼠子鼠心肌细胞上建立H2O2损伤模型,观察不同剂量红景天苷（10、30、90μg／m1）对心肌细胞凋亡率、丙二醛（MDA）含量、超氧化物歧化酶（SOD）活性、乳酸脱氢酶（LDH）活性的影响。结果红景天苷可以减少心肌细胞凋亡率,降低MDA和LDH含量,增加SOD活性。结论红景天苷对H2O2诱导的子鼠心肌细胞凋亡有抑制作用,其作用机制可能与其抗脂质氧化有关。     

过氧化氢对人肝癌细胞株HepG2增殖的促进作用

目的:探讨低剂量过氧化氢(H2O2)对人肝癌细胞株HepG2的促增殖作用及该作用与NF-κB和细胞周期的关系. 方法: 不同剂量H2O2直接作用于培养的HepG2细胞;20 μmol/L NF-κB抑制剂(PDTC)预处理细胞2 h, 50 μmol/L的H2O2作用HepG2细胞;50 μmol/L H2O2分别作用于G1, G2/M, S期细胞,MTT法测定细胞增殖活性. 结果: 50 μmol/L的H2O2具有明显的促进HepG2细胞生长的作用,此作用可以被PDTC抑制;50 μmol/L的H2O2可以明显的促进G1期HepG2细胞生长. 结论: 低剂量H2O2可诱导HepG2细胞增殖,该过程可能包含依赖NF-κB的信号途径的参与;H2O2诱导HepG2细胞增殖在细胞周期的不同时相效应敏感性不同,主要诱导G1期细胞增殖.     

齐墩果酸对损伤血管内皮细胞的保护作用及其机制探讨

目的:探讨齐墩果酸(oleanic acid,OA)对过氧化氢(hydrogen peroxide,H2O2)诱导人血管内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)损伤的保护作用及其机制?方法:培养HUVECs,分为正常组?H2O2模型组?H2O2+OA (0.25 ?滋mol/L)组?H2O2+OA (0.50 ?滋mol/L)组?H2O2+OA (1.00 ?滋mol/L)组?H2O2+维生素C(1.50 mmol/L)组?各组培养24 h后,通过MTT法检测细胞增殖能力,酶生化法测定上清液中的乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)和一氧化氮(nitric oxide,NO)含量,酶生化法测定细胞裂解液中的丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量?谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活力,流式细胞仪测细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)和细胞凋亡率?结果:OA能够恢复H2O2损伤的细胞活力,减轻H2O2诱导的LDH释放,减少H2O2诱导的MDA生成,恢复H2O2损伤的GSH-Px和SOD活力,清除H2O2诱导的ROS,减轻H2O2诱导的细胞凋亡,提高HUVECs细胞NO的生成?结论:OA对损伤血管内皮细胞有保护作用,这与OA能够启动HUVECs细胞内抗氧化防御机制,清除细胞内的ROS,提高HUVECs细胞NO的生成,抑制H2O2诱导的HUVECs细胞凋亡有关?     

槲皮素抗人脐静脉内皮细胞氧化损伤的作用研究

目的观察槲皮素（quercetin,Que）对人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells,HUVECs）过氧化氢损伤的保护作用及可能机制。方法用体外培养的HUVECs传代后进行实验,实验分为3组：对照组常规培养;过氧化氢损伤组;药物干预组加入Que低、中、高浓度组（62.5、125、250 umol/L预处理）。用MTT法观察Que对过氧化氢损伤的内皮细胞活性的影响,各组均测定细胞中超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）、丙二醛（（malondialdehyde,MDA）和乳酸脱氢酶（lactate dehydrogense,LDH）的活性,TUNEL法检测细胞凋亡率。结果 Que使过氧化氢损伤的内皮细胞的脂质过氧化物MDA生成减少,LDH漏出液减少,SOD活力增加;过氧化氢损伤可以诱导内皮细胞凋亡,Que可显著减少过氧化氢诱导的内皮细胞的凋亡。结论 Que处理对过氧化氢所致的内皮细胞的损伤有保护作用,机制可能通过抗脂质过氧化,对氧自由基的清除,以及抗细胞凋亡有关。