某地区乙型肝炎病毒基因BCP区A1762T/G1764A双变异和前C区G1896A突变分析及临床意义

目的探讨江西省赣州地区乙型肝炎病毒感染者血清中HBV基因BCP区双变异(A1762T/G1764A)和前C区G1896A突变的情况及其临床意义。方法收集116例本土感染者一般资料及血清,运用速率法检测丙氨酸转氨酶(ALT)和天冬氨酸转氨酶(AST)含量;ELISA检测HBe Ag;荧光定量PCR检测HBV DNA拷贝数;采用巢式PCR扩增及测序方法检测HBV C启动子A1762T/G1764A双变异和前C区G1896A突变情况并进行统计分析。结果 1肝细胞癌患者在年龄、HBe Ag阴性率、ALT和AST水平方面均高于慢性乙型肝炎患者(P<0.01),而HBV DNA拷贝数则低于慢性乙型肝炎患者(P<0.01);2肝细胞癌患者的A1762T/G1764A、G1896A变异率及联合变异率均高于慢性乙型肝炎患者(P<0.01)。3 HBe Ag阴性患者A1762T/G1764A、G1896A变异率及联合变异率均高于HBe Ag阳性患者(P<0.05)。结论乙型肝炎患者常规的相关指标检测对病情的评估是不全面的,在条件许可情况下,对HBV基因区的BCP双变异(A1762T/G1764A)和前C区G1896A的常见突变位点进行检测,再结合其他的临床资料进行综合分析,可做出更为正确的诊断。     

乙型肝炎病毒C基因启动子区及前C区突变与乙型肝炎病情的关系

目的分析乙型肝炎病毒(HBV)C基因启动子(BCP)双突变及前C区nt1896位点突变与乙型肝炎临床表现及e抗原(HBeAg)表型的关系。方法采用巢式聚合酶链反应(PCR)扩增nt1660~1935的HBVDNA片段及PCR产物直接测序的方法检测BCP区及前C区基因的变异情况。结果130例经证实为HBVDNA阳性的急慢性肝炎患者中共有75例BCP区nt1762、nt1764双突变,HBeAg阳性组BCP突变者32例(58.2%),而HBeAg阴性组43例(57.3%)。检出前C区nt1896突变者20例,其中慢性肝炎10例(12.8%)、重型肝炎2例(25.0%)、肝硬化8例(22.2%);nt1896突变者在HBeAg阳性组3例(5.5%),HBeAg阴性组17例(22.7%),两组比较差异有统计学意义。nt1896突变组丙氨酸转氨酶(ALT)及HBV DNA水平较无突变组差异均有统计学意义。结论BCP双突变及前C nt1896均与肝炎的慢性化、重型化及肝硬化的发生密切相关,前者对HBeAg的表达及HBV-DNA水平并无明显影响;后者影响HBeAg的表达,并且增强病毒复制水平。     

基因芯片技术检测肝细胞癌前C区/BCP区基因突变

目的应用基因芯片技术探讨HBV慢性感染并发肝细胞癌(HCC)前C区/BCP区基因突变的临床意义。方法应用基因芯片杂交技术检测46例HBV慢性感染并发肝细胞癌前C区A1896、A1899及BCP区nt1762、nt1764四位点突变,比较各位点突变的发生率;据乙肝血清学标志熏将研究对象分为HBeAg阳性组、HBeAg阴性组两组,比较前C区/BCP区变异与HBeAg分泌障碍的关系,分析前C区/BCP区基因突变与血清HBVDNA定量的关系。结果①用基因芯片法测定46例患者,阳性率91.3%(42/46),A1896突变率52.4%,A1899突变率19%熏nt1762/nt1764联合突变率66.7%。②HBeAg阴性组与HBeAg阳性组比较,A1896突变率、nt1762nt1764联合突变率及多位点突变率明显为高,P<0.05。前C区/BCP区变异组与非变异组比较,HBVDNA定量无显著性差异。结论应用基因芯片法可一次同时检测乙型肝炎病毒多个突变位点熏HBV持续慢性感染并发的HCC前C区/BCP区变异的发生率较高,该变异与HBeAg分泌障碍有关,但与HBVDNA复制水平并无明显相关性。     

乙型肝炎病毒携带产妇前C区和核心启动子区热点变异及其与宫内感染的关系

目的 研究乙型肝炎病毒(HBV)携带产妇前C区和核心启动子(CP)区热点变异情况及与宫内感染的关系.方法 采用HBV核酸扩增荧光定量检测试剂盒抽提99对无症状乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)阳性携带临产孕妇及其新生儿血清HBV DNA,EIA法检测血清HBsAg、HBeAg,半巢式PCR法扩增产妇HBV前C区、CP区核苷酸片断,ABI3730型DNA自动荧光测序仪对PCR产物直接测序.结果 82例(单阳性52例,双阳性30例)孕妇HBV前C区和CP区核苷酸片断扩增测序成功.无症状HBV携带单阳性孕妇中1896G→A变异的检出率为21.2％(11/52,仅测到1例双阳性孕妇存在1896G→A变异);1899G→A变异仅发生在1例单阳性孕妇,且与1896G→A变异连锁出现.1762A→T/1764C →A变异总是连锁出现,且仅发生于单阳性孕妇,单阳性孕妇中双变异的检出率为17.3％(9/52).1896G→A变异和无该点变异孕妇所生新生儿宫内感染率分别为25.0％(3/12)和37.1％(26/70) (P＞0.05);1762A→T/1764GA变异和无该点变异的单阳性孕妇所生新生儿宫内感染率分别为22.2％(2/9)和37.2％(16/43)(P＞0.05).结论 HBV前C区和CP区1896G→A及1762A→T/1764G →A热点变异在无症状HBV携带单阳性孕妇中有较高的检出率,而在HBsAg、HBeAg双阳性孕妇中的检出率较低.HBV前C区和C启动子区热点变异对宫内感染率无显著影响.     

乙肝病毒基因型及基因变异与原发性肝癌的相关性

目的分析HBV基因型及基因变异与原发性肝癌(PHC)发病的关系。方法采用基因型特异引物PCR法测定HBV基因型,限制性酶切片段长度多态性检测基因亚型;直接测序法检测HBV DNA 1653、1762/1764及1896位点的变异情况;统计比较多个因素在慢性乙型肝炎(CHB)和PHC患者中的异同,并进行危险因素分析。结果与CHB组比较,PHC组患者年龄较大,HBeAg阴性更常见,而ALT水平和HBV DNA载量较低(P<0.05)。CHB组HBV的基因型B型与C型相当,而PHC组绝大多数为C型(P<0.01);两组基因型C型的亚型多为Ce亚型。两组病毒G1896A变异无差异,而PHC组C1653T、A1762G/T1764A变异出现的几率较高(P<0.05)。Logistic回归分析表明只有基因C型和高龄为PHC的独立危险因素。结论 HBV基因型C型为HBV相关PHC发病的独立危险因素;C1653T、A1762G/T1764A变异与PHC有一定相关,但非独立危险因素。     

慢性乙型肝炎乙肝病毒基本核心启动子变异的实验与临床研究

目的 研究乙型肝炎基本核心启动子(BCP)变异与慢性乙型肝炎病情的关系.方法 通过PCR及其产物直接检测128例慢性乙型肝炎(CHB)患者HBV,同时检测患者HBV定量及血清生化指标.结果 128例标本中nt1762、1764变异(双变异)共检出56例,nt1753、1762、1764变异(三变异)共检出10例,肝炎肝硬化(LC)组中双变异明显高于其他CHB组(P＜0.05);双变异组的HBeAg、ALB明显低于无变异组(P＜0.05),三变异组HBeAg明显低于双变异组(P＜0.05).结论 BCP区双变异可减少HBeAg的表达,引起肝功能受损严重并导致肝硬化的发生,BCP区尚有新发现的变异如三变异也可影响HBeAg的表达.     

萍乡地区HBV前C区和BCP区基因突变研究

乙型肝炎病毒是一个双链DNA病毒.HBV感染能导致急、慢性的肝病,其中全球慢性乙型肝炎(CHB)患者超过3.6亿.每年由于HBV慢性感染引起的肝硬化、肝细胞癌死亡患者超过47万人[1].而由于HBV病毒的复制过程缺乏校对机制,在慢性感染的过程中发生基因突变的几率很高,相关研究最多的HBV突变株主要有:一是发生在翻译水平的前C突变(G1896A):二是发生在核心启动子区(BCP区),即A1762T和G1764A的联合突变;三是发生在HBV DNA聚合酶(反转录酶)区的变异包括P区528、552位点的突变.我们采用生物芯片技术检测,对113例乙型病人HBV前C区和BCP区基因多态性进行分析,以探讨其临床意义,现报告如下:     

HBeAg/HBeAb双阳性者血清病毒C基因启动子热点变异分析

目的　了解乙型肝炎患者 HBe Ag和 HBe Ab双阳性状态下 C基因启动子区 ( BCP)变异情况。方法　采用时间分辨荧光免疫分析方法定量检测乙型肝炎“二对半”,对 HBe Ag/ HBe Ab双阳性标本采用巢式聚合酶链反应扩增目的 DNA片段 ,并对阳性的 PCR产物直接标记测序 ,测序结果和 Grenbank中登录的标准序列相比较。结果　对 17例 HBe Ag和 HBe Ab双阳性患者血清中 HBV DNA进行了检测 ,阳性 13例 ,测序结果显示 ,13例 HBV DNA阳性者均存在 T1762和 A1764的突变。结论　在乙型肝炎 HBe转换过程中均伴有 C基因启动子区 T1762与 A1764变异     

慢性重型乙型肝炎患者的乙型肝炎病毒C基因启动子和前C基因变异及与e抗原系统的关系

目的 研究慢性重型乙型肝炎患血清的HBV C基因启动子(CP)和前C基因变异情况。方法 通过DNA扩增、基因序列分析检测75例慢性乙型肝炎(CHB)和14例慢性重型乙肝(CSH)患血清的EIBV CP和前C基因序列，通过微粒子发光法定量检测血清中HBeAg的含量及通过荧光定量PCR技术定量检测血清中的HBV DNA。结果 (1)前C终止变异(nt1896G→A)在CASH组中的发生率显高于CHB组(71．4％和26．7％)；CP双变异(nt1762A→T和1764G→A)则在CASH组和CHB组的发生率无显差异(42．9％和48．0％)。(2)CSH组的HBeAg含量显低于CHB组；CSH组的HBeAb阳性率则显高于CHB组(71．4％和32．0％)。(3)CSH组和CHB组的HBV DNA定量则无明显差异。结论 前C终止变异，对e系统有明显影响，与CSH的发病有关。     

微流芯片检测乙型肝炎病毒前核心区及基本核心启动子变异

乙型肝炎病毒(HBV)可以变异,其基因组存在多个变异位点[1]。HBV变异常出现在某些特定位点(热点变异),如前核心区(前C区,nt1896)及启动子(BCP,nt1762/1764)变异。同一患者可同时存在野生株和变异株,其比例可随时间而变     

Main mutations in the hepatitis B virus basic core promoter (A1762T/G1764A) before HBeAg loss are markers that identify patients who will require long‐term treatment

Aliment Pharmacol Ther 2010; 32: 97–104

Summary

Background Some patients continue to have detectable HBV‐DNA levels with liver disease progression after hepatitis B e antigen (HBeAg) loss. It is important to identify these patients, candidates for long‐term treatment. Aims To evaluate hepatitis B virus (HBV) genotype and the main mutations in the basic core promoter (BCP, A1762T/G1764A) and precore (G1896A) sequences as markers of persistent HBV‐DNA after HBeAg loss. Methods We analysed 60 serum samples from 20 Caucasian, HBeAg‐positive, chronic hepatitis B patients, who lost HBeAg and were followed‐up longitudinally. HBV genotype and precore and BCP mutations were determined before, at the time of, and after HBeAg loss. Results After HBeAg loss, eight (40%) patients continued to have undetectable HBV‐DNA and 12 (60%) had persistent HBV‐DNA (median level 4.7 log₁₀ copies/mL). The presence of BCP mutations prior to therapy was the only variable associated with persistently detectable viraemia (P = 0.017). Four patients with genotype A and no mutations in the BCP region experienced hepatitis B surface antigen (HBsAg) loss after a mean period of 35 months from baseline. Conclusions Main BCP mutations in HBeAg‐positive patients are useful markers to identify patients who will not have sustained virological suppression after HBeAg loss and therapy discontinuation and could benefit from long‐term treatment.     

Precore/core promoter mutations and hepatitis B virus genotype in hepatitis B and C dually infected patients treated with interferon-based therapy

We studied the prevalence and distribution of precore/basal core promoter (BCP) mutations and hepatitis B virus (HBV) genotypes in HBV/hepatitis C virus (HCV) dually-infected patients, and evaluated their impact on long-term HBV response of interferon (IFN)-based therapy. The HBV genotypes and sequences of the precore/BCP regions were determined in 180 HBV/HCV dually-infected patients and were compared with 90 age, sex and hepatitis B e antigen-matched chronic hepatitis B controls. Serum HBV DNA and hepatitis B surface antigen (HBsAg) were assessed every 3-6 months after therapy with IFN or pegylated-IFN plus ribavirin in 135 dually-infected patients with active hepatitis C. Dually-infected patients had a higher prevalence of genotype C HBV (P = 0.022) and a lower frequency of G1896A mutation (P = 0.004) as compared with controls. Among dually-infected patients, genotype C was associated with a higher frequency of A1762T/G1764A mutation (P < 0.001), but with lower HBV DNA (P < 0.001) and a lower frequency of A1752T/G (P = 0.008), C1799G (P < 0.001) and G1896A mutation (P < 0.001) than genotype B. Based on Cox proportional hazards model, young age (hazard ratio (HR) = 0.952, P = 0.001), sustained virological response to HCV (HR = 4.638, P = 0.044), C1766T mutation (HR = 5.216, P = 0.003) and A1846T mutation (HR = 2.332, P = 0.031) correlated with HBV DNA reactivation (?2000 IU/ml) after therapy. Age (HR = 1.068, P = 0.020), G1896A mutation (HR = 0.140, P = 0.01) and A1846T mutation (HR = 0.086, P = 0.018) were associated with HBsAg seroclearance independently. In conclusion, specific mutations in the precore/BCP regions could be useful in predicting long-term HBV response in HBV/HCV dually-infected patients treated with IFN-based therapy.     

乙型肝炎病毒X蛋白截断变异对HBeAg含量和HBV DNA定量的影响

目的研究乙型肝炎病毒(HBV)X蛋白截断变异对HBeAg含量和HBV DNA定量的影响。方法通过DNA扩增、基因序列分析检测75例慢性乙肝和14例慢性重型乙肝和34例肝硬化病人血清的HBV X基因和前C基因序列,通过微粒子发光法定量检测血清中HBeAg的含量,以及通过荧光定量PCR技术定量检测血清中的HBVDNA。结果(1)9例检出X蛋白截断变异。(2)同无变异组比较,X蛋白截断变异组、CP双变异(nt 1762A→T,1764G→A)组和前C基因终止变异(nt 1896G→A)组的HBeAg含量均显著下降,其中前C终止变异组HBeAg血清转换最为明显。(3)同无变异组比较,X蛋白截断变异组的HBV DNA含量无明显差异。结论X蛋白截断变异影响HBeAg表达,但影响程度不及前C基因终止变异;X蛋白截断变异对HBV DNA定量无明显影响。     

HBV-前C区基因变异与乙肝病毒复制的相关性

目的 研究乙型肝炎病毒(HBV)前C区G1896A变异与乙肝病毒复制的相关性.方法 选取38例慢性轻度,57例慢性中度,29例慢性重度的乙型肝炎患者为研究对象.采用突变特异PCR技术检测HBV前C基因nt1896位点突变情况,并对血清中HBVDNA进行测序.同时检测乙型肝炎病毒HBeAg/抗-Hbe、HBVDNA定量、肝纤维化指标.结果 (1)抗Hbe阳性者在单纯变异株感染的慢性乙型肝炎患者中所占的比例(84.61%)高于单纯野生株感染者(24.32%).(2)随着变异株感染率的增加,HBVDNA的含量增高.(3)随着变异株感染率增加,肝脏纤维化分期的逐渐加重.结论 前C区G1896A变异与乙肝病毒的复制程度相关.     

乙型肝炎病毒C基因启动子热点变异的检测及分析

目的　探讨乙型肝炎病毒C基因启动子 (CP)热点变异的临床意义。方法　应用克隆测序的方法检测 2 0例HBV感染者HBVCP序列 ,并结合临床进行分析。结果　 10例HBeAg(+)患者中 ,CP的T176 2、A176 4联合变异有 2例 (2 0 % ) ;10例HBeAg(- )患者中T176 2、A176 4联合变异有 7例 (70 % ) ,χ2 =6 73,P <0 0 5 ,有显著性差异。结论　T176 2、A176 4联合变异多见于HBeAg(- )的慢性乙型肝炎患者。