双功能域重组FN多肽抑制癌细胞浸润能力的研究

在制备了两个ＣｅｌｌＩ－ＨｅｐⅡ双结构域重组ＦＮ多肽的基础上，研究其抑制肿瘤细胞浸润能力的作用。两个多肽的结构差异是ＣＨ５０中删除了ＣｅｌｌⅠ和ＨｅｐⅡ之间的Ⅲ－１１和ＥＤ－Ａ结构顺序。ＣＨ５０结合结构的能力略高于ＣＨ５６。     

迷走神经递质P物质对人类肝癌细胞侵袭转移能力的影响及其分子机制

目的探讨迷走神经递质P物质对肝癌细胞侵袭转移能力的影响及其相关分子机制。方法实时荧光定量PCR及琼脂糖凝胶电泳检测并分析两种人肝癌细胞株Hep G2和SMMC-7721中神经肽-1(NK-1)受体表达;Cell Titer Blue检测不同浓度P物质(0、100、250、500 nmol/L)在不同时间点(0、24、48、72、96、120 h)对肝癌细胞增殖能力的影响;肝癌细胞均经不同浓度的(0 nmol/L,对照组;100 nmol/L,实验组)P物质处理48 h,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭功能,Western blot检测细胞中上皮-间质转化蛋白质标志表达变化,实时荧光定量PCR及Western blot检测NK-1受体表达变化。结果 Hep G2和SMMC-7721两种人肝癌细胞中均有NK-1受体表达;不同浓度P物质(0、100、250、500 nmol/L)在96 h内不影响两种细胞的增殖能力(P>0.05),而在120 h 250 nmol/L和500 nmol/L P物质可抑制两种细胞增殖(P<0.05);100 nmol/L P物质明显促进两种细胞迁移和侵袭能力(P<0.05);与对照组相比,实验组细胞NK-1受体表达明显上调(P<0.05),同时,细胞中上皮-间质转化蛋白质标志E-Cadherin表达下调,N-Cadherin和Slug表达上调(P<0.05)。结论迷走神经递质P物质与人肝癌细胞中表达的NK-1受体相互作用并使其表达上调,促进细胞发生上皮-间质转化,进而提高其侵袭转移能力。     

RhoC表达对喉鳞癌Hep2肿瘤细胞凋亡、肿瘤干细胞标志物-ALDH1A1及细胞形态的影响

目的 研究Ras同源类似物C （ras homology C,RhoC）对喉鳞状细胞癌生物学行为的影响。方法 通过脂质体转染技术将外源基因导入喉鳞状细胞癌细胞-Hep2肿瘤细胞,抑制/增强肿瘤细胞中RhoC表达,TUNEL法检测RhoC对Hep2肿瘤细胞凋亡的影响,罗丹明标记的鬼笔环肽染色细胞骨架观察Hep2肿瘤细胞形态变化,实时荧光定量核酸扩增检测（real-time quantitative polymerase chain reaction detecting system,QPCR）方法检测RhoC对Hep2肿瘤细胞肿瘤干细胞标志物乙醛脱氢酶A1（aldehyde dehydrogenase 1 family,member A1,ALDH1A1）的表达的影响。结果 抑制RhoC表达可使Hep2肿瘤细胞凋亡增强,肿瘤细胞群中肿瘤干细胞标志物ALDH1A1 mRNA表达水平降低;改变RhoC表达后,肿瘤细胞形态发生了不同的改变。结论 RhoC在喉鳞癌的转移中具有重要的作用,以RhoC为治疗靶点在控制肿瘤转移方面具有重要的临床应用价值。     

CH50多肽对IFN-γ基因转染癌细胞体内生长及免疫刺激作用的影响

探讨重组FN多肽CH50对IFN-γ基因转染癌细胞体内生长及免疫刺激作用的影响。将小鼠IFN-γ基因转染黑色素瘤B16/Fl细胞,测定其表达产物与CH50协同刺激巨噬细胞产生NO的作用、转染细胞接种小鼠并注射CH50时对脾细胞的免疫刺激作用及瘤细胞的体内生长特性。结果表明,转染细胞表达产物可与CH50协同作用刺激巨噬细胞产生NO。转染细胞表达IFN-γ水平较低,仍可在体内形成肿瘤,注射CH50能够抑制其形成肿瘤。基因转染细胞和CH50能够促进脾细胞对肿瘤细胞的杀伤能力。研究表明,CH50不仅可以提高肿瘤疫苗的安全性,也可以提高肿瘤疫苗刺激机体免疫系统的作用。并提示,表达CH50和IFN-γ双因子的肿瘤疫苗可为提高肿瘤疫苗治疗肿瘤的效果开辟新的途径。     

caveolin-1脚手架样结构域多肽对HEp2细胞迁移和侵袭能力的影响

目的研究caveolin-1脚手架样结构域(caveolin-scaffolding domain,CSD)多肽对HEp2细胞迁移和侵袭能力的影响,并探讨其分子机制。方法 CSD多肽和乱序多肽由人工合成得到,并在N'末端用生物素标记。用免疫细胞化学法检测CSD多肽在HEp2细胞中的渗透情况,划痕实验检测细胞的迁移能力,Transwell细胞体外侵袭实验检测细胞的侵袭能力;免疫印迹法检测HEp2细胞中FAK蛋白的表达水平及磷酸化程度。结果免疫细胞化学检测显示CSD多肽能够较好地进入HEp2细胞内;CSD多肽组HEp2细胞迁移能力明显低于乱序组和空白对照组(P均0.01),而乱序肽组与空白对照组之间差异无统计学意义(P0.05);CSD多肽组发生侵袭的细胞数明显低于乱序组和空白对照组(P均0.01),而乱序肽组与空白对照组之间差异无统计学意义(P0.05);免疫印迹法检测结果显示,CSD多肽组FAK相对磷酸化程度明显低于乱序组与空白对照组(P均0.01)。结论 caveolin-1脚手架样结构域多肽可顺利进入HEp2细胞内,而且可以抑制肿瘤细胞的迁移和侵袭能力,FAK磷酸化水平的下调可能是其中重要的分子机制。     

扶正抗癌方抑制HepG2细胞诱导EMT机理探讨

目的探讨扶正抗癌方(FZKAF)对体外培养的人肝癌细胞Hep G2迁移与侵袭能力的影响及可能的机制。方法将细胞随机分为实验组和对照组,实验组给予FZKAF处理,对照组不添加任何药物,用MTT法测定两组Hep G2细胞的活力,再分别采取细胞-基质黏附实验、划痕实验、Transwell侵袭及迁移实验测定Hep G2细胞黏附,侵袭及迁移的能力;最后通过明胶酶谱实验测定Hep G2细胞内TGF-β1的酶活性。结果 FZKAF能抑制Hep G2细胞的增殖,呈浓度依赖性,细胞-基质黏附实验、划痕实验、Transwell侵袭及迁移实验表明实验组细胞的黏附,侵袭及迁移的能力明显低于对照组(P0.05);明胶酶谱实验显示,随着FZKAF浓度的增加可以明显抑制Hep G2细胞内TGF-β1的酶活性。结论一定剂量的FZKAF在体外可以抑制Hep G2细胞的粘附,迁移和侵袭,其机制可能是通过抑制TGF-β1的酶活性,抑制其表达,从而阻断肿瘤细胞的EMT过程有关。     

东亚钳蝎蝎毒多肽组分Ⅲ对肝癌细胞凋亡的影响

目的：探讨东亚钳蝎蝎毒多肽组分Ⅲ对肝癌细胞凋亡的影响及其诱导凋亡的初步机制。 方法：将人肝癌细胞株Hep G2浸润在不同浓度的蝎毒多肽组分Ⅲ溶液中,应用DNA凋亡梯状带分析法和DNA末端转移酶介导的末端标记法（TUNEL法）测定凋亡的发生及凋亡率;用Western blotting方法观察Bcl-2蛋白和Caspase-3的表达量。 结果：蝎毒多肽组分Ⅲ引起的肝癌细胞株Hep G2凋亡呈剂量依赖性变化。DNA凋亡呈现明显的梯状带电泳行为。经5、10、50、100及200 mg·L^-1蝎毒多肽组分Ⅲ处理12 h 后,肝癌细胞凋亡率分别为（6.1±3.0）%、（15.3±4.9）%、（48.5±5.2）%、（66.7±6.5）%和（91.2±6.9）%。凋亡伴随着bcl-2基因的表达下调,在凋亡过程中Caspase -3被激活。 结论：东亚钳蝎蝎毒多肽组分Ⅲ可以促进人肝癌细胞株Hep G2的凋亡,并且这种凋亡可能与通过下调bcl-2基因和激活Caspase-3途径有关。     

Cystatin C与恶性肿瘤的关系

浸润及转移是恶性肿瘤的特征性表现,肿瘤细胞能产生多种水解酶(如半胱氨酸蛋白酶,无花果蛋白酶等)降解细胞外基质,破坏宿主黏膜屏障。近年来,研究人员发现半胱氨酸蛋白酶抑制剂C(Cystatin C)能有效的抑制细胞内外的半胱氨酸蛋白酶的活性,从而间接抑制肿瘤的浸润转移,因此有望成为肿瘤检测及治疗的分子指标。     

桂皮酸诱导高转移人肺癌细胞去恶性的研究

本文作者选用桂皮酸处理克隆化高转移人肺巨细胞癌（PGCL3）细胞，发现肿瘤细胞在形态、增殖速度、分裂指数、软琼脂集落形成能力和凝集反应等方面均出现向正常细胞表型逆转，证明栓皮酸具有抑制PGCL3细胞增殖及诱导分化的作用。我们还进行了反映肿瘤细胞浸润和转移能力的粘附、运动和降解侵袭实验，结果显示桂皮酸对PGCL3细胞的上述三种能力都有明显的抑制作用，表明桂皮酸在诱导PGCL3细胞向成熟方向分化的同时，还使肿瘤细胞的浸润和转移能力减弱。     

胃腺癌Bcl-2、增殖细胞核抗原表达及DNA含量与癌浸润转移的关系

目的:研究细胞凋亡抑制基因Bcl2、增殖细胞核抗原(PCNA)及DNA含量与胃腺癌浸润转移的关系,探讨癌浸润转移的可能机制。方法:采用免疫组化SP法检测65例胃腺癌中Bcl2、PCNA的表达,同时用组织化学Feulgen染色方法及计算机图像分析技术对其DNA含量指数(DI值)进行检测。结果:①Bcl2、PCNA表达、DI值与胃腺癌浸润深度及淋巴结转移均有关;②Bcl2表达与PCNA表达呈正相关;③PCNA表达与DI值呈正相关。结论:胃腺癌的发展(浸润、转移)在一定程度上是肿瘤细胞不断增殖和凋亡抑制的结果,高的肿瘤细胞增殖能力常提示胃腺癌高的浸润转移能力。     

Comparative Study on the Inhibitory Effect of RecombinantFN Polypeptide CH50 and CH56 on the Metastasis ofMelanoma Cells

Intactmoleculesoffibronectinhavenoinhibitoryeffectonthemetastasisoftumorcells.RecombinantCellIorHepI(singledomain)polypeptidesoffibronectin,expressedinE.colt,arenotabletoinhibitthemetastasesoftumornomattertheywereusedaloneorasamixture.ButtheinhibitoryeffectcanbeachievedwhenCellIandHepIdomainsoffibronectinwerepreparedasarecombinantbifunctional--domainpolypeptideexpressedinE.coliLlj.ItisnotclearuntilnowthatrecombinantCellI-Hep1polypeptideinhibitsthemetastasisoftumorcellsbecauseotherdomains…     

中国汉族人IgE重链恒定区CH2、CH3及CH4亚基cDNA的克隆

人血清中高水平的IgE是哮喘、过敏性鼻炎、慢性荨麻疹等过敏性疾病的标志,而IgE与效应细胞上IgE高亲和力受体(FcεRⅠ)的相互作用则是这些Ⅰ型变态反应的重要调节步骤[1].很长时间以来,找到抑制它们结合从而治疗过敏性疾病的方法,一直是过敏性疾病研究的重点,所以了解这两个蛋白相互识别的方式以及结合的位点是极为重要的.     

Augmentation of Recombinant Fibronectin Polypeptide CH50 on the Antitumor Function of Macrophages

Fibronectin(FN)isamulti-domainglycoproteinwithcomplicatedregulatoryfunctionsllj.TheapplicationofFNtothetherapyofdiseaseshasbeentriedsince1983,buthampered'becauseofthecomplexityofitsfunctionslll.Inrecentyears,theresearchonFNwasconcentratedonthefunctionsofitsdomainfragments.IthasbeenprovedthattheFNfragmentcontainingCellIdomaincouldenhancethefunctionofmonocyte--macrophage['--'J,suggestingthatdomainfragmentofFNcouldbeveryusefulinthetherapyofdiseases.WehaverecombinedcDNAfragmentsofCellIdoma…     

Inhibitory Effect of recombinant FN polypeptide CH50 on the metastasis and tumor growth

Immunotherapycouldremoveresidualtumorcellsbyenhancinganti-tumorfunc-tionofimmunesystemaftersurgicalre-movaloftumor.ltisatime-consumingtofullyactivateimmunece11sandformstrongcytotoxicityontumorcellsinvivo.ltisim-perativetofindawaytoactivateanti-tumoractivityofimmunecellsquick1yenoughinvivosothattheresidualtumorcellscouldbeattackedasearlyaspossible.CH5oisabifunctiona1-domainrecombinantpolypep-tidewhichcontainsCellIandHepIdo-mainsofhumanfibronectin(FN)andisabIetoexpressinE-coli[lj.Thispolypep-…     

Augmentation of recombinant CH50 polypeptide on the function of macrophages of mice during chemotherapy

CH50 is a Cell I- Hep Ⅱ bifunctional-domain recombinant polypeptide of human fibronectin expressed in E. colilll. This polypeptide can inhibit theinvasion and metastasis of tumor cells 1'n the[2] andactivate the anti--tumor activity of macrophages[']. Ithas been reported that this polypeptide andchemotherapeutic agent have a synergistic inhibitoryeffect on the metastasis of tumors[4J. In this study,we further investigated the effect of CH50 on thefunction of macrophages of mice during chem…     

小叶锦鸡儿二氯甲烷萃取物的抗炎作用

[目的]研究小叶锦鸡儿二氯甲烷萃取物对小鼠炎症的抑制作用.[方法]将小鼠随机分组,分别灌胃给予不同剂量的小叶锦鸡儿二氯甲烷萃取物,采用二甲苯及巴豆油致小鼠耳壳肿胀,7 d后观察耳壳肿胀度.[结果]小叶锦鸡儿二氯甲烷萃取物中剂量组小鼠二甲苯和巴豆油所致耳壳肿胀度明显降低.[结论]小叶锦鸡儿二氯甲烷萃取物对小鼠炎症具有抗炎作用.     

Effect of polypeptide CH50 on macrophage activationin vivo and antitumor function

Surgery,chemotherapy and radiotherapy aremajor methods used in tumor therapy.After the re-moval of large tumor tissue by surgery,the mainproblem to be faced with is the inhibition and elimi-nation of the residual tumor cells in vivo. Ifmacrophages can be effectively activated,the residualtumor cells could be inhibited and eliminated as earlyas possible,the conditions favorable to the induce-mentof specificimmune response againsttumorcouldalso be created. Recombinant polypeptide CH50 wasprepar…     

内蒙古自治区2010-2018年新生儿PKU和CH筛查情况分析

目的：总结内蒙古自治区2010年到2018年新生儿遗传代谢病筛查以来苯丙酮尿症(PKU)和先天性甲状腺功能减低症(CH)的筛查情况,与全国多地的筛查情况对比,探讨内蒙古地区新生儿遗传代谢病筛查存在的问题及未来发展对策。方法：由内蒙古自治区新生儿疾病筛查中心获得PKU和CH的筛查数据。所有筛查对象在出生后72h针刺足跟采血。PKU采用时间分辨免疫荧光法测定血液苯丙氨酸浓度,CH筛查采用时间分辨免疫荧光分析法测定促甲状腺素浓度。结果：内蒙古2010年至2018年期间,共对834868例新生儿进行了PKU和CH筛查,平均筛查率为42.77%,PKU和CH初筛阳性召回率为84.02%和85.02%,共检出患儿106例(确诊率为1/7876),检出CH患儿207例(确诊率为1/4033)。与国内多地比较,内蒙古地区筛查覆盖率和召回率相对较低,PKU发生率相对较高,CH发生率相对较低。结论：内蒙古自治区新生儿疾病筛查有效预防了PKU和CH导致的出生缺陷,目前筛查覆盖度和召回复查率与国内大部分地区相比较低,应加强管理和宣传,通过多种途径提高新生儿疾病筛查率和复查率。