DMD基因第50号和第51号内含子的克隆和测序

用ＤＭＤｃＤＮＡ８探针从假肥大型肌营养不良（Ｄｕｃｈｅｎｎｅｍｕｓｃｕｌａｒｄｙｓｔｒｏｐｈｙ，ＤＭＤ）基因的ＹＡＣ克隆的ｃｏｓｍｉｄ亚克隆库中筛选到９个阳性ｃｏｓｍｉｄ克隆，Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交鉴定ｃｏｓｍｉｄＣ０４６１含ＤＭＤ基因的第５１号外显子，将该ｃｏｓｍｉｄ亚克隆于ｐＶＣ１１８中，获得含ＤＭＤ基因第５０和５１号内含子的３．１ｋｂ－ＨｉｎｄⅢ片段的亚克隆，将亚克隆的插入片段分别用Ｓａｕ３ＡⅡ完全和部分酶切克隆于ｐＵＣ１１８中，Ｓａｎｇｅｒ法双链测序测出质粒克隆的序列并重叠所测出的序列，确定该片段的长度为３１７９ｂｐ。与Ｓｐｅｅｒ测出的该段序列（３１５９ｂｐ）比较相差２０ｂｐ，有３３处不同。并发现有重复顺序存在，它们之间可能会发生重组并可能导致第５１号外显子的缺失。     

假性肥大型肌营养不良症第50和51号内含子的结构特点及51号外显子的缺失机制

假性肥大型肌营养不良症第５０和５１号内含子的结构特点及５１号外显子的缺失机制盛文利柴建华刘焯霖假性肥大型肌营养不良症第５０和５１号内含子的结构特点及５１号外显子的缺失机制@盛文利@柴建华@刘焯霖...     

抗肌萎缩蛋白基因51号外显子的筛选及其两侧内含子的亚克隆

用ｃＤＭＤｓ探针，从人Ｘ染色体噬菌体文库中筛选并作ＤＮＡ印迹杂交鉴定出含有抗肌萎缩蛋白基因５１号外显子的克隆。经限制酶切图谱分析，确定ＫｐｎⅠ和ＨｉｎｄⅡ为亚克隆位点，从而获得了与抗肌萎缩蛋白基因５１号外显子相连的５０和５１号内含子亚克隆，为该区段的核苷酸顺序分析打下了基础。     

抗肌萎缩蛋白基因DNA缺失机制的探讨

用Ｇｅｎｅｐｒｏ程序在计算机上对肌萎缩蛋白基因缺失热区部分４４号、５０号和５１号内含子进行分析，结果表明该基因缺失热区ＡＴ含量高，呈聚集性分布，并存在多个同源顺序。该结果支持作者以前提出的“不同内含子中ＡＴ富集区的同源顺序与ＤＮＡ缺失有关”的结论。     

抗肌萎缩蛋白基因DNA缺失机制的探讨

用Ｇｅｎｅｐｒｏ程序在计算机上对抗肌萎缩蛋白基因缺失热区部分４４号、５０号和５１号内含子进行分析，结果表明该基因缺失热区ＡＴ（腺嘌呤－胸腺嘧啶）含量高，呈聚集性分布。并存在多个同源顺序。该结果支持作者以前提出的“不同内含子中ＡＴ富集区的同源顺序与ＤＮＡ缺失有关”的结论。     

抗肌萎缩蛋白基因51号外显子的精确定位

抗肌萎缩蛋白基因是迄今发现的人类最大基因，长约2300kb，含有75个外显子。对该巨大基因的研究是近年来医学分子生物学研究的一个热点。虽然抗肌萎缩蛋白基因Hind Ⅱ片段排序后就知道第51号外显子位于3．1kb的第40号Hind Ⅱ片段中，由于抗肌萎缩蛋白基因组DNA至今未被克隆，     

抗肌萎缩蛋白基因51号外显子的精确定位

抗肌萎缩蛋白基因是迄今发现的人类最大基因,长约2300 kb,含有75个外显子。对该巨大基因的研究是近年来医学分子生物学研究的一个热点。虽然抗肌萎缩蛋白基因HindⅢ片段排序后就知道第51号外显子位于3.lkb的第40号HlndⅢ片段中,由于抗肌萎缩蛋白基因组DNA至今未被克隆,233bP的第51号外显子在3.lkp HindⅢ片段中的部位并不知道,也不知道它两侧的DNA结构。51号外显子     

DMD基因内含子的重复序列与内含子不稳定性和基因缺失的关联

【目的】为了研究DMD基因内含子的重复序列与内含子不稳定性和基因缺失的关联，我们分析了缺失型DMD病人的连接片段的断裂点并研究了DMD基因内含子结构与内含子不稳定性之间是否存在相关。【方法】多重引物PCR法鉴定缺失型DMD患者，分别克隆46和51号外显子缺失后形成的连接片段，测定连接片段的序列；并用计算机分析DMD基因可以获得的全部内含子的结构特点。【结果】对46号和51号外显子缺失后形成的连接片段的序列分析表明，5’和3’端的断裂点均位于重复顺序，断裂点附近无小插入、小缺失或点突变。对连接片段的二级结构分析表明，所有的断裂点均位于单链发夹结构的非匹配区。对DMD基因可以获得的全部内含子的结构分析表明，在DMD基因全长内含子中重复序列占大约34．8％。大量重复序列的存在是许多内含子的重要结构特征。【结论】重复序列是DMD基因多数内含子的关键结构，与内含子的不稳定性相关。在原有DNA序列的基础上，单链发夹结构的形成增加了DMD基因的不稳定性，形成了基因断裂的基础，单链发夹结构的形成导致两个断裂点的靠近，最终导致了基因缺失。     

糖尿病视网膜病变与血管紧张素转换酶基因多态性的关系

为探讨血管紧张素Ⅰ转换酶（ＡＣＥ）基因插入／缺失（Ｉ／Ｄ）多态性与非胰岛素依赖型糖尿病（ＮＩＤＤＭ）及其视网膜病变的关系，以ＡＣＥ基因第１６内含子１个２８７ｂｐＡｌｕ顺序Ｉ／Ｄ型为多态性标志，用聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增基因片段，１％琼脂糖凝胶电泳ＰＣＲ产物。结果８７例ＮＩＤＤＭ与５０例正常人之间基因频率无显著差异；ＮＩＤＤＭ合并视网膜病变与未合并视网膜病变２组间基因型频率和等位基因频率无显著差异。提示糖尿病视网膜病变与ＡＣＥ基因多态性无关。     

一个BMD家族基因短串联重复顺序多态性分析

目的：在一个一代发病的Ｂｅｃｋｅｒ型肌营养不良稼系中进行等位片段长度多态性分析,识别患者,携带者及正常后代不同的单体型。方法：用多重聚合酶链反应方法扩增Ｄｙｓｔｒｏｐｈｉｎ基因外显子,检测有无外显子缺失,用聚合酶链反应方法扩增位于Ｄｙｓｔｒｏｐｈｉｎ基因内含子的短串联重复顺序（ＳＴＲ４４,ＳＴＲ４５,ＳＴＲ４９,ＳＴＲ５０）,所得产物进行等位估算长度多态性。结果：先证者第１７,１９及４５号外显子缺     

DMD基因内含子的重复序列与内含子不稳定性和基因缺失的关联

[目的]为了研究DMD基因内含子的重复序列与内含子不稳定性和基因缺失的关联,我们分析了缺失型DMD病人的连接片段的断裂点并研究了DMD基因内含子结构与内含子不稳定性之间是否存在相关.[方法]多重引物PCR法鉴定缺失型DMD患者,分别克隆46和51号外显子缺失后形成的连接片段,测定连接片段的序列;并用计算机分析DMD基因可以获得的全部内含子的结构特点.[结果]对46号和51号外显子缺失后形成的连接片段的序列分析表明,5'和3'端的断裂点均位于重复顺序,断裂点附近无小插入、小缺失或点突变.对连接片段的二级结构分析表明,所有的断裂点均位于单链发夹结构的非匹配区.对DMD基因可以获得的全部内含子的结构分析表明,在DMD基因全长内含子中重复序列占大约34.8%.大量重复序列的存在是许多内含子的重要结构特征.[结论]重复序列是DMD基因多数内含子的关键结构,与内含子的不稳定性相关.在原有DNA序列的基础上,单链发夹结构的形成增加了DMD基因的不稳定性,形成了基因断裂的基础,单链发夹结构的形成导致两个断裂点的靠近,最终导致了基因缺失.     

猴附睾特异性表达基因LCN6第5号内含子的克隆及分析

用PCR法扩增了猴LCN6基因第5号内含子区的基因组DNA片断，并将该片断克隆到T-载体中，用Southern Blot的方法鉴定阳性克隆。经测序后与人LCN6基因的第5号内含子相比较，两者的同源性达到了87％。根据对已有小鼠，大鼠，猴及人LCN6基因第5号内含子DNA序列比较，可知在LCN6基因的进化中由于基因组DNA序列，特别是剪切位点的改变使得原本在小鼠中转录的一个转录子mLCN6β在大鼠、猴及人中不被转录。     

南方汉族人群中血管紧张素转换酶基因多态性的分布特点

南方汉族人群中血管紧张素转换酶基因多态性的分布特点刘志红陈朝红关天俊张京红黎磊石血管紧张素转换酶（ＡＣＥ）基因第１６号内含子中存在插入（ＩｎｓｅｒｔｉｏｎⅠ）和缺失（ＤｅｌｅｔｉｏｎＤ）两种多态型，表现为插入纯合子（Ⅱ）、缺失纯合子（ＤＤ）以及缺失和...     

中国人细胞色素P450_2D_6基因第1号和第9号外显子多态性

利用聚合酶链反应－限制性片段长度多态性（ＰＣＲ－ＲＦＬＰ）技术对８３名正常中国人ＣＹＰ２Ｄ６基因的第１号和第９号外显子的多态性做了分析。结果发现，在ＣＹＰ２Ｄ６基因的第１８８位点Ｃ→Ｔ的频率为０．５９，第４２６８位点Ｇ→Ｃ的频率为０．６６，而且Ｔ１８８／Ｔ１８８纯合子及Ｃ４２６８／Ｃ４２６８纯合子的比率分别为０．３８和０．３４。与国外报道比较，发现中国人ＣＹＰ２Ｄ６基因的这２个位点的多态性分布规律与西方人有明显的不同。这可能有助于解释中国人在药物代谢及某些疾病（如帕金森病等）的易感性方面与西方人的差异。     

血管紧张素转移酶基因多态性与冠心病关系的研究

目的：研究血管紧张素转换酶（ＡＣＥ）基因多态性与冠心病的关系。方法：应用聚合酶链式反应（ＰＣＲ）检测ＡＣＥ基因第１６内含子Ｉ／Ｄ多态性,并计算基因型和等位基因频率。结果：在５１例冠心病组中ＡＣＥ基因ＤＤ基因型和Ｄ等位基因频率分别是３５％和６１％,８３例正常对照组中的ＡＣＥ基因ＤＤ基因型和Ｄ等位基因频率分别是１６％和４５％,两者相比具有显著性差异,结论：ＡＣＥ基因ＤＤ基因型可能 是冠心病发生发展过程     

妊娠高血压综合征与血管紧张素转化酶关系的研究

为探讨血管紧张素Ⅰ转化酶（ＡＣＥ）基因第１６内含子插入／缺失多态与妊娠高血压综合片的关系，聚合酶链反应技术，检测６０例妊高征患者及３８例正常妊娠妇女ＡＣＥ基因的插入／人状态。６０例妊高征患者中，ＡＣＥ基因Ⅱ型和ＤＤ型频率分别为１５％和６５％，而３８例正常晚妊妇女中则分别为５０％和１０．５％。提示Ⅱ型基因是妊高征的保护性基因，ＤＤ型基因是妊高征的易感基因。     

Dystrophin基因3～5号外显子缺失连接片段的克隆和测序

目的 通过对抗肌萎缩蛋白（dystrophin）因3～5号外显子缺失后连接片段的克隆和测序分析,探讨dystrophin基因缺失的发生机制。方法 先以外显子PCR反应检测证实1例杜氏肌营养不良症患者3～5号外显子缺失,然后在2、5号内含子上用PCR步移方法寻找断裂位点,最后用靠近断裂位点处设计的引物,以PCR法直接扩增dystrophin基因的缺失连接片段并测序,测序结果和正常内含子序列作对比分析。结果 获得2113bp PCR产物,本例基因缺失片段长约49000bp。5’端断裂点位于2号内含子短散在元件Alu序列内,3’端断裂点在单一序列,附近有TTTAAA序列。断裂点附近有较强的拓扑异构酶Ⅱ酶切位点。连接片段插入了26bp序列并在断裂点周围形成3个13bp的短序列重复（GGCTTATATTTAA）连接断裂点两端。结论 推测重复序列、断裂点附近较强的拓扑异构酶Ⅱ酶切位点关联易引起基因的断裂重组,加上非同源末端连接修复机制等综合因素可能是导致基因缺失的重要原因。     

多重聚合酶链反应检测DMD基因的初步分析

目的 在更广泛的区域内寻找ＤＮＤ基因的缺失范围。方法 用２５对引物以多重ＰＣＲ技术对１７例ＤＭＤ或ＢＭＤ患者进行ＤＭＤ基因检测。结果 ８例患者（４７．１％）被检出ＤＭＤ基因片段性缺失,其中７例患者的缺失部位集中在４４～５１号外显子,另１例患者的缺失部位处于ＤＭＤ基因的５′端。结论 我国ＤＭＤ或ＢＭＤ患者ＤＭＤ基因的缺失热点主要位于该基因的中央部位,但亦有基因上游大片段的缺失。     

顺序特异引物聚合酶链反应技术HLA－DR1，DR51组的基因快速分型

采用快速基因分型技术对人类白细胞抗原（ＨＬＡ）－ＤＲ１、ＤＲ５１组准确分型，为临床选择理想配型的供受者提供依据。根据核苷酸序列合成系列特异引物，借助ＰＣＲ技术，建立顺序特异引物聚合酶链反应方法（ＰＣＲ－ＳＳＰ）快速基因分型方法，对６９例肾移植供受者ＨＬＡ－ＤＲ１、ＤＲ１５、ＤＲ１６和ＤＲ１０分型，同时与血清学方法对比研究。分型结果采用限制性内切酶分析和寡核苷酸探针杂交证实。结果：６９例供受者ＨＬＡ－ＤＲ１、ＤＲ５１组ＰＣＲ－ＳＳＰ分型均获成功，无假阳性和假阴性，总耗时５ｈ，分型结果经酶切分析和探针杂交证实符合。血清学分型耗时２４ｈ，误差率达３２．４％。结论：ＰＣＲ－ＳＳＰ用于ＨＬＡ－ＤＲ１、ＤＲ５１组基因分型，具有快速、精确的特点，适合于临床应用。     

内蒙古地区蒙古族人群ACE基因多态性

目的：分析ＡＣＥ 基因第１６ 内含子Ｉ／Ｄ 在内蒙古地区蒙古族人群中分布的多态性。方法：ＤＮＡ 提取自９６ 名健康蒙古族,应用ＡＣＥ 基因内含子１６ 多态部位侧翼的前体进行ＰＣＲ 反应。等位基因在琼脂胶上电泳,紫外灯下观察。结果：蒙古族ＤＤ、ＤＩ和ＩＩ基因型的频率是０－５１、０－２６ 和０－２３ 。等位基因Ｄ 和Ｉ频率是０－６４ 和０－３６ 。结论：内蒙古地区蒙古族ＤＤ、ＤＩ和ＩＩ基因型频率和汉族人群之间有显著性差异。蒙古族人群中ＡＣＥ 等位基因和基因型的分布;Ｄ 等位基因比Ｉ等位基因频率高,ＤＤ 基因型是最普遍的。