病理性损伤因素对肾小管上皮细胞表型转化的影响

目的 :观察低血清、高糖、高蛋白刺激下肾小管上皮细胞向间叶性细胞的表型转化 ,探讨损伤的肾小管上皮细胞在肾小管间质纤维化中的作用。方法 :以体外培养的人近端肾小管上皮细胞为对象 ,分别用含低血清(0 .2mol·L-1小牛血清 )、高葡萄糖 (4.5 g·L-1)、高白蛋白 (15 g·L-1)的培养液培养 7d ,透射电镜检测细胞形态变化 ;免疫组化和Westernblot检测细胞表型改变 ,包括CK、Vimentin、α SMA、Ⅰ和Ⅲ型胶原 ,原位杂交检测Ⅰ型胶原mRNA表达 ,同时检测细胞TGFβ1蛋白表达。 结果 :低血清、高糖、高蛋白直接刺激下 ,肾小管上皮细胞出现明显形态学改变 ,包括细胞变为长梭形 ;透射电镜下细胞内线粒体明显减少 ,粗面内质网明显增加 ,并出现actin样微丝。免疫组化染色和Westernblot显示CK表达明显减弱 ,Vimentin、Ⅰ、Ⅲ型胶原、α SMA和TGFβ1表达增强。原位杂交显示Ⅰ型胶原mRNA表达增强。结论 :低血清、高糖、高蛋白可直接引起人近端肾小管上皮细胞TGFβ1表达增加 ,并发生向间叶性细胞的表型转化     

罗格列酮对人肾小管上皮细胞转分化的影响

目的：观察罗格列酮（rosiglitazone,RGZ）对TGF-β1刺激人肾小管上皮细胞转分化的影响。方法：人肾小管上皮细胞（HK一2）经同步培养后分为3组：正常对照组,TGF-β1刺激组,TGF-β1＋RGZ组（10μmol／LRGZ）。给予TGF-~I刺激24h后,分别应用WesternBlot和免疫荧光方法检测上皮细胞转分化相关指标的表达变化;应用Transwellassay检测细胞迁移能力。结果：①与正常对照组比较,TGF-β1刺激组细胞呈梭形变,E-钙黏素蛋白表达减弱（P〈0．01）,波形蛋白、纤维连接蛋白表达增强（P〈0．01）;细胞的迁移能力亦明显增强。②与TGFq31刺激组比较,TGF-β1＋RGZ组细胞恢复为多边形或圆形,E-钙黏素蛋白表达增加（P〈0．01）,波形蛋白、纤维连接蛋白表达减弱（Pd0．01）;细胞的迁移能力亦明显减弱。结论：①TGF-β1刺激后HK一2细胞出现表型转化。②RGZ能够减弱TGF-β1刺激下HK一2细胞的表型转化。     

罗格列酮对高糖大鼠肾小管上皮细胞表达转化生长因子β1和纤维连接蛋白的影响

目的:观察罗格列酮(rosiglitazone,RGZ)对高糖环境下大鼠肾小管上皮细胞(NRK52E)转化生长因子β1(TGF_β1)和纤维连接蛋白(FN)表达的影响,初步探讨罗格列酮对糖尿病肾病的保护作用。方法:体外培养大鼠肾小管上皮细胞,分成正常对照组NG(含1000mg/LD_葡萄糖)、高糖组HG(含4500mg/LD_葡萄糖)、HG+RGZ(5μmol/L)组、HG+RGZ(10μmol/L)组和HG+RGZ(15μmol/L)组,用蛋白印迹的方法(Westernblotting)检测TGF_β1和FN蛋白表达的改变。结果:HG组细胞TGF_β1和FN的蛋白水平较NG组显著升高,加入罗格列酮后,TGF_β1和FN的表达较HG组降低。结论:罗格列酮可以抑制高糖诱导的小管细胞TGF_β1和FN高表达,具有一定的肾保护作用。     

罗格列酮对糖尿病兔肾间质纤维化和氧化指标的影响

目的探讨罗格列酮（RSG）对糖尿病兔肾脏间质纤维化和血清氧化指标的影响。方法将28只新西兰大白兔随机分为3组,正常对照组（NC组）、糖尿病组（DM组）、罗格列酮干预组（RGS组）。四氧嘧啶耳缘静脉注射建立糖尿病模型,RGT干预组给予罗格列酮（1.0mg·kg^-1·d^-1）直接灌胃。在第16周未时测定各组血糖、肾重/体重、24h尿蛋白、尿纤维连接蛋白（FN）、尿Ⅳ型胶原（ColⅣ）和血清丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）和总抗氧化力（TOC）。结果与NC组相比,DM组肾重/体重、24h尿蛋白、肌酐清除率、尿FN、尿ColⅣ以及血MDA水平明显升高（P〈0.05）,血SOD、TOC水平明显降低（P〈0.05）。与DM组相比,RGT组肾重/体重、24h尿蛋白、肌酐清除率、尿FN、尿ColⅣ以及血MDA水平明显降低（P〈0.05）,血SOD、TOC水平明显升高（P〈0.05）。结论RGS对糖尿病肾间质纤维化具有一定的保护作用,其机制可能与减少氧化应激水平有关。     

衰老对大鼠视网膜色素上皮细胞ROS生成和NADPH氧化酶表达的影响

目的衰老对大鼠视网膜色素上皮细胞(RPE)活性氧物质(ROS)生成及对尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)氧化酶表达的影响。方法实验分为青年组(3月龄)和老年组(16月龄)大鼠,二氢乙啡啶(DHE)染色检测RPE ROS的生成,HE染色观察RPE形态学变化,免疫组化检测视网膜及RPE蛋白激酶Cα(PKCα)、P47phox和NADPH氧化酶2(NOX2)的表达。结果与青年组大鼠比较,老年组大鼠RPE ROS的生成明显增加。HE染色结果显示,青年组和老年组大鼠视网膜及RPE形态学未见明显差异。免疫组化结果表明,老年组大鼠视网膜及RPE PKCα、P47phox和NOX2的表达明显增加。结论老年大鼠RPEROS生成和NADPH氧化酶表达明显增加,NADPH氧化酶介导的ROS可能是年龄相关性视网膜病变的机制之一。     

罗格列酮对高糖刺激下肾小管上皮细胞整合素β1表达的影响

目的观察罗格列酮(R os ig litazone,RO S)对肾小管上皮细胞整合素水平的影响。方法将体外培养的大鼠近端肾小管上皮细胞分为对照组、正常血糖组(N)、高糖组(H)、正常培养液 罗格列酮组(RO S)、高糖 罗格列酮低浓度组和高糖 罗格列酮高浓度组六组,采用W estern B lot及RT-PCR了解不同浓度的罗格列酮(5μm o l/L、10μm o l/L)对高糖刺激(30mm o l/L)下整合素1β(In tegrin-beta1)蛋白质水平表达的影响。结果高糖刺激下,In tegrin1β(84710.79±1810.4)较对照组(23283.17±827.55)及正常葡萄糖组(47896.31±2014.63)明显增加(P<0.05),RO S组In tegrin1β(22609.49±1076.26)较高糖组降低,RO S 10μm o l/L组(38603.43±1409.30)的降低程度较RO S 5μm o l/L组(31327.16±1721.36)更明显。结论罗格列酮可明显抑制高糖刺激下肾小管上皮细胞In tegrin1β的表达,且有明显剂量依赖关系。     

罗格列酮对2型糖尿病肾病的影响

糖尿病肾病是糖尿病严重的慢性微血管并发症，已成为导致终末期肾功能衰竭的最主要病因，尿微量白蛋白排泄增加，预示着早期糖尿病肾病的存在，是心血管疾病的危险因子，也是代谢综合征的指标之一。早期诊断和有效干预治疗可延缓糖尿病肾病的发生和发展。罗格列酮通过激活过氧化物酶体增殖物激活受体（PPAR-r）来增加胰岛素敏感性，改善胰岛素抵抗，还能减少尿微量白蛋白的排泄。本研究观察罗格列酮对2型糖尿病微量白蛋白的影响。现报道如下。     

罗格列酮对糖尿病大鼠肾脏氧化应激的影响

目的 研究罗格列酮对糖尿病大鼠肾组织氧化应激的影响.方法 36只雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组(NC)、糖尿病组(DM)、糖尿病罗格列酮治疗组(DK).腹腔注射链脲佐菌素(STZ)诱导糖尿病模型,罗格列酮[5mg/(kg·d)]对DK组进行治疗性灌胃.8周末称取体重、肾重、肾重/体重,检测尿白蛋白排泄率(UAER)及尿肌酐;测定各组生化指标包括血糖(BG)、胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、血清肌酐(SCr);检测肾组织与尿中丙二醛(MDA)的含量及肾组织超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)与谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性;PAS染色作肾组织切片分析肾小球面积、肾小球体积及系膜区面积.结果 8周时,与DM组比较,DK组大鼠BG、TC、TG差异无显著性.DM组大鼠肾重、肾重/体重、UAEK、Ccr、肾小球面积、肾小球体积、系膜区面积较NC组均明显增加,DR组上述改变较DM组均明显减轻(P<0.05).DK组肾组织及尿中MDA含量明显低于DM组,SOD、CAT、GSH-Px活性明显高于DM组(P<0.05).结论 罗格列酮对糖尿病大鼠肾组织有明显保护作用.其机制部分可能与抑制肾组织氧化应激有关.     

罗格列酮对2型糖尿病患者血清抵抗素的影响

①目的探讨罗格列酮对2型糖尿病患者血清抵抗素水平和胰岛素敏感性的影响。②方法40例2型糖尿病患者给予罗格列酮治疗12周，治疗前后分别测定其血清抵抗素水平和胰岛素抵抗指数（HOMA-1R）。③结果治疗后血清抵抗素的水平下降（P〈0．05）、胰岛素抵抗指数显著下降（P〈0．01）。④结论罗格列酮降低血清抵抗素的水平与胰岛素抵抗指数，对改善糖尿病患者血压、血糖及血酯具有重要意义。     

霉酚酸酯对糖尿病大鼠肾小管上皮细胞转分化的影响

目的探讨霉酚酸酯(MMF)对糖尿病大鼠肾小管上皮细胞转分化的影响及其可能机制。方法雄性SD大鼠28只,随机选取8只作为正常对照组(N组),其余20只注射链脲佐菌素(STZ)制作糖尿病模型,并随机分为糖尿病组(DM组)、霉酚酸酯组(M组)。12周后测量大鼠血糖、体质量、肾质量/体质量、24 h尿蛋白定量、血肌酐(SCr),观察肾小管间质病理形态学变化,应用免疫组化技术和Western blot检测肾组织中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及转化生长因子β1(TGF-β1)的表达。结果 DM组血糖、肾质量/体质量、24 h尿蛋白定量、血SCr、肾小管-间质损伤指数(TII)均明显高于N组(P<0.01),M组除血糖、体质量外(P>0.05),其余指标均明显低于DM组(P<0.01);免疫组化结果显示,DM组肾小管上皮细胞胞浆中α-SMA、TGF-β1表达均明显高于N组(P<0.01),M组明显低于DM组(P<0.01);Western blot结果显示,DM组肾组织α-SMA、TGF-β1表达较N组分别增加3.4倍与1.1倍,M组肾组织α-SMA、TGF-β1表达较DM组分别下降55%与40%。结论 MMF能下调糖尿病大鼠肾小管上皮细胞α-SMA、TGF-β1的表达,抑制肾小管上皮细胞转分化,起到肾脏保护作用。     

醛固酮对肾小管上皮细胞凋亡的影响

目的 研究醛固酮(ALD)对体外培养的肾小管上皮细胞凋亡的影响及其机制.方法 人肾小管上皮细胞(HK-2)培养于无血清DMEM/F12培养液中,以不同浓度的ALD(O、10-11、10-10、10-9和10-8 mol/L)刺激细胞48 h后,Annexin V/PI双染流式细胞术检测ALD对HK-2细胞凋亡的影响 ;Western blotting检测ALD对HK-2细胞中Bax和Bcl-2蛋白表达的影响.结果 流式细胞术结果表明,随着ALD浓度的升高,凋亡细胞百分率逐渐增多,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05).Western blotting结果表明,随着ALD浓度的升高,Bax蛋白表达量逐渐增加,Bcl-2蛋白表达量逐渐减少,Bax/Bcl-2比值增加.结论 ALD可以通过调节凋亡调控蛋白Bax和Bcl-2的表达促进肾小管上皮细胞凋亡,进而促进肾小管间质纤维化的进展.     

柴胡皂苷D对人肾小管上皮细胞转分化的影响及机制

目的探讨柴胡皂苷D(SSD)对人肾小管上皮细胞转分化的影响及其作用机制。 方法将人肾小管上皮细胞HK-2细胞分为对照组、空白溶剂对照组、肾间质纤维化(RIF)组(5 μg/L TGF-β1)、阳性对照组(5 μg/L TGF-β1+10 μmol/L贝那普利)、SSD组(5 μg/L TGF-β1+10.00 μmol/L SSD)、SSD+DKK-1组(5 μg/L TGF-β1+10.00 μmol/L SSD+100 μg/L DKK-1)。光学显微镜观察各组细胞形态变化,免疫荧光检测细胞E-钙黏素(E-cadherin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达,Western blotting检测细胞基质金属蛋白酶(MMP)-7、Snail、E-cadherin、α-SMA、β-catenin蛋白表达,qRT-PCR检测细胞胶原蛋白Ⅰ(Collagen Ⅰ)相对表达量。 结果对照组、空白溶剂对照组细胞有序、紧密排列,RIF组细胞呈现出长梭形且细胞排列分散;阳性对照组、SSD组和SSD+DKK-1组中长梭形细胞较RIF组减少且细胞分散程度降低。RIF组E-cadherin荧光斑低于对照组(P＜0.05),α-SMA荧光斑和MMP-7、Snail、E-cadherin、α-SMA、β-catenin蛋白表达、Collagen Ⅰ基因相对表达量高于对照组(P＜0.05)。阳性对照组、SSD组E-cadherin荧光斑和蛋白表达高于RIF组(P＜0.05),α-SMA荧光斑和MMP-7、Snail、α-SMA、β-catenin蛋白表达、Collagen Ⅰ基因相对表达量低于RIF组(P＜0.05)。SSD+DKK-1组E-cadherin荧光斑和蛋白表达高于SSD组(P＜0.05),α-SMA荧光斑和MMP-7、Snail、α-SMA、β-catenin蛋白表达、Collagen Ⅰ基因相对表达量低于SSD组(P＜0.05)。 结论SSD可抑制人肾小管上皮细胞转分化,可能与抑制Wnt/β-catenin途径活化有关。     

纳米细菌对肾小管上皮细胞的损伤及晶体滞留的影响

目的：研究纳米细菌（nanobacteria,NB）对HK-2细胞的损伤作用及机制,并探讨损伤后细胞与一水草酸钙（calcium oxalate monohydrate,COM）晶体粘附性的变化。方法：应用肾结石患者血清培养NB,免疫组化法对NB进行鉴定。实验分为4组：空白对照组、NB组、纳米级羟基磷灰石（nanograde hydroxuapatite,nHAP）组和COM组。HK-2细胞与各组作用物共同培养12、24 h后进行形态学观察;培养6、12、24 h后取培养液进行过氧化氢（H₂O₂）、LDH、MDA含量测定,消化细胞并超声粉碎后进行Na^+/K⁺ 及Ca ²⁺ / Mg ²⁺ ATP酶活性的测定;培养6、12、24 h后各组分别加入COM晶体,利用异硫氰酸荧光素-鬼笔环肽进行细胞荧光染色,于激光共聚焦显微镜下观察细胞与COM晶体的粘附情况。结果：NB组、nHAP组12 h后出现细胞形态改变,刷状缘排列紊乱,胞浆、胞核松散,空泡形成;24 h后线粒体肿胀,部分细胞核膜溶解、核仁消失,NB组核膜溶解细胞数量多于nHAP组。NB组12、24 h H₂O₂含量高于空白对照组、nHAP组,6、24 h MDA含量高于空白对照组、nHAP组,但NB组各时间点LDH含量与空白对照组、nHAP组无明显差异。Na⁺ /K⁺ ATP酶活性在12 h后,NB组、nHAP组低于空白对照组,24 h后,仅NB组低于空白对照组;Ca ²⁺ /Mg ²⁺ ATP酶活性在12 h后,NB组、nHAP组低于空白对照组,24 h后仅NB组低于空白对照组。12 h后,NB组粘附COM晶体数量较前增多,而COM组还可见到部分晶体已进入细胞内;24 h后,NB组与COM组晶体粘附情况与12 h相近。空白对照组与nHAP组未观察到细胞与显著数量的COM晶体粘附。结论：NB对共同培养的HK-2细胞造成损伤,损伤程度随作用时间加长而加重,并强于nHAP,损伤过程中有脂质过氧化反应参与。NB损伤细胞后,细胞的晶体粘附性明显增强,随损伤作用时间的延长,细胞与一水草酸钙晶体的粘附量也会相应地增加;nHAP损伤细胞后未对细胞的晶体粘附性产生显著影响。     

依那普利对大鼠肾间质纤维化中肾小管上皮细胞凋亡的作用

目的：观察依那普利对肾间质纤维化大鼠肾小管上皮细胞凋亡的影响,探讨依那普利抗肾间质纤维化的 作用机制。方法：将24只SD雄性大鼠随机分为假手术组(n=8)、模型组(n=8)和依那普利治疗组(n=8)。对模型组和依 那普利治疗组大鼠行左侧输尿管结扎术,建立单侧输尿管梗阻(unilateral urethral obstruction,UUO)模型。术后14 d处 死大鼠,留取梗阻侧肾组织分别进行HE和Masson染色,观察各组大鼠肾组织病理改变,用脱氧核糖核苷酸末端转移 酶介导的缺口末端标记法[terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated (dUTP) nick end-labeling,TUNEL]染色检查肾小 管上皮细胞凋亡,免疫组织化学及蛋白质印迹法检测Fas相关死亡结构域(Fas-associated death domain,FADD)、凋亡蛋 白酶活化因子-1(apoptotic protease activating factor-1,APAF-1)、C/EBP同源蛋白(C/EBP homologous protein,CHOP)的 蛋白表达。结果：HE染色、Masson染色显示模型组肾间质损伤指数、肾间质纤维化指数均较假手术组明显增高(均 P<0.05),依那普利治疗组肾间质损伤指数、肾间质纤维化指数均较模型组明显降低(均P<0.05)。TUNEL染色显示模 型组肾小管上皮细胞凋亡计数较假手术组明显增多(P<0.05),依那普利治疗组肾小管上皮细胞凋亡数较模型组明显减 少(P<0.05)。免疫组织化学及蛋白质印迹法显示模型组肾组织FADD,APAF-1和CHOP的蛋白表达均较假手术组明显 增多(均P<0.05),依那普利治疗组肾组织FADD,APAF-1和CHOP的蛋白表达均较模型组明显降低(均P<0.05)。结论： 依那普利可通过抑制UUO大鼠的肾小管上皮细胞凋亡而起到抑制肾间质纤维化的作用。     

微小RNA-138/NGAL对缺血再灌注诱导人肾小管上皮细胞的影响

目的 探究微小RNA-138(microRNA-138,miR-138)调控中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(neutrophil gelatinase-associated lipocalin,NGAL)对缺血/再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)诱导人肾小管上皮(HK-2)细胞损伤的影响。方法 HK-2细胞构建I/R模型,分别转染miR-138模拟物、miR-138抑制剂、NGAL、NGAL+miR-138模拟质粒,qRT-PCR测定不同细胞miR-138或NGAL mRNA表达鉴定转染结果,细胞活力检测(cell counting kit-8,CCK-8)法和流式细胞术测定细胞活性和凋亡。ELISA、Western blot法分别测定miR-138模拟物、miR-138抑制剂对I/R细胞白细胞介素(interleukin,IL)-6、IL-1β、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)水平,以及Toll样受体4(toll like receptor 4,TLR4)、核因子κB(nuclear factor kappa-B...     

黄芪注射液对KKA~y小鼠肾小管上皮细胞转分化的影响

目的探讨黄芪注射液治疗肾间质纤维化的作用机制,为临床中药治疗糖尿病肾间质纤维化提供实验依据。方法将16只2型糖尿病模型KKAy小鼠随机分为模型组和黄芪注射液治疗组,另取8只C57BL/6J小鼠作为正常组,治疗组小鼠14周龄开始腹腔注射黄芪注射液。于24周龄处死小鼠,取肾脏分别观察肾组织病理形态学变化,免疫组织化学法检测小鼠肾组织中α-平滑肌肌动蛋白、钙依赖性跨膜糖蛋白和转化生长因子β1的表达。结果可见模型组发生明显的纤维化改变,而经黄芪注射液治疗后,小鼠肾间质基质轻度增多,病变较轻微。治疗组KKAy小鼠肾组织中α-平滑肌肌动蛋白、转化生长因子β1的表达较模型组减少,钙依赖性跨膜糖蛋白的表达增多。结论黄芪注射液可在一定程度上减少α-平滑肌肌动蛋白的表达,抑制KKAy小鼠肾脏组织中转化生长因子β1表达,上调钙依赖性跨膜糖蛋白的表达水平,阻断并逆转肾小管上皮-间质转化的过程,延缓肾小管上皮细胞转分化的发生发展进程。     

低密度脂蛋白活化人肾小管上皮细胞促进肾间质成纤维细胞生？…

目的 观察低密度脂蛋白（ＬＤＬ）对近曲肾小管上皮细胞（ＨＫ－２）的作用;探讨经ＬＤＬ活化的ＨＫ－２对肾间质成纤维细胞（ＲＩＦＢ）生物学表型的影响。方法 用＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入和细胞计数法评价细胞增殖：Ｎｏｒｔｈｅｒｎ和Ｗｅｓｔｅｒｎ杂交方法检测α－平滑肌肌动蛋白（α－ＳＭ－ａｃｔｉｎ）;间接竞争抑制酶联免疫吸附法测定纤粘连蛋白和蛋粘连蛋白含量;＾３Ｈ－脯氨酸掺入法测定细胞总胶原成分的合成;逆转录聚合     

软脂酸对肾小管上皮细胞TLR4表达的影响

目的通过研究软脂酸(PA)对肾小管上皮细胞Toll样受体4(TLR4)表达的影响,初步探讨游离脂肪酸(FFA)在引发肾脏微炎症反应的相关作用机制。方法体外培养大鼠肾小管上皮细胞(NRK-52E),采用不同浓度软脂酸进行干预,用RT-PCR法检测12 h、24 h后肾小管上皮细胞TLR4 mRNA水平,ELISA方法检测24 h后IL-6、TNF-α的表达。结果软脂酸组的TLR4、IL-6、TNF-α表达较对照组均明显升高,且呈现一定的浓度依赖趋势(P<0.05)。结论软脂酸可能是通过刺激肾小管上皮细胞表达TLR4而促进肾脏炎症反应。