通过抑制ERK1/2通路诱导肝癌细胞SMMC-7721凋亡的研究

目的应用细胞外信号调节激酶(ERK)1/2抑制剂U0126研究ERK1/2在肝癌细胞增殖、凋亡中的作用。方法以肝癌SMMC-7721细胞株为材料,分为空白对照组及不同浓度的U0126处理组。以MTT检测细胞增殖情况,流式细胞仪分析细胞周期及细胞凋亡情况。结果不同浓度的U0126处理后均可明显抑制肝癌SMMC-7721细胞的增殖(P<0.05,P<0.01),使处于G0/G1期的细胞明显增多(P<0.05)且呈剂量依赖性,并诱发细胞凋亡发生(P<0.05)。结论阻断ERK1/2通路有可能成为肝癌治疗的重要手段。     

丝裂霉素诱导人肝癌细胞凋亡的研究

本研究旨在观察在体外丝裂霉素(ＭＭＣ)对人肝癌细胞凋亡的诱导作用 ,从凋亡的角度探讨其抗癌机理 ,现将结果报道如下。一、材料与方法1.细胞培养及实验分组 :人肝癌ＢＥＬ 740 2细胞株来自中国科学院上海细胞所 ,用含高糖的ＤＭＥＭ培养液 ,补充体积分数为 12 %的胎牛血清、青霉素 (10 4 Ｕ/Ｌ)、键霉素 (10 0 μｇ/Ｌ) ,于37℃ ,体积分数为 5 %的ＣＯ2 孵箱中培养。实验分药物处理组与对照组 ,处理组又分 2× 10 -2 、2× 10 -3 、2× 10 -4 ｇ/ＬＭＭＣ 3种浓度 ,作用时间为 2 4ｈ。2 .透射电镜 :将浓度为 2× 10 -2ｇ/Ｌ的ＭＭＣ处理Ｂ…     

双荧光素染色检测5-氟尿嘧啶及羟基喜树碱诱导的肝癌SMMC-7721细胞凋亡的研究

我们用 5 氟尿嘧啶 (5 Ｆｕ)、羟基喜树碱 (ＨＣＰＴ )在体外诱导人肝癌细胞ＳＭＭＣ 772 1产生凋亡 ,并用双荧光染料吖啶橙 /溴乙锭 (ＡＯ/ＥＢ)染色结合ＤＮＡ电泳法进行观察 ,结果报道如下。一、材料与方法将 1× 10 8/ＬＳＳＣ 772 1细胞 (中国科学院上海细胞学研究所 )接种于含体积分数为 10 %小牛血清的ＲＰＭＩ 164 0培养液中 ,于 3 7℃ ,体积分数 5 %ＣＯ2培养 2 4ｈ ,细胞铺满瓶底 ,呈对数生长时加入 5 Ｆｕ、ＨＣＰＴ使二者终浓度分别为75ｍｇ/Ｌ、1ｍｇ/Ｌ ,再继续孵育 ,分别于6、12、2 4、48ｈ观察结果。细胞孵育至特定时间 …     

Lupeol对肝癌SMMC-7721细胞增殖及凋亡的影响

【摘要】〓目的〓探讨羽扁豆醇(lupeol)对人肝癌SMMC-7721细胞生长和凋亡的作用及机制。方法〓采用MTT法检测lupeol对肝癌细胞 SMMC-7721和正常肝细胞L-02的增殖抑制作用,流式细胞法检测细胞凋亡情况,Western blot检测TRAIL受体及抗凋亡蛋白表达变化,比色法分析caspase-8、-9、-3酶活性改变。结果〓lupeol对SMMC-7721细胞具有明显的增殖抑制作用(IC50=40 μmol/L),而对正常肝细胞L-02无细胞毒作用;lupeol在30、40、50 μmol/L浓度范围诱导SMMC-7721细胞48小时的凋亡率分别为5.5%、12.6%、28%;抗凋亡蛋白c-FLIPL表达下调,caspase-8及caspase-3活性增强均呈剂量依赖性。结论〓Lupeol通过下调c-FLIPL表达激活caspase通路诱导肝癌细胞凋亡,对肝癌细胞增殖发挥抑制作用。     

丁酸钠对人肝癌细胞株SMMC-7721的诱导分化作用及其机制

目的 探讨丁酸钠(Sodium Butyrate,NaB)抑制人肝癌细胞株SMMC-7721细胞生长、诱导其凋亡的分子机制.方法 采用噻唑蓝(MTT)比色法、倒置显微镜观察药物对细胞生长的影响并绘制细胞增殖抑制曲线;透射电镜观察细胞凋亡的形态变化;流式细胞术分析细胞周期;半定量RT-PCR方法检测细胞p21WAF1基因mRNA的表达水平;Western blot检测细胞p21WAF1蛋白的表达变化.结果 NaB对人肝癌细胞生长的抑制呈剂量依赖和时间依赖关系.将细胞周期阻滞于G0/G1期,NaB上调p21WAF1 mRNA及蛋白的表达.结论 NaB具有抑制人肝癌SMMC-7721细胞增殖、诱导其凋亡的作用,这种作用可能是通过上调p21WAF1 mRNA及蛋白完成的.     

survivin基因反义寡核苷酸对人肝癌细胞株SMMC-7721细胞凋亡与细胞周期的调控作用

目的研究survivin基因反义寡核苷酸转染对人肝癌细胞株SMMC-7721细胞周期、细胞凋亡的作用及其可能的作用机制。方法采用脂质体介导survivin基因反义寡核苷酸转染人肝癌SMMC-7721细胞,透射电镜观察细胞超微结构,流式细胞术检测细胞周期及细胞凋亡,RT-PCR方法检测cyclin B1 mRNA的表达。结果survivin反义寡核苷酸转染后细胞内cyclin B1表达由0.36±0.03增加至0.91±0.03,同时G2-M期细胞及凋亡细胞比例分别由5.81%及0.7%明显增加至42.11%及31.35%,同时细胞超微结构呈典型凋亡样改变。结论survivin基因反义寡核苷酸转染细胞后可以通过诱导cyclinB1的表达,导致G2-M期阻滞,从而诱导细胞凋亡的发生。survivin基因反义寡核苷酸转染可以作为治疗肝癌的重要新方法。     

丁酸钠诱导人肝癌细胞凋亡机制

丁酸钠（NaB）作为一种组蛋白去乙酰化酶（HDAC）抑制剂，已被证实能抑制多种体外培养的肿瘤细胞增殖、诱导肿瘤细胞衰老和凋亡。我们拟用NaB作用于人肝癌SMMC-7721细胞，采用FCM检测细胞周期、逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）方法及Western blot方法在mRNA及蛋白水平检测p21WAF。     

阿霉素诱导人肝癌细胞凋亡机制的研究

探讨阿霉素诱导HCC-9204细胞凋亡的作用机制,及其与凋亡相关基因Bcl-2和Bax表达的关系。方法用TUNEL法和流式细胞仪观察和检测阿霉素对HCC-9204细胞增殖周期的影响以及细胞凋亡,并检测HCC-9204细胞中Bcl-2和Bax蛋白的表达水平。结果阿霉素能够显著诱导HCC-9204细胞凋亡,染色显示有典型的凋亡特征。在药物处理24h后流式细胞仪检测出显著的“亚二倍体峰”。阿霉素作用HCC-9204细胞后,Bcl-2蛋白表达明显减少(P<0.05);而Bax蛋白的表达虽有所增加,但与对照组相比差异无显著性(P>0.05)。结论阿霉素能诱导癌细胞凋亡,是其发挥抗癌作用的重要机制之一,这可能与其下调Bcl-2基因表达有关。     

重组人生长激素对体外培养的SMMC-7721肝癌细胞生长的影响

目的 探讨重组人生长激素(rhGH)对体外培养的Bel-7721肝癌细胞生长的影响及机制.方法 采用放射配体法检测SMMC-7721肝癌细胞生长激素受体(GHR)的表达.采用噻唑蓝(MTT)比色法检测Bel-7721肝癌细胞株在不同浓度rhGH(0、1.33、13.33、133.30、1333.00μg/L)作用下的药物敏感性,计算细胞生长率;用流式细胞仪检测肝癌细胞在上述浓度rh-GH作用下细胞周期各时相细胞比率、增殖指数(PI)以及凋亡率.结果 rhGH对体外培养的SMMC-7721肝癌细胞的生长具有一定程度刺激作用,表现为rhGH在133.30μg/L浓度促进肝癌细胞增殖较显著,而rhGH在其他浓度(1.33、13.33、1333.00μg/L)对肝癌细胞增殖虽也表现出一定程度的促进作用,但总体效果较rhGH在133.30 μg/L浓度为弱.rhGH作用48 h后流式细胞检测各实验组S期所占比率、PI均较对照组升高(P<0.05);G_2-M细胞所占比率,13.33、133.30与1333.00μg/L组较对照组显著增高(P<0.05),1.33μg/L与对照组比较差异无统计学意义;各实验组凋亡率与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05).放射配体法发现SMMC-7721肝癌细胞株表达GHR.结论 一定浓度范围的rhGH对7721肝癌细胞生长有促进作用,原因可能与7721肝痛细胞表达GHR,rhGH可促进肝癌细胞DNA合成,提高细胞分裂增殖能力有关.     

芬太尼和瑞芬太尼对人肝癌细胞SMMC-7721生物学特性的影响

目的观察芬太尼和瑞芬太尼对人肝癌细胞SMMC-7721增殖、凋亡以及迁移能力的影响。方法体外培养人肝癌细胞SMMC-7721至对数期,接种到96孔板或6孔板中,随机均分为11组:1个空白对照组(N组)、5个芬太尼组(F1、F2、F3、F4、F5组)和5个瑞芬太尼组(R1、R2、R3、R4、R5组)。F1、F2、F3、F4、F5组对应的芬太尼终浓度为0.5、5、50、500、1 000ng/ml,R1、R2、R3、R4、R5组对应的瑞芬太尼终浓度为0.5、5、50、500、1 000ng/ml,每组设6个平行副孔,N组加入等剂量的培养基。每组均孵育24、48和72h,用CCK-8法检测细胞的增殖活性;孵育24h时应用流式细胞仪检测细胞凋亡情况和细胞周期分布;孵育48h时应用划痕实验检测细胞迁移能力。结果与N组比较,当药物浓度≥5ng/ml时随着浓度的增高芬太尼组和瑞芬太尼组的细胞活性逐渐降低,细胞凋亡率逐渐升高,G0/G1期比例逐渐增加,S期比例逐渐减少,细胞迁移能力逐渐降低(P0.05)。结论芬太尼和瑞芬太尼能剂量依赖性地抑制人肝癌细胞SMMC-7721的增殖,降低该肝癌细胞的迁移能力,可能与促进细胞凋亡,影响细胞周期有关。     

肝癌SMMC-7721细胞中侧群细胞干细胞标记的表达

目的 分选肝癌细胞株SMMC-7721中的侧群(SP)细胞,并分析其干细胞标记的表达.方法 采用流式细胞荧光激活分选(FACS)技术将SMMC-7721细胞分为SP细胞和非侧群(NSP)细胞两个亚群,以实时荧光定量聚合酶链反应(real-time PCR)技术和流式细胞术对两个亚群细胞干细胞标记mRNA和蛋白表达进行分析.结果 SMMC-7721细胞株中分选出的SP细胞比例为(9.2±0.2)%.SP细胞ABCG2、CD133、Oct4、Sox2和NANOG等干细胞标记mRNA的表达水平分别是NSP细胞的7.132倍、4.985倍、8.642倍、5.095倍和5.164倍,差异均有统计学意义(P＜0.01);ABCG2、CD133、Oct4、Sox2和NANOG蛋白在肝癌SP细胞中的含量分别为(92.65±3.92)%、(12.75±1.62)%、(17.35±2.31)%、(9.57±1.71)%和(28.39±5.28)%,在NSP细胞中的含量分别为(0.26±0.06)%、(2.51±0.17)%、(1.74±0.38)%、(1.52±0.41)%和(3.37±1.02)%,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 肝癌SMMC-7721细胞中的SP细胞可能富集了肝癌干细胞,联合应用多种干细胞标记筛选肝癌SP细胞可能会获得纯化的肝癌干细胞.

Abstract：

Objective To study the expression of stem cell markers in side population cells sorted from SMMC-7721 cell line. Methods Fluorescence-activated cell sorting (FACS) was used to sort side population (SP) cells and non-SP (NSP) cells from SMMC-7721 cell line. Real-time polymerase chain reaction (PCR) and flow cytometry (FCM) were used to evaluate the expression of several stem cell markers such as ABCG2, CD133, Oct4, Sox2 and NANOG in SP cells and NSP cells. Results FACS analysis indicated that (9.2 ±0. 2)% of the SMMC-7721 cells were SP cells. Real-time PCR analysis suggested that ABCG2, CD133, Oct4, Sox2 and NANOG were expressed in the SP cells at higher levels than the NSP cells by about 7. 132, 4. 985, 8. 642, 5.095 and 5. 164 folds, respectively ( P ＜0. 01 ). FCM analysis revealed that the expression of ABCG2, CD133, Oct4, Sox2 and NANOG proteins in SP cells was (92. 65 ±3.92)%, (12.75 ±1.62)%, (17.35 ±2.31)%, (9.57 ± 1.71)% and (28.39 ±5.28)% respectively,while in NSP cells that was (0. 26 ±0. 06)%, (2. 51 ±0. 17)%, ( 1.74 ±0. 38)%, ( 1.52 ±0. 41 )% and ( 3.37 ± 1.02) % respectively ( P ＜ 0. 01 ). Conclusion The SP cells sorted from SMMC-7721 cell line may enrich tumor stem cells. Purified liver cancer stem cells may be obtained by screening SP cells using a variety of stem cell markers.     

聚酯型儿茶素诱导人肝癌细胞凋亡的研究

目的 探讨聚酯型儿茶素（ＴＳ）的抗癌作用机制。方法 应用四氮唑蓝快速比色（ＭＴＴ）法,透视电镜,琼脂糖凝胶电泳,流式细胞术等方法研究ＴＳ诱导体外培养的人肝癌细胞凋亡。结果 ５０－８００ｍｇ／Ｌ ＴＳ对人肝癌细胞株ＳＭＭＣ－７７２１细胞的生长有明显的抑制作用,且量效关系明显。４００ｍｇ／Ｌ ＴＳ作用于ＳＭＭＣ－７７２１细胞２４ｈ后,透射电镜观察到凋亡小体;ＤＮＡ琼脂糖凝胶电泳上可见典型的“阶梯状”：     

NS-398对肝癌SMMC-7721细胞裸鼠移植瘤凋亡和血管生成的影响

为观察COX-2对肝细胞癌生长和血管生成的影响，我们通过构建肝癌SMMC-7721细胞株荷瘤裸鼠，检测NS-398对血管内皮生长因子（VEGF）、基质金属蛋白酶-9（MMP-9）、肿瘤微血管密度（MVD）和凋亡的影响，探讨环氧合酶2（COX-2）在肝细胞癌生长和血管生成过程中的作用及其机制。     

L-精氨酸诱导人肝癌细胞凋亡的作用

目的 探讨L-精氨酸诱导人肝癌细胞凋亡的作用及机制。方法 采用倒置显微镜、透射电镜和流式细胞仪，观察和分析不同浓度L-精氨酸作用下体外培养人肝癌细胞株QGY-7703的增殖和凋亡情况。结果（1）低浓度L-精氨酸对肝癌细胞生长和细胞大体形态无明显影响。高浓度的L-精氨酸引起肝癌细胞形态变圆、体积变小，细胞皱缩，细胞核固缩，核碎裂，染色质边聚，凋亡小体形成。（2）低浓度L-精氨酸对肝癌细胞生长周期和增殖指数无影响；而高浓度的L-精氨酸引起G0／G1期较对照组显著升高，S期显著降低，细胞增殖指数显著下降（P〈0．05），而G2／M无明显变化。（3）低浓度L-精氨酸（1mmol／L）和对照组细胞未见凋亡峰（亚G1峰），凋亡率分别为2．1％和2．5％；而16mmol／L和64mmol／L浓度组则出现典型的凋亡峰，凋亡率分别为12．4％和30．8％，较对照组显著增高（P〈0．05）。结论 高浓度的L-精氨酸通过合成NO，诱导肝癌细胞凋亡。     

α-干扰素和COX-2抑制剂对人肝癌细胞SMMC-7721细胞增殖的抑制作用研究

目的研究α-干扰素和环氧合酶(COX-2)抑制剂塞来昔布(Celecoxib)对人肝癌SMMC-7721细胞的生长抑制作用。方法采用MTT比色法观察不同浓度的塞来昔布和α-干扰素处理对肝癌细胞增殖的影响;通过荧光显微镜检测细胞凋亡。结果实验组与对照组相比,能抑制人肝癌SMMC-7721细胞的增殖,两种药物高浓度联合作用48 h后,对肝癌细胞的生长抑制率可达92.44%±0.98%。α-干扰素和塞来昔布对肝癌细胞的增殖抑制具有协同作用。荧光显微镜观察到细胞皱缩、核质浓缩、核碎裂以及凋亡小体形成等凋亡形态学改变。结论 COX-2抑制剂塞来昔布和α-干扰素对人肝细胞癌SMMC-7721细胞的增殖有协同抑制作用,同时能诱导其凋亡,并且呈剂量和时间依赖性,这提示α-干扰素和COX-2抑制剂塞来昔布对HCC的预防和治疗可能有积极意义。     

康莱特诱导人肝癌细胞HepG2 凋亡的实验研究

目的 探讨康莱特注射液(KLT)诱导肝癌细胞HepG2凋亡的作用机制.方法 用不同浓度的KLT培养肝癌细胞HepG2,应用流式细胞仪检测HepG2凋亡细胞的发生,应用ELISA法检测相关凋亡蛋白Bcl-2的变化.结果 流式细胞术证实KLT可诱导肝癌细胞HepG2凋亡(P＜0.01), 且具有时间、剂量依赖关系.KLT处理组HepG2细胞中Bcl-2蛋白的表达分别为(16.91±0.20)units/ml、(10.78±1.41)units/ml和(7.66±0.64)units/ml,对照组为(22.65±2.83)units/ml.结论 KLT可诱导肝癌细胞HepG2凋亡;且KLT诱导HepG2细胞凋亡过程中,Bcl-2蛋白表达的下调对调控细胞凋亡有重要作用.     

刺参黏多糖诱导人肝癌细胞凋亡的实验研究

目的 观察刺参酸性黏多糖(SJAMP)体外诱导人肝癌细胞HepG2凋亡的情况,并初步探讨SJAMP对HepG2细胞中Bcl-2和nm23-H1表达有何作用,为其能否应用于肝癌的临床治疗提供理论依据和可行性评估.方法 体外培养人肝癌细胞HepG2,用不同浓度的刺参黏多糖(0.25、0.5、1.0、2.0、4.0g/L)培养人肝癌细胞HepG2.采用细胞毒试验(MTT法)检测HepG2细胞抑制率,蛋白印迹法(western blot)检测相关蛋白Bcl-2和nm23-H1 的变化. 结果 (1)MTT细胞毒试验证实SJAMP能明显抑制人肝癌细胞HepG2细胞的生长,且呈时间和浓度依赖性.(2)western blot试验中,与空白组相比,SJAMP处理组、对照组(5-FU)及共同作用组HepG2细胞中Bcl-2蛋白表达均明显降低(P<0.05),nm23-H1蛋白的表达则明显升高(P<0.05). 结论 (1)SJAMP可通过抑制细胞增生并诱导凋亡来抑制人肝癌细胞HepG2的生长;(2)SJAMP可诱导人HepG2细胞中Bcl-2和nm23-H1蛋白含量的改变来发挥其抗肿瘤作用.     

多西紫杉醇诱导人肝癌细胞凋亡及其机制的研究

目的 探讨多西紫杉醇(docetaxel,DTX)对人肝癌细胞诱导凋亡的作用及其机制.方法 人肝癌细胞株HepG2和Huh7用于实验.通过WST-1细胞增殖实验观察DTX对细胞生长的抑制作用,采用Hoechst 33342荧光染色和DNA凝胶电泳检测细胞的凋亡情况,采用Western印迹法检测DTX对Caspase-3和Caspase-9酶原的激活作用.结果 DTX对HepGZ和Huh7的生长有明显的抑制作用;经Hoeehst 33342荧光染色和DNA凝胶电泳检测发现DTX可诱导HepG2和Huh7细胞凋亡;在DTX诱导肝癌细胞凋亡的过程中.凋亡效应分子Caspase-3和Caspase-9酶原被剪切激活;Caspase3抑制剂Z-VAD-FMK抑制DTX诱导的肝癌细胞凋亡.结论 DTX对肝癌细胞具有较强的增殖抑制作用,凋亡是其抑瘤的机制之一.DTX导致肝癌细胞凋亡程序依赖于激活Caspase-3酶原途径.     

羟基磷灰石纳米粒子诱导人肝癌细胞凋亡的研究

羟基磷灰石纳米粒子是近年研制的抗癌新药 ,具有作用缓和及抗瘤谱广的特点。我们从羟基磷灰石纳米粒子诱导人肝癌BEL 740 2细胞凋亡的角度探讨其抑制癌细胞生长的机制 ,为纳米材料用于临床提供依据。一、材料和方法1.材料 :羟基磷灰石纳米粒子由华东理工大学生物材料中心提供 ;RNase酶、蛋白酶K、碘化丙锭 (PI)及Hochest3 3 2 5 8荧光染液购于Sigma公司。Hi tachi 60 0型透射电镜 ,日立公司 ;FAC Sort流式细胞仪 ,BectonDickinson公司。人肝癌细胞系BEL 740 2 ,武汉大学典藏中心提供 ,培养于含 10 %小牛血清的RPMI 164 0培养液中 …     

人肝细胞癌耐阿霉素细胞亚株SMMC-7721/ ADM的诱导及其特征研究

目的 建立人肝细胞癌多药耐药亚株并对其主要特征进行研究。方法 应用SMMC-7721细胞株，通过不断提高培养液中阿霉素(ADM)的浓度，长期筛选培养，得到了人肝细胞癌多药耐药亚株SMMC-7721／ADM后，对其特征进行研究。结果 ①SMMC-7721／ADM对ADM的抗药性提高了33．3倍，对长春新碱的抗药性提高了16．8倍，对顺铂的抗药性提高了2．8倍；②耐药细胞与亲代细胞的生长速度基本相同，倍增时间分别为32．0h和30．5h，呈现相似的生长曲线；③利用扫描和透射电镜发现，耐药细胞与亲代细胞形态上的明显差别是前者微绒毛变得粗短、稀疏、分布不均；④耐药细胞保持着肝细胞癌的特征，能在裸小鼠皮下移植再现；⑤SMMC-7721／ADM在去药培养1个月和2个月后耐药指数下降为28．0％和9．2％。而在ADM(0．04μg／ml)存在下生长2个月后，耐药倍数可保持稳定(35．4倍)。结论 SMMC-7721／ADM细胞亚株具有稳定的耐药性细胞株的基本特征。