Bcl-2、Bax蛋白产物在脑缺血耐受中的表达及前列腺素E1的干预作用

目的探讨大鼠脑缺血时凋亡相关基因Bcl-2、Bax蛋白的表达与脑缺血耐受的关系及前列腺素E1 (PGE1)对脑缺血耐受的影响。方法采用大鼠全脑-局灶脑缺血耐受模型。观察预缺血组、PGE1组在大脑中动脉梗死2h再灌注(MCAO)24h后神经行为评分、脑梗死体积、Bcl-2、Bax蛋白表达和TUNEL、流式细胞仪检测神经细胞凋亡。结果MCAO后24h,PGE1组的神经行为评分、脑梗死体积、Bax蛋白表达更少,Bcl-2蛋白表达较高,神经细胞凋亡降低。结论预缺血及PGE1预处理后,使Bax蛋白表达减少,Bcl-2蛋白表达增高能够诱导脑缺血耐受,且PGE1的作用优于预缺血。     

氟美松对成年大鼠持续性局灶性脑缺血后凋亡和Bcl-2蛋白表达的影响

目的研究药理剂量氟美松对成年大鼠持续性局灶脑缺血后凋亡及凋亡相关基因Bcl-2表达的影响.方法健康成年雄性SD大鼠随机分为假手术组、生理盐水组、氟美松组, 分别对应脑缺血3 h、 6 h、 12 h、 24 h、 48 h、 72 h、 120 h等时间点;行左侧大脑中动脉近端电凝术建立持续性局灶脑缺血模型;术后1 h生理盐水组静脉注射生理盐水, 氟美松组静脉注射氟美松(0.5 mg*kg-1*d-1);行常规HE染色, 原位末端TUNEL法标记凋亡细胞, 免疫组织化学法检测Bcl-2蛋白表达.结果持续性局灶脑缺血后细胞凋亡、 Bcl-2蛋白表达主要分布在梗死灶的边缘区域, 脑缺血2 d出现细胞凋亡并持续到缺血5 d;氟美松组细胞凋亡出现时间提前到缺血1 d, 而且缺血2 d、 5 d凋亡细胞数量较生理盐水组增加;脑缺血3 h～5 h梗死灶边缘区域都有Bcl-2蛋白表达;氟美松处理组6 h～5 d Bcl-2蛋白表达细胞密度明显低于生理盐水组.结论持续性局灶脑缺血早期给予氟美松可促进梗死灶边缘区的细胞凋亡, 引作用与其下调Bcl-2的基因表达有关.     

大鼠脑缺血再灌注后Caspase-3、Bcl-2和Bax的表达

目的探讨大鼠脑缺血再灌注后caspase-3、Bcl-2和Bax在脑皮质神经元中的表达。方法将动物随机分为假手术组及缺血组,参照zea longa线栓法建立大鼠左侧大脑中动脉闭塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)局灶性脑缺血再灌注模型,各组大鼠分别在左侧MCAO2h再灌注不同时间点断头取脑,脑皮质神经元中caspase-3、Bcl-2和Bax的表达通过免疫组化法来测定。结果缺血组大鼠脑皮质caspase-3的表达较假手术组显著增强(P<0.01),缺血组大鼠脑皮质Bcl-2的表达较假手术组显著增强(P<0.01),缺血组大鼠脑皮质Bax的表达较假手术组显著增强(P<0.01)。结论短暂性脑缺血再灌注上调脑皮质神经元中caspase-3和Bax的表达促细胞凋亡,上调脑皮质神经元中Bcl-2的表达抗细胞凋亡。     

人脂肪组织来源的神经干细胞移植对大鼠局灶性脑缺血再灌注后细胞凋亡及Bcl-2、Bax蛋白表达的影响

目的 探讨人脂肪组织来源的神经干细胞移植对大鼠局灶性脑缺血再灌注后细胞凋亡及Bcl-2、Bax蛋白表达的影响.方法 线栓法制作大鼠大脑中动脉缺血2 h再灌注模型.60只健康雄性SD大鼠随机分为4组:正常对照组(6只),假手术组(6只),缺血对照组(24只)和移植治疗组(24只);后2组又分为再灌注7 d、14 d、21 d、28 d组(各6只).体外培养脂肪基质细胞,诱导分化为神经干细胞.造模成功后24h,移植治疗组经尾静脉移植人脂肪组织来源的神经干细胞悬液(细胞浓度为2×106/ml),缺血对照组经尾静脉注射生理盐水,假手术组不做任何处理.TUNEL法检测细胞凋亡,免疫组化SABC法检测Bcl-2、Bax表达.结果 与缺血对照组比较,移植治疗组各时间点的细胞凋亡数均明显减少(均P＜0.01),Bcl-2阳性细胞数明显增高(均P＜0.01),Bax阳性细胞数明显减少(P＜0.05～0.01).结论 人脂肪组织来源的神经干细胞可能通过上调Bcl-2蛋白表达、下调Bax蛋白表达,减少局灶性脑缺血细胞凋亡;对脑缺血再灌注损伤后的神经细胞起保护作用.     

雌激素对雄性大鼠缺血性脑损伤的神经保护作用及其可能机制

目的 探讨雌激素对雄性大鼠局灶性脑缺血的神经保护作用及其可能机制。方法 随机将大鼠分为雌激素预处理组、雌激素＋他莫昔芬预处理组和对照组，采用线栓法制作大鼠大脑中动脉闭塞（MCAO）模型，观察缺血后2h和24h脑梗死体积、大鼠死亡率、神经功能缺损程度、神经元凋亡以及Bcl-2、Bax、p53蛋白的表达。结果 缺血后2h和24h，雌激素预处理组较对照组脑梗死体积小、死亡率低、神经功能缺损程度轻、神经元凋亡少，并抑制Bax、p53表达，促进Bcl-2蛋白表达。雌激素受体拮抗剂他莫昔芬可抑制这一作用。结论 雌激素对雄性大鼠缺血性脑损伤具有明显的神经保护作用。对基因和非基因因素的影响是神经保护作用的可能机制。     

白介素-8在局灶性脑缺血大鼠脑组织及血清中的表达及地塞米松对其的影响

目的探讨白介素(IL)-8在局灶性脑缺血大鼠脑组织及血清中的表达及地塞米松对其的影响。方法实验大鼠随机分为空白对照组、假手术组、缺血组及地塞米松组,后两组又各分为术后1h、2h、4h、8h、12h、24h、48h、72h组;每组12只。采用线栓法制备大鼠大脑中动脉栓塞模型;在相应的时间点应用ELISA法检测各组脑组织及血清中IL-8的水平。结果缺血组与地塞米松组脑组织及血清中IL-8水平于缺血1h后逐渐升高,后于24h及4h达高峰;缺血组与地塞米松组脑组织及血清中IL-8水平各时间点又低于空白对照组与假手术组(均P<0.05),地塞米松组又低于缺血组(均P<0.05)。结论局灶性脑缺血大鼠脑组织及血清中IL-8表达与时间关系密切;地塞米松可明显抑制局灶性脑缺血大鼠脑组织中炎性反应。     

大鼠局灶性脑缺血再灌注后脑和肝、肾Bax、Bcl-2的蛋白表达

目的研究大鼠急性局灶性脑缺血再灌注后脑和肝、肾细胞凋亡和Bax、Bcl-2的蛋白表达变化,探讨急性局灶性脑缺血再灌注后对肝和肾脏的影响。方法参照Longa等的线栓法采用阻断大鼠大脑中动脉后再灌注（MCAO）,按随机原则将54只Wistar大鼠分为3个组：正常对照组（n=6）、假手术组（n=6）及缺血再灌注后2h、6h、12h、24h、48h、72h、5d 7个亚组,应用免疫组织化学SP染色技术检测脑和肝、肾Bax、Bcl-2的蛋白表达,并计数计算出平均阳性率（LI）,同时检测了肝和肾功能改变。结果（1）大鼠脑缺血再灌注后各时相点的肝、肾脏组织均有不同程度的病理损害；（2）Bax、Bcl-2在手术组的大鼠中呈明显的阳性表达,与正常对照组和假手术组之间比较有非常显著性差异（P＜0．01,P＜0．001）。结论大鼠急性局灶性脑缺血再灌注后肝、肾功能减退并出现组织细胞凋亡明显增加。     

大鼠局灶性脑缺血再灌注后海马Bcl-2、Bax蛋白的表达

目的 探讨大鼠局灶性脑缺血再灌注后Bcl-2、Bax蛋白在海马表达的变化.方法 线栓法制作大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,应用免疫组化染色检测Bcl-2、Bax蛋白表达,应用TUNEL法检测海马区细胞凋亡.结果 缺血再灌注2h后海马神经元Bcl-2、Bax蛋白开始表达,Bcl-2蛋白12h达高峰,Bax蛋白12h～24h达高峰,之后开始下降.再灌注2h后海马凋亡细胞开始表达,随着再灌注时间的延长,其表达不断增加.Bcl-2/ Bax的比率在再灌注开始时升高,再灌注12h达高峰,随后开始下降.结论 凋亡是脑缺血再灌注损伤的重要形式之一,Bcl-2/ Bax的改变与缺血再灌注后海马的神经元存亡有关,缺血再灌注可导致海马神经元凋亡.     

吸氧预处理对大鼠局灶脑缺血神经细胞凋亡及Bcl-2、Bax的影响

目的 观察吸氧预处理对大鼠局灶脑缺血再灌注后细胞凋亡及凋亡相关基因Bax、Bcl-2的关系,探讨吸氧预处理的脑保护作用.方法 采用线栓法阻塞大鼠大脑中动脉造成局灶脑缺血再灌注模型,用TUNEL染色标记神经细胞凋亡,免疫组化染色观察Bax,Bcl-2蛋白含量.结果 与模型组相比,吸氧预处理组半暗区的TUNEL阳性细胞数和Bax蛋白表达阳性细胞数明显下降,(P<0.05),Bcl-2蛋白表达细胞数明显上升(P<0.05).结论 吸氧预处理可通过抑制缺血再灌注后神经细胞凋亡和减少Bax的表达,增加Bcl-2蛋白的表达发挥脑保护作用.     

硫化氢对短暂脑缺血/再灌注老年大鼠海马神经元Camkkβ、Bcl-2和Bax表达的影响

目的探讨硫化氢对短暂脑缺血再灌注老年大鼠海马神经元Camkkβ、Bcl-2和Bax表达的影响。方法健康雄性SD老龄大鼠120只,随机分为对照组(C组)、缺血/再灌注组(IR组)、H2S组(H组)和生理盐水组(S组),采用Pusinelli四动脉阻断法建立全脑缺血模型。H组缺血前10 min腹腔内注射H2S外源性供体NaHS;S组注入等量生理盐水;C组不行任何处理。大鼠脑缺血/再灌注后24 h进行神经行为学评分;脑缺血/再灌注后1、3、5 d采用TUNEL法检测神经元的凋亡情况,采用Western-blot法测定大鼠海马内Camkkβ、Bcl-2和Bax蛋白表达。结果与对照组比较,缺血/再灌注组老年大鼠脑缺血/再灌注24 h后神经行为学评分升高,海马TUNEL阳性神经元计数升高,Camkkβ表达升高,Bcl-2表达下调,Bax表达上调(P<0.05);与缺血/再灌注组比较,H2S组老年大鼠脑缺血/再灌注24 h后神经行为学评分降低、海马区TUNEL阳性神经元计数降低、Camkkβ表达降低,Bcl-2表达上调、Bax表达下调(P<0.05)。结论硫化氢可通过降低神经元海马Camkkβ蛋白表达、上调Bc1-2蛋白表达、抑制Bax蛋白表达来减轻短暂脑缺血/再灌注损伤。     

香港远志提取物对局灶性脑缺血大鼠脑保护作用与作用机制

目的探讨香港远志提取物对局灶性脑缺血大鼠脑保护作用与机制。方法线栓法制备SD大鼠大脑中动脉闭塞(MCAO)模型,随机分4组:假手术组、模型组及治疗A、B组。治疗组按设定方式给药,假手术组、模型组给1%吐温溶液。观察术后24h神经功能缺损评分(NBDS)、脑梗死体积(IV)、血清神经元烯醇化酶(NSE)及神经元凋亡、Bcl-2、Bax表达。结果与假手术组比较,模型组和治疗组NBDS、IV、NSE、神经元凋亡及Bcl-2、Bax显著增高、Bcl-2/Bax显著降低(P<0.05)。与模型组比较,治疗组NBDS、IV、NSE及神经元凋亡、Bax显著降低、Bcl-2、Bcl-2/Bax显著增高(P<0.05),治疗组间数据亦有显著差异(P<0.05)。结论香港远志提取物预处理,对局灶性脑缺血大鼠脑神经有保护作用,机制可能是促进Bcl-2、抑制Bax表达,上调Bcl-2/Bax比值,阻止神经元凋亡。     

脑脉泰对大鼠脑缺血再灌注后神经细胞凋亡和Akt,bcl-2,Bax,caspase3表达的影响

目的 研究脑脉泰对大鼠脑缺血再灌注损伤神经细胞凋亡和Akt,bcl-2, Bax,caspase3表达的影响。方法 在大鼠大脑中动脉栓塞再灌注动物模型,将60只雄性SD大鼠随机分为假手术组（sham）、脑缺血再灌注模型组（MCAO）、脑脉泰大剂量组（MCAO+脑脉泰2.24g·kg-1）、脑脉泰中剂量组（MCAO+脑脉泰1.12g·kg-1 ）,脑脉泰小剂量组（MCAO+脑脉泰0.56g·kg-1）和尼莫地平组（MCAO+nimodipine 10mg·kg-1）,每组10只大鼠。脑脉泰组在MCAO前五天开始灌胃给药,连续五天。用TUNEL法和免疫组化染色法分别检测缺血半暗带凋亡细胞和Akt,bcl-2,Bax,caspase3表达。结果 脑脉泰大剂量组和中剂量剂量组大鼠脑缺血半暗带的凋亡细胞显著减少,Akt、bcl-2 表达显著增加, caspase3 和 Bax表达减少,与MCAO模型组比较,有显著性差异（P<0.01）。结论 脑脉泰对脑缺血/再灌注损伤产生保护作用,其保护作用与促进Akt,bcl-2的表达,抑制Bax和caspasse3的表达有关。     

钙拮抗剂对大鼠缺血性脑损伤后Bcl-2和Bax基因表达的作用

目的探讨大鼠实验性脑缺血后海马组织Bcl-2和Bax基因的表达及尼莫地平预处理对Bcl-2和Bax基因表达的影响。方法采用线栓法建立大鼠脑缺血模型；尼莫地平预处理；逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法测定其海马组织中Bcl-2和Bax mRNA。结果大鼠大脑中动脉阻断(MCAO)后，海马组织Bcl-2和Bax基因均被诱导表达，Bcl-2表达量持续升高，而Bax表达量在脑缺血24h达高峰，随后逐渐下降。在脑缺血后6h和24h，经尼莫地平预处理7d的大鼠，海马组织Bcl-2基因的表达水平较未经预处理的大鼠明显上调，而Bax基因表达水平则较未经预处理的大鼠明显下调。结论钙拮抗剂尼莫地平能有效地调控大鼠缺血性脑损伤后海马组织Bcl-2和Bax基因表达的水平，为干预脑卒中后基因表达提供依据。     

大鼠局灶性脑缺血Bcl-2和Bax的表达与细胞凋亡

目的:研究大鼠局灶性脑缺血再灌注后凋亡相关基因Bcl-2和Bax在缺血皮层表达的变化及其与神经元凋亡的关系。方法:线栓法制作大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,免疫组化法观察Bcl-2和Bax的表达变化,TUNEL法观察神经元凋亡的情况。结果:再灌注2h后皮层神经元Bcl-2表达开始明显上调,6h为高峰,之后开始下降。再灌注早期 Bax在皮层神经元的表达即明显增强,24～48h达高峰。Bcl-2／Bax的比率在再灌注开始时升高,6h达高峰,随后开始下降。TUNEL阳性细胞主要分布在缺血中心的边缘,再灌注48h之内,随时间的延长而不断增加。结论:Bcl-2／Bax的比率改变与缺血再灌注后的神经元存亡相关。     

醒脑静联合丁苯肽对脑缺血再灌注损伤后细胞凋亡的影响

目的 观察醒脑静、丁苯酞及二者联合分别对大鼠脑缺血再灌注损伤后神经细胞凋亡及Bcl-2和Bax表达的影响。方法 60只雄性wistar大鼠(250±20)g采用改良线栓法制作脑缺血再灌注损伤模型(Middle cerebral artery occlusion,MCAO),随机分为4组,即模型组、醒脑静组、丁苯酞组、醒脑静联合丁苯酞(联合用药)组,每组又分为6、24、72 h三个亚组; 通过原位末端转移酶标记技术(TUNEL)检测神经细胞凋亡情况,采用免疫组化法观察大鼠脑缺血再灌注各个时间点Bcl-2、Bax的表达水平。结果(1)模型组手术对侧大脑半球偶见凋亡细胞,病灶区可见大量神经细胞凋亡。丁苯酞用药组、醒脑静用药组凋亡细胞数明显减少,醒脑静联合丁苯酞组凋亡细胞数最少(P<0.05);(2)丁苯酞组及联合用药组Bcl-2阳性表达水平较模型组均有提高,联合用药组Bcl-2阳性表达水平在各时间点均最高(P<0.05); 丁苯酞组及联合用药组Bax阳性表达水平较模型组均有降低,联合用药组Bax阳性表达水平最低(P<0.05)。结论(1)醒脑静、丁苯酞及二者联合均可能通过抑制脑缺血再灌注损伤后神经细胞凋亡来实现神经细胞保护作用,其中二者联合效果最佳;(2)丁苯酞可能通过增加脑缺血再灌注损伤大鼠Bcl-2表达,减少Bax表达的方式来减少神经细胞凋亡,从而减轻脑缺血再灌注损伤;(3)醒脑静本身不能对Bcl-2、Bax的表达水平产生影响,但其可能通过增强丁苯酞作用的方式影响Bcl-2、Bax的表达,从而减轻脑缺血再灌注损伤。     

3-硝基丙酸预处理对大鼠局灶性脑缺血Bcl-2和Bax mRNA表达的影响

目的探讨3-硝基丙酸(3-NPA)预处理对大鼠局灶性脑缺血半暗带Bc l-2和Bax mRNA表达的影响。方法将大鼠腹腔注射3-NPA 20 mg/kg,3 d后制作局灶性脑缺血再灌注模型;采用逆转录聚合酶链反应,观察3-NPA预处理对脑缺血再灌注1 h、6 h、12 h、24 h及48 h额顶部皮质Bc l-2和Bax mRNA表达的影响,并与假手术组和缺血再灌注组比较。结果与假手术组比较,缺血再灌注组和3-NPA预处理组各时间点Bc l-2和Bax mRNA表达极显著增强(均P<0.01);与缺血再灌注组比较,3-NPA预处理组各时间点Bc l-2mRNA表达显著增强(均P<0.05),再灌注12~48 h Bax mRNA的表达显著降低(均P<0.05)。结论增强Bc l-2的表达、抑制Bax的表达,可能是3-NPA预处理抑制细胞凋亡、诱导脑缺血耐受的机制之一。     

Effect of compound preparation Tongqiao Jiannao capsules on neural cell apoptosis and Bcl-2 and Bax protein levels in a rat model of brain ischemia/reperfusion injury★

BACKGROUND：Pharmacological studies have demonstrated that compound preparation Tongqiao Jiannao capsules composed of Zexie, Baizhu, Honghua, Danshen, and Shexiang can supplement qi, activate blood circulation, relieve blood stasis, induce resuscitation for alleviating pain, relieve pain, and dilate blood vessels. OBJECTIVE： To observe the effects of Tongqiao Jiannao capsules on the levels of the anti-apoptotic protein Bcl-2 and the proapoptotic protein Bax, and verify the mechanism of action. DESIGN, TIME AND SETTING： Randomized, controlled animal experiment, performed in the Laboratory of Biochemistry and Molecular Biology, Shanxi Medical University between June 2001 and December 2002. MATERIALS： The right middle cerebral arteries of 24 healthy adult Sprague Dawley rats were occluded by the suture method. The primary Chinese herbal medicinal ingredients of Tongqiao Jiannao capsules are Zexie, Baizhu, Honghua, Danshen, and Shexiang, which were purchased from Shanxi Provincial Medicinal Material Company, China, and prepared into condensed granules in the Room for Chinese Herbal Medicine Preparation, Second Hospital, Shanxi Medical University. Bcl-2 and Bax immunohistochemical staining kits, a 3,3-diaminobenzidine（DAB） kit, and an in situ apoptosis detection kit were purchased from Wuhan Boster Bioengineering Co., Ltd., China. METHODS： Twenty-four rats were randomly and evenly divided into three groups： （1） sham-operated rats in which sutures were inserted and immediately pulled out; （2） Tongqiao Jiannao capsule-treated rats that were intragastrically administered 6.5 g/kg/d Tongqiao Jiannao capsule preparation for seven successive days prior to middle cerebral artery occlusion （MCAO）; and （3） MCAO rats without any other treatments. MAIN OUTCOME MEASURES： The levels of neural cell apoptosis and Bcl-2 and Bax proteins at 24 hours post-surgery. RESULTS： In the MCAO group, the numbers of apoptotic cells and Bax-positive cells were significantly increased, while the numbers of Bcl-2-