叶酸受体介导的药物靶向投递系统研究进展

目的　肿瘤细胞膜上表达一些正常细胞不表达或低表达的受体 ,它可成为肿瘤治疗的靶点。一些肿瘤组织高水平表达叶酸受体 ,利用多聚阳离子为载体 ,结合药物 /DNA形成叶酸交联复合物 ,通过叶酸受体介导的基因转移方式 ,将药物 /DNA靶向投递到肿瘤组织或细胞 ,具有转移效率高和靶向性投递的特点。现就叶酸受体、叶酸受体介导的内化机理、基因药物、蛋白毒素、放射性药物靶向投递等方面作一综述     

叶酸受体及其在介导药物靶向肿瘤细胞治疗中的应用

肿瘤细胞表面过度表达一系列受体,能与特异性的配体结合并诱导细胞内化.以这些受体为作用靶点,使药物与特异性配体结合即可将药物主动靶向肿瘤细胞.叶酸受体在多种肿瘤细胞特别是髓细胞白血病细胞中都有过度表达,它可通过介导细胞内化将叶酸摄取入细胞胞浆,利用叶酸受体进行肿瘤,特别是白血病的靶向性治疗颇有应用前景.本文就叶酸受体生物学性质、染色体定位及与配体的相互作用,叶酸受体在正常组织、肿瘤组织,特别是白血病细胞中的分布特点,以及叶酸受体介导主动靶向肿瘤细胞,特别是白血病细胞的研究进展进行了概述.     

叶酸修饰聚合物和脂质体药物载体及其靶向治疗的研究现状

背景:叶酸介导的靶向药物载体被广泛研究。目的:总结叶酸修饰靶向聚合物和脂质体药物载体的研究现状。方法:由作者应用计算机检索2000-01/2010-12Web of Science和CNKI数据库,选择叶酸修饰靶向聚合物和脂质体药物载体的相关文章,英文检索词为"folic acid,drug carriers,targeted delivery system,polymer,liposome",中文检索词为"叶酸,药物载体,靶向,聚合物,脂质体"。共纳入相关文献19篇进行综述。结果与结论:叶酸受体在多种肿瘤细胞表面过度表达,而在多数正常组织中的表达仅限于一些难于进入血液循环的上皮细胞顶膜。正因为叶酸受体表达的特性,叶酸受体天然配体——叶酸成为将药物靶向到肿瘤细胞的重要分子。叶酸具有与叶酸受体的高亲和力、低免疫原性等优点,这使得叶酸介导肿瘤靶向的研究得到迅速发展。含叶酸靶向的药物载体体系中,主要分为3大类:即人工合成高分子载体体系、脂质体和天然高分子载体体系。     

叶酸受体在鼻咽癌组织中的表达及其意义

目的:研究叶酸受体在人鼻咽癌组织中的表达情况,了解其与肿瘤临床和病理特征间的关系,为进一步研发叶酸受体靶向头颈部肿瘤药物载体奠定基础。方法:分别通过免疫组织化学SP法和RT-PCR法检测鼻咽癌组织中的叶酸受体(FRα)和FRαm RNA的表达情况,结合临床参数进行分析。结果:鼻咽癌组织中FRα水平和FRαm RNA水平均高度表达。结论:叶酸受体表达与鼻咽癌的发生、发展有重要关系。叶酸受体可作为鼻咽癌靶向治疗的分子靶点,并为鼻咽癌的早期诊断及靶向治疗提供重要依据。     

受体介导的基因转移及其在基因治疗中的应用

在各类用于基因治疗研究的病毒及非病毒基因运载体系中，非病毒受体介导的基因转移（ｒｅｃｅｐｔｏｒｍｅｄｉａｔｅｄｇｅｎｅｔｒａｎｓｆｅｒ）系统，因其基因转移的细胞靶向性而独具特色。目前已用于多种组织、细胞的靶向基因转移，从而为人类基因治疗开辟了新的途...     

TIM-3、LAG-3和BTLA介导的血液肿瘤免疫耐受及其逆转研究

近年来认为肿瘤免疫抑制最为重要的原因,是免疫细胞异常表达一些T细胞免疫抑制受体所介导的T细胞功能耗竭,与肿瘤的发生发展密切相关,而阻断这些免疫负调控受体通路可以使T细胞部分或全部恢复功能。本文就近年来新近发现的T细胞免疫抑制受体T细胞免疫球蛋白黏蛋白分子3(TIM-3)、淋巴细胞活化基因-3(LAG3)和B和T淋巴细胞弱化子(BTLA)在血液肿瘤介导T细胞免疫耐受中的作用及其靶向治疗研究进展作一综述,旨在为血液肿瘤的免疫靶向治疗提供新的思路。     

人端粒酶逆转录酶基因启动子在肿瘤靶向性基因治疗中的作用

肿瘤的基因治疗中，目的基因的靶向性表达是其关键因素。利用组织特异性的启动子来介导目的基因，从而限制目的基因只在靶细胞中表达，是肿瘤靶向性基因治疗的一种有效途径，它减轻了对正常组织的损伤。现有不少的组织或细胞的特异性启动子被用于基因的靶向治疗，如癌胚抗原启动子，甲胎蛋白启动子，EB病毒启动子等；然而，因其较弱的转录活性及只能针对有限的组织起源的肿瘤细胞，其运用受到了限制。[第一段]     

叶酸介导靶向高分子造影剂的制备及体外识别研究

目的 合成叶酸介导靶向的聚乳酸共聚物,以其为靶向膜材制备靶向造影剂,表征造影剂性质.方法 以自制的叶酸-脯氨酸-乳酸共聚物(Fa-PLLA-Hpr)为膜材,应用双乳化-冷冻干燥法制备叶酸介导靶向高分子造影剂(MB-Fa-PLLA).采用激光粒径测量仪检测微泡的粒径,通过光镜观察该靶向造影剂(靶向造影剂实验组)对人卵巢癌SKOV3细胞的体外寻靶情况,并与游离叶酸干预组及空白对照组(普通微泡)比较.结果 FT-IR表征了靶向膜材的结构.成功制备叶酸介导靶向聚乳酸共聚物MB-Fa-PLLA.MB-Fa-PLLA在光镜下大小分布均匀,形态圆整,65％的微粒直径分布为500～800 nm,呈单峰分布,其亲水性较普通高分子微泡更好.体外寻靶实验显示,MB-Fa-PLLA可以较多并牢固地聚集到SKOV3细胞表面,而普通微泡未见特异性结合.结论 MB-Fa-PLLA亲水性好,对高表达叶酸受体的SKOV3细胞具有较强特异性亲合力,其有望成为靶向显像叶酸高表达肿瘤的理想造影剂.     

表皮生长因子受体介导的信号转导与肿瘤侵袭、转移的关系研究进展

表皮生长因子受体（EGFR）属受体酪氨酸蛋白激酶,在多种肿瘤中表达或高表达。与配体结合后传递信号至细胞核内,调节基因的表达。参与生长、分化、增殖、血管发生和凋亡等多种细胞功能的调节。肿瘤的侵袭、转移是一个复杂的过程,也是导致肿瘤患者死亡的主要原因。本文就EGFR的结构、信号转导及其在肿瘤的侵袭和转移中的作用作一综述,为肿瘤的靶向治疗提供新思路。     

N-软脂酰基壳聚糖叶酸靶向微泡的体内外特性和靶向效果

目的 应用N-软脂酰基壳聚糖制备叶酸靶向微泡,评价其基本特征、体外靶向性及体内超声显影效果.方法 以高速剪切法制备叶酸靶向微泡和对照微泡,观察叶酸靶向微泡的大小、形态和叶酸分子在微泡的分布及对昆明鼠肾脏的超声显影效果和体外靶向效果,并与对照微泡比较.结果 叶酸靶向微泡呈空心球形结构,形态规则,分散均匀,平均粒径(1.32±0.20)μm,浓度(1.93±0.01)×109/ml;鼠肾对比显影明显增强,1 min、7 min视频强度分别为(30.35±5.01)GU、(17.41±3.15)GU,可视性对比增强持续时间(10.00±3.00)min;与叶酸受体高表达细胞结合数明显大于叶酸受体低表达细胞组和对照微泡组(P<0.01).结论 N-软脂酰基壳聚糖构建的叶酸靶向微泡可与叶酸受体有效结合,可用其作为分子探针,对叶酸受体高表达的肿瘤进行超声分子成像.     

表皮生长因子受体表达和结直肠癌生物学行为的关系

近年来,随着细胞受体和增殖调控的分子水平对肿瘤发病机制的进一步认识,开始了针对细胞受体、关键基因和调控分子为靶点的靶向治疗。表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor,EGFR）是受体酪氨酸激酶家族成员,基因定位于第7号染色体短臂（7p11-13）上,包含26个外显子,长约110kb,所编码的蛋白为I型跨膜酪氨酸蛋白激酶（tyrosine proteinkinase,TPK）。在多种肿瘤中高表达,针对其已经开发出一系列靶向抗肿瘤药物,已经部分应用于临床,取得一定疗效。本研究利用组织芯片和免疫组化技术检测EGFR在结直肠癌和正常结肠黏膜中的表达,分析EGFR与临床病理特征及预后的关系,探讨在结肠癌发生发展中的作用及应用靶向药物的可行性。     

以适体作为载体介导siRNA靶向运输的研究进展

小干扰RNA（siRNA）通过RNAi途径沉默目的基因,因此其在疾病治疗领域的应用受到关注。如今siRNA作为药物应用于治疗的主要问题是如何将siRNA靶向传递到目标细胞或组织。适体是一种体外合成的单链DNA或RNA寡核苷酸,由于对靶分子有高特异性、穿透力强、低免疫原性等特点,适体可作为载体用于药物的靶向运输。本文主要介绍用适体介导siRNA靶向传递的研究进展。     

叶酸-顺铂纳米药物的制备及其对人鼻咽癌细胞的靶向治疗作用

目的:制备连接叶酸分子的顺铂纳米药物,并研究该药物对人鼻咽癌细胞的体外靶向治疗作用.方法:采用化学共沉淀法制备顺铂纳米药物并通过聚乙二醇二胺连接叶酸分子合成叶酸-顺铂纳米药物(FA-MNP-CDDP)并对其进行表征.将人鼻咽癌细胞HNE-1和CNE-2与FA-MNP-CDDP体外共培养,采用普鲁士蓝染色法测定细胞摄取纳米药物的情况,采用MTT法测定纳米药物的细胞毒性.结果:合成FA-MNPCDDP纳米药物顺铂含量为(1.6 ±0.1)mg/mL,药物粒子平均直径为(10.1 ±1.5)nm.表达叶酸受体的HNE-1细胞对该纳米药物摄取能力显著强于不表达叶酸受体的CNE-2细胞.FA-MNP-CDDP对HNE-1细胞的体外抑制效果明显,IC50[(1.300±0.10)μg/mL]较单纯顺铂[(2.161±0.85)μg/mL]降低约40%.结论:叶酸-顺铂纳米药物具有针对鼻咽癌细胞的靶向载药和抑制增殖的能力.     

非小细胞肺癌患者外周血游离DNA中检测EGFR基因突变

目的检测非小细胞肺癌患者外周血游离DNA中表皮生长因子受体(EGFR)基因19和21外显子的突变情况,并与相应的肿瘤组织检测结果进行比较,探讨非小细胞肺癌患者应用外周血游离DNA检测EGFR突变的临床意义。方法应用实时荧光聚合酶链反应(PCR)技术检测32例非小细胞肺癌患者术后肿瘤组织和术前外周血游离DNA中EGFR基因19和21外显子的突变,所有扩增标本均经基因测序法验证。结果 32份外周血标本中,共检测到13份EGFR基因突变,突变率达40.6%,肿瘤组织中有16份EGFR基因突变,突变率达50.0%,外周血和肿瘤组织EGFR基因同时突变的有13份,两者突变一致性达到81.2%,两者间差异无统计学意义(P0.05)。结论外周血游离DNA代替肿瘤组织进行EGFR基因突变检测具有可行性,为无法取得肿瘤组织的非小细胞肺癌患者提供一种更快捷、简便的EGFR基因突变检测方法,其检测结果可为临床选择靶向药物治疗提供依据。     

超声微泡造影剂的肿瘤靶向治疗研究进展

近几年,国内外着眼于靶向微泡造影剂的研究,利用超声波与微泡造影剂的相互作用及所产生的生物学效应,可实现微泡所携带的基因/药物等向目标组织的转移释放,介导肿瘤细胞的凋亡及肿瘤微血管的栓塞阻断等,从而起到靶向治疗的作用。随着各种兼具诊断治疗双重作用的超声探头和靶向微泡造影剂包括纳米级微泡造影剂的研制,以及对超声生物学效应的深入研究,超声微泡介导肿瘤靶向治疗将为临床肿瘤的治疗带来新的希望。     

各型甲状腺肿瘤组织中生长抑素受体的表达

目的 用原位杂交方法 观察生长抑素受体在甲状腺肿瘤组织及癌旁组织中的表达.方法 根据生长抑素受体(SSTR)亚型的基因结构设计两种cDNA探针:针对各型生长抑素受体的寡核苷酸探针以及特异性针对二型生长抑素受体(SSTR2)的寡核苷酸探针序列,并分别与各型甲状腺肿瘤组织及癌旁组织行原位杂交,采用Mias图像分析仪进行灰度分析, mRNA丰度以信号强度x-±s表示,进行t检验.结果 甲状腺髓样癌组织中SSTR的表达明显高于癌周组织(P＜0.05),SSTR2仅在癌组织中有表达.SSTR在甲状腺乳突状癌组织中的表达明显高于癌周组织(P＜0.05),SSTR2在癌组织及癌周组织内均未见有表达.滤泡性腺癌组织SSTR的表达明显高于癌周组织(P＜0.05),癌组织及癌周组织均未见有SSTR2表达.嗜酸性细胞癌组织SSTR的表达明显高于癌周组织(P＜0.05),SSTR2仅在癌组织中有表达.结论 SSTR2仅在MTC及HCC的肿瘤组织中有表达;各型甲状腺肿瘤组织均表达除SSTR2之外的其他几型SSTR中的一种或数种,且肿瘤组织中的表达强度明显高于邻近正常组织.某些靶向生长抑素受体(尤其是特异性靶向SSTR2)的化合物(配体),可能成为甲状腺肿瘤尤其是甲状腺髓样癌和嗜酸性细胞癌的特异性显像剂和靶向治疗载体.     

间变性淋巴瘤激酶与肿瘤靶向治疗

间变性淋巴瘤激酶(ALK)因发现于间变性大细胞淋巴瘤(ALCL)中而得名,是一种受体酪氨酸激酶,属于胰岛素受体超家族,特异性表达于成人大脑组织中。研究发现,ALK除了可表达于ALCL,还可表达于弥漫性大B细胞性淋巴瘤、非小细胞肺癌、神经母细胞瘤、炎性肌纤维母细胞瘤等多种肿瘤中,在这些肿瘤中发生基因重排、点突变及扩增,因此ALK基因已成为抗肿瘤治疗的新靶点。ALK基因的靶向治疗药物克唑替尼在多种肿瘤的治疗中取得了很好的疗效,但耐药性的问题使其在肿瘤中的应用受到了限制。耐药的原因包括原发性耐药和继发性耐药两种,人们为了解决耐药性的问题,研制出了几种替代药物,包括ALK二代抑制剂、Hsp90抑制剂以及RNA干扰,为耐药患者的肿瘤治疗带来了希望。     

叶酸分子靶向载顺铂磁性纳米药物制备及表征

背景:醛基化海藻酸钠具有良好的水溶性和组织相容性,利用其改性Fe3O4磁性纳米颗粒可增加表面活性和稳定性,叶酸的修饰可赋予载体分子靶向性。目的:制备具有叶酸受体靶向及磁靶向的载顺铂磁性纳米药物(CDDP-FA-ASA-MNPs)。方法:采用高碘酸钠氧化法制备醛基化海藻酸钠,叶酸的羧基经二环己基碳二亚胺和N-羟基琥珀酰亚胺活化后合成FA与双端氨基聚乙二醇的耦连产物FA-PEG,化学共沉淀法制备Fe3O4,海藻酸钠侧链含有大量羧基,85℃下与Fe3O4纳米颗粒表面的羟基形成化学键结合,然后通过雪夫氏碱将FA-PEG与醛基化海藻酸钠相连接,最后根据配位络合的原理,顺铂分子中的-Cl被海藻酸钠的羧基取代,形成稳定的叶酸和醛基化海藻酸钠改性载顺铂磁性纳米复合物。结果与结论:所制备的磁性纳米药物呈颗粒状,稳定分散于水溶液中,Fe3O4磁核平均粒径为(8.116±0.24)nm,流体力学直径为(110.9±1.7)nm,zeta电位为(-26.45±1.26)mV,最大饱和磁化强度为56.2emu/g,顺铂包封率为(49.05±1.58)%,载药量为(14.31±0.49)%。体外实验证实,叶酸分子靶向载顺铂磁性纳米药物能被叶酸受体表达阳性的鼻咽癌细胞HNE-1和喉癌细胞Hep-2选择性摄取,而叶酸受体表达阴性的鼻咽癌细胞CNE-2则不摄取。提示所制备的CDDP-FA-ASA-MNPs具有良好的水溶性和稳定性,能被叶酸受体表达阳性的鼻咽癌和喉癌细胞摄取。     

叶酸分子靶向载顺铂磁性纳米药物制备及表征

背景：醛基化海藻酸钠具有良好的水溶性和组织相容性,利用其改性Fe3O4磁性纳米颗粒可增加表面活性和稳定性,叶酸的修饰可赋予载体分子靶向性。目的：制备具有叶酸受体靶向及磁靶向的载顺铂磁性纳米药物（CDDP-FA-ASA-MNPs）。方法：采用高碘酸钠氧化法制备醛基化海藻酸钠,叶酸的羧基经二环己基碳二亚胺和N-羟基琥珀酰亚胺活化后合成FA与双端氨基聚乙二醇的耦连产物FA-PEG,化学共沉淀法制备Fe3O4,海藻酸钠侧链含有大量羧基,85℃下与Fe3O4纳米颗粒表面的羟基形成化学键结合,然后通过雪夫氏碱将FA-PEG与醛基化海藻酸钠相连接,最后根据配位络合的原理,顺铂分子中的-Cl被海藻酸钠的羧基取代,形成稳定的叶酸和醛基化海藻酸钠改性载顺铂磁性纳米复合物。结果与结论：所制备的磁性纳米药物呈颗粒状,稳定分散于水溶液中,Fe3O4磁核平均粒径为（8.116±0.24）nm,流体力学直径为（110.9±1.7）nm,zeta电位为（-26.45±1.26）mV,最大饱和磁化强度为56.2emu/g,顺铂包封率为（49.05±1.58）%,载药量为（14.31±0.49）%。体外实验证实,叶酸分子靶向载顺铂磁性纳米药物能被叶酸受体表达阳性的鼻咽癌细胞HNE-1和喉癌细胞Hep-2选择性摄取,而叶酸受体表达阴性的鼻咽癌细胞CNE-2则不摄取。提示所制备的CDDP-FA-ASA-MNPs具有良好的水溶性和稳定性,能被叶酸受体表达阳性的鼻咽癌和喉癌细胞摄取。     

叶酸受体靶向液态氟碳纳米粒造影剂的制备及体外寻靶

目的 制备叶酸受体靶向的被脂质包裹的液态氟碳纳米粒造影剂,鉴定其基本性质,观察其体外靶向性能.方法 以氯仿将偶联叶酸的磷脂[DSPE-PEG(2000)]按照一定比例溶解在成膜材料中,用旋转蒸发仪去除有机溶剂成膜,加入磷酸盐缓冲液重新水合后,在悬液中逐滴加入适量液态氟碳,均质乳化后得到叶酸受体靶向的纳米粒造影剂.在人卵巢癌SKOV3细胞中验证该造影剂的靶向性能(靶向造影剂组),并与不带叶酸的普通造影剂组和游离叶酸干预组相比较.结果 叶酸受体靶向液态氟碳纳米粒造影剂外观与普通造影剂无明显差别.体外靶向实验发现此纳米粒造影剂聚集且牢固地黏附于SKOV3细胞,而普通造影剂组和游离叶酸干预组则未见明显特异性结合.结论 成功制备了偶联叶酸的被脂质包裹的液态氟碳纳米粒造影剂,该造影剂对高表达叶酸受体的SKOV3细胞具有较强的亲和力,有望成为卵巢癌靶向显影与治疗的理想分子探针.