大鼠再生坐骨神经病理结构计算机三维重建研究

目的:研究周围神经损伤后变性再生过程中的形态学改变,利用三维图像重建技术实现神经再生过程中形态改变的可视化.材料和方法:采用30只Wistar大鼠制作右侧坐骨神经切割伤模型,硅胶管桥接,术后3d、7d、15d、30d、60d、90d取坐骨神经断端两侧神经及对侧正常神经各5mm,丝线标记定位,石蜡切片,三色法染色,显微镜下观察,摄像并输入微机,进行图像配准和数据预处理,导入SGI图像工作站中完成三维图像重建及显示.结果:三色法染色标本结构层次清晰,境界分明,三维图像成功再现神经损伤后变性与再生过程中各个时间点的典型病理变化.结论:利用普通三色染色法与计算机三维图像重建技术相结合,是研究周围神经显微结构的一种有效方法和手段.     

大鼠坐骨神经损伤后神经再生的形态学观察

目的 研究周围神经损伤后的再生情况。方法 切断并原位吻合右侧SD大鼠坐骨神经。左侧不作任何处理、作为对照。手术后不同时间取跨越吻合口两侧的神经段作纵向冰冻切片,行乙酰胆碱酯酶(AChE)组织化学染色,观察神经纤维的变化。同时取左侧一段神经作对照染色。结果 右侧坐骨神经损伤后。术后第1天至第7天无神经纤维通过吻合口。且神经纤维排列杂乱;第14天只有小部分神经纤维通过吻合口;第21天有部分神经纤维通过吻口;第30天有较多神经纤维通过吻合口;第45天有大量神经纤维通过吻合口。但排列不整齐;第60天吻合口神经纤维排列整齐。而左侧的神经纤维排列整齐、均匀。结论 大鼠坐骨神经切断损伤后,神经纤维先发生溃变,1个月后有大量神经能够再生,至2个月,再生神经纤维的排列近似正常。     

联合应用神经生长因子和睫状神经营养因子治疗大鼠坐骨神经损伤

目的 探讨联合应用神经生长因子(NGF)和睫状神经营养因子(CNTF)对大鼠坐骨神经损伤后再生及功能恢复的影响。方法 切除120只大鼠左侧6mm长坐骨神经，随机分为4组，每组30只，分别行NGF CNTF、CNTF、NGF、等渗盐水(NS)靶肌肉注射。伤后行坐骨神经功能指数(SFI)、形态学和S—100α、神经中丝200(NF200)免疫组化检查。结果 联合应用NGF和CNTF组SFI有髓神经纤维直径、数目和S—100α、NF200阳性轴突计数均明显优于单独用药组。结论 联合应用NGF和CNTF可明显促进大鼠坐骨神经损伤后的再生与功能恢复。     

坐骨神经损伤修复过程中髓鞘变化的形态学研究

目的：探讨坐骨神经损伤修复过程中髓鞘的形态学变化，并对髓鞘显示方法的应用价值进行评估。方法：制备大鼠坐骨神经损伤实验模型，采用锇酸染色，改良苏木精染色和镀银染色等三种髓鞘显示方法对伤后30天，90天髓鞘的形态学变化进行比较研究。结果：应用三种方法均观察到伤后两组伤侧坐骨神经髓鞘形态结构同对照侧有明显差别，伤后30天神经髓鞘溃变程度很高；伤后90天，神经髓鞘形态结构接近正常。结论：三种髓鞘显示方法均能反映坐骨神经损伤修复过程中髓鞘的形态学变化，改良苏木精染色方法是显示髓鞘的形态结构及其与轴突关系的简捷有效的方法，锇酸染色方法不仅适用于显示髓鞘的形态结构，还可进行形态计量分析。     

肝细胞生长因子修复周围神经损伤研究

目的 探讨肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)对周围神经损伤修复的作用.方法 以Wistar大鼠坐骨神经挤挫伤为动物模型,神经损伤局部肌肉注射腺病毒介导的人肝细胞生长因子(Ad-HGF),与无注射HGF组对照,通过步态分析、肌肉湿重测定、计算机图像分析等指标评价神经损伤后再生效果.结果 术后4周,在坐骨神经指数、肌肉湿重恢复、计算机图像分析等再生指标的比较中,注射HGF组明显强于对照组(P<0.05).结论 HGF能促进大鼠坐骨神经损伤后的有髓纤维再生和功能恢复,是一种有效的治疗周围神经损伤的神经营养因子.     

腺病毒介导脑源性神经营养因子基因转移对神经根损伤后神经元的保护和促轴突再生作用

目的：探讨腺病毒向脊髓内转移脑源性神经营养因子（BDNF）基因能否在脊髓水平修复神经根损伤。方法：在大鼠神经根切断吻合模型基础上，通过显微注射法在立体定位仪上将2μl复制缺陷型重组腺病毒载体（AxCA-BDNF)直接注入大鼠神经根损伤部相应的脊髓腹角。观察伤后脊髓尼氏染色神经元和轴突计量及形态学改变。结果：与单纯损伤组比较，注射AxCA-BDNF可明显增加神经根伤后尼氏染色阳性神经元的百分率、有髓神经纤维数目以及髓鞘厚度。结论：神经根重建结合BDNF基因治疗可明显减少神经根伤后尼氏染色神经元的死亡以及促进轴突再生，是一种新的有效的治疗神经根损伤方法。     

靶肌肉注射甲钴胺对大鼠周围神经损伤再生的作用

目的　通过靶肌肉 (腓肠肌 )注射不同剂量的甲钴胺 ,观察其对大鼠坐骨神经损伤的再生作用 ,为临床肌肉局部注射甲钴胺促进周围神经再生探讨较佳的用药剂量和方法。　方法选用健康Wistar大鼠 30只 ,左侧坐骨神经横断后即刻行外膜缝合 ,制备大鼠坐骨神经损伤模型。随机分为A、B、C三组 ,每组 1 0只 ,A组注射甲钴胺 30 0 μg kg,B组注射甲钴胺 1 0 0 μg kg ,C组注射同体积的等渗盐水 1ml,术后靶肌肉注射 1次 d。术后第 4周、第 8周每组分别提取 5只大鼠 ,以左小腿三头肌湿重、光镜和电镜坐骨神经形态学观察并图像分析作为检测指标 ,分析不同剂量甲钴胺对大鼠坐骨神经损伤的影响。　结果　术后 4周左小腿三头肌湿重 ,A组为 (1 .36 7± 0 .0 1 2 )g ,B组为 (1 .1 6 4± 0 .0 1 1 )g,C组为 (0 .95 0± 0 .0 0 9)g ,差异有显著性意义 (P <0 .0 5 ) ;术后 8周 ,A组为 (2 .2 0 5± 0 .0 1 5 )g ,B组为 (1 .6 1 1± 0 .0 1 3)g ,C组为 (1 .2 30± 0 .0 1 4 )g ,差异有显著性意义 (P <0 .0 5 )。术后 4周和 8周行光镜和电镜观察 ,图像分析坐骨神经髓鞘的横截面积、壁厚度 ,A组优于B组 ,B组优于C组。　结论　靶肌肉注射甲钴胺可以促进周围神经的再生 ,高剂量的甲钴胺可以更好地发挥其对损伤神经的营养诱导作用 ,值     

动脉套管联合聚乙二醇在大鼠周围神经损伤中的应用

目的 观察应用动脉套管联合小间隙缝合聚乙二醇(PEG)冲洗法修复大鼠周围神经损伤的效果.方法 建立大鼠坐骨神经离断后神经重建模型,144只大鼠平均分为4组,每组36只,均选用雄性SD大鼠,体重200～250g.其中坐骨神经断端采用小间隙缝合盐水冲洗修复为A组,小间隙缝合PEG冲洗修复为B组,动脉套管联合小间隙缝合盐水冲洗修复为C组,动脉套管联合小间隙缝合PEG冲洗修复为D组.评估神经功能恢复时,采用行为学坐骨神经功能指数(SFI)及电生理神经冲动传导与复合肌肉动作电位(CMAP)对4组数据进行分析.评估神经再生情况时,应用苏木精-伊红染色法(HE染色)和透射电子显微镜(TEM)对4组数据进行采集.所有数据在各组术后1、4和8周进行检测.结果 D组行为学SFI值显著优于其他组;电生理学示各组在术后所有时间点均产生混合肌肉运动电位CMAP,但D组运动电位峰值高于其他组;组织病理学HE染色示D组下肢肌肉萎缩程度小于其他组且在对坐骨神经进行染色时发现D组再生神经纤维排列有序,具有正常直径和施万细胞,成纤维细胞较少;TEM示D组再生神经纤维数量最多、轴突最厚、髓鞘外观正常.结论 在对大鼠坐骨神经损伤模型中应用动脉套管联合小间隙缝合PEG冲洗修复效果显著优于其他方法,通过后期的临床转化,有望为临床上周围神经损伤的修复提供一种新的思路.     

碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对周围神经再生作用的实验研究

目的:探讨外源性bFGF对周围神经再生的作用。方法:6O只SD大鼠随机分治疗组、对照组各30只,钳夹损伤右侧坐骨神经后每日分别给予bFGF和生理盐水,术后行神经电生理和组织学检查。结果:计量分析治疗组运动神经传导速度、神经纤维密度、轴突直径和髓鞘厚度明显优于对照组。结论:bFGF能促进周围神经再生。     

银染法观察甲状腺激素人工神经促进周围神经再生的研究

目的　用Bielschowsky神经纤维银染法观察再生有髓神经通过PDLLA T3 支架材料的情况及大鼠有髓再生神经纤维的数量。方法　SD大鼠 5 4只 ,分成PDLLA T3 、PDLLA组和自体移植组 3组 ,同只大鼠右侧坐骨神经为正常对照。培养新生大鼠坐骨神经的雪旺细胞 ,将其种植在PDLLA T3 和PDLLA材料上备用 ,每只大鼠左侧坐骨神经经手术造成 1cm缺损 ,然后分别用以上 3组材料进行移植修复 ,在伤后 2周、1个月、2个月 3个时相点收集标本进行神经银染 ,染色结果通过图象分析仪进行分析 ,统计数据行t检验。结果　伤后 2周时各组均见新生的神经纤维通过神经移植段 ,各组之间无显著性差异 ,直到伤后 1个月 ,2个月后 ,PDLLA T3 组好于PDLLA组 ,差异有显著性 ,P <0 .0 5。自体移植组髓神经增加明显 ,高于其他 2组 ,差异有显著性 ,P <0 .0 5 ,但低于正常值。结论　Bielschowsky神经纤维银染法观察大鼠神经再生效果满意 ,新生的神经纤维可以通过PDLLA T3 ,效果好于PDLLA。     

周围神经损伤对脊髓运动神经元睫状神经营养因子表达的影响

目的 探讨周围神经损伤后脊髓运动神经元素达睫状神经营养因子（ＣＮＴＦ）水平的变化规律及其与神经元病理变化的相关性。方法 选用出生后３ｄ和成年大鼠各３０只,均分为对照组、伤后３,７,１４,２１,２８ｄ６组。切断不同鼠龄Ｗｉｓｔａｒ大鼠坐骨神经复制周围神经损伤模型,行免疫组织化学染色ＣＮＴＦ阳性脊髓运动神经元,利用图像分析系统计算脊髓ＣＮＴＦ阳性运动神经元的吸光度值,从而间接反映脊髓运动神经元ＣＮＴＦ     

Foxo3a在大鼠坐骨神经损伤后背根神经节中的表达

目的 探讨大鼠坐骨神经夹伤后Foxo3a在腰段背根神经节(dorsal root ganglia,DRG)中的表达变化及其意义.方法 将42只成年SD大鼠完全随机分为正常对照组和实验组.对实验组行坐骨神经夹伤术.运用Western blot及免疫荧光染色,观察大鼠坐骨神经夹伤对腰段DRG中Foxo3a表达的影响及其与生长相关蛋白的表达变化.结果 Western blot结果表明,坐骨神经夹伤后1 d,腰段DRG中Foxo3a蛋白表达开始明显下降,第2天达到最低值,随之逐渐升高,于4周后接近正常水平.坐骨神经夹伤后2 d细胞核增殖抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)和神经元生长相关蛋白(GAP-43)在DRG中的表达均开始上调,在7 d达到最高点,GAP-43则保持较高水平.免疫荧光染色结果表明,Foxo3a表达下降主要存在于神经元和神经胶质细胞内,并且PCNA与神经元细胞几乎无共定位,与神经胶质细胞共定位明显.结论 大鼠坐骨神经损伤后,Foxo3a在腰段DRG中的表达减少可能与神经胶质细胞增殖和轴突再生密切相关.     

局部持续分泌神经生长因子促周围神经再生作用的研究

目的探讨以微囊化基因修饰细胞为载体,在局部持续分泌神经生长因子(nerve growth factor,NGF)促周围神经再生的作用。方法NGF基因修饰3T3细胞(3T3-NGF),采用微胶囊制备技术制备微囊化的3T3-NGF细胞;体外培养后分别检测活性和生物活性。选取SD大鼠制备坐骨神经横断损伤模型后,随机分微囊化3T3-NGF细胞移植组(A组)、裸3T3-NGF细胞移植组(B组)、空胶囊移植组(C组)和阴性对照组(D组)。术后不同的时间采用组织形态学检查分别观察各组坐骨神经恢复情况。结果3T3-NGF细胞在微胶囊内保持正常活性和增殖能力,可以持续分泌NGF。移植术后A组的患肢恢复情况好于B,C和D组。移植术后4,8及12周时,各组动物行组织形态学检查,显示A组的损伤远端神经纤维密度、轴突直径和髓鞘厚度等评价神经再生的指标均优于B,C和D组(P<0.05),而B,C和D三组之间差异无显著性(P>0.05)。结论体外培养的3T3-NGF细胞,在微胶囊内可保持正常的增殖能力和生物活性;微囊化3T3-NGF细胞移植到大鼠周围神经损伤的局部,在微胶囊的免疫保护下,可持续分泌NGF,有促进周围神经再生修复的作用。     

不同年龄大鼠坐骨神经损伤后睫状神经营养因子对脊髓组织中Caspase3表达的影响

目的　观察睫状神经营养因子 (CNTF)对天冬氨酸特异酶切的半胱氨酸蛋白酶 (Caspase3)在坐骨神经损伤后不同年龄大鼠脊髓组织中表达的影响。方法　幼年、成年、老年Wistar大鼠各 2 70只 ,随机分为正常组 (1 8只 )、CNTF组 (1 2 6只 )和生理盐水组 (1 2 6只 )。CNTF组和生理盐水组切出长 2mm右侧坐骨神经 ,用硅胶管连接近、远侧神经残端制作神经再生小室 ,CNTF组再生小室内注入 2 5 μg/ml重组CNTF1 5 μl,生理盐水组再生小室内注入生理盐水 1 5 μl,CNTF组和生理盐水组分为术后 1、3天和 1、2、4、8、1 2周组。利用免疫组织化学、Westernblotting检测脊髓Caspase3的分布与表达强度变化 ,进行Caspase3活性测定。结果　损伤后各年龄组伤侧脊髓Caspase3蛋白表达增强 (P <0 .0 5或 0 .0 1 ) ,以前角运动神经元变化最为明显 ,幼年、成年、老年CNTF组Caspase3表达较生理盐水组减弱 (P <0 .0 5或 0 .0 1 ) ;各组对侧未伤侧与正常组比较 ,差异无显著性意义 (P >0 .0 5 )。幼年、老年及成年生理盐水组于损伤侧脊髓Caspase3活性升高 ,各时相点幼年大鼠Caspase3活性高于老年及成年 (P <0 .0 5或 0 .0 1 ) ,幼年、成年、老年CNTF组Caspase3活性低于生理盐水组 (P <0 .0 5或 0 .0 1 )。生理盐水组及CNTF组对侧未伤侧Ca     

含血运的神经外膜管桥接神经缺损的实验研究与临床应用

用含有血运的神经外膜管桥接兔坐骨神经缺损4cm,术后6个月神经纤维沿着外膜管生长良好,神经纤维排列规则,其复合运动电位、传导速度、波伏、横径平均值与自体神经移植者无差异。临床应用48例获得较好效果。     

兔膈神经移位术后早期轴浆流转运的核素显像研究

目的 探讨在体核素显像检测膈神经移位术后早期再生轴浆流转运的可行性，为临床应用提供依据。方法 选用^131I-酪氨酸和^99Tc^m-亚甲基二膦酸盐(MDP)，通过计算机图像融合，在兔动物模型中分别对正常坐骨神经及移位后膈神经进行轴浆流核素显像。结果 正常兔坐骨神经内轴浆流转运速率为30mm／d。膈神经移位术后1个月即可在再生良好组中测出^131I-酪氨酸通过吻合口向远端转运，转运速率为40mm／d。在瘢痕组中发现^131-酪氨酸不能向远端转运。^131I-酪氨酸在神经内的转运可用于在体示踪显像，与^99Tc-MDP图像融合可对转运图像进行定位。结论 该方法可在术后早期直观检测轴浆流通过神经吻合口的能力。     

大鼠坐骨神经损伤对背根节GDNF的表达的影响

目的 应用免疫组化技术观察大鼠坐骨神经条件性损伤对相应背根节及坐骨神经胶质细胞源性神经营养因子（glial cell line-derived neurotrophic factor,GDNF)表达的影响，以探讨GDNF对损伤神经元的作用。方法 45只成年雌性Wistar大鼠随机分为3组：A组（N＝5）正常对照组，B组（N＝20）坐骨神经压榨伤组，C组（N＝20）坐骨神经切断／结扎组；B、C两组按存活期不同再各分为4个亚组，每组5例。大鼠分别于伤后3天、2周、1个月、2个月处死，取材L5节段损伤侧背根节及损伤坐骨神经的远近节段，免疫组化染色观测GDNF表达。结果 （1）正常背根节细胞GDNF表达主要分布于小神经元，少数为大神经元。（2）坐骨神经损伤促使同侧背根节神经元GDNF表达显著增强，伤后2周达到高峰；B组背根节细胞GDNF表达在伤后1个月时轻度下调，伤后2个月恢复为对照组水平。C组背根节细胞GDNF表达保持高水平，并至观察后期2个月。（3）坐骨神经损伤同时诱导背根节卫生细胞及坐骨神经雪旺氏细胞，GNDF表达显著增强，其中远端坐骨神经GDNF表达强于近端。B组这些细胞的阳性表达持续至伤后2周，C组伤后1个月时其表达仍显著。结论 GDNF是参与损伤初级感觉神经元反应的重要因子，并可能对正常及受损背根节细胞发挥营养作用。