LAT和SLP76在T细胞信号转导中的作用

LAT是一个相对分子质量为36000~38000的跨膜蛋白,SLP76是一个相对分子质量为76000含有SH2结构域的白细胞磷蛋白,二者都属于转接蛋白,主要表达在T细胞、自然杀伤细胞、骨髓细胞和血小板,它们既没有内在的酶催化活性也没有转录活性,但它们具有蛋白-蛋白或蛋白-脂质相互作用的结构域,在各种信号转导通路中形成大分子复合物,通过介导分子间相互作用从而介导信号的整合和分配。LAT、SLP76作为信号转接蛋白在T细胞活化的信号转导过程中发挥着重要作用。     

高表达衔接蛋白Src羧基端激酶结合蛋白对Jurkat细胞形态及功能的影响

背景：衔接蛋白分子的联动和协同有效调控T细胞的信号转导,形成级联放大或限制,最终实现T细胞复杂的免疫功能。蛋白分子Src羧基端激酶结合蛋白正是衔接蛋白的一种,其主要是通过负反馈调节Src家族激酶活性。而这种负反馈调节作用依赖于Src羧基端激酶结合蛋白的Y317,可能涉及Src羧基端激酶的SH2结构域。 目的：探索衔接蛋白Cbp对Jurkat细胞形态及功能的作用。 方法：构建仅表达增强绿色荧光蛋白的融合蛋白和Src羧基端激酶结合蛋白-增强绿色荧光蛋白的融合蛋白的病毒颗粒。将Jurkat细胞分为未转染组、阴性对照组和Src羧基端激酶结合蛋白组,后2组转染仅表达增强绿色荧光蛋白的病毒和转染Src羧基端激酶结合蛋白-增强绿色荧光蛋白的病毒。 结果与结论：细胞转染效率大于95%, Src羧基端激酶结合蛋白定位于细胞膜上。转染Src羧基端激酶结合蛋白-增强绿色荧光蛋白病毒的Jurkat细胞,皱缩细胞增多,大小均一性较差,细胞坏死凋亡的数量增加,细胞中Src羧基端激酶结合蛋白基因表达上调,Src羧基端激酶表达下降,而酪氨酸蛋白激酶表达增加。提示Jurkat细胞转染Src羧基端激酶结合蛋白后,可使细胞存活率下降,细胞信号转导功能减弱。  中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建;骨细胞;软骨细胞;细胞培养;成纤维细胞;血管内皮细胞;骨质疏松;组织工程     

胰岛素受体底物家族成员的结构和组织特异性与功能的关系

胰岛素(insulin)/胰岛素样生长因子1(insulin-like growth factor 1,IGF-1)信号通路在细胞的分化、生长、生存及代谢起非常重要作用。胰岛素信号传递首先需要胰岛素/IGF-1与胰岛素受体(insulin receptor,IR)结合,磷酸化胰岛素受体底物(insulin receptor substrates,IRSs)后形成一个紧密连接的三聚物。磷酸化的IRSs作为停靠蛋白(docking protein)再激活一系列包含Src同源结构域2(SH2)的蛋白,引起相应的生物学效应。目前发现IRSs从IRS-1到IRS-6共6种,它们的分布存在明显的组织特异性,IRS-1、2在人体多种组织中分布广泛;IRS-3则在脂肪组织中居多;而IRS-4、5、6在人体组织表达相对较低。本文拟对IRSs在组织中分布特异性与功能作一综述。     

PH结构域与细胞信号转导

PH结构域是一段存在于血小板中的主要的PKC底物Pleckstrin中的重复序列.同源序列分析证实这一约100个氨基酸组成的相对保守的序列亦存在于多种其它的信号转导分子例如:蛋白激酶类,GTP酶类,GTP结合蛋白调节分子,磷酯酶C以及某些细胞骨架蛋白中.这样的分布特点表明PH结构域可能与SH2或SH3结构域的功能类似,即介导信号转导分子间的相互作用,构成细胞信息传递的网络.蛋白酪氨酸激酶Tec家族成员Btk的N端含有PH结构域,其点突变可导致遗传性免疫缺陷病(XLA)的现象提示该结构域在B细胞的发育中可能具有重要功能.     

酪氨酸激酶Btk家族的结构和功能

Btk(Bruton'styrosinekinase,Bruton酪氨酸蛋白激酶)家族是新近发现的一类非受体酪氨酸蛋白激酶,包括Btk等5个成员。该家族成员同源程度高,包括PH、TH、SH2、SH3B及Src1等5个结构功能域,与PI3(磷脂酰肌醇-3-激酶K)、G-蛋白双受体等结合后发生激活,通过PLCg2(磷脂酶C-g2)、PKCbI(丝氨酸-苏氨酸激酶bI)等下游信号分子,参与对血管生成、细胞增殖和凋亡以及细胞运动的调节。     

Ig融合蛋白在配体研究中的应用

免疫球蛋白(immunoglobulin, Ig)融合蛋白是指 在基因水平上，将目的蛋白基因同Ig部分片段基因 相连，并在真核或原核细胞中表达具有上述2部分 结构域的重组蛋白。     

CD45分子对Src家族蛋白酪氨酸激酶活性的调节

CD45分子发挥磷酸酶活性使Src家族蛋白酪氨酸激酶的抑制位点磷酸化,激酶区内自磷酸化位点去磷酸化,而Src家族蛋白酪氨酸激酶的这两个主要的磷酸化位点的磷酸化状态决定了激酶的活性。因此,CD45分子既可对Src家族蛋白酪氨酸进行正向调节。又可对其进行负向调节;在TCR相关信号传递过程中,CD45分子对Src家族激酶起正向调节作用;在整合素介导粘附过程中,CD45分子对Src家族激酶起负向调节作用。这是因为细胞内的微环境不同,CD45分子对于Src家族激酶活性的调节功能也就不同,本文拟就有关内容作一综述。     

079 CD45分子对Src家族蛋白酪氨酸激酶活性的调节

CD45分子发挥磷酸酶活性使Src家族蛋白酪氨酸激酶的抑制位点磷酸化,激酶区内自磷酸化位点去磷酸化,而Src家族蛋白酪氨酸激酶的这两个主要的磷酸化位点的磷酸化状态决定了激酶的活性.因此,CD45分子既可对Src家族蛋白酪氨酸进行正向调节.又可对其进行负向调节;在TCR相关信号传递过程中,CD45分子对Src家族激酶起正向调节作用;在整合素介导粘附过程中,CD45分子对Src家族激酶起负向调节作用.这是因为细胞内的微环境不同,CD45分子对于Src家族激酶活性的调节功能也就不同,本文拟就有关内容作一综述.     

CD45分子对Src家族蛋白酪氨酸激酶活性的调节

CD4 5分子发挥磷酸酶活性使Src家族蛋白酪氨酸激酶的抑制位点磷酸化 ,激酶区内自磷酸化位点去磷酸化 ,而Src家族蛋白酪氨酸激酶的这两个主要的磷酸化位点的磷酸化状态决定了激酶的活性。因此 ,CD4 5分子既可对Src家族蛋白酪氨酸进行正向调节。又可对其进行负向调节 ;在TCR相关信号传递过程中 ,CD4 5分子对Src家族激酶起正向调节作用 ;在整合素介导粘附过程中 ,CD4 5分子对Src家族激酶起负向调节作用。这是因为细胞内的微环境不同 ,CD4 5分子对于Src家族激酶活性的调节功能也就不同 ,本文拟就有关内容作一综述     

051 TRAF：一种重要的接头分子

近年来，在对TNF受体超家族成员的研究中相继鉴定出了许多胞内接头分子，主要分为两类即含有死亡结构域(DD)的蛋白和含有TRAF同源结构域的蛋白。TRAF分子是一类具有多种功能的细胞内信号接头分子，迄今已发现有15种之多。这类分子在细胞内的信号网络中与其它分子相互作用最终引起了NF-κB和JNK的活化，由此影响细胞的生存与死亡。本文对TRAF2为例，对TRAF分子的结构、功能、信息传递等方面加以简要综述。     

SH2结构域识别磷酸化酪氨酸的分子机制及其生物学作用

由约100个氨基酸残基组成的SH2结构域特异性识别配体上磷酸化酪氨酸及其C端的3～6个氨基酸残基。其对配体的识别特性取决于特定的空间结构。SH2结构域广泛存在于蛋白酪氨酸激酶、磷酸酶、磷酯酶、信号接头蛋白及转录因子等蛋白分子内,而参与调控相应的信号传导通路。SH2结构域所介导的信号通路的异常会导致多种遗传病及肿瘤的发生。因此对其配体识别特性的研究及相应的靶分子模拟物的研究受到生物学家及药学家的青睐。     

P53调节蛋白ASPPs的分子生物学特性及其与肿瘤的关系

ASPPs(含有富含脯氨酸结构域、锚蛋白重复区及SH3结构域的蛋白)是一类新发现的凋亡调节蛋白,它们能够特异性地调节P53蛋白家族的凋亡活性。ASPPs由ASPP1、ASPP2和iASPP3个同源性很高的成员组成,其中ASPP1、ASPP2可正向调节P53活性,而iASPP的功能恰好与之相反;越来越多的研究表明,此类蛋白功能多样,可参与多条细胞信号通路。ASPPs的异常调控与肿瘤发生、发展密切相关,有望成为肿瘤治疗的新靶点。     

FasL相关蛋白SH3P12影响FasL细胞膜表达效应研究

目的 研究FasL相关蛋白SH3P12对FasL表达的影响。方法 构建SH3P12真核细胞表达载体，并与FasL共同短暂表达于人胚肾细胞293T细胞。以免疫共沉淀和免疫印迹法确定目的蛋白之间的相互作用，以免疫荧光染色结合激光共聚焦显微镜观察SH3P12与FasL在细胞内表达。结果 在转染的293T细胞中，SH3P12与FasL可形成免疫共沉淀的蛋白-蛋白复合物。荧光蛋白标记结合显微镜观察提示在无SH3P12存在时，FasL主要分布于293T细胞膜，并伴随部分蛋白表达在细胞内高尔基体或内含体样颗粒中；在有SH3P12存在时，FasL与SH3P12形成复合体，共同定位于细胞膜，此时细胞内表达FasL量明显降低。结论 SH3P12为FasL细胞内结合蛋白，其生物学活性可能为稳定FasL在细胞膜上的表达。     

TRAF:一种重要的接头分子

近年来 ,在对TNF受体超家族成员的研究中相继鉴定出了许多胞内接头分子 ,主要分为两类即含有死亡结构域 (DD)的蛋白和含有TRAF同源结构域的蛋白。TRAF分子是一类具有多种功能的细胞内信号接头分子 ,迄今已发现有 15种之多。这类分子在细胞内的信号网络中与其它分子相互作用最终引起了NF κB和JNK的活化 ,由此影响细胞的生存与死亡。本文对TRAF2为例 ,对TRAF分子的结构、功能、信息传递等方面加以简要综述。     

SH2A 基因对细胞信号转导的影响及其亚细胞定位

目的 研究Src同源域2(src homology 2，SH2)A基因在细胞信号转导中的作用并进行亚细胞定位。方法 通过RT—PCR方法扩增SH2A cDNA编码序列，构建真核重组表达载体pcDNA3．1-SH2A，利用脂质体转染肝癌Bel7402细胞、COS7细胞，检测蛋白酶C(protein kinaseC，PKC)、酪氨酸蛋白激酶(tyrosine protein kinase，TPK)、丝裂原激活蛋白激酶(mitogen activated protein kinase，MAPK)活性的改变；另构建pEGEP—SH2A，转染同前，荧光显微镜观察荧光定位。结果 测序结果显示真核重组表达载体pcDNA3．1-SH2A及pEGFP—SH2A中均含有SH2AcDNA编码序列；肝癌Bel7402细胞、COS7细胞转染pcDNA3．1-SH2A后，胞浆PKC的活性下降了40％左右，MAPK和TPK活性未见明显改变。荧光显微镜观察发现SH2A基因在细胞质中表达。结论 SH2A基因编码蛋白在PKC信号转导通路中起抑制作用；SH2A基因编码蛋白定位于细胞质。     

TRAF：一种重要的接头分子

近年来，在对TNF受体超家族成员的研究中相继鉴定出了许多胞内接头分子，主要分为两类即含有死亡结构域（DD）的蛋白和含有TRAF同源结构域的蛋白，TRAF分子是一类具有多种功能的细胞内信号接头分子。迄今已发现有15种之多，这类分子在细胞内的信号网络中与其它分子相互作用最终引起了NF-кB和JNK的活化，由此影响细胞的生存与死亡。本文对TRAF2为例，对TRAF分子的结构。功能、信息传递等方面加以简要综述。     

蛋白酪氨酸磷酸酶SHP-2对Ang Ⅱ刺激的心肌成纤维细胞增殖的影响

目的: 探讨含有Src同源结构域2的蛋白酪氨酸磷酸酶2 (Src homology 2 domain-containing protein tyrosine phosphatase 2, SHP-2) 对血管紧张素Ⅱ (angiotensin Ⅱ, Ang Ⅱ) 刺激的心肌成纤维细胞(cardiac fibroblasts,CFs)增殖的作用。方法: 差速贴壁法体外培养心肌成纤维细胞,以波形蛋白(vimentin)鉴定CFs纯度; MTT法检测Ang Ⅱ作用下心肌成纤维细胞增殖率,采用重组腺病毒过表达SHP-2和SHP-2抑制剂NSC-87877分别对Ang Ⅱ作用下的细胞增殖的影响。结果: Ang Ⅱ 对CFs增殖的促进作用有剂量依赖性,其促进细胞增殖的最高浓度为10^-7 mol/L;在AngⅡ 的刺激下,SHP-2可以促进心肌成纤维细胞增殖,并且突变体组比野生型组增殖更明显(P<0.01)。 SHP-2抑制剂NSC-87877达到50 μmol/L时可以明显抑制Ang Ⅱ刺激下的CFs增殖。结论: Ang Ⅱ的促CFs增殖作用是通过SHP-2调控的。     

p66ShcA蛋白与机体衰老关系

p66ShcA蛋白是哺乳动物原癌基因Shc家族成员中的一员,除具有该家族特有的保守结构域(PTB和SH2)外,在N端具有特有的CH2结构域。当细胞在外界压力(H2O2、UV)刺激条件下,p66ShcA蛋白CH2结构域中36位的苏氨酸磷酸化,参与p53介导的凋亡信号通路,促进细胞凋亡。近年的研究阐明了氧应激引起的细胞凋亡和机体衰老之间的关系,因此,p66ShcA蛋白是联系细胞凋亡和衰老的交汇点。目前通过对p66ShcA蛋白转录方式的研究发现,p66ShcA蛋白启动子甲基化和p66ShcA蛋白的表达有负调控作用,所以对p66ShcA蛋白表达的调控,为延缓机体衰老及治疗由衰老引起的各种疾病带来新的思路。     

抗原受体启动淋巴细胞活化信号传导中的接头蛋白

接头蛋白 (adapter proteins)是一类既无激酶活性 ,也无转录因子活性 ,但可介导信号蛋白分子之间或信号蛋白与脂类分子间相互作用的蛋白分子。在抗原受体启动的淋巴细胞活化信号传导途径中 ,接头蛋白分子发挥着重要的衔接和调节作用。本文介绍与 T细胞活化相关的 L AT、SL P- 76和 Gads,与 B细胞活化相关的 BL NK与 MAPK途径相关的 Grb2、Shc、Sos和 Vav分子 ,及具有负性调节作用的 Cb1等接头蛋白分子近年来的研究进展     

胰岛素受体底物家族中的两个新成员

胰岛素受体底物蛋白参与多种激素、细胞因子的信号转导,可联系下游台SH2结构域的蛋白。它是一种极为重要的信号传递中介分子。胰岛素受体底物家族有4个成员。本文从基因结构、蛋白质结构介绍新发现的两个成员(IRS-3、IRS-4)的一些基本特征。