小肠脂肪酸结合蛋白基因多态性与冠心病患者血脂水平关系的研究

目的探讨小肠型脂肪酸结合蛋白（FABP2）外显子2第54位密码子的基因多态性与不同民族冠心病患者血脂水平的关系。方法收集人选人群的空腹外周血标本,全血用于提取DNA,血清用于检测血脂。采用聚合酶链反应（PCR）,DNA限制性内切酶酶切（RFLP）等技术,分别对病例组（汉族冠心病组60例,蒙古族冠心病组60例）和对照组（汉族对照组51例,蒙古族对照组51例）54A／TFABP2基因型进行分析。结果（1）汉族冠心病组人群54T等位基因频率为0．542,54A等位基因频率为0．458;蒙古族冠心病人群54T等位基因频率为0．708,54A等位基因频率为0．292;汉族对照组人群54T等位基因频率为0．284,54A等位基因频率为0．716;蒙古族对照组人群54T等位基因频率为0．353,54A等位基因频率为0．647;与对照组相比：汉族及蒙古族冠心病组人群突变型54T等位基因频率明显增高,且差异均有统计学意义（统计值分别为：X2=14．967,P〈0．05;x2=28．083,P〈0．05）;蒙古族冠心病人群突变型54T等位基因频率较汉族冠心病人群增高,且差异有统计学意义（X2=7．111,P〈0．05）。（2）与FABP2Thr54（-）者相比,冠心病组FABP2Thr54（＋）者的空腹血浆TG[汉族冠心病：Thr54（-）人群为（1．89±0．57）mmol／L,Thr54（＋）人群为（3．92±1．63）mmoL／L,P=0．001;蒙古族冠心病组：Thr54（-）人群为（2．23±0．13）mmol／L,Thr54（＋）人群为（4．03±1．14）mmol／L,P=0．035]、低密度脂蛋白胆固醇[汉族冠心病：Thr54（-）人群为（3．09±0．92）mmol／L,Thr54（＋）人群为（4．05±1．14）mmol／L,P=0．025;蒙古族冠心病组：Thr54（-）人群为（4．26±0．08）mmol／L,Thr54（＋）人群为（5．104-0．56）mmol／L,P=0．045]水平升高。结论（1）内蒙古自治区呼和浩特市市区蒙古族及汉族人群中存在FABP2外显子2第54位密码子的基因多态性。（2）FABP2基因多态性是冠心病患者脂质代谢异常的影响因素,可能与冠心病发病风险有关,携带FABP2Thr基因的蒙古族个体冠心病发病风险增高。     

慢性HBV感染者甘露糖结合蛋白基因多态性与HBV基因型的关系

目的探讨甘露糖结合蛋白(MBP)基因多态性及HBV基因型与慢性乙型肝炎(HBV)进展的关系。方法采用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法和实时荧光定量PCR(FQ-PCR)技术对360例慢性HBV感染者[其中66例无症状HBV携带者组(ASC组)、182例慢性乙型肝炎患者组(CH组)、112例肝硬化患者组(LC组)和65例对照组]的MBP基因第54号密码子多态性和HBV基因分型进行检测。结果 ASC组和轻、中型CH组均以B基因型占优势,MBP基因GGC/GAC基因型频率和GAC等位基因频率与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);重型CH组、代偿期LC组、失代偿期LC组均以C基因型占优势,MBP基因GGC/GAC基因型频率和GAC等位基因频率显著高于对照组(P<0.05),其中失代偿期LC组突变率最高(37.7%)。结论该地区乙型肝炎人群以B和C基因型为主;MBP基因第54号密码子突变与HBV感染的慢性化无明显关系,而与HBV C基因型及慢性HBV感染者的肝病进展有关。     

系统性红斑狼疮病人甘露糖结合蛋白基因多态性

目的　探讨 SL E病人 MBP基因多态性。方法　用多聚酶链反应 -限制性片段长度多态性 ( PCR-RFLP)法检测 5 6名正常健康者和 62名 SL E病人外显子 1的第 5 4号密码子多态性 ( GGC/GAC)。结果　正常人 MBP基因型分布频率 GGC/GGC为 76.8% ( 4 3/5 6) ,GGC/GAC为 2 3.2 % ( 1 3/5 6) ;SLE病人GGC/GGC为 69.4% ( 4 3/62 ) ,GGC/GAC为 2 9.0 % ( 1 8/62 ) ,GAC/GAC为 1 .61 % ( 1 /62 ) ;与正常人相比 ,无显著性差异。红斑狼疮病人各组之间等位基因分布频率亦无统计学差异 ( P>0 .0 5 )。结论　患 SL E疾病危险性与 MBP第 5 4号密码子基因变异无相关性     

血栓调节蛋白基因多态性与肺栓塞的风险评估

目的 探讨血栓调节蛋白(TM)THBD基因rs1042579和rs3176123位点的单核苷酸多态性(SNP)与肺栓塞发生风险的相关性.方法 选取100例栓塞患者(肺栓塞组)及100例健康志愿者(对照组)作为研究对象,提取研究对象全血基因组DNA,对THBD基因上的两个SNP位点rs1042579和rs3176123进...     

临床分离表皮葡萄球菌附属基因调节因子agr基因多态性分析

目的探讨临床分离表皮葡萄球菌附属基因调节因子agr基因多态性,了解表皮葡萄球菌的分子特征。方法收集84株临床分离并经过全自动微生物鉴定系统准确鉴定的表皮葡萄球菌,通过PCR扩增esp和mecA基因准确鉴定和区分甲氧西林敏感表皮葡萄球菌(MSSE)和耐甲氧西林表皮葡萄球菌(MRSE),采用多重PCR扩增表皮葡萄球菌的agr等位基因,分析agr基因多态性。结果 84株临床分离表皮葡萄球菌中,20株为MSSE,占23.80%,其中agrⅠ型5株,agrⅡ型2株,agrⅢ型2株,agr未分型11株。64株为MRSE,占76.20%,其中agrⅠ型37株,agrⅡ型7株,agrⅢ型11株,agr未分型9株。血液来源的表皮葡萄球菌中,agrⅠ型25株,agrⅡ型5株,agrⅢ型10株,agr未分型16株。非血液来源的表皮葡萄球菌中,agrⅠ型17株,agrⅡ型4株,agrⅢ型3株,agr未分型4株。结论临床分离表皮葡萄球菌agr基因存在明显多态性,MSSE中未分型agr较常见,MRSE中以agrⅠ型和agrⅢ型为主。     

裂解酶片段长度多态性在沙眼衣原体主要外膜蛋白基因分型中的应用研究

目的 建立沙眼衣原体（Ct）主要外膜蛋白基因（ompl）上游引物5′末端地高辛标记裂解酶片段长度多态性（CFLP）分型方法，并对Ct临床分离株进行分型。方法 取临产孕妇宫颈刮片及其新生儿鼻咽拭子组成母婴配对标本300对605份，用套式聚合酶链反应扩增Ct ompl第四可变区；用建立的CFLP方法对其进行基因分型。结果 孕妇宫颈Ct检出率11％（33／300），母婴传播率24．2％（8／33）；8对Ct阳性母婴配对标本CFLP图谱呈四类，经测序证实分别为E、F、H、D型（各3、2、2、1对），各占37.5％、25％、25％和12．5％，且每对母子CFLP图谱完全一致；同一标本不同批次和相同基因型不同标本的CFLP图谱一致。结论 上游引物5′末端地高辛标记Ct ompl CFLP分型方法灵敏度高、重复性好、操作简便、快速、费用相对低廉，无放射污染，是一种极具潜力的Ct基因分型方法。     

血栓调节蛋白-33G/A基因多态性和急性心肌梗死的相关性研究

目的 检测急性心肌梗死(acute myocardial infartction,AMI)患者血栓调节蛋白(thrombomodulin,TM)-33G/A基因多态性,探讨急性心肌梗死发病和血栓调节蛋白-33G/A基因位点突变之间的相关性.方法 浙江医院心内科2004年3至8月收住的临床表现、心电图及冠脉造影确诊为AMI的患者80例,对照组为同时期本院收住的既往无冠心病病史和心电图正常的房颤患者.入院第2天清晨空腹抽取静脉血2 ml取清晨空腹静脉血,用细胞DNA抽提试剂盒提取基因组DNA.依据TM蛋白启动子序列-33位点突变设计引物,聚合酶链反应(PCR)扩增特定序列,1.5%琼脂糖凝胶电泳,EB染色分析,筛选特定的PCR产物纯化,测序分析突变的碱基.病例组和对照组基因突变位点和基因突变率差异比较用χ2检验,P＜0.01是差异有统计学意义χ2检验用SPSS 12.0统计软件包分析计算.结果 80例AMI患者中18例可见-33G/A基因突变,基因突变率为29.0%;对照组78例中6例发生该基因突变,基因突变率为8.3%(P＜0.01).结论 血栓调节蛋白-33G/A位点突变与AMI的发生有显著的相关性.     

血栓调节蛋白基因变异的研究进展

血栓调节蛋白（thrombomodulin,TM)是存在于内皮细胞表面的一种糖蛋白，通过与凝血酶结合激活蛋白C（PC），从而发挥抗凝作用。对TM编码基因、启动子及其近侧、远侧调控序列的突变分析发现，G1456T、G127A等TM基因突变与血栓栓塞性疾病（thromboembolic disease,TED)发生有密切相关性，TM基因变异会引起家族性的血栓形成倾向。另外，还发现TM调控基因上启动子近侧G－33A突变与颈动脉、冠状动脉粥样硬化相关，启动子远侧－1208／－1209TT的缺失与静脉曲张相关，提示TM基因突变与缺陷可能增加了TED的危险因子。     

上海地区汉族人血栓调节蛋白基因1418位多态性研究

目的探讨上海地区汉族人群中血栓调节蛋白(TM)胞外编码区基因片段是否存在多态性.方法以基因组DNA为模板,用PCR扩增目的片段,构建测序质粒,进行测序分析.结果28名上海地区汉族正常人标本中,TM1418位基因型为T/C 16名、T/T10名、C/C 2名.结论上海地区汉族人群中TM胞外编码区基因片段1418位存在C/T两态,且以基因型T/C(表型为TM455V/A)和T/T为主(白人和黑人以基因型C/C为主),等位基因T的频率(64.3%)明显高于白人(＜35%)和黑人(＜7%).     

血栓调节蛋白基因变异的研究进展

血栓调节蛋白(thrombomodulin,TM)是存在于内皮细胞表面的一种糖蛋白,通过与凝血酶结合激活蛋白C(PC),从而发挥抗凝作用。对TM编码基因、启动子及其近侧、远侧调控序列的突变分析发现,G1456T、G127A等TM基因突变与血栓栓塞性疾病(thromboembolic disease,TED)发生有密切相关性,TM基因变异会引起家族性的血栓形成倾向。另外,还发现TM调控基因上启动子近侧G-33A突变与颈动脉、冠状动脉粥样硬化相关,启动子远侧-1208/-1209TT的缺失与静脉曲张相关,提示TM基因突变与缺陷可能增加了TED的危险因子。     

血液透析患者低密度脂蛋白受体Taq I位点基因多态性与血脂水平检测

目的 探讨血液透析患者脂代谢紊乱的临床特征及低密度脂蛋白受体(LDLR)基因多态性对脂代谢的影响。方法 生化方法检测血液透析血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDLC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDLC)、载脂蛋白(Apo A1、ApoB、ApoE)及脂蛋白[Lp(a)]水平，多聚合酶链反应-限制性片断长度(PCR—RFLP)方法检测LDLR内含子4Taq I位点基因多态性。结果 血液透析患者脂代谢紊乱主要表现为血清，TG水平显著增高，HDLC水平显著降低。33％的患者血清TG水平高于正常水平，10．4％的患者HDLC低于正常水平。偏相关回归分析显示，TG水平与血清ALB水平、透析时体外循环血流量显著相关；HDLC与KT／V显著相关。血液透析患者高血压的发生率为73．6％，心血管疾病为25％。伴心血管疾病组TG水平显著高于无心血管疾病组，伴高血压组与无高血压组血脂水平无显著差异。LDLR基因多态性检测结果显示，血液透析组与对照组间LDLR内含子4Taq I位点基因型与等位基因分布频率无显著差异。LDLR基因多态性对血脂水平的影响表现为LDLR内含子4Taq I位点基因型-／-的血液透析患者甘油三酯水平较高。结论 血液透析患者脂代谢紊乱主要表现为血清TG、ApoB水平显著增高，HDLC等指标显著降低。伴心血管并发症的患者，TG水平显著高于无并发症的患者。，TG水平与血清ALB水平、透析时体外循环血流量显著相关；HDLC与KT／V显著相关。LDLR内含子4Taq I位点基因型-／-血液透析患者易发生血清甘油三酯水平增高。     

冠状动脉粥样硬化性心脏病患者循环白细胞SREBP-2启动子甲基化与其他风险因素的相关性研究

目的探讨冠状动脉粥样硬化性心脏病(CAD)患者固醇调节元件结合蛋白-2(SREBP-2)的启动子甲基化水平与血浆miR-33a以及血脂和心肌酶等生化指标的相关性。方法病例对照研究,2017年8月至2018年4月在湖北医药学院附属太和医院心内科三病区招募冠状动脉造影检查受检者100例,其中冠状动脉造影显示梗阻的CAD患者50例以及冠状动脉造影阴性的对照者50例。采集外周血样本,提取白细胞DNA,通过焦磷酸测序法检测SREBP-2启动子区两个片段,共计12个CpG位点的甲基化水平;提取血浆RNA,定量qPCR检测血浆miR-33a水平;分离血浆,采用全自动生化分析仪检测血浆中血脂、心肌酶、炎症相关因子等15项生化指标。通过Pearson和Spearman相关系数及多因素Logistic回归分析等统计学方法分析其相关性。结果CAD患者SREBP-2启动子区F1-4 CpG位点(转录起始点上游-103bp)甲基化水平显著高于对照组(4.56%±0.70%vs 3.54%±0.72%,t=-3.864,P<0.001);F1-4位点的甲基化水平与血浆中miR-33a-5p水平和高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平呈负相关(r=-0.318,P=0.001;r=-0.225,P=0.024)。此外,校正年龄、性别、高血压、高脂血症和糖尿病病史混杂因素之后,F1-4高甲基化是CAD的独立风险因素(OR=2.452,95%CI=1.398~4.299,P=0.002)。结论DNA甲基化和miRNA可能协同调控CAD发病机制中异常的脂质代谢。     

人载脂蛋白基因A5 c.553 G＞T多态性与冠心病及血脂水平的相关性研究

目的分析中国江苏地区汉族人群载脂蛋白（apo）A5c．553G〉T基因多态性与冠心病及血脂水平的关系。方法采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（PCR—RFLP）技术分别检测201例冠心病患者和222名健康对照者apoA5c．553G〉T多态性基因型和等位基因的分布，并采用生化方法检测研究对象的血脂水平。结果健康对照组和冠心病组apoA5基因c．553G〉T位点GG、GT、TT基因型分别为91．89％、8．11％、0％和82．58％、16．92％、0．50％（Χ^2=9．257，P=0．010）；T等位基因频率分别为4．05％和8．96％（Χ^2=8．481，P=0．004）。冠心病组T等位基因携带者血清三酰甘油和总胆固醇水平分别为（2．17±1．05）mmol／L和（5．16±0．95）mmol／L，均明显高于GG基因型人群（t=3．194和3．022；P=0．002和0．003）。此外，T等位基因携带者患冠心病的风险较G等位基因携带者高出2．39倍（OR=2．39，95％CI 1．31～4．37，P=0．005），经Logistic多元回归校正年龄、性别、体重指数、高血压、吸烟史、糖尿病史其他冠心病危险因素后，差异仍具有统计学意义（OR=2．25，95％CI1．18～4．30，P=0．014）。结论江苏地区汉族人群apoA5C．553G〉T基因多态性与冠心病存在一定的关联性，并影响血清三酰甘油和总胆固醇水平。     

载脂蛋白AI基因MspI多态性与原发性高血压病及血脂关系的研究

目的 探讨原发性高血压患者载脂蛋白（apo）AI基因多态性及其对血脂的影响。方法 应用聚合酶链反应对190例正常人和200例原发性高血压患者apoAI基因启动子多态性进行分析，扩增含apoAI基因启动子-75bp和第一内含子＋83bp的DNA片段，限制性内切酶（MspI酶）切此片段，琼脂糖凝胶电泳分离基因多态性。结果 两组apoAI基因-75bp位点均为G／G基因型占优势，但两组间基因型比较差异无统计学意义；两组间-75bp位点A、G等住基因频率差异无统计学意义。＋83bp位点中基因型与等位基因频率在两组间比较差异均无统计学意义。ApoAI基因-75bp位点中GA／AA基因型携带者高密度脂蛋白（HDL-C）血浆水平显著低于GG基因型携带者；ApoAI基因-75bp与＋83bp位点基因变异在高血压不同分级间差别无统计学意义。结论 apoAI基因启动子（-75bp）MspI酶切位点的突变与HDL-C血浆水平降低相关，与高血压痛发生及其严重程度无相关性。     

肝硬化患者血清视黄醇结合蛋白与前白蛋白变化及其临床意义

目的 探讨肝硬化患者血清视黄醇结合蛋白(RBP)、前白蛋白(PAB)的变化,以判定肝脏的合成功能及临床意义.方法 116例肝硬化患者按Child Pugh分级标准分为三组:①A组(A级):17例;②B组(B级):42例;③C组(C级):52例;对照组:50例.均采用自动生化分析仪分别测定血清RBP、PAB、血清白蛋白(ALB)的含量,了解其变化趋势及其灵敏度.结果 A组与对照组比较ALB、PAB两项指标差异无显著性意义,但RBP下降与比较差异有统计学意义(F=2.98,P＜0.05).随肝硬化Child-pugh分级的增加,B、C两组与正常对照组之间三项指标差异均有显著性意义,RBP、PAB在B组即具有差异高度显著性意义(F=14.68,F=7.68,均P＜0.01).血清RBP与PAB呈正相关(r=0.769,P＜0.01),RBP、PAB与ALB之间亦呈正相关(r=0.608,r=0.534,均P＜0.05).结论 随肝硬化Child pugh分级增加,血清RBP及PAB水平均进行性下降,且比ALB更为敏感,两者联合分析能更好的判断肝硬化患者肝功能状况,对患者的预后及治疗提供一定的临床价值.     

COMT基因Met多态与子宫内膜异位症的关系

目的探讨COMT基因Met多态与子宫内膜异位症的关系。方法采用蛋白酶K消化-饱和酚氯仿法提取外周血白细胞基因组DNA,聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法分别对120例子宫内膜异位症患者(内异症组,含59例腺肌病患者)和65例非内异症及腺肌病女性(对照组)进行COMT基因分型。结果 (1)内异症组和对照组G/G、G/A和A/A基因型频率分别为17.5%、43.3%和39.2%,9.2%、50.8%和40.0%,差异无统计学意义;内异症组和对照组A等位基因频率分别为27.1%和29.2%,两组比较差异无统计学意义;(2)G/A、A/A基因型个体发生子宫内膜异位症的相对危险度分别为G/G型个体的0.516倍(0.185-1.441,P>0.05)和0.450倍(0.165-1.232,P>0.05),差异无统计学意义。结论 COMT基因Met多态与子宫内膜异位症无相关性。     

CXCL16基因多态性与C反应蛋白的相关性研究

目的探讨健康人群趋化因子CXC配体16（CXCL16）基因多态性与血清CXCL16、C反应蛋白（CRP）水平的相关性。方法采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）方法检测204名健康体检者CXCL16基因A181V多态性,同时分别应用酶联免疫吸附试验（ELISA）和免疫比浊法检测血清CXCL16和高敏CRP（hs-CRP）水平,并进行统计学分析。结果 AA基因型血清hs-CRP水平明显高于GG、GA基因型（P=0.01）;多元线性回归显示A等位基因是高hs-CRP水平的独立危险因素（OR=1.25,95%CI：1.08~2.59,P=0.021）;以血清hs-CRP水平中位数（0.91 mg/L）为界定值分为2组,AA基因型和A等位基因频率在hs-CRP〉0.91 mg/L组中显著升高（P=0.008,0.036）;而血清CXCL16水平与其基因型间差异无统计学意义（P〉0.05）。结论 CXCL16基因A181V位点基因多态性与血清hs-CRP水平相关,A等位基因可能参与机体炎症反应的发生、发展。     

CXCL16基因多态性与C反应蛋白的相关性研究

目的探讨健康人群趋化因子CXC配体16(CXCL16)基因多态性与血清CXCL16、C反应蛋白(CRP)水平的相关性。方法采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法检测204名健康体检者CXCL16基因A181V多态性,同时分别应用酶联免疫吸附试验(ELISA)和免疫比浊法检测血清CXCL16和高敏CRP(hs-CRP)水平,并进行统计学分析。结果 AA基因型血清hs-CRP水平明显高于GG、GA基因型(P=0.01);多元线性回归显示A等位基因是高hs-CRP水平的独立危险因素(OR=1.25,95%CI:1.08~2.59,P=0.021);以血清hs-CRP水平中位数(0.91 mg/L)为界定值分为2组,AA基因型和A等位基因频率在hs-CRP>0.91 mg/L组中显著升高(P=0.008,0.036);而血清CXCL16水平与其基因型间差异无统计学意义(P>0.05)。结论 CXCL16基因A181V位点基因多态性与血清hs-CRP水平相关,A等位基因可能参与机体炎症反应的发生、发展。     

炎症致巨噬细胞和血管平滑肌细胞低密度脂蛋白受体反馈调控差异的研究

目的：探讨在生理及炎症应激条件下,人单核细胞系（T HP-1）巨噬细胞和血管平滑肌细胞（VSMCs）、低密度脂蛋白受体（LDLr）的负反馈调控的细胞特异性差别及其可能的机制。方法脂多糖（LPS）加入T HP-1巨噬细胞和VSMCs培养基中诱导炎症应激,酶学法检测细胞内胆固醇水平,反转录聚合酶链反应（RT-PCR）法检测LDLr、SCAP、固醇调控元件结合蛋白2（SREBP2）mRNA水平。结果生理条件下,LDL负荷增加细胞内胆固醇水平,进而减少 THP-1巨噬细胞和 VSMCs LDLr mRNA 水平。VSMCs IC50为11．25μg/mL ,低于THP-1巨噬细胞的18．125μg/mL。0～400 ng/mL LPS 呈剂量依赖性上调两种细胞 LDLr mRNA 水平,但VSMCs LDLr曲线比THP-1巨噬细胞LDLr曲线平坦,200 ng/mL LPS处理下,THP-1巨噬细胞LDLr mRNA上调倍数远高于VSMCs（0．33和0．04）。LDLr阻断剂肝素钠减少两种细胞内由LPS诱导的胆固醇沉积。生理条件下,LDL负荷减少SREBP2和SCAP mRNA水平,而LPS增加SREBP2和SCAP mRNA水平。结论炎症应激在两种细胞中均扰乱细胞内胆固醇水平介导的LDLr负反馈调控,THP-1巨噬细胞LDLr上调程度更大,这可能是炎症应激下T HP-1巨噬细胞更易泡沫化的一个原因。