几种常见中药注射剂对RBL-2H3细胞脱颗粒的影响

目的 通过研究几种常见中药注射剂(TCMI)对RBL-2H3细胞脱颗粒的影响,探讨RBL-2H3细胞模型应用于体外评价TCMI引起类过敏反应的可行性.方法 体外培养RBL-2H3细胞,血塞通等7种TCMI与其共同培养,通过中性红染色法计数脱颗粒的RBL-2H3细胞,显色法计算β-氨基己糖苷酶释放率,ELISA法检测培养上清中组胺含量,观察TCMI对RBL-2H3细胞脱颗粒的影响.结果 正常RBL-2H3细胞出现少量脱颗粒现象,血塞通、清开灵、双黄连、脉络宁、香丹、穿琥宁等能显著引起细胞脱颗粒;血塞通、穿琥宁和柴胡注射液能不同程度促进β-氨基己糖苷酶的释放;血塞通、清开灵注射液可显著引起RBL-2H3细胞组胺释放.结论 RBL-2H3细胞脱颗粒的检测方法敏感、重复性好,其结果与临床报道有一定的相关性,提示其有评价TCMI所致的类过敏反应的潜在应用价值.     

清开灵注射液诱导嗜碱性粒细胞脱颗粒致类过敏反应作用研究

目的:观察清开灵注射液诱导大鼠嗜碱性粒细胞白血病细胞株RBL-2H3细胞脱颗粒,释放组胺,探讨其诱发类过敏反应的可能机制。方法:清开灵注射液孵育RBL-2H3细胞30 min后,透射电镜观察细胞发生脱颗粒反应形态学变化,阿利新蓝染色试验、Annexin V结合试验、β-氨基己糖苷酶测定试验检测细胞脱颗粒率,ELISA检测细胞组胺释放率。结果:不同浓度清开灵注射液可诱导细胞发生典型的脱颗粒反应形态学变化,与对照组相比脱颗粒率及组胺释放率显著升高,且具有浓度依赖性。结论:清开灵注射液单次给药即可诱导RBL-2H3细胞脱颗粒,释放组胺,诱发类过敏反应,这可能是其临床首次用药即引起严重不良反应的机制之一。     

清开灵注射液对人血清补体和RBL-2 H3细胞影响的体外研究

目的 体外研究清开灵注射液对人血清补体和RBL-2 H3细胞的影响.方法 采用ELISA法检测清开灵注射液对人血清补体末端复合物SC5 b-9含量的影响.将不同批号、不同浓度的清开灵注射液与RBL-2 H3细胞共孵育,作用45min后,显微镜下观察细胞脱颗粒,显色法测定β-氨基己糖苷酶释放度和ELISA法测定组胺释放量.结果 清开灵注射液能使人血清中SC5 b-9含量降低,与PBS组比较,差异有统计学意义(P＜0.05);能刺激RBL-2 H3细胞释放组胺和β-氨基己糖苷酶,与阴性组比较,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 清开灵注射液不能引起补体系统激活,可以直接刺激肥大细胞脱颗粒释放组胺和β-氨基己糖苷酶.其在临床引起的不良反应可能为非补体激活相关的类过敏反应.     

中药注射剂类过敏反应应急检验方法探讨

目的 探索适用于中药注射剂类过敏反应的应急检验方法。方法 考察豚鼠一次性静脉注射注射用丹参和清开灵注射液后类过敏反应的发生情况 ,并观察清开灵注射液对RBL-2H3细胞中β-氨基己糖酶释放率的影响。结果 豚鼠一次性静脉注射中药注射液后,部分批次的中药注射液可观察到类过敏反应;清开灵注射液 体外可诱导RBL-2H3细胞发生非免疫性脱颗粒,刺激β-氨基己糖酶释放,且呈浓度依赖性。结论 豚鼠体内类过敏反应检查法和RBL-2H3细胞β-氨基己糖酶释放率检查法结合 ,可作为中药注射剂类过敏反应应急检验方法,用于药品质量控制。     

清开灵注射液及其中间品类过敏反应的实验研究

目的:研究清开灵注射液及其生产过程中的中间品对RBL-2H3细胞脱颗粒的影响,评价清开灵注射液及其中间品的类过敏反应。方法:将清开灵注射液以5个不同浓度稀释,其中间品以IC50浓度稀释,分别作用于RBL-2H3细胞,45 min后,底物显色法测定β-氨基己糖苷酶释放度;ELISA法测定组胺释放量。结果:不同浓度的清开灵注射液对RBL-2H3细胞脱颗粒程度并无浓度依赖性,但最高浓度下脱颗粒程度相对较高。同时,在其不同中间品中,金银花促进RBL-2H3细胞脱颗粒作用最明显。结论:在体外,不同浓度的清开灵注射液均可不同程度的引起肥大细胞脱颗粒,释放活性物质,引起类过敏反应,而金银花可能是致敏的主要成分。本研究为进一步研究清开灵注射液不良反应的作用机制提供实验依据。     

钙离子变化应用于中药注射剂类过敏性评价的可行性研究

目的:研究通过检测RBL-2H3细胞内钙离子变化评价中药注射剂类过敏性的可行性。方法:不同浓度的C48/80作用RBL-2H3细胞后,Flex Station检测RBL-2H3细胞内钙离子变化,显色法检测β-氨基己糖苷酶释放率,比较钙离子变化与β-氨基己糖苷酶释放率的一致性。选择6种临床常用中药注射液:参麦注射液、注射用血塞通、脉络宁注射液、舒血宁注射液、痰热清注射液及热毒宁注射液,检测各中药注射液对RBL-2H3细胞内钙离子浓度及β-氨基己糖苷酶释放率的影响。结果:与对照组相比,加入200、400、600μg/ml的C48/80后,钙离子浓度和β-氨基己糖苷酶释放率均随C48/80浓度的升高而明显增大,钙离子变化与β-氨基己糖苷酶释放率变化趋势一致。各中药注射液中,26.66 ml/L的参麦注射液显著升高RBL-2H3细胞内钙离子浓度,但对β-氨基己糖苷酶释放率无明显影响,其余中药注射液对RBL-2H3细胞β-氨基己糖苷酶释放率及胞内钙离子浓度均无明显变化。结论:以细胞内钙离子浓度变化作为检测药物类过敏的方法,有可能在早期更便捷、迅速的对药物进行安全性筛查,但是在对药物的安全性进行整体评价时,仍需要对应传统的检测方法,以便评价结果的真实可靠。     

RBL-2H3细胞体外试验评价药物类过敏的方法学研究和适用性考察

目的： RBL-2H3细胞用于检测药物类过敏的方法学研究,对评价类过敏反应的适用性进行考察。 方法： 采用MTT试验研究RBL-2H3细胞的密度、生长时间等基本生长特性,以化合物48/80（C48/80）为工具药物对其最佳给药浓度、作用时间及检测指标进行优化,以聚山梨酯（吐温80）、中华眼镜蛇毒作适用性考察,对血塞通、脉络宁注射液类过敏反应进行初步评价。 结果： RBL-2H3细胞试验作为药物类过敏反应体外检测方法,最佳培养时间为24 h,最佳种植密度为（0.5~2.0）×10⁵/mL。实验选用台氏液为反应溶媒,其C48/80致RBL-2H3细胞脱颗粒试验以25~50 mg·L^-1质量浓度,反应30 min为优选条件。C48/80可使细胞上清β-己糖苷酶、组胺浓度升高,呈现良好的“量-时-效”关系;β-己糖苷酶、组胺释放率与药物剂量呈高度正相关（r=0.984,0.940;P=0.000,0.000）,两指标之间相关性非常显著（r=0.957;P=0.000）。适用性考察显示,吐温80、中华眼镜蛇毒素在临床或高于临床浓度条件下均具有致RBL-2H3细胞脱颗粒作用;中药注射剂血塞通注射液存在潜在发生类过敏风险,脉络宁注射液类过敏反应阴性。 结论： RBL-2H3细胞作为药物类过敏的体外试验方法具有灵敏、快速、方便的特点,适用于包括中药注射剂在内的药物类过敏反应的检测和评价,对于存在明显色质的受试物,建议以ELISA法指标组胺检测结果为准,最终的确证还需结合整体动物试验。     

药物类过敏反应的临床前评价方法研究(I)——小鼠类过敏反应评价方法的建立和验证

目的:建立适用于注射剂类过敏评价的动物模型。方法:小鼠一次性静脉注射含0.4%伊文思蓝(EB)的受试物,以耳廓蓝染发生率和伊文思蓝渗出量作为类过敏评价指标。结果:小鼠静脉注射生理盐水注射液(NS)、5%葡萄糖注射液(Glu)后,未出现耳廓蓝染,说明无类过敏反应发生。阳性对照物质组胺和Compound 48/80均具有明显的致类过敏反应,可造成耳廓明显蓝染和EB大量渗出。采用临床上可发生类过敏反应的多种中、西药注射剂验证了本模型和评价方法的可靠性和敏感性,检测结果与临床一致。结论:小鼠类过敏反应评价方法敏感、可靠,与临床一致性好,适宜于注射剂临床前类过敏反应评价、注射剂生产过程中的安全性检测、上市产品抽验、致敏原筛选、类过敏反应发生机制研究以及类过敏防治方法研究等。     

致敏RBL-2H3细胞在清开灵、痰热清中药注射剂过敏性评价中的应用

目的探索采用血清抗体致敏的RBL-2H3细胞对清开灵、痰热清2种中药注射剂过敏性进行初步评价。方法以阳性药卵白蛋白(OVA)、清开灵注射液、痰热清注射液分别与Al(OH)3凝胶佐剂混合作为致敏源,Wistar大鼠sc致敏源制备抗体血清,采用放免法检测血清总Ig E水平。取抗体血清致敏RBL-2H3细胞,48 h后再以药物激发致敏细胞,检测细胞脱颗粒后上清液中β-氨基己糖苷酶释放率。另取大鼠进行被动皮肤过敏(PCA)实验,观察动物皮肤蓝斑阳性反应率。结果与对照组相比,OVA、清开灵、痰热清组大鼠抗体血清总Ig E水平著显升高(P0.05、0.01)。致敏细胞脱颗粒结果显示:采用OVA和清开灵、痰热清注射液抗体血清致敏细胞,再经药物激发后RBL-2H3细胞上清液中β-氨基己糖苷酶释放率明显增加(P0.05、0.01),与对照组比较,最大的相对释放倍数分别为3.7、1.53、1.98。大鼠PCA实验结果显示,各给药组大鼠蓝斑阳性反应最高百分率分别为100%、100%、86%。RBL-2H3细胞实验与PCA实验结果具有较好的一致性。结论血清抗体致敏RBL-2H3细胞模型可以用于对中药注射剂过敏性的初筛或评价。     

射干抗病毒注射液致类过敏反应初步研究

目的:探究射干抗病毒注射液的致类过敏反应及其可能的作用机制。方法:通过体外动物类过敏试验,探究射干抗病毒注射液对小鼠耳廓血管通透性的影响;细胞水平上,采用MTT比色法筛选出射干抗病毒注射液对RBL-2H3细胞的安全作用浓度,并在安全浓度之下,以不同浓度,用中性红染色观察其脱颗粒状态,检测射干抗病毒注射液对细胞内颗粒物质β-氨基己糖苷酶释放量的影响,Fluo-3荧光标记细胞内Ca~(2+)检测细胞内钙离子变化,综合考察射干抗病毒注射液的体外致类过敏性。结果:射干抗病毒注射液可引起小鼠耳廓通透性增强,引发类过敏反应;并可诱导RBL-2H3细胞发生脱颗粒反应,使胞内钙离子浓度升高,且均具有剂量依赖性。结论:射干抗病毒注射液具有引发类过敏反应的风险,其机制可能与引起胞内Ca~(2+)浓度增加有关。     

常用中药注射剂致敏性研究

目的：研究中药注射剂的过敏反应,测定致敏动物血清免疫球蛋白（IgE）抗体含量,观察其与过敏反应是否具有相关性,为提高过敏反应实验预测的准确性提供实验依据。方法：选用多种中药注射剂进行被动皮肤过敏实验（PCA）实验和类过敏反应研究,用ELISA 法对致敏动物血清进行血清IgE 水平检测。结果：双黄连注射液（SHL）、清开灵注射液（QKL）、鱼腥草注射液（YXC）、血塞通注射液（XST）、葛根素注射液（GGS）、穿琥宁注射液（CHN）的PCA 实验结果均为阴性,刺五加注射液（CWJ）的PCA 实验结果为阳性。SHL、QKL、YXC、XST、GGS、CHN、CWJ 注射液组血清总IgE 水平与生理盐水组无明显差异;SHL、QKL、YXC、XST、GGS、CHN、CWJ 注射液均引起了豚鼠的类过敏症状。结论：SHL、QKL、YXC、XST、GGS、CHN、CWJ 均能引起豚鼠的类过敏反应,其过敏反应的发生与血清IgE 抗体水平无相关性。     

啮齿类动物类过敏试验模型的建立

目的:以不同浓度的聚氧乙烯脱水山梨醇单油酸酯(吐温-80)为对象,建立一种简便易行的清醒小动物类过敏试验方法,用于中药注射剂的类过敏反应筛选和评价.方法:所有受试物均含有0.4%伊文思蓝,各组分别iv给予受试药小鼠20 mL·kg-1,豚鼠30 mL·kg-1,给药后观察30 min内动物的行为学变化,耳廓蓝染情况,测定小鼠双耳丙酮生理盐水浸液的吸光度.结果:小鼠iv0.5%～10%吐温-80溶液、含0.5%～10%吐温-80的鱼腥草蒸馏液、150～600 mL·kg-1双黄连粉针剂;豚鼠iv0.25%～1.0%吐温-80溶液、含0.25%～1.0%吐温-80的鱼腥草蒸馏液、54 mg·kg-1双黄连粉针剂,均可造成小鼠和豚鼠耳廓不同程度蓝染,并且各组随着剂量增高,耳廓蓝染面积增大、染色加深.鼠耳经丙酮生理盐水液浸泡后,用半自动生化仪检测,发现伊文思蓝渗出量与肉眼观察结果基本一致.结论:利用小鼠和豚鼠耳廓血管通透性测试,可以作为筛选中药注射剂类过敏反应的模型,是一种简便易行的清醒小动物类过敏试验方法.     

双黄连注射液类过敏反应研究

目的观察双黄连注射液的类过敏反应,测定致敏动物血清组胺含量,探讨其与类过敏反应的相关性。方法将豚鼠随机分组,选用双黄连注射液按不同注射速度、不同剂量进行给药,观察豚鼠的类过敏反应,同时用ELISA进行血清免疫球蛋白E(IgE)、血清组胺含量检测。结果不同剂量、不同注射速度下的双黄连注射液均能引起豚鼠的类过敏症状;不同剂量、不同注射速度下的双黄连注射液组IgE水平与生理盐水组无明显差异;不同剂量、不同注射速度下的双黄连注射液组血清组胺水平明显升高,且呈剂量、速度相关性。结论双黄连注射液能引起豚鼠产生类过敏反应,豚鼠血清组胺含量的变化与双黄连注射液的给予剂量、速度有相关性。     

RBL-2H3和P815细胞用于建立体外肥大细胞脱颗粒模型的比较研究(英文)

目的:通过比较两种肥大细胞模型RBL-2H3和P815细胞激活后脱颗粒反应的差异,寻找早期、稳定、敏感的肥大细胞脱颗粒体外检测模型,为进一步建立基于细胞水平的过敏原和抗过敏药物的体外筛选模型提供一定的参考。方法:10μg.mL-1C48/80激活细胞15-60min,比色法检测组胺、β-氨基己糖苷酶及类胰蛋白酶等过敏介质的释放,中性红染色法进行形态学观察,流式细胞法检测AnnexinV阳性细胞率。结果:C48/80刺激P815、RBL-2H3细胞15-60min后组胺释放率均明显增加,并且相同刺激条件下,两种细胞模型的组胺释放率基本相当。C48/80刺激P815细胞15min以上,β-氨基己糖苷酶释放率、类胰蛋白酶释放率、Annexin V阳性细胞率和中性红染色脱颗粒细胞率均明显增加;但相同浓度的C48/80需刺激RBL-2H3细胞30-45min以上,上述指标才出现显著增加。在相同的刺激条件下,P815细胞过敏介质释放率、AnnexinV阳性率和脱颗粒率均高于RBL-2H3细胞。结论:同RBL-2H3相比,在相同刺激条件下,P815细胞活化后脱颗粒时间出现更早、程度更高。提示除RBL-2H3细胞,P815细...     

生脉注射液(新工艺)致Beagle犬类过敏反应实验研究

目的:对新、旧两种工艺生产的生脉注射液致Beagle犬类过敏反应的致敏性进行比较研究.方法:选用类过敏反应的敏感动物Beagle犬,随机分为3组,每组3只,分别注射5％葡萄糖注射液、旧工艺生脉注射液、新工艺生脉注射液.观察给药前至给药后24 h各犬的变化,根据反应症状轻重判定级别.给药前及停药后10 min取血,ELISA方法检测血清组胺含量,并结合反应症状级别,综合判定药物的致敏性.结果:旧工艺生脉注射液导致Beagle犬出现典型的类过敏反应症状,且血清组胺升高1倍以上,综合判定旧工艺生脉注射液致Beagle犬类过敏反应为阳性;新工艺生脉注射液可诱发Beagle犬出现不典型的类过敏反应症状,血清组胺升高1倍以上,综合判定新工艺生脉注射液诱发Beagle犬类过敏反应为可疑.结论:旧工艺生产的生脉注射液可诱发Beagle犬出现典型的类过敏反应,其致敏性强.与旧工艺生脉注射液相比,改进工艺后的生脉注射液引发Beagle犬类过敏反应症状出现时间晚,程度轻,对Beagle犬的致敏性降低.     

中药注射剂对I型变态反应试验的影响

目的:研究中药注射剂的过敏反应,测定致敏动物血清IgE抗体和组织胺含量,观察其与过敏反应是否具有相关性,为提高Ⅰ型过敏反应试验预测的准确性提供实验依据.方法:选用3种中药注射剂进行PCA,ASA试验和类过敏反应研究,用ELISA法对致敏动物血清进行血清OVA-sIgE、血清总IgE、组织胺水平检测.结果:3种中药注射剂的PCA试验结果为阴性,血清总IgE水平与生理盐水组无明显差异;3种中药注射剂+OVA(不引起过敏反应的剂量)的研究中双黄连注射液(SHL)、鱼腥草注射液(YXC)的PCA试验均为阳性,OVA-sIgE水平明显增加,清开灵注射液(QKL)的PCA试验为阴性,OVAsIgE水平增加不明显,各组血清总IgE水平增加不明显;3种中药注射剂的ASA试验结果为阳性,3种中药注射剂(临床剂量和临床等效剂量)均引起了豚鼠的类过敏症状,且反应强弱呈现剂量和注射速度依赖性,各给药组血清组织胺水平均较生理.盐水组明显增高,血清总IgE水平无明显差异.结论:SHL和YXC具有增加豚鼠对卵蛋白敏感性的作用,SHL,YXC,QKL均能引起豚鼠的类过敏反应,3种中药注射剂的过敏反应的发生与特异性IgE抗体和组织胺水平有相关性.     

大鼠腹腔肥大细胞与RBL-2H3细胞脱颗粒方法的 建立及其在中药注射剂安全性评价上的应用

目的:建立大鼠体外肥大细胞以及RBL-2H3细胞脱颗粒试验的方法,评估2种细胞脱颗粒方法对中药注射剂(traditional Chinese medicine injections,TCMI)引起脱颗粒的可行性。方法:提取大鼠腹腔肥大细胞(rat peritoneal mast cell,RPMC),优化实验条件,用阳性药物C48/80和各种TCMI等与其共培养,通过甲苯胺蓝染色法计数腹腔MC脱颗粒率;通过RBL-2H3细胞与TCMI共同培养,底物显色法检测β-氨基己糖苷酶释放率。结果:阳性对照品C48/80的浓度与RPMC脱颗粒有一定的量效关系;参麦、冠心宁、痰热清、清开灵和生脉5种TCMI能显著引起细胞脱颗粒,并与药物浓度有一定的正相关性;RBL-2H3细胞脱颗粒方法中参麦、黄芪、银杏、痰热清、丹香冠心、清开灵和生脉7种TCMI能是β-氨基己糖苷酶释放率升高。结论:一些TCMI能引起体外RPMC和RBL-2H3细胞脱颗粒,2种细胞脱颗粒方法在评价一些TCMI可能引起类过敏反应方面具有一定的互补性与可行性。     

生脉注射液(新工艺)致食蟹猴类过敏反应实验研究

目的:对新、旧2种工艺生产的生脉注射液致食蟹猴类过敏反应的致敏性进行比较研究。方法:食蟹猴随机分为4组,分别为5%葡萄糖注射液组、旧工艺生脉注射液组、新工艺生脉注射液组及阳性对照药组。观察给药前至给药后24 h各猴的变化;给药前及停药后10 min取血,检测血清组胺含量;给药前及停药后10 min测定血压及心率,综合判定药物的致敏性。结果:旧工艺生脉注射液导致食蟹猴出现典型的类过敏反应症状,但是血清组胺未升高1倍以上;新工艺生脉注射液可诱发食蟹猴出现不典型的类过敏反应症状,血清组胺未升高。结论:旧工艺生产的生脉注射液可诱发食蟹猴出现典型的类过敏反应,其致敏性强;改进工艺后的新生脉注射液引发食蟹猴类过敏反应症状出现时间晚,程度轻,对食蟹猴的致敏性降低。     

组胺致Beagle犬类过敏反应实验模型研究

目的 通过静脉注射磷酸组胺注射液,建立类过敏反应的Beagle犬实验动物模型.方法 一次静脉注射磷酸组胺注射液,根据注射后Beagle犬的行为及血压变化,判断类过敏反应.结果 磷酸组胺注射液静脉注射可引起Beagle犬产生典型的类过敏反应,高剂量组的反应明显强于低剂量组.结论 Beagle犬静脉注射磷酸组胺注射液能够模拟临床类过敏反应的发生过程,可以作为中药注射剂类过敏反应的敏感动物模型,用于评价中药注射剂及其组成成分类过敏反应的临床前实验研究.