三七总皂苷对铝暴露脑微血管内皮细胞胞质紧密黏连蛋白1表达的影响

目的从血脑屏障的角度探讨三七总皂苷对铝暴露脑微血管内皮细胞胞质紧密黏连蛋白1（zonulaoccludens-1,ZO-1）表达的影响,初步揭示三七总皂苷抗老年痴呆的可能靶点及机制。方法采用脑微血管内皮细胞系Balb/c,以含20%胎牛血清和100 mg/L生长因子的DMEM培养基培养,随机分为正常组、模型组、铝螯合剂组及三七总皂苷低、中、高剂量组,经铝暴露24 h后,分别以荧光实时定量PCR和Western blot的方法测定ZO-1的基因转录和蛋白表达水平,观察不同剂量三七总皂苷对ZO-1表达的影响。结果与正常组相比,铝暴露24 h可使脑微血管内皮细胞ZO-1的转录及表达明显减少（P〈0.01）。与模型组比较,三七总皂苷高剂量组能显著增加ZO-1的基因转录水平（P〈0.05）,中、高剂量组能显著提高ZO-1的蛋白表达（P〈0.05,P〈0.01）。结论三七总皂苷对铝暴露下的脑微血管内皮细胞具有一定的保护作用,可增加血脑屏障紧密连接主要组成蛋白ZO-1的表达。     

黄芪甲苷对Aβ_(1-42)诱导的体外血脑屏障模型损伤的影响及机制探究

目的探究黄芪甲苷对纤维状Aβ_(1-42)诱导的体外血脑屏障(BBB)模型损伤的影响及可能机制。方法制备Aβ_(1-42)诱导的小鼠脑微血管内皮细胞b End.3和原代大鼠星形胶质细胞As非接触式共培养BBB模型,分为对照组、模型组(Aβ_(1-42)30μmol/L)及黄芪甲苷低、高剂量(50、200μmol/L)组;利用噻唑蓝(MTT)法检测黄芪甲苷对Aβ_(1-42)诱导的b End.3细胞活力的影响;通过检测荧光素钠透过体外BBB模型的量鉴定BBB的通透性;Western blotting法检测细胞凋亡执行蛋白半胱天冬蛋白酶-3(Caspase-3)、活化的半胱天冬蛋白酶-3(cleaved Caspase-3)的表达水平以及BBB内皮细胞间相关连接蛋白细胞质透明带蛋白-1(ZO-1)、Claudin-5、Occludin的表达水平。结果 MTT结果显示,与模型组比较,黄芪甲苷低、高剂量组均能显著提高b End.3细胞活性(P0.001),且保护作用与黄芪甲苷浓度呈正相关;荧光素钠通透性实验结果显示,与模型组相比较,黄芪甲苷预处理可显著降低BBB的通透性(P0.001)。Western blotting结果显示,与模型组比较,黄芪甲苷预处理后,cleaved Caspase-3/Caspase-3显著降低,ZO-1、Claudin-5、Occludin蛋白的表达水平显著增加(P0.001)。结论黄芪甲苷可能是通过抑制Aβ_(1-42)诱导的脑微血管内皮细胞b End.3的凋亡及增加其连接蛋白表达而发挥BBB保护作用。     

人参皂苷Rg1对Aβ_(1-42)诱导PC12细胞自噬性死亡的保护作用

目的:观察人参皂苷Rg1对β-淀粉样蛋白(beta-Amyliod,Aβ1-42)诱导PC12细胞自噬性死亡的作用,试探究其神经保护机制。方法:将PC12细胞分为对照组、Aβ组和Aβ+Rg1组。Aβ组细胞用Aβ1-42(10μmol/L)处理24 h;Aβ+Rg1组细胞分别用12.5、25、50μmol/L Rg1预处理24 h后,加入Aβ1-42(10μmol/L)继续培养24 h。采用MTT法测定各组细胞活力,免疫荧光染色法检测细胞自噬相关蛋白LC3-Ⅱ表达变化,Western blot法检测LC3-Ⅱ和Beclin-1蛋白表达变化。结果:对照组比较,Aβ组细胞活力显著下降(P0.01);与模型组比较,Rg1各剂量组细胞活力显著高于Aβ组(P0.01)。与对照组比较,Aβ组LC3-Ⅱ和Beclin-1蛋白表达显著上升(P0.01);与模型组比较,Rg1各剂量组LC3-Ⅱ和Beclin-1蛋白表达显著低于Aβ组(P0.01)。结论:人参皂苷Rg1可能通过抑制Aβ诱导的细胞自噬性死亡发挥神经保护作用。     

三七总皂苷在氧化应激的PC12细胞中抑制Aβ蛋白生成的作用

目的考察三七总皂苷在氧化损伤的PC12细胞中对Aβ蛋白生成相关代谢酶基因和蛋白表达的影响。方法采用H2O2损伤PC12细胞,建立氧化应激的PC12细胞模型,以ELISA法及Western blot法测定PC12细胞中淀粉样前体蛋白(APP)、早老素-1(PS-1)、金属蛋白酶结构蛋白-10(ADAM10)、α-分泌酶、β-分泌酶及γ-分泌酶蛋白水平,并以RT-PCR法检测PS-1,β-分泌酶(BACE)及ADAM10 mRNA表达的变化。结果三七总皂苷显著降低PC12细胞中的APP、PS-1蛋白(P0.05)及γ-分泌酶水平(P0.01),增加α-分泌酶及ADAM10蛋白水平(P0.05)。并且显著增加ADAM10 mRNA的表达(P0.01),减少PS-1 mRNA的表达(P0.05)。结论三七总皂苷能抑制由于氧化应激而引发的PC12细胞内Aβ蛋白的堆积,减轻PC12细胞在氧化应激后继发的Aβ级联损伤。     

镇心省睡益智方抗Aβ25-35诱导人脑微血管内皮细胞损伤的作用

目的:观察镇心省睡益智方(省睡方)水提液对抗β淀粉样蛋白25-35(Aβ_(25-35))诱导的人脑微血管内皮细胞(HBMEC)损伤的神经保护作用和潜在机制。方法:采用Aβ_(25-35)诱导的HBMEC细胞损伤作为阿尔茨海默病(AD)细胞模型。本研究分为空白组,Aβ_(25-35)组,省睡方水提液低、中、高剂量组(125,250,500 mg·L~(-1))。对其进行相关治疗后,采用噻唑蓝(MTT)比色法确定不同浓度药物及Aβ_(25-35)的细胞毒性,采用Hoechst-33258染色观察细胞凋亡情况,采用比色法检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)活性,采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测晚期糖基化终产物受体(RAGE),低密度脂蛋白受体相关蛋白(LRP1),葡萄糖转运蛋白1(GLUT1)及葡萄糖转运蛋白3(GLUT3)的表达。结果:与空白组比较,Aβ_(25-35)组细胞活力显著下降(P0.01),Hoechst-33258染色观察到明亮的蓝色荧光、染色质固缩、呈致密浓染或碎块状致密浓染,颜色有些发白,凋亡细胞百分比显著增加(P0.01),Caspase-3活性显著增加(P0.01),RAGE蛋白表达显著增加(P0.01),LRP1,GLUT1和GLUT3蛋白表达显著下降(P0.01);与Aβ_(25-35)组比较,省睡方水提液组细胞存活率以剂量依赖性方式显著增加,500 mg·L~(-1)省睡方水提液组保护作用比其他组更明显(P0.05),500 mg·L~(-1)省睡方水提液组及显著抑制凋亡细胞的数量(P0.01),且显著降低Caspase-3活性(P0.01),125 mg·L~(-1)省睡方水提液组RAGE蛋白表达未显著降低,250,500 mg·L~(-1)省睡方水提液组RAGE蛋白表达显著下降(P0.01),而各剂量省睡方水提液组LRP1,GLUT1和GLUT3蛋白表达明显增加(P0.05,P0.01)。结论:省睡方水提液能够减弱Aβ_(25-35)寡聚体诱导的HBMEC细胞毒性,抑制细胞凋亡,降低Caspase-3活性,降低RAGE蛋白的表达,升高LRP1,GLUT1和GLUT3蛋白的表达,从而降低Aβ在脑内异常聚集和沉积可能是其防治AD的机制。     

三七总皂苷对缺糖缺氧/再灌注损伤SH-SY5Y细胞NgR1、ROCK2 mRNA和蛋白表达的影响

目的:研究三七总皂苷(Panax notoginseng saponins,PNS)对Nogo-NgR及其下游通路中NgR1和ROCK2 mRNA和蛋白的调控作用。方法:将SH-SY5Y细胞分为8组:正常组、模型组、维甲酸(retinoic acid,RA)组、三七总皂苷大(640 mg/L)、小(320 mg/L)剂量组、Y27632组、Y27632+三七总皂苷大、小剂量组,采用缺糖缺氧方法建立SH-SY5Y细胞损伤模型。应用实时荧光定量PCR和Western blot检测SH-SY5Y细胞缺糖缺氧损伤后NgR1、ROCK2 mRNA和蛋白表达特征及三七总皂苷对其影响。结果:模型组细胞中NgR1、ROCK2 mRNA和蛋白的表达较正常组显著升高(P0.01);各给药组细胞中NgR1和ROCK2 mRNA水平较模型组均有较为显著的降低(P0.01或P0.05);Western blot结果显示Y27632+三七总皂苷大、小剂量组中NgR1表达水平较模型组有显著差异(P0.01或P0.05);Rock2在三七总皂苷大剂量组、Y27632组和Y27632+三七总皂苷大、小剂量组中,表达水平较模型组明显减少(P0.01或P0.05)。结论:三七总皂苷可能通过抑制NgR1、ROCK2 mRNA和蛋白在缺糖缺氧损伤SH-SY5Y细胞中的表达,进而促进轴突的生长和重塑。     

补肾益精方含药血清对β-淀粉样蛋白干预血脑屏障体外模型渗透性的影响

目的:以Aβ1-42干预血脑屏障大鼠脑微血管内皮细胞和星形胶质细胞共培养模型,评价补肾益精方含药血清对该模型的渗透性的影响。方法:体外分别培养胚胎鼠脑微血管内皮细胞和星形胶质细胞,鉴定并测定跨内皮细胞电阻,利用Transwell细胞培养池,建立内皮细胞和星形胶质细胞共培养的血脑屏障体外模型,将5μmol/L Aβ1-42加入大鼠脑微血管内皮细胞和星形胶质细胞非接触式共培养血脑屏障模型。分为Aβ1-42模型组和Aβ1-42加补肾益精方低、中、高剂量组,另设血脑屏障空白组,分别检测并比较各培养组荧光素钠的渗透性。结果:补肾益精方低、中剂量组荧光素钠的通透性明显低于Aβ1-42模型组(P0.05)。结论:补肾益精方含药血清对Aβ1-42诱导的血脑屏障渗透性增加有抑制作用。     

三七总皂苷对氧化型低密度脂蛋白诱导的人脐静脉内皮细胞的细胞间黏附分子-1的影响

目的 研究三七总皂苷对氧化型低密度脂蛋白(ox LDL )损伤血管内皮细胞的保护作用,以探讨其治疗动脉硬化闭塞症 (ASO)的机制。方法 以培养原代人脐静脉内皮细胞（HUVEC）作为靶细胞, 用ox LDL造成HUVEC损伤模型,以三七总皂苷进行干预。光镜下观察细胞形态变化,MTT法检测细胞活性;采用蛋白定量法检测HUVEC与单核细胞的黏附率;用流式细胞仪测定HUVEC的细胞间黏附分子-1（ICAM-1）的蛋白表达。结果 ox-LDL作用HUVEC后12、24 h时,HUVEC损伤明显,细胞活性显著降低,人单核细胞与HUVEC的黏附率显著升高, HUVEC的ICAM 1的蛋白表达水平也明显升高, 均明显高于正常对照组(P＜0.05,P＜0.01),而三七总皂苷能使ox-LDL损伤的HUVEC形态趋于正常,活性增强,并明显降低人单核细胞与HUVEC的黏附率,显著降低ICAM-1蛋白的表达水平,与ox-LDL组比较差异有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01),这种作用随着剂量的增加而增强。结论 三七总皂苷能通过下调内皮细胞表面黏附分子的表达抑制单核－血管内皮细胞黏附,从而发挥对血管内皮细胞的保护作用,这可能是其治疗ASO的机制之一。     

人参总皂苷与三七总皂苷对高糖刺激下腹膜间皮细胞分泌转化生长因子β_1和纤维连接蛋白的影响

目的:观察人参总皂苷与三七总皂苷对高糖刺激下腹膜间皮细胞分泌转化生长因子β1(TGF-β1)和纤维连接蛋白(FN)的影响。方法:采用胰蛋白酶消化法分离大鼠腹膜间皮细胞,建立稳定的细胞培养模型,加入2.5%腹膜透析液作用3h,吸弃后加入终浓度为100μg/mL的人参总皂苷与三七总皂苷,分别于24h、48h后用ELISA法检测上清液中TGF-β1和FN的水平。结果:高糖腹透液刺激后,在24h、48h腹膜间皮细胞分泌FN及TGF-β1均明显增加,与空白组比较,差异有显著性意义或非常显著性意义(P0.05,P0.01)。对高糖刺激后的腹膜间皮细胞培养24h,与高糖组比较,三七总皂苷能抑制FN分泌(P0.01);人参总皂苷培养24h、48h均能降低FN的水平(P0.01)。人参总皂苷培养24h能减少高糖刺激后腹膜间皮细胞分泌TGF-β1(P0.01),三七总皂苷培养24h、48h均能降低TGF-β1的水平(P0.05,P0.01)。结论:三七总皂苷及人参总皂苷对高糖培养24h的腹膜间皮细胞分泌FN、TGF-β1均有明显的抑制作用,人参总皂苷对FN分泌的抑制持续时间更长,三七总皂苷对TGF-β1分泌的抑制持续时间更长。     

三七总皂苷对以尿酸钠诱导血管内皮细胞凋亡的影响

目的:观察三七总皂苷片剂对以尿酸钠(MSU)100μg.mL-1诱导血管内皮细胞凋亡的影响。方法:体外培养的血管内皮细胞,以尿酸钠(MSU)100μg.mL-1为凋亡诱导因子,建立血管内皮细胞凋亡诱导模型,继而采用2.5、5、10μg.mL-1浓度的三七总皂苷进行干预,用流式细胞仪测定细胞凋亡率,采用实时定量PCR检测ICAM-1基因的表达。结果:三七总皂苷组2.5μg.mL-1明显抑制细胞凋亡(6.9±1.07)%,与模型组比较P0.01;能显著抑制ICAM-1基因的表达。结论:三七总皂苷能明显抑制以尿酸钠(MSU)100μg.mL-1诱导的血管内皮细胞凋亡。     

丹皮酚联合三七总皂苷对AngⅡ诱导的心脏成纤维细胞增殖及TGF-β/Smads信号通路的影响

目的探讨丹皮酚联合三七总皂苷应用对血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)诱导新生大鼠的心脏成纤维细胞(cardiac fibroblasts,CFs)增殖及TGF-β/Smads信号通路的影响。方法采用胰酶消化法分离培养的CFs随机分为6组:正常对照组,模型组,三七总皂苷组,丹皮酚组,丹皮酚与三七总皂苷联合用药大、小剂量组。采用MTT比色法测定各组培养液中CFs增殖情况,免疫细胞化学法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的蛋白表达水平,RTPCR法检测转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,Tgfb1)的mRNA表达水平,Western blot法检测TGF-β1、磷酸化的Smad2/3(p-Smad2/3)的蛋白表达水平。结果与正常对照组比较,模型组大鼠CFs增殖明显增高,Tgfb1的mRNA表达显著增加,α-SMA及TGF-β1、p-Smad2/3的蛋白表达显著增加;与模型组比较,丹皮酚组、三七总皂苷组、联合用药的大剂量和小剂量组均可抑制由AngⅡ诱导的CFs的增殖,Tgfb1的mRNA表达显著减少,α-SMA及TGF-β1、p-Smad2/3的蛋白表达显著减少;与丹皮酚组、三七总皂苷组比较,联合用药大、小剂量组在抑制CFs增殖的作用上显著增强,抑制Tgfb1的mRNA表达效果显著增强,抑制α-SMA及TGF-β1、p-Smad2/3的蛋白表达效果显著增强;与联合用药小剂量组比较,联合用药大剂量组对以上指标的抑制效果更佳,显示一定的剂量依赖性。结论丹皮酚与三七总皂苷联合应用对抑制CFs增殖,呈现明显的协同作用。其作用机制与抑制TGF-β/Smads信号通路的传导有关。     

竹节参总皂苷对棕榈酸诱导HepG2细胞凋亡的保护作用研究

探讨竹节参总皂苷(TSPJ)对棕榈酸(PA)诱导的HepG2细胞凋亡的保护作用及分子机制。体外培养HepG2细胞,分为5组:对照组,模型组,竹节参参总皂苷高(50 mg·L~(-1))、中(25 mg·L~(-1))、低(12.5 mg·L~(-1))剂量组。5组细胞均培养24 h后,采用MTT法检测细胞活力,用Hoechst染色和Annexin V-FITC/PI双标记流式细胞术检测细胞凋亡,用RT-PCR法检测TNF-α,IL-1β,BCL-2,CHOP和GAPDH mRNA表达水平,用Western blot法和流式检测BCL-2,CHOP和Toll样受体4(TLR4)蛋白表达量。结果表明,与正常组比较,模型组细胞数量显著减少(P0.01),凋亡细胞增多,与模型组比较,高,中剂量组细胞数量显著增多(P0.01),凋亡细胞减少;与正常组比较,模型组CHOP和TLR4蛋白表达量,TNF-α,IL-1β和CHOP mRNA表达水平显著升高(P0.01),BCL-2蛋白表达水平和mRNA表达水平显著降低(P0.01),与模型组比较,高剂量组CHOP和TLR4蛋白表达量,TNF-α,IL-1β和CHOP mRNA表达水平显著降低(P0.01),BCL-2蛋白表达量和mRNA表达水平显著升高(P0.01),提示竹节参总皂苷可以减轻PA诱导的炎症反应及凋亡,对肝细胞有一定的保护作用。     

丹参酮ⅡA对裸鼠人肠癌血管新生的抑制作用

目的:研究丹参酮ⅡA(TSⅡA)对裸鼠人肠癌血管新生的抑制作用.方法:建立人肠癌HCT-116细胞裸鼠皮下移植瘤模型,随机分为5组:模型组(DMSO组)、TSⅡA低、中、高剂量组(0.5,1,2 mg·kg-1·d-1)和5氟脲嘧啶组(50 mg·kg-1·2d),连续给药21 d后处死裸鼠,取出瘤体,测量瘤体大小及质量,计算肿瘤抑制率;免疫组化法检测瘤体的微血管密度(MVD);ELISA测定血清中血管内皮细胞生长因子(VEGF)的表达情况;Western blot检测瘤体中β-catenin蛋白表达.结果:TSⅡA低、中、高剂量组的瘤重抑制率分别为25.6％,46.7％,59.6％.免疫组化结果显示,DMSO组、TSⅡA低、中、高裸鼠瘤体MVD计数分别为(60.8±7.0),(47.5±6.7),(31.3±4.2),(20.5±4.1)个,各组与DMSO组比较差异显著(p＜0.01).ELISA结果显示,TSⅡA低、中、高剂量组裸鼠血清VEGF表达量分别是DMSO组的0.94,0.84,0.73倍,差异显著(P＜0.01).TSⅡA各组瘤体中β-catenin蛋白表达量在细胞总蛋白和核蛋白中均显著降低,并且呈一定剂量依赖效应.结论:TSⅡA能够抑制裸鼠人肠癌皮下移植瘤的生长和微血管生成,其机制可能与下调VEGF和β-catenin蛋白表达有关.     

三七总皂苷对拟缺血脑微血管内皮细胞RIG-I表达的影响

目的:研究三七总皂苷对拟缺血损伤的脑微血管内皮细胞维甲酸诱导基因-I(Retinoic Acid-inducible Gene-I,RIG-I)的影响。方法:采用原代培养大鼠脑微血管内皮细胞(Brain Microvascular Endothelial Cell,BMEC),氧糖剥夺法制备拟缺血损伤模型,首先用不同浓度梯度的三七总皂苷进行干预,筛选出三七总皂苷的最佳用药浓度,然后分别采用荧光定量PCR和免疫蛋白印迹法检测各组细胞中RIG-I mRNA及蛋白的表达水平。结果:三七总皂苷在22μg/m L浓度时能够显著提高拟缺血损伤脑微血管内皮细胞的活性,同时能够从基因和蛋白水平下调RIG-I的表达。结论:三七总皂苷对拟缺血损伤脑微血管内皮细胞具有保护作用,提示三七总皂苷在缺血性脑损伤中使RIG-I的表达下调可能是其发挥抗炎作用的内在分子机制之一。     

远志皂苷元调控tau蛋白磷酸化的实验研究

目的观察远志皂苷元对阿尔茨海默（AD）大鼠模型海马tau蛋白磷酸化相关酶类表达的影响,并探讨其机理。方法清洁级SD雄性大鼠60只,随机分为对照组、模型组、多奈哌齐组及远志皂苷元低、中、高剂量组,每组10只。侧脑室注射寡聚体形式的β淀粉样蛋白（Aβ）1-42制备AD大鼠模型,术后给药组给予不同剂量远志皂苷元和多奈哌齐灌胃,对照组和AD模型组给予等量生理盐水灌胃。应用免疫组织化学方法和蛋白印迹法检测海马tau蛋白激酶（GSK-3β、CDK-5）和磷酸酯酶（PP-1、PP-2A）的表达水平。结果与对照组比较,模型组tau蛋白激酶表达明显升高,磷酸酯酶表达明显降低（P〈0.01）;与模型组比较,远志皂苷元各剂量组蛋白激酶表达明显降低,磷酸酯酶表达明显升高（P〈0.01）。结论远志皂苷元能调节AD大鼠模型蛋白激酶和磷酸酯酶之间的平衡失调。     

从Neu3/IAP通路研究竹节参总皂苷对衰老大鼠结肠炎症的改善作用

目的从Neu3/IAP通路探讨竹节参总皂苷(saponins from Panax japonicus,SPJ)对衰老大鼠结肠炎症的改善作用及其可能的机制。方法 SD雄性大鼠分为四组,青年组(6月龄)、自然衰老组(24月龄)以及竹节参总皂苷低、高剂量组。SPJ低、高剂量组大鼠从18月龄分别给予含10、30 mg/kg的SPJ饲料至24月龄。测量结肠组织长度,生化试剂盒检测大鼠结肠组织中MPO水平,免疫组化检测炎症相关蛋白NLRP3、TNF-α的表达,以及结肠组织中紧密连接蛋白ZO-1、claudin-5的表达,酶组织化学染色法检测大鼠十二指肠IAP活性,RT-PCR检测结肠组织中IAP、Neu3 mRNA表达。结果与自然衰老组比较,SPJ低、高剂量能显著降低大鼠结肠长度(P0.05),增强MPO活力(P0.05或P0.01),降低炎症相关蛋白NLRP3、TNF-α(P0.01),增加紧密连接蛋白ZO-1、claudin-5的表达(P0.01或P0.05),增强十二指肠IAP活性以及结肠组织中IAP、Neu3 mRNA表达(P0.01或P0.05)。结论 SPJ可能通过Neu3/IAP通路减轻肠道炎症反应。     

三七总皂苷对MC3T3-E1细胞增殖和成骨分化的影响

目的 探讨三七总皂苷对激素性股骨头坏死的保护作用。方法 采用CCK-8法检测三七总皂苷(1～1 000 mg/L)和地塞米松(10μmol/L)对MC3T3-E1细胞增殖的影响，偶氮偶联法检测三七总皂苷(10、50、100 mg/L)和地塞米松对MC3T3-E1细胞ALP活性的影响，茜素红染色法检测三七总皂苷和地塞米松对细胞矿化的影响，RT-qPCR法和免疫荧光染色法检测三七总皂苷和地塞米松对细胞蛋白Col-Ⅰ、OCN、OPN蛋白和mRNA表达的影响，Western blot法检测三七总皂苷和地塞米松对细胞Runx2蛋白和Wnt/β-catenin通路靶蛋白表达的影响。结果 10μmol/L地塞米松能抑制MC3T3-E1细胞增殖。与正常组比较，10～100 mg/L三七总皂苷能促进MC3T3-E1细胞增殖(P<0.05),并可降低地塞米松对细胞增殖的抑制作用(P<0.01)。此外，三七总皂苷能降低地塞米松对MC3T3-E1细胞ALP活性和钙沉积的抑制作用(P<0.01),地塞米松可降低MC3T3-E1细胞Col-I、Runx2、OCN、OPN蛋白表达和Wnt/β-ca...     

三七皂苷R1对血管平滑肌细胞迁移及p38MAPK蛋白的影响

目的 观察三七皂苷R1对血管平滑肌细胞（VSMC）迁移及p38 MAPK蛋白的影响。方法 用AngⅡ诱导VSMC迁移建立细胞迁移模型，将迁移的VSMC随机分为对照组和三七皂苷R1低、中、高剂量组（5、10、20μmol/L）。用细胞划痕实验检测VSMC迁移面积，Western blotting法检测MMP2、MMP9、磷酸化p38 MAPK及p38 MAPK蛋白表达。结果 与对照组相比，三七皂苷R1中、高剂量组均能明显减少VSMC的细胞迁移面积及MMP2、MMP9迁移蛋白表达（P <0.05），且呈剂量依赖性；与对照组相比，三七皂苷R1中、高剂量组均能明显减少p38 MAPK蛋白磷酸化（P <0.05），且呈剂量依赖性。结论 三七皂苷R1抑制了AngⅡ诱导的VSMC迁移面积，同时下调MMP2和MMP9迁移蛋白，且呈剂量依赖性，其机制可能与降低p38 MAPK蛋白磷酸化有关。     

通络救脑注射液对Aβ1-42诱导原代大鼠脑微血管内皮细胞氧化应激反应及细胞凋亡的影响

目的：探讨通络救脑注射液对Aβ诱导下原代大鼠脑微血管内皮细胞氧化应激反应及细胞凋亡因子Caspase-3蛋白表达的影响。方法：模型组以Aβ1-42加入内皮细胞培养基中制备阿尔茨海默病（AD）内皮细胞损伤模型,通络救脑注射液（简称TLJN）组在造模前先行加入通络救脑注射液干预。采用生化法检测各组内皮细胞中MDA含量、SOD活性,运用Western Blot法检测各组Caspase-3蛋白表达。结果：TLJN组能明显降低AD内皮细胞损伤模型中MDA含量、提高SOD活性;抑制Caspase-3蛋白表达。结论：在本实验观察范围内,通络救脑注射液对Aβ诱导下原代大鼠脑微血管内皮细胞的凋亡有抑制作用,其作用机制可能是通过提高SOD抗氧化酶活性、降低MDA含量,进而下调Caspase-3蛋白表达以抑制细胞凋亡。     

基于MEKK1/SEK1/JNK1/AP-1通路探讨三七总皂苷对4T1乳腺癌荷瘤小鼠肿瘤模型的影响

目的:通过研究三七总皂苷对4T1乳腺癌荷瘤小鼠促分裂原激活的蛋白激酶的激酶1(MEKK1)/应激激活的蛋白激酶/细胞外信号调节的蛋白激酶(SAPK/Erk激酶,SEK1)/c-Jun氨基末端激酶1(JNK1)/激活蛋白-1(AP-1)通路的影响,探讨三七总皂苷抑制肿瘤的可能机制。方法:建立4T1乳腺癌荷瘤小鼠肿瘤模型,将48只造模成功的小鼠随机分为三七总皂苷低、中、高剂量组(10,20,40 mg·kg~(-1))和模型组,每组12只,三七总皂苷各剂量组腹腔注射剂量为10 mL·kg~(-1),模型组给予相同剂量的生理盐水,连续给药28 d。给药结束后分离肿瘤组织、称质量、切片、匀浆等,采用脱氧核苷酸末端转移酶(TdT)介导的dUTP缺口末端标记法(TUNEL)染色检测肿瘤细胞凋亡;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测肿瘤组织MEKK1,SEK1,JNK1,AP-1 mRNA表达;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测4T1乳腺癌荷瘤小鼠肿瘤组织MEKK1,SEK1,JNK1,AP-1蛋白表达。结果:与模型组比较,三七总皂苷中、高剂量组的肿瘤质量明显下降(P0.05);肿瘤细胞凋亡数量随三七总皂苷剂量的升高明显升高(P0.05);三七总皂苷中、高剂量组肿瘤组织中MEKK1,SEK1,JNK1,AP-1 mRNA和蛋白表达明显升高(P0.05)。结论:三七总皂苷对4T1乳腺癌荷瘤小鼠肿瘤模型具有抑制作用,其作用机制可能与激活MEKK1/SEK1/JNK1/AP-1信号通路有关。