FKN、PI3K及NF-κB对人外周血单个核细胞IL-6表达的的影响及缬沙坦的干预作用

目的探讨不规则趋化因子Fractalkine(FKN)、磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)、核因子κB(NF-κB)对外周血单个核细胞(PBMC)IL-6表达的影响及缬沙坦的干预作用,研究FKN影响IL-6表达的信号转导机制。方法利用密度梯度离心法分离健康人外周血单个核细胞,将提取的PBMC分为7组:空白对照组、FKN组、LY294002组(PI3K抑制剂)、PDTC组(NF-κB抑制剂)、FKN+缬沙坦组、FKN+LY294002组、FKN+PDTC组,后二组在FKN诱导PBMC细胞前分别由LY294002、PDTC预处理。各组PBMC分别在12 h和24 h后,用酶联免疫吸附实验(ELISA)法检测各组细胞培养液中的IL-6表达。结果培养12 h后,与对照组比较,FKN组IL-6明显降低(P<0.05),LY294002组和PDTC组无明显差异(P>0.05);与FKN组比较,FKN+缬沙坦组IL-6明显降低(P<0.05),FKN+LY294002组IL-6明显升高(P<0.05)、FKN+PDTC组IL-6明显降低(P<0.05)。培养24 h后,各组IL-6表达无明显差异(P>0.05)。结论 FKN对人外周血单个核细胞IL-6的表达具有双向调节作用,通过PI3K途径抑制IL-6的表达,而通过NF-κB途径促进IL-6的表达,总体上FKN可以抑制IL-6的表达。缬沙坦可增加FKN抑制IL-6表达的作用。     

趋化因子FKN对外周血单个核细胞NF-κB和TNF-α表达的影响及卡托普利的干预作用

[目的]通过研究趋化因子(fractalkine,FKN)对单个核细胞合成核因子-κB(nuclearfactor-κappaB,NF-κB)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的影响,探索了FKN-CX3CR1可能存在的信号传导机制及在动脉粥样硬化形成中的作用,并探讨了卡托普利在这其中可能的干预作用.[方法]①抗凝血用Ficoll密度梯度离心法分离外周血单个核细胞.②将每份提取的单个核细胞分3组分别为:空白对照组、FKN组、卡托普利组.③应用免疫细胞化学法检测各组单个核细胞中NF-κB表达情况.④应用酶联免疫法检测各组培养液中TNF-α的表达水平.[结果]①FKN诱导组NF-κB(34.80±2.69)%和TNF-α(1506.1±69.3)pg/mL较空白组NF-κB(3.80±0.95)%和TNF-α(80.5±5.5)pg/mL表达显著增多(P＜0.05).②卡托普利干预组NF-κB(27.55±1.96)%和TNF-α(1119.3±116.2)pg/mL较FKN组NF-κB(34.80±2.69)%和TNF-α(1506.1±69.3)pg/mL表达显著减少(P＜0.05).[结论]FKN-CX3CR1有增加单个核细胞表达NF-κB、TNF-α的作用;而卡托普利可通过减弱FKN-CX3CR1诱导的单个核细胞合成NF-κB、TNF-α,抑制炎症反应.     

趋化因子FKN对人外周血单个核细胞IL-8表达的影响及ERK、PI3K和NF-κB在其中的作用

目的：通过研究趋化因子Fractalkine（FKN）对人外周血单个核细胞IL-8表达的影响,以及信号分子细胞外调节蛋白激酶（extracellular regulated protein kinases,ERK）、磷脂酰肌醇-3激酶（phosphatidylinositol 3-kinase, PI3K）、核因子-κB（nuclear factor-κB,NF-κB）在其中的作用,探讨FKN促进动脉粥样硬化（atherosclerosis,AS）的机制。方法利用密度梯度离心法分离健康人外周血单个核细胞;将提取的单个核细胞分为：空白对照组、FKN组、PD98059（ERK阻断剂）组、LY294002（PI3K阻断剂）组、PDTC（NF-κB阻断剂）组、FKN＋PD98059组、FKN＋LY294002组、FKN＋PDTC组;分别于培养12 h和24 h后收集细胞培养上清,应用ELISA检测各组单个核细胞中IL-8的表达情况。结果（1）细胞培养12 h或24 h后,PD98059组、LY294002组和PDTC组与空白组比较,IL-8表达有减少趋势,但差异无显著性意义（P＞0.05）。（2）FKN组较空白组IL-8表达明显减少（P＜0.05）,FKN＋PD98059组和FKN＋LY294002组较FKN组IL-8表达明显增加（P＜0.05）,FKN＋PDTC组较FKN组、FKN＋PD98059组和FKN＋LY294002组IL-8表达均明显减少（P＜0.05）。（3）细胞培养24 h后,各组IL-8表达均较12 h明显减少（P＜0.05）。结论趋化因子FKN可能通过ERK、PI3K信号途径抑制单个核细胞IL-8的表达,而通过NF-κB途径促进IL-8的表达,FKN对单个核细胞IL-8的表达具有双向调节作用,但以抑制作用为主。     

NF-κB活化及livin,survivin表达上调与胃癌细胞耐药的关系

目的:探讨核转录调节因子NF-κB活性及凋亡抑制蛋白livin, survivin的表达与胃癌细胞耐药的关系.方法:MTT法检测化疗药物长春新碱(VCR)对胃癌细胞SGC7901及耐药细胞SGC7901/VCR的生长抑制作用;流式细胞仪检测VCR作用后细胞的凋亡率;ELISA法检测NF-κB核转录活性;Western blot检测livin, survivin蛋白表达.结果:化疗药VCR对SGC7901/VCR细胞的生长抑制作用较SGC7901细胞显著降低,VCR作用SGC7901/VCR细胞的凋亡率减少;SGC7901/VCR细胞中NF-KB核转录活性增强(P<0.01);livin, survivin在SGC7901/VCR细胞中表达上调(P<0.05).结论:胃癌细胞SGC7901在化疗药VCR长期诱导后产生的继发耐药可能与NF-κB活化及livin, survivin表达上调有关;NF-κB活化是livin, survivin表达上调可能的调控因素.     

B细胞成熟抗原BCMA在细胞内诱导NF-κB的活化

目的: 研究细胞表面B细胞成熟抗原(B-cell maturation antigen, BCMA)在B细胞激活因子刺激下,对转录因子NF-κB是否具有激活作用. 方法: 采用电转移基因转染和卤化钙基因转染方法,将BCMA和C末端缺失80个氨基酸残基的BCMA基因(BCMAΔC80)分别转染3T8细胞及kb gfp细胞,观察与NF-κB启动子下游的报告基因表达水平的变化. 结果: BCMA在3T8细胞中经BAFF激活后可上调报告质粒中CD14基因的表达,而C末端缺失80个氨基酸残基的突变BCMA(BCMAΔC80)则不具备此功能. 同时在另一报告细胞系kb gfp中亦观察到类似作用. 结论: 细胞表面的BCMA在被B细胞激活因子刺激后,可引起NF-κB的活化,这一作用依赖于BCMA的C末端的80个氨基酸残基.     

NF-κB与肿瘤的关系

198 6年 ,Sen和Baltimore在成熟的B细胞核提取物中发现一种与免疫球蛋白κ轻链基因的增强子中特定DNA位点结合的蛋白 ,命名为核转录因子 (Nu clearfactorkappaB ,NF -κB)。NF -κB最初被认为是淋巴细胞特异性的 ,后来发现其广泛存在于各种细胞中 ,并参与细胞内的信号传递 ,调控多种基因的表达。它的异常激活或完全抑制与多种疾病的发生有关。本文拟就NF -κB与肿瘤的关系进展做一综述。1　NF -κB的结构特点目前 ,已鉴别和克隆成功 5种哺乳动物NF -κB家庭成员 ,即NF -κB1(P5 0 /10 5 ) ,NF -κB2 (P5 2 /P10 0 ) ,P6 5 (Re…     

核转录因子NF-κB与类风湿性关节炎关系的研究进展

类风湿性关节炎（rheumatoid arthritis，RA）是人类最常见的自身免疫性疾病之一，是一种严重危及人类健康的致残性关节炎，其原因尚未完全明确。其病理改变主要为滑膜组织的增生，炎细胞浸润，血管翳形成，以及骨和软骨进行性不可逆性破坏，其中血管翳的形成为一重要的中间环节。已有研究表明，NF-κB可能对血管形成具有核心的调节作用。     

NF-κB与变态反应性疾病

NF-κB(核因子)是具有基因转录调节作用的蛋白质因子,几乎存在于所有有核细胞中,调节着包括趋化因子、生长因子、细胞粘附分子及各种疾病的蛋白基因.当细胞受到炎症介质、病毒感染、氧化应激等刺激后,NF-κB蛋白在胞质内被激活,进入细胞核,与病毒、细胞因子、生长因子、细胞粘附分子、酶等基因的增强子序列结合,调控着这些基因的表达.NF-κB在一系列由细胞因子、炎症介质及蛋白酶类参与的疾病的发病过程中发挥重要作用.     

白血病细胞中NF-κB的活化状态及其对细胞凋亡的影响

目的探讨白血病细胞株中核转录因子NF-κB的活化状态及其对白血病细胞凋亡的影响。方法流式细胞术检测白血病细胞及对照组细胞PBMC凋亡率;双荧光素酶报告基因检测各组细胞NF-κB相对活性;NF-κB抑制剂PDTC作用12h后检测各组白血病细胞NF-κB相对活性及细胞凋亡率的变化。此外,qPCR及Western Blot分别检测各组细胞凋亡相关蛋白Bax及Bcl-2的mRNA及蛋白水平的改变。结果与PBMC比较,各组白血病细胞凋亡率明显下降(P<0.05);双荧光素酶报告基因结果显示各组白血病细胞的NF-κB活性显著高于PBMC(P<0.05);PDTC作用后各组白血病细胞NF-κB活性明显下降,细胞凋亡率明显升高(P<0.05);同时,各组白血病细胞Bax的mRNA及蛋白表达水平均明显增高(P<0.05),而Bcl-2的表达水平明显降低(P<0.05)。结论白血病细胞中存在NF-κB的持续性激活,其激活可导致白血病细胞凋亡受阻。     

NF-κB/IκB信号通路与皮肤病

核因子-κB (nuclear factor kappa binding,NF-)是广泛存在于细胞中的具有多向调节作用的蛋白质分子,可调节100多种靶基因的表达,其中的大多数均参与了宿主的免疫和炎症反应.NF-κB抑制蛋白 (inhibitor of NF-κB,IκB) 是NF-κB的抑制因子.本文主要就NF-κB/IκB信号通路的概况及其在某些皮肤病发病机制中的作用进行综述.     

烧伤血清对内皮细胞IκBα降解和NF-κB活化的影响

目的 了解烧伤血清对内皮细胞抑制性κB(IκBα)降解、核因子-κB(NF-κB)活化的影响,进一步探讨烧伤血清诱导内皮细胞活化分泌细胞因子的机制。方法 采用体外培养的内皮细胞,分别用正常人血清(对照组)、烧伤患者血清、烧伤患者血清+吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(PDTC)刺激内皮细胞。采用Western印迹法检测血清刺激30、60、90、120min后内皮细胞IκBα蛋白降解情况,电泳迁移率分析检测血清刺激30、60、120、240min后NF-κB活性的变化。结果 烧伤血清刺激内皮细胞后30min,IκBα发生明显降解,刺激后60min达高峰,2h后表达逐渐升高;烧伤血清刺激内皮细胞后30min,NF-κB活性迅速升高,30~60min达高峰,2h后逐渐回复基础状态。PDTC能有效抑制烧伤血清作用条件下内皮细胞IκBα降解、NF-κB活化。结论 烧伤血清可诱导内皮细胞IκBα降解,活化NF-κB,从而在烧伤后内皮细胞分泌细胞因子过程中起重要作用。     

NF-κB与神经系统疾病的关系

核转录因子NF-κB对感染、免疫反应以及控制细胞分化和凋亡起到广泛的效应,这些效应较为明显存于在神经系统中。NF-κB通常以多种亚单位形式存在于各种神经细胞中,通过多个激活途径被激活后从胞浆移位至细胞核内发挥转录激活作用,NF-κB在对神经系统发育和抗凋亡中以及调节胶质细胞活性过程中起到十分重要的作用。本文主要对NF-κB的生物学特性、抗肿瘤机制及神经系统疾病的关系做一综述。     

NF-κB与动脉粥样硬化的研究进展

核因子-κB（nuclear factor-kappaB,NF-κB）是一种具有基因转录多项调控作用的转录因子,能与靶基因的启动子或增强子部位的κB位点结合,启动基因的转录。NF-κB作为信号转导途径中的枢纽,与免疫、肿瘤的发生与发展、细胞凋亡的调节及胚胎发育有密切关系。     

NF-κB的生物学特性及其与肝脏病的关系

NF-κB是一种广泛存在于体内细胞的核转录因子，调节细胞因子、趋化因子、生长因子、粘附分子、免疫受体基因的表达，影响机体内的细胞分化、免疫反心、炎症反应、细胞凋亡、肿瘤生长等多种生物学功能。研究表明NF—κB信号通路的过度活化与人类疾病的发生关系密切，因此受到科学界的广泛关注。     

NF-κB、MMP-9在宫颈癌细胞中的表达及意义

目的 探讨核转录因子-κB(nuclear factor-kappa B,NF-κB)及基质金属蛋白酶(Matrix metalloproteinase,MMP)-9在两种宫颈癌siha、caski细胞中的表达及意义.方法 采用免疫细胞化学法和酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测两种宫颈癌细胞及其上清液中NF-κB及其下游调控基因MMP-9的蛋白表达.结果 NF-κB、MMP-9在宫颈癌细胞中均有表达,与siha细胞相比,两者在肠转移的caski细胞中及其上清液中的表达较高,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 在宫颈癌细胞中存在有NF-κB及其下游基因MMP-9的高表达,提示其可能在宫颈癌发生发展及转移中起重要作用.     

烧伤血清对内皮细胞IκBα降解和NF-κB活化的影响

目的 了解烧伤血清对内皮细胞抑制性κB(IκBα)降解、核因子-KB(NF—KB)活化的影响，进一步探讨烧伤血清诱导内皮细胞活化分泌细胞因子的机制。方法 采用体外培养的内皮细胞，分别用正常人血清(对照组)、烧伤患者血清、烧伤患者血清 吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(PDTC)刺激内皮细胞。采用Westem印迹法检测血清刺激30、60、90、120min后内皮细胞IκBα蛋白降解情况，电泳迁移率分析检测血清刺激30、60、120、240min后NF—κB活性的变化。结果烧伤血清刺激内皮细胞后30min，IκBα发生明显降解，刺激后60min达高峰，2h后表达逐渐升高；烧伤血清刺激内皮细胞后30min，NF-κB活性迅速升高，30～60min达高峰，2h后逐渐回复基础状态。PDTC能有效抑制烧伤血清作用条件下内皮细胞IκBα降解、NF-κB活化。结论 烧伤血清可诱导内皮细胞IκBα降解，活化NF—κB，从而在烧伤后内皮细胞分泌细胞因子过程中起重要作用。     

NF-κB与急性坏死性胰腺炎

急性胰腺炎(acute pancreatitis,AP)是胰腺的炎症性疾病,重症时可引发多器官功能衰竭(Multiple Organ Failure,MOF),甚至死亡。近年来与该疾病发生和进展相关的信号分子和通路成为研究热点。一个重要的信号分子,核转录因子-κB(NF-κB),已被证实在AP炎症进展中扮演着重要的角色。能调控很多与免疫和炎症相关基因的表达。而这些基因在     

NF-κB在炎症及脓毒症中的作用

炎症是机体对致炎因素引起的局部损伤产生以防御反应为主的应答性反应。感染导致的全身炎症反应综合征常发展为脓毒性休克。病原菌及其产物可以激活炎症基因,从而激活细胞因子网络系统,释放一系列炎症介质和抗炎介质,     

NF-κB与动脉粥样硬化机制研究进展

核转录因子NF-κB(nuclear factor-κB)为1986年由Sen和Baltimore在淋巴细胞中发现的一种能够和免疫球蛋白κ轻链基因的增强子序列特异性结合的核因子。NF-κB广泛存在于真核生物中,是一个由复杂的多肽亚单位组成的蛋白家族,它作为信号转导途径中的枢纽,与免疫、肿瘤的发生与发展、细胞凋亡的调节及胚胎发育等有密切关系。目前,随着人们对NF-κB的研究日益重视并逐渐深入,它与动脉粥样硬化(Atherosclerosis,AS)等心血管疾病的密切关系进一步被证实,NF-κB的激活在AS发生发展中发挥重要作用。1NF-κB激活的分子机制NF-κB存在于所…     

EB病毒LMP1在鼻咽癌细胞中通过IκBα的降解活化NF-κB

目的　阐明鼻咽癌细胞中EB病毒编码的潜伏膜蛋白 1(LMP1)活化核转录因子NF κB的机制。方法　利用强力霉素Dox诱导表达LMP1的鼻咽癌细胞株Tet on LMP1 HNE2为实验模型 ,首先应用免疫印迹方法测定Dox诱导后不同时相LMP1的表达动力学以及IκBs蛋白量及功能的改变。进而用间接免疫荧光法检测NF κB的亚细胞定位。最后采用瞬间共转染及报道基因活性分析分析NF κB的活性。结果　在鼻咽癌细胞Tet on LMP1 HNE2中 ,Dox处理 15分钟后LMP1的表达迅速升高并维持与较高水平直至 12 0分钟。LMP1的诱导性表达导致IκBα的磷酸化并降解 ,但IκBα蛋白总量无改变。继IκBα的磷酸化并降解 ,NF κB(P6 5 )自胞浆易位至胞核且活性升高。IκBα的显性负性突变子抑制NF κB(P6 5 )的核易位及报道活性。LMP1的诱导性表达并未引起IκBβ蛋白水平变化。结论　在鼻咽癌细胞Tet on LMP1 HNE2中 ,EB病毒LMP1通过IκBα的磷酸化并降解激活核转录因子NF κB的活性 ,并且 ,LMP1诱导的NF κB活性能被IκBα的显性负性突变子完全抑制。IκBβ在此信号传导途径中无改变。LMP1表达前后IκBα蛋白总量维持恒定可能是由于NF κB的活化迅速启动了IκBα的重头合成这一自身调节环路所致。