自由基与视网膜缺血-再灌注损伤

自由基在视网膜缺血-再灌注损伤中占有重要地位。视网膜缺血-再灌注时黄嘌呤氧化酶（XO）增加，花生四烯酸代谢系统环氧化旁路，线粒体功能障碍，一氧化氮合成酶（NOS）激活及中性粒细胞系统被激活，使自由基生成大大增加。体内清除自由基的酶系统和抗氧化剂不足以清除生成的自由基而引起脂质，蛋白质和核酸等生物大分子的氧化损伤。给予外源性的自由基清除剂和抗氧化酶等通过加速自由基清除或抑制自由基生成而减轻视网膜缺血-再灌注损伤。     

视网膜缺血--再灌注损伤的保护

视网膜缺血-再灌注损伤是目前研究较多的一个课题,其损伤机制复杂,目前通过各种实验研究探索其损伤机制以及减轻或防止缺血-再灌注损伤的药物和方法很多.现就视网膜缺血-再灌注损伤的保护机制进行总结归纳.     

视网膜缺血-再灌注损伤干预治疗新进展

视网膜缺血-再灌注损伤(RIRI)是眼科常见的病理生理损伤性眼病,常发生于视网膜动静脉阻塞、糖尿病视网膜病变、急性闭角型青光眼等与缺血相关的眼病.表现为缺血性患眼在血液再灌注后,细胞功能发生代谢性障碍,视网膜组织结构损伤,视功能下降.缺血-再灌注损伤是由多种因素共同作用的结果,目前公认的假说主要包括氧自由基的损伤、细胞内的钙超载、白细胞介素介导作用和细胞凋亡等.但目前对于RIRI的保护及治疗研究有限,本文就国内外有关RIRI的干预治疗新进展综述如下.     

一氧化氮合酶在大鼠视网膜缺血再灌注损伤中的表达及意义

目的：探讨诱导型一氧化氮舍酶(iNOS)在大鼠视网膜缺血再灌注损伤中的表达及意义。方法：建立结扎颈总动脉的大鼠视网膜缺血再灌注损伤模型，60只SD大鼠被随机分为缺血再灌注组和对照组。每组按再灌注后不同时间段相应分为1h、6h、12h、24h、48h、72h小组，每小组5只大鼠，以免疫组织化学法(SABC法)检测视网膜组织中iNOS的表达情况。结果：在缺血再灌注损伤1h时，未见到iNOS的表达，在缺血再灌注6h时，iNOS开始表达，至第24小时表达最强，第48小时开始减弱，但第72小时仍有表达。而对照组视网膜中未能检测到iNOS的表达。结论：iNOS可能在视网膜缺血再灌注损伤中发挥重要作用。     

视网膜缺血再灌注损伤和细胞因子的研究进展

视网膜缺血再灌注（retinal ischemia reperfusion,RIR)损伤是由多种因素，如自由基，炎性细胞因子，白细胞等介导的复杂病理生理过程，RIR损伤和细胞因子之间存在密切联系，一方面，RIR损伤可以诱导多种炎性细胞因子，如白细胞介素1和6的表达，另一方面，多种外源性神经营养因子，如碱性成纤维细胞生长因子，重组人肝细胞生长因子，脑源性神经生长因子等，具有保护RIR损伤的作用，研究RIR损伤和细胞因子关系具有重要意义，因此我们报告了国外有关RIR损伤和细胞因子的最新研究进展。     

家兔视网膜缺血-再灌注损伤后形态学的动态变化

目的　观察家兔视网膜缺血 -再灌注后视网膜结构的动态变化。方法　通过前房灌注加压至 16 .7k Pa,维持 1h,建立缺血模型 ,观察再灌注 2～ 14d内其结构变化及内层视网膜平均厚度的变化。结果　家兔视网膜在缺血 -再灌注后 2～ 14d内表现为神经细胞持续丢失 ,视网膜层次逐渐不清 ,萎缩、变薄。其中神经节细胞、神经纤维及视锥、视杆对缺血最敏感 ,外颗粒层次之 ,内颗粒层最能耐受缺血 -再灌注后的损伤。结论　视网膜缺血 -再灌注损伤是个持续性、进行性的损伤过程 ,与功能变化相一致     

Caspase-7与视网膜缺血-再灌注损伤

视网膜缺血-再灌注损伤是细胞凋亡、炎症反应等多种机制参与的病理生理过程。半胱氨酸蛋白酶７（Ｃａｓｐａｓｅ-７）是Ｃａｓｐａｓｅ家族中的凋亡效应分子,近期研究表明,它在调控炎症细胞因子方面也起着重要作用。本文就Ｃａｓｐａｓｅ-７生物学特性及其与细胞凋亡、炎症反应在视网膜缺血-再灌注损伤的分子机制进行综述。     

缺血后适应对视网膜缺血-再灌注损伤的保护作用

背景研究证明,缺血后适应（IPC）对多种组织器官的缺血缺氧损伤均有一定的抵抗作用,但其对视网膜缺血缺氧的作用仍受到关注。目的探讨IPC对大鼠视网膜缺血-再灌注损伤（RIRI）后视网膜结构和功能的保护作用。方法将36只健康雄性Wistar大鼠以随机数字表法分为正常对照组、伪手术组、缺血-再灌注组、IPC组。利用前房灌注生理盐水升高眼压至100mmHg（1mmHg=0．133kPa）维持60min的方法制备RIRI大鼠模型,实施IPC处理鼠亚分为再灌注后即刻、1min、10min组（即IPCⅠ组、IPCⅡ组、IPCⅢ组）,分别于实验后1d、7d行大鼠视网膜电图（ERG）检测,然后用过量麻醉法处死大鼠并制备视网膜切片,行苏木精-伊红染色,对各组大鼠视网膜厚度的变化和视网膜形态进行观察。采用SPSS13．0统计学软件的单因素方差分析对各组大鼠ERG各波振幅恢复率和视网膜厚度值的差异进行比较。结果实验后1d,与正常对照组大鼠比较,伪手术组大鼠视网膜结构接近正常,而缺血-再灌注组及IPCⅠ组、IPCⅡ组、IPCⅢ组大鼠视网膜均出现水肿,可见空泡变性,主要在内丛状层（IPL）及内核层（INL）。缺血-再灌注组及IPCⅠ组、IPCⅡ组、IPCⅢ组大鼠视网膜全层、INL、IPL及视网膜外层厚度值均明显高于正常对照组,差异均有统计学意义（均P〈0．05）。再灌注后7d,缺血-再灌注组大鼠视网膜全层厚度值明显低于正常对照组,差异均有统计学意义（均P〈0．05）,尤以INL、IPL显著。IPCⅠ组、IPCⅡ组、IPCⅢ组大鼠视网膜全层、INL、IPL及视网膜外层厚度值均明显高于缺血-再灌注组,差异均有统计学意义（均P〈0．05）。再灌注后7d,缺血-再灌注组、IPC各组大鼠ERG a波、b波和OPs振幅恢复率明显低于伪手术组和正常对照组大鼠,差异均有统计学意义（均P〈0．05）;而IPCⅠ组、IPCⅡ组、IPCⅢ组大鼠ERG a波、b波和OPs振幅恢复率明显高于缺血-再灌注组,差异均有统计学意义（均P〈0,05）。结论IPC对RIRI具有保护作用,在大鼠模型中,这种保护作用在再灌注后即刻至1min时最强。     

选择性一氧化氮合酶抑制剂对大鼠视网膜缺血再灌注损伤影响的光镜观察

目的观察选择性一氧化氮合酶(nitric oxide synthase,NOS)抑制剂7-硝基-吲唑(7-nitro-indazole,7-NI)、氨基胍(aminoguanidine,AG)对视网膜缺血再灌注损伤影响的组织学变化,探讨NOS亚型神经原型和诱导型及其所产生的一氧化氮(nitric oxide,NO)在视网膜缺血再灌注损伤中的作用.方法56只Sprague Dawley大鼠随机分为正常对照组、阴性对照组、缺血再灌注非处理组、7-NI缺血前处理组、7-NI再灌注前处理组、AG缺血前处理组、AG再灌注前处理组及7-NI+AG处理组计八组.采用升高眼内压的方法诱导视网膜缺血,100分钟后,缓慢降压至正常眼内压,使视网膜再灌注.用7-NI或/和AG处理动物(腹膜腔内注射),光镜观察视网膜组织学变化,图像分析仪测量视网膜内层(IRL)、内网层(IPL)厚度及神经节细胞(RGCs)的数目.结果缺血再灌注非处理鼠IRL和IPL厚度比正常对照鼠明显变薄(P＜0.0001),RGCs层和内核层神经细胞比正常对照鼠明显减少,残留者排列紊乱,空泡形成及核固缩现象多见.7-NI缺血前处理鼠和AG再灌注前处理鼠IRL和IPL分别比缺血再灌注非处理鼠明显增厚(P＜0.001),RGCs层和内核层神经细胞少数丢失,排列稍乱,偶见空泡形成.7-NI+AG处理鼠IRL和IPL分别比7-NI缺血前处理组和AG再灌注前处理鼠都增厚(P＜0.001),RGCs层和内核层神经细胞排列基本整齐,偶见核固缩现象.结论神经原型和诱导型NOS及其产生的NO在视网膜缺血再灌注损伤中起重要作用;选择性NOS抑制剂7-NI和AG能够选择性抑制神经原型和诱导型NOS的活性,从而抑制NO的生成,对视网膜缺血再灌注损伤有保护作用.     

缺血预处理对大鼠视网膜缺血再灌注损伤保护作用

目的：探讨缺血预处理是否对视网膜缺血再灌注损伤有保护作用及其机理,方法：利用前房灌注生理盐水形成高眼压的视网膜缺血再灌注损伤的动物模型,视网膜缺血时间为1h分别于缺血前30min、24h或72h对大鼠一只眼5min短暂缺血即预处理,24h或72h后行视网膜电图（ERG）、电镜、光镜、丙二醛（MDA）及热休克蛋白70（HSP70）检测,或者一侧眼行5min假处理,24h后行1h缺血,24h或72h再行上述检测,所有对侧眼不作处理作对照,结果：与假处理相相比,缺血前24、72h进行预处理后的大鼠视网膜光镜、电镜表现损害明显减轻,ERGb波明显恢复（P＜0．01）,MDA含量降低（P＜0．01）,缺血前30min预处理的视网膜表现严重的损害,ERGb波几安全消失,结论：缺血预处理对视网膜缺血再灌注损伤有保护作用,且有一定时限性。     

Nitric oxide and octreotide in retinal ischemia-reperfusion injury

This experimental study was performed to investigate the role of ischemia–reperfusion injury on retinal nitric oxide activity and to determine whether octreotide, the synthetic analogue of natural somatostatin, modifies the nitric oxide activity during retinal ischemia–reperfusion in a quinea pig model. Three groups of seven pigmented male quinea pigs were formed; Control, Ischemia and the Ischemia/Octreotide groups. 90 minutes of pressure-induced retinal ischemia and 24 h of reperfusion were established in the ischemia and ischemia/octreotide groups. Saline for the ischemia group and 50 g/kg of octreotide for the ischemia/octreotide group were administered intraperitoneally five times with 6-h intervals. At the end of the reperfusion period both eyes of the animals of the three groups were enucleated. One eye of each animal was randomly selected for biochemical assay and the other for histopathological analysis. Retinal nitrate levels were measured and histopathological changes were evaluated in the groups. The mean retinal nitrate levels of the control, ischemia and ischemia/octreotide groups were 157.6±25.2, 106.4±20.1 and 96.4±17.7 mol/l, respectively. Nitrate levels decreased significantly both in the ischemia (p<0.01) and ischemia/octreotide (p<0.01) groups versus control. In the ischemia group, retinal histopathological changes, which were different from the control group, were prominent edema, polymorphonucleated leukocytes infiltration and vacuolated spaces in the inner retina. No significant change was observed in the histopathological specimens of the ischemia/octreotide group. Significant increase in the thickness of the inner plexiform layer of the retina of the ischemia group was observed versus the control and ischemia/octreotide groups (p<0.01 and p<0.01, respectively).The thickness of the inner plexiform layer of the retina of the ischemia/octreotide group did not change versus the control group. It was concluded that nitric oxide activity decreased during retinal ischemia–reperfusion and, although octreotide prevented the histopathological damage, it could not ameliorate the nitric oxide activity of the retina.This study was presented in part at the 23rd Congress of the European Society of Ophthalmology.     

iNOS mRNA在缺血再灌注损伤鼠视网膜中的表达

目的　研究iNOSmNRA在缺血再灌注过程鼠视网膜中的表达 ,探讨NO对视网膜缺血再灌注损伤的作用和意义。方法　动物模型采用升高眼压造成视网膜缺血 ,再恢复正常眼压形成血流再灌注。用Biotin标记iNOScRNA探针进行分子原位杂交。结果　正常组、对照组视网膜没有iNOSmRNA表达 ;再灌注 3、12、2 4h均有iNOSmRNA表达 ,与正常组相比差异有显著性 (P <0 0 1) ,并且再灌注 12hiNOSmRNA表达量最高 ,明显高于其他实验组 (P <0 0 1) ;再灌注48、96h没有发现iNOSmRNA表达。结论　在缺血再灌注过程视网膜有较高的iNOSmRNA表达 ,iNOS催化产生的NO可能参与了视网膜的缺血再灌注损伤。     

培养的牛视网膜毛细血管周细胞产生一氧化氮的影响

目的 观察糖基化终产物(ACE)、脂多糖(LPS)及低氧对培养的牛视网膜毛细血管周细胞(BRPs)内一氧化氮(NO)产生的影响。方法 培养的BRPs分别与不同质量浓度的AGE(8、32、125、500μg/ml)共同培养4d;LPS(10、20、40μg/ml)共同培养24h;低氧(5％O_2、5％CO_2、90％N_2)条件下培养12、24、48h。培养结束后,分别收集培养液,离心取上清液,用硝酸还原酶法检测其NO的浓度。结果 基础状态下,BRPs上清液中NO浓度为(37.25±4.37)μmol/L。低剂量的AGE(8μg/ml)与BRPs共同培养4d后,其上清液中NO的浓度为(68.37±9.92)μmol/L,是基础状态下BRPs上清液中NO浓度的1.8倍,随着AGE质量浓度的增加,BRPs上清液中NO的浓度迅速减少(r=0.835,P<0.01)。LPS及低氧能使BRPs产生NO明显增加(t=2.88,P<0.05及t=4.56,P<0.01),随着LPS质量浓度的增加和低氧时间的延长,BRPs上清液中NO的浓度也迅速上升(r=0.951,P<0.01和r=0.955,P<0.01)。结论 AGE、LPS和低氧能调节BRPs中NO的产生,NO与视网膜微循环血流动力学的调节有关。     

牛磺酸对大鼠视网膜缺血再灌注损伤的影响

目的观察牛磺酸对大鼠视网膜缺血再灌注损伤的影响及其作用机制。方法将90只SD大鼠随机分为3组:对照组、缺血组和保护组,采用前房灌注液体形成14.63kPa高眼压1h的方法,建立缺血再灌注模型。保护组连续3d每天2次腹腔注射100g.L-1的牛磺酸,剂量为100mg.kg-1,于术前30min加注1次。缺血组、对照组给予同等剂量的生理盐水。缺血组和保护组2组缺血60min后,分别再灌注0h、2h、6h、12h、24h、48h、72h,比色法测定视网膜超氧化物歧化配备酶、丙二醛、一氧化氮,光镜测量包埋切片的平均视网膜内层厚度。结果牛磺酸能显著对抗大鼠视网膜缺血再灌注后丙二醛和一氧化氮水平的升高,同时能改善平均视网膜内层厚度的变化,但对超氧化物歧化酶的作用不确定。结论牛磺酸可减轻大鼠视网膜缺血再灌注后的损伤。     

Nogo-A和NgR在大鼠视网膜缺血再灌注损伤中的表达

目的：观察轴突生长抑制因子Nogo-A及其受体NgR在视网膜缺血再灌注（retinal ischemia-reperfusion,RIR）急性损伤中的表达,研究两者在RIR损伤中的作用及相关性。 方法：SD大鼠90只随机分为：正常对照组（n=6）;假手术组(n=42);RIR组（n=42）,假手术组及RIR组分为再灌注后0,6,12,24,48,72,168h亚组,每组6只;采用结扎单侧颈总动脉的方法制备大鼠RIR模型,HE染色观察组织形态学改变,免疫组织化学检测Nogo-A和NgR蛋白的表达。 结果：假手术组各时间点Nogo-A及NgR表达与正常组相比无统计学差异（P>0.05）,实验组大鼠与假手术组相比：Nogo-A的表达在12h开始升高（P<0.05）,48h达到高峰（P<0.01）,72h下降（P<0.05）,168h达到正常基线水平（P>0.05）;NgR的表达在6h即出现上升,持续至48h达到最高峰（P<0.01）,72h下降,168h达到正常基线水平。实验组大鼠Nogo-A与NgR的表达呈正相关（P<0.01）。 结论：Nogo-A和NgR在RIR各时间点均有表达,其表达水平沿时间点呈抛物线形,在再灌注48h时均达到峰值,NgR先于Nogo-A表达,两者协同作用,与RIR损伤后抑制节细胞轴突修复再生有关。     

缺血再灌注大鼠视网膜诱导型一氧化氮合酶与细胞凋亡的研究

目的　探讨缺血再灌注大鼠视网膜诱导型一氧化氮合酶 (induciblenitricoxidesynthase ,iNOS)的表达、视网膜细胞凋亡的发生以及二者之间的关系。 方法　采用前房灌注生理盐水的方法制作实验性视网膜缺血再灌注损伤模型 ,分别于再灌注不同时间点取材 ,行免疫组织化学法染色iNOS阳性细胞 ;TUNEL法检测视网膜凋亡细胞 ;透射电镜观察视网膜超微结构。结果　缺血再灌注早期 ,视网膜主要表现为内层水肿增厚 ,晚期主要表现为视网膜萎缩变薄、神经节细胞减少。缺血再灌注 3h组视网膜神经节细胞层及内核层细胞出现iNOS弱阳性表达 ,12h组阳性表达达高峰 ,与其余各组比较差异有显著意义 (P <0 .0 1) ,2 4、4 8h组iNOS表达渐减少。视网膜组织细胞凋亡见于缺血再灌注 12、2 4及 4 8h组 ,凋亡细胞主要位于内核层 ,且 2 4h组凋亡阳性表达最强 ,与其他各组比较差异有显著意义 (P <0 .0 1)。结论　缺血再灌注大鼠视网膜iNOS表达增加 ,介导视网膜缺血再灌注损伤 ;视网膜细胞的损伤部分以凋亡的形式发生 ,iNOS的表达可能对细胞凋亡的发生起一定的诱导作用。     

Nitric oxide and hydroxyl radical‐induced retinal lipid peroxidation in vitro

Background: Free radicals can cause cellular oxidation and consequent membrane lipid peroxidation (LPO). The significance of these effects on retinal tissue is unclear. This study compared the retinal LPO products, after the incubation with nitric oxide or hydroxyl radical, with those of two commonly studied tissues–kidney and liver. Methods: Retina, liver and kidney were obtained from Sprague‐Dawley rats. These samples were homogenised and incubated with variously 2, 20 or 200 uM iron (II) or sodium nitroprusside (SNP) solution for 60 minutes at 37d? C. The amounts of malondialdehyde (MDA) were measured and the concentrations per unit weight protein provided an index of LPO. Results: After die iron (II) and SNP treatments, MDA levels were significandy different among die three tissues (p < 0.0001) in a dose‐dependent manner (p < 0.0001). The retinal MDA level was significandy higher dian diose of die kidney (p < 0.001) and the liver (p < 0.001). For die iron (II)‐treated homogenates, die differences in MDA were statistically significant in the retina (p = 0.0001) and die liver (p = 0.0004). For die SNP‐treated homogenates, die differences in MDA were all statistically significant in die retina (p = 0.002), die liver (p < 0.0001) and the kidney (p < 0.0001). There was no statistical difference in retinal MDA concentrations between iron (II) and SNP treatments (p = 0.41). Discussion: Retinal tissue is several times more susceptible to free radical‐induced LPO dian liver and kidney tissue. The retinal responses to SNP and iron (II) treatments were comparable, suggesting diat NO*‐ and *OH‐induced LPO damage shared similar mechanism in vitro. Future work is required to identify the protective system in living retina.     

川芎嗪对大鼠缺血再灌注视网膜SOD，MDA和NO水平及细胞凋亡的影响

目的 观察川芎嗪对大鼠视网膜缺血再灌注后视网超氧化物歧化酶（SOD）,丙二醛（MDA）,一氧化氮（NO）水平及细胞凋亡的影响。方法 采用大鼠视网膜压力缺血再灌注模型,分光光度法测定SOD,MDA和NO,琼脂糖凝胶电泳分析DNA断裂。结果 川芎嗪能显著对抗视膜膜缺血再灌注后视网膜SOD水平的下降及MDA和NO水平的升高;同时能阻断缺血再灌注12h后细胞DNSA凋亡样断裂。结论 川芎嗪可能通过抑制自由基的产生和提高抗氧化能力来对抗大鼠视网缺血再灌注诱导的细胞凋亡。     

氨基胍对兔缺血-再灌注损伤后视网膜形态学及一氧化氮和一氧化氮合酶表达的影响

背景临床研究表明,多种眼科疾病如青光眼、视网膜中央动脉阻塞、缺血性视神经病变等均可导致视网膜缺血-再灌注损伤（RIRI）,严重影响视功能,因而对治疗RIRI药物的研究是非常必要的。目的观察并探讨氨基胍对兔RIRI后形态学的变化,并研究其对一氧化氮（NO）及一氧化氮合酶（iNOS）在视网膜中表达的影响及其机制。方法清洁级日本大耳白兔66只,以随机数字表法分为正常组、RIRI模型组和氨基胍治疗组。用前房灌注生理盐水法升高眼压60min后恢复灌注建立兔RIRI模型,氨基胍治疗组每日在模型兔腹腔内注射氨基胍注射液80mg／kg,而RIRI模型组以同样的方法注射等量生理盐水。RIRI模型组和氨基胍治疗组分别于缺血即时、再灌注后6、24、72h各取2只兔活体行眼底彩色照相及荧光素眼底血管造影（FFA）。各组兔分别于再灌注后1、6、24、72h用空气栓塞法处死并摘除眼球以制备视网膜切片,用TUNEL法检测视网膜组织神经细胞的凋亡变化,通过硝酸还原酶法检测NO浓度,比色法检测iNOS活力。结果各时间点眼底彩色照相及FFA检查结果表明,与RIRI模型组比较,氨基胍治疗组视网膜水肿程度减轻,血管闭塞程度及比例降低,荧光素渗漏量及面积减轻并减少。TUNEL染色凋亡细胞计数检测表明,正常组兔视网膜未见TUNEL阳性细胞,而缺血-再灌注1、6、24、72h后RIRI模型组兔视网膜凋亡细胞计数均明显高于氨基胍治疗组（F分组=2762．37,P=0．00;F时间=894．24,P=0．00）。RIRI模型组和氨基胍治疗组各组内相邻时间点之间TUNEL阳性细胞的差异均有统计学意义（RIRI模型组：q=24．47、36．59、-20．37,P〈0．05;氨基胍治疗组：q=20．94、16．79、-6．92,P〈0．05）,再灌注后24h各组TUNEL阳性细胞数量达到高峰。各时间点RIRI模型组兔视网膜NO浓度明显高于氨基胍治疗组（q=3．84、4．01、8．91、3．75,P〈0．05）,各组内相邻时间点之间NO浓度的差异均有统计学意义（RIRI模型组：q=4．77、13．40、-10．29,P〈0．05;氨基胍治疗组：q=4．55、9．05、-5．08,P〈0．05）,各组24h视网膜中NO浓度达峰值。各时间点RIRI组视网膜iNOS活力均明显高于氨基胍治疗组（q=-3．74、-4．94、-6．53、-3．98,P〈0．05）;各组内相邻时间点间iNOS活力的差异均有统计学意义（RIRI模型组：q=8．43、6．71、-6．39,P〈0．05;氨基胍治疗组：q=4．16、5．08、-3．93,P〈0．05）,各组24h iNOS活力达峰值。结论氨基胍对维持RIRI后的视网膜形态和功能起保护作用,其作用机制可能为抑制iNOS的活性,减少NO的生成。