人巨细胞病毒体外感染诱导早幼粒细胞白血病细胞凋亡

本研究探讨人巨细胞病毒（hCMV）体外感染是否可引起早幼粒细胞的增殖、分化抑制、诱导其凋亡，并探讨其作用机制。采用hCMV AD169株体外感染早幼粒细胞白血病细胞HL-60，用PCR检测hCMV DNA，用形态学观察、DNA片段化检测及Annexin V／PI染色流式细胞仪检测等方法分析细胞凋亡情况。结果表明：hCMV AD169株在体外能明显抑制早幼粒细胞白血病细胞HL-60的生长，抑制程度与病毒感染滴度呈剂量依赖关系；PCR检测发现病毒感染组HL-60细胞中有hCMV IEA的表达；形态学观察和DNA片段化检测证实了细胞凋亡的存在；流式细胞仪检测结果显示HL-60细胞凋亡率随培养液中病毒浓度的加大和感染时间的延长而增高，二者呈依赖关系。结论：hCMV AD169株在体外可直接感染HL-60细胞；hCMV AD169株在体外感染HL-60细胞后，可抑制HL-60细胞的分化和增殖；hCMV AD169株体外感染HL-60细胞后可诱导其凋亡，且凋亡率与病毒剂量及作用时间呈依赖性关系。     

细胞色素C对HL-60细胞凋亡作用及其与相关bcl-2、bax基因的关系

为了探讨细胞色素C在体外作用于HL-60细胞时细胞发生的变化及其相关凋亡基因的bcl-2、bax表达变化的机制，用不同浓度的细胞色素C作用于HL-60细胞24小时，然后分别用肌检测细胞色素C对HL-60细胞的抑制率；应用光学显微镜、荧光显微镜观察HL-60细胞形态的变化；用流式细胞术检测细胞凋亡率和细胞周期的变化；用DNA凝胶电泳检测HL-60细胞的凋亡；用RT—PCR检测bcl-2、bax基因的表达的变化。结果表明：在细胞色素C浓度为0—150mg／L时，细胞抑制率随着浓度的增加而增加；当细胞色素C浓度在0—37．5mg／L时，细胞凋亡率逐渐增加，可见典型的凋亡细胞和明显DNA梯形条带，同时，在该浓度范围内bcl-2表达逐渐减少，而bax表达逐渐增加；当细胞色素C浓度大于37．5mg／L时，细胞凋亡率增加不明显，但细胞出现坏死。结论：细胞色素C能诱导HL-60细胞发生凋亡，细胞色素C对细胞周期的作用是将细胞阻滞于G1期，并且细胞凋亡率、bcl-2、bax基因的表达的变化与细胞色素C浓度呈一定的量效依赖关系，细胞色素C诱导HL-60凋亡可能与bax的激活和bcl-2的抑制有关。     

塞来西布对HL-60细胞增殖、凋亡及表达VEGF影响的体外研究

目的研究塞来西布（Celecoxib）对急性髓系细胞白血病（AML）HL-60细胞的增殖抑制、诱导凋亡作用及其机制。方法以不同浓度的Celecoxib作用于体外培养的HL-60细胞,用MTT法检测细胞生长抑制率;用流式细胞仪分析凋亡细胞的百分率和细胞周期变化;QRT—PCR法检测VEGF表达水平。结果Celeeoxib以浓度依赖性方式有效地抑制HL-60细胞增殖,Celecoxib增加G0／G1期HL-60细胞百分率,降低S、G2期HL-60细胞百分率;Celecoxib能以浓度依赖性方式诱导HL-60细胞凋亡。当Celecoxib浓度大于40μmol／L时,随着Celecoxib浓度增高,HL-60细胞VEGF-mRNA的表达逐渐降低,呈浓度依赖性变化。结论Celecoxib对HL-60细胞具有显著的增殖抑制和诱导凋亡作用,增殖抑制可能在于阻断了细胞周期的进行,降低VEGF活性可能是其诱导凋亡重要作用机制之一。     

三氧化二砷对HL-60细胞和人白血病裸鼠移植瘤模型的作用

目的:探讨三氧化二砷(As2O3)对HL-60细胞增殖和凋亡的影响及其对HL-60细胞皮下移植瘤裸鼠的抗瘤作用和药物毒性。方法:不同浓度的As2O3处理HL-60细胞24h,采用MTT比色法检测细胞增殖活性,Hochest33342染色、DNA凝胶电泳、流式细胞仪检测细胞凋亡。建立皮下移植瘤裸鼠模型,随机分入对照组和As2O3组,比较两组的抑瘤作用和裸鼠一般状态的变化。结果:As2O3可有效抑制HL-60细胞增殖并诱导其凋亡,其中在5～50!mol/L浓度范围内表现出明显的剂量依赖性抑制效应。同时可显著抑制HL-60细胞皮下移植瘤的生长,并延长荷瘤裸鼠的生存时间,对裸鼠一般状况和体重无不良影响。结论:As2O3在体外和体内均可显著抑制HL-60细胞的增殖并诱导其凋亡,且无明显毒副作用。     

人参总皂甙对HL-60细胞凋亡相关基因bax、bcl-xl表达的影响

本研究探讨人参总皂甙对凋亡相关基因表达的影响及其诱导HL-60细胞凋亡的作用机制。用人参总皂甙0、100、200、400、800及1600μg／ml作用于HL-60细胞48小时。用荧光显微镜检测HL-60细胞形态的变化，流式细胞仪、DNA凝胶电泳检测HL-60细胞凋亡，RT—PCR检测bax、bcl—xl基因表达的变化。结果表明：人参总皂甙浓度在100—400μg／ml时，HL-60细胞凋亡逐渐增加，可见典型的凋亡细胞形态和明显的DNA梯度。在该浓度范围内，bax表达逐渐增加、而bcl—xl表达逐渐减少；当人参总皂甙浓度大于400μg／ml时，出现细胞坏死．细胞凋亡下降．结论：一定浓度的人参总皂甙能诱导HL-60细胞发生凋亡，且细胞凋亡率与人参总皂甙浓度呈一定的量效依赖关系，bax、bcl—xl基因的表达变化在人参总皂甙诱导HL-60细胞凋亡可能起重要作用。     

青蒿琥酯诱导HL-60细胞凋亡的研究

本研究旨在研究青蒿琥酯体外诱导HL-60细胞凋亡及其过程中Bcl-2与ICAD蛋白表达的变化。采用MTT法测定青蒿琥酯对HL-60细胞的生长抑制作用;用光学显微镜检、琼脂糖凝胶电泳、流式细胞术观察和检测青蒿琥酯诱导HL-60细胞的凋亡;应用蛋白印迹法检测青蒿琥酯诱导HL-60细胞凋亡过程中Bcl-2与ICAD的表达变化情况。结果表明：青蒿琥酯对HL-60细胞有明显的生长抑制作用,并呈时间、剂量依赖性。48小时IC50值为18.33μg/ml,其增殖抑制作用与诱导细胞凋亡有关;Bcl-2和ICAD在HL-60细胞中均有表达,且随药物浓度的增高表达量逐渐降低。结论：青蒿琥酯可诱导HL-60细胞凋亡,Bcl-2和ICAD在青蒿琥酯诱导HL-60细胞凋亡的信号传导途径中可能是重要的调控因子。     

藏红花素对HL-60细胞增殖抑制和诱导凋亡作用及其机制

本研究探讨藏红花素(crocin)对人急性白血病细胞HL-60增殖抑制的影响及其促凋亡机制。测定HL-60细胞在不同浓度crocin作用后的生长曲线,用荧光显微镜观察细胞形态学变化,MTT法检测细胞的增殖情况,流式细胞术检测细胞周期分布,RT-PCR检测bcl-2、bax基因的表达。结果表明,不同浓度crocin作用后HL-60细胞生长明显受抑制,并呈现出剂量时间依赖关系。在0-5mg/ml范围内HL-60细胞凋亡率逐渐升高。当crocin浓度高于5mg/ml时,HL-60细胞凋亡率并没有升高,反而下降,表现为细胞坏死。流式细胞术检测结果显示,细胞周期被阻滞于G0/G1,且在5mg/ml时阻滞作用最明显。RT-PCR结果显示,bcl-2基因表达明显下调,bax基因表达上调。结论:crocin可诱导HL-60细胞凋亡,并对细胞周期起阻滞作用,其作用机制可能与bcl-2基因表达抑制及bax基因表达激活有关。     

c-myc小干扰RNA诱导人髓系白血病细胞系HL-60细胞凋亡

本研究探讨c-myc小干扰RNA对白血病细胞系HL-60诱导凋亡的作用。将体外合成的siRNA转染HL-60细胞,观察形态学变化,应用MTT法绘制细胞生长曲线,用细胞集落培养观察c-mycsiRNA对HL-60细胞增殖的影响;应用DNA片段化分析细胞的凋亡,RT—PCR及Western blot检测c-mycsiRNA作用前后Comyc基因mRNA及蛋白表达水平的变化。结果表明：ComycsiRNA能明显抑制HL-60细胞增殖,半数抑制浓度（IC50）约为150nmol／L;DNA片段化的检出证实C-mycsiRNA能有效诱导HL-60细胞调亡,凋亡率与药物作用时间呈正相关。C-mycsiRNA与HL-60细胞作用后C-myc基因和蛋白的表达水平与作用时间呈负相关。结论：C-mycsiRNA能有效抑制HL-60细胞增殖,降低C-myc基因和蛋白的表达,诱导其凋亡。     

c-myc在大黄素抑制HL-60细胞增殖及诱导凋亡中的作用

目的研究中药大黄素(emodin)对人髓系白血病细胞株HL-60细胞的影响及探讨c—myc基因在其中的作用。方法应用MTT法绘制细胞生长曲线；细胞集落培养观察大黄素对HL-60细胞增殖的影响；DNA倍体分析、线粒体细胞凋亡检测法、末端缺失原位标记(TUNEL)法及DNA凝胶电泳分析细胞凋亡；RT—PCR及Western blot检测大黄素作用前后c—myc基因mRNA及蛋白表达水平的变化。结果大黄素能明显抑制HL-60细胞增殖，半数抑制浓度(IC50)约为20μmol／L；DNA片段化、亚G1峰(凋亡峰)的检出及线粒体细胞凋亡检测等证实大黄素能有效诱导HL-60细胞凋亡，细胞凋亡率与药物作用浓度呈正相关。大黄素与HL-60细胞作用后c—myc基因mRNA及蛋白的表达水平与作用时间呈负相关。结论大黄素能有效抑制HL-60细胞增殖，诱导其凋亡；c—myc基因可能参与了大黄素抑制HL-60细胞增殖和诱导凋亡的过程。     

染料木黄酮诱导HL-60细胞凋亡的作用途径

背景：近年的研究发现，染料木黄酮具有抗氧化、抑制血管生成、调节细胞周期等生物活性。 目的：观察染料木黄酮在体外诱导HL-60细胞凋亡过程中，对HL-60细胞c—Myc，Bcl-2和增殖细胞核抗原表达水平的影响，并分析其作用途径。 设计、时间及地点：对比观察的细胞分子生物学实验，于2006—03／2007—09在广东医学院血液疾病研究室完成。 材料：人早幼粒细胞白血病细胞株HL-60来源于中国典型培养物保藏中心。 方法：HL-60细胞分别以0．1，0．5和1．0mmol／L的染料木黄酮处理12～16h，显微镜下观察并经DNA凝胶电泳检测细胞凋亡情况。分别经碘化丙啶染色和经异硫氰酸荧光素标记的鼠抗人Bcl-2，c-Myc及增殖细胞核抗原单克隆抗体作用后，用流式细胞仪检测凋亡细胞和Bcl-2，c-Myc和增殖细胞核抗原阳性细胞的表达百分率。 主要观察指标：①HL-60凋亡细胞的形态学变化。②HL-60细胞凋亡百分率和c-Myc，Bcl-2及增殖细胞核抗原表达阳性率。 结果：①HL-60细胞经染料木黄酮处理12～16h，显微镜下可见核碎裂和凋亡小体等细胞凋亡形态学改变：DNA凝胶电泳显示典型的凋亡DNA梯形条带。②0．1～1．0mmol／L的染料木黄酮在诱导HL-60细胞凋亡同时，下调Bcl-2，c-Myc和增殖细胞核抗原表达水平。且均呈剂量效应关系。 结论：染料木黄酮可能通过抑制Bcl-2和c-Myc的表达水平从而诱导HL-60细胞凋亡；而增殖细胞核抗原表达下调，则可能是染料木黄酮诱导HL-60细胞凋亡的结果。     

蟾蜍灵对HL—60细胞的生长抑制及凋亡诱导作用

目的 研究中药蟾酥有效成分蟾蜍灵（ｂｕｆａｌｉｎ）对人白血病细胞的作用及其机制。方法 应用ＭＴＴ比色法观察蟾蜍灵对细胞的抑制作用。荧光显微境和透射电镜观察细胞结果色的改变,ＤＮＡ交电泳１、原位缺口标记法和流式细胞术等分析细胞凋亡。结果 ①蟾蜍灵明显抑制ＨＬ－６０细胞的生长,半数抑制浓度（ＩＣ５０）约为０．０２５μｍｏｌ／Ｌ;②典型的细胞形态学改变、ＤＮＡ片段化和亚Ｇ１峰的检出等证实蟾蜍灵能诱导白血     

rhGM—CSF对VP—16诱导的HL—60细胞凋亡的影响

为探讨ｒｈＧＭ－ＣＳＦ对ＶＰ－１６诱导的ＨＬ－６０细胞凋亡的影响,我们观察了预先应用ｒｈＧＭ－ＣＳＦ孵育的ＨＬ－６０细胞由ＶＰ－１６诱导的凋亡的过程及凋亡相关基因ｂｃｌ－２和ｆａｓ的表达变化,应用光学显微镜和电子显微镜观察细胞形 和超微结构变化,凝胶电泳检测ＤＮＡ的碎片,流式细胞术检测细胞凋亡率、ｂｃｌ－２和ｆａｓ的表达,实验结果显示,ｒｈＧＭ－ＣＳＦ可抑制ＶＰ－１６诱导的ＨＬ－６０细胞的凋亡,它加强了ＶＰ－１６对ｂｃｌ－２表达的下调作用,抑制了ＶＰ－１６对ｆａｓ表达的上调作用,由此推测,ｒｈＧＭ－ＣＳＦ可能是通过下调ｆａｓ表达降低ＨＬ－６０细胞对ＶＰ－１６的敏感性。     

阿霉素增强抗人DR5单克隆抗体mDRA-6诱导HL-60细胞凋亡的作用

目的观察抗死亡受体5（DR5）单克隆抗体（单抗）mDRA-6与阿霉素（Adr）对HL-60细胞的协同杀伤作用。方法用DR5蛋白免疫BALB／c小鼠，融合筛选抗DR5杂交瘤细胞，制备抗人DR5单抗mDRA-6；流式细胞术测定Adr对HL-60细胞表面DR5表达的影响；荧光显微镜下观察mDRA-6与Adr协同作用下HL-60细胞的形态变化；MTT法测定1μg／ml Adr与不同浓度的mDRA-6对HL-60细胞存活的影响；琼脂糖凝胶电泳检测mDRA-6与Adr联合对HL-60细胞DNA片断化的影响。结果Adr诱导HL-60细胞表面DR5表达，mDRA-6作用后HL-60细胞出现染色质浓缩、断裂，细胞出芽，凋亡小体形成，mDRA-6与Adr联用细胞形态变化更明显；mDRA-6与Adr对HL-60细胞具有明显的协同杀伤作用，20ng／ml的mDRA-6作用HL-60细胞10h，细胞死亡率为9．32％，1μg／mlAdr作用HL-60细胞10h，细胞死亡率为17.47％，20ng／ml mDRA-6联合1μg／mlAdr，可使HL-60细胞死亡率增至65．06％；20μg／ml mDRA-6与1μg／mlAdr联合作用于HL-60细胞3h，DNA琼脂糖凝胶电泳显示明显“梯形”条带。结论抗DR5单抗mDRA-6与Adr对HL-60细胞具有强大的协同杀伤作用。     

去铁胺激活半胱天冬酶3诱导HL-60凋亡

为了研究铁螯合剂-去铁胺（deferoxamine,DFO）诱导人白血病细胞株HL-60凋亡时半胱天冬酶-3（caspase-3）活性的变化并探讨DFO诱导凋亡的可能机制.HL-60细胞经HE染色,在光学显微镜下观察其形态结构变化,用TUNEL法和流式细胞术（FCM）检测细胞凋亡,免疫组织化学法检测caspase-3活性,原位杂交法检测凋亡基因bax的转录水平.结果表明,HL-60经去铁胺处理后,典型的细胞形态改变、DNA末端原位标记和FCM检测均证实DFO可诱导细胞凋亡,凋亡率与药物剂量和作用时间呈依赖性.在DFO诱导HL-60凋亡过程中,caspase-3活性明显升高,凋亡基因bax的转录水平均较对照组增高（P＜0.05）.caspase广谱抑制剂Z-AVD可明显降低DFO诱导的细胞凋亡率.结论：DFO通过激活caspase-3和增强bax活性而诱导HL-60凋亡.     

血管内皮生长因子反义寡核苷酸对白血病细胞系HL-60细胞作用的研究

本研究探讨VEGF ASODN抑制白血病细胞内源性VEGF mRNA的表达作用及其与白血病细胞凋亡的关系。用阳离子聚合物介导硫代修饰VEGF ODN转染体外培养白血病细胞系HL-60细胞后,采用MTT法检测细胞增殖抑制率,RT-PCR检测VEGF mRNA表达,以细胞形态学,凝胶电泳,流式细胞术观察细胞凋亡。结果显示：反义组与错义组、空白对照组相比,在细胞增殖抑制率和VEGF mRNA的表达水平方面均具有显著性差异（p〈0.05）;错义组与空白对照组相比无统计学差异（p〉0.05）。反义组可见细胞皱缩,颗粒增多,核固缩并出现细胞碎片,而错义组、空白对照组细胞轮廓清楚,胞体透亮,生长旺盛;反义组有凋亡梯形带,错义组和空白对照组仅见1条DNA条带;反义组细胞凋亡率达19.46%,与错义组、空白对照组相比具有显著性差异（p〈0.05）;错义组与空白对照组相比,无统计学差异（p〉0.05）。VEGF ASODN联合VP16的细胞凋亡率与等同条件单用VP16组相比有统计学差异（p〈0.05）;且凋亡率具有时间和剂量依赖关系。结论：VEGF ASODN能抑制白血病细胞内源性VEGF mRNA的表达,诱导白血病细胞的凋亡,抑制增殖,且增强VP16对白血病细胞诱导凋亡作用,两者联合效应具有相加作用。     

端粒酶RNA的反义寡核苷酸诱导白血病细胞凋亡的研究

目的研究端粒酶RNA的反义寡核苷酸(As-ODN)抗白血病作用及其机制。方法采用脂质体包裹As-ODN转染入HL-60细胞;用端粒重复序列扩增法(TRAP)-酶联免疫吸附试验(ELISA）检测HL-60细胞的端粒酶活性变化;用细胞形态学观察、DNA琼脂糖凝胶电泳和流式细胞术检测凋亡细胞。结果0.1～2.0?μmol/LAs-ODN转染入HL-60细胞,培养1～6?d,HL-60细胞端粒酶活性（A值）由1.043±0.045降至0.063±0.011,且有剂量依赖性和时间依赖性。As-ODN转染的HL-60细胞培养后细胞增殖速度减慢,发生了细胞凋亡。而错义寡核苷酸(Ms-ODN)则无此效应。结论As-ODN能特异性抑制HL-60细胞的端粒酶活性,诱导细胞凋亡。     

一氧化氮供体诱导HL-60细胞凋亡过程中活性氧自由基和抗氧化能力的变化

为了研究外源性一氧化氮（NO）供体硝普钠（SNP）诱导HL-60细胞凋亡过程中活性氧自由基和抗氧化能力的变化，将HL-60细胞与SNP在体外培养，用MTT法观察NO对细胞的抑制作用；用透射电子显微镜和光学显微镜观察细胞结构的变化；用DNA凝胶电泳、细胞DNA含量、Annexin-V／PI法等分析细胞凋亡；用双氢罗丹明123（DHR）标记、流式细胞仪检测细胞内活性氧（ROS），并同时测定细胞内谷胱甘肽（GSH）和3种抗氧化酶的活性。结果表明：SNP能抑制HL-60细胞生长，典型的细胞形态改变、DNA片段化、亚二倍体峰比例增加、DNA末端标记和Annexin-V^＋／PI^-表达增加等证实NO能诱导白血病细胞凋亡，且两者之间有明显的量效和时效关系。在此过程中，细胞内ROS水平增加，细胞内谷胱甘肽和过氧化氢酶（CAT）、谷胱甘肽S转移酶（GST）、谷胱甘肽过氧化物酶（GPX）活性降低。ROS含量和CAT、GST、GPX活性与SNP之间也有明显的量效关系。结论：细胞内活性氧自由基增加和抗氧化能力下降在外源性一氧化氮供体诱导HL-60细胞凋亡中发挥了重要作用。     

硼替佐米单用或联合三尖杉酯碱体外诱导HL-60细胞凋亡实验研究

本研究探讨硼替佐米（bortezomib,Bor）单用或联合三尖杉酯碱（harringtonine,HT）对HL-60细胞凋亡的影响。以不同浓度Bor、HT处理HL-60细胞12-48小时,采用MTT比色法检测细胞增殖活性,以DNA凝胶电泳、荧光显微镜检、流式细胞术检测细胞凋亡。结果表明：10-50nmol/LBor可有效抑制HL-60细胞增殖,并诱导其凋亡。其中10nmol/L剂量处理12小时即有细胞凋亡发生,延长作用时间或增加药物剂量可使细胞凋亡率明显增加。30nmol/LHT与10nmol/LBor联合应用时,可见HL-60细胞凋亡率比两种药物单独使用时显著增加。结论：Bor对HL-60细胞具有时间和剂量依赖性的细胞凋亡诱导效应,与HT联合应用有明显的协同作用。