两X-性连遗传鱼鳞病家系类固醇硫酸酯酶基因研究

目的 研究X性连锁遗传鱼鳞病(XLI)家系基因突变,探讨基因突变与临床表现的关系,为进一步开展基因诊断和基因治疗奠定基础。方法 抽取不同地区两个家系中患者、正常人及与这些家系无关的50例正常人的外周血,提取外周血基因组DNA。应用PCR方法扩增外周血基因组DNA类固醇硫酸酯酶(STS)基因的第1、2和10外显子。结果 两个家系中的患者STS基因均部分缺失,既仅有第1外显子,而无其他外显子。家系中正常人和与该家系无关的50例正常人未发现这种缺失。结论 该两XLI家系存在STS基因部分缺失,该缺失引发出XLI特有的皮肤病变。     

迟发型先天性厚甲家系角蛋白17基因新突变位点的检测

目的探讨一迟发型先天性厚甲家系角蛋白17基因突变和临床表现的关系,为先天性厚甲的基因诊断和基因治疗奠定基础。方法用巢式PCR扩增了迟发型先天性厚甲家系中9例患者、1名正常人及与该家系无关的50名正常人外周血基因组：DNA角蛋白17基因第1外显子热点突变区,对PCR产物进行DNA序列分析。结果迟发型先天性厚甲家患者的角蛋白17基因第109位密码子由AAC突变为GAC,结果导致天冬酰胺由天冬氨酸替代(即N109D)。而该家系中的正常人及与该家系无关的50名正常人的DNA测序结果均未发现此突变。结论该家系存在角蛋白17N109D突变,为一新的错义突变。角蛋白17 1A区后半部的突变可表现为迟发型先天性厚甲Ⅱ型。     

单纯型轴后多趾一家系的基因突变筛查

目的：探讨一个中国汉族单纯型轴后多趾家系患者是否存在GLI3和ZNF141基因突变。方法收集家系中2例患者的临床资料，并采集2例患者及4例家系正常成员的外周血，提取基因组DNA，采用PCR扩增GLI3和ZNF141基因的全部外显子及外显子与内含子交界区域，用直接双向测序、BLAST比对进行突变分析。结果此家系中2例患者临床诊断为单纯型轴后多指（趾） A型；在GLI3和ZNF141基因中发现了6个变异序列，所有序列变异均存在于患者及其正常亲属中，与疾病表型无共分离现象。结论 GLI3和ZNF141基因外显子突变与该家系单纯型轴后多趾的发病无关。     

遗传性对称性色素异常症一家系基因突变分析

目的 研究发现一家系遗传性对称性色素异常症的致病基因突变情况.方法 收集临床患者家系成员血样并抽提基因组DNA,通过PCR及突变检测致病基因的方法,分析基因的突变位点.结果 该家系患者DSRAD基因12号外显子发生基因突变,表现为第2887位G缺失.结论 该遗传性对称性色素异常症家系患者中存在致病基因突变,表现为碱基缺失.     

杂合子导致CADASIL病患者家系NOTCH3基因突变

目的 研究一伴皮质下梗死和白质脑病的常染色体显性遗传性脑动脉病（CADASIL）患者家系NOTCH3基因突变,探讨突变分析方法在遗传性CADASIL疾病筛查和诊断中的应用。方法 收集该家系8位成员（5例患者,3例正常个体）外周血标本,提取基因组DNA。采用PCR扩增NOTCH3基因突变热点区域,DNA直接测序检测扩增产物,寻找该家系致病的突变基因。结果 NOTCH3基因第4外显子内存在一杂合的错义突变（c.421C＞T）,导致141位精氨酸（Arg）被半胱氨酸（Cys）替代。该家系中患者均携带该突变基因,而家系中正常个体未发现此突变基因。结论 杂合的错义突变（c.421C＞T）与该CADASIL家系中患者表型共分离,为引起该家系的致病基因突变。     

Reis-Bücklers一家系的TGFBI基因突变筛查

目的 对临床诊断为RBCD角膜营养不良的一家系进行TGFBI基因突变筛查,确定患者的病因.方法 采集家系中所有人的血样,提取基因组DNA,然后采用聚合酶链反应及直接测序的方法 ,TGFBI基因的所有外显子进行突变检测,以家系中正常人及100例无亲缘关系的正常志愿者DNA样本作为对照.结果 发现患者的TGFBI基因4号外显子的第371位碱基G→T,导致该基因编码的蛋白质的第124位氨基酸Arg变为Leu.家系中正常人及100名正常对照样本均未发生该突变.结论 错义突变R 124 L是导致患者该临床表型的主要病因.     

常染色体显性遗传帕金森病家系1例基因缺失序列分析

目的:分析常染色体显性遗传帕金森病家系的基因缺失.方法:根据Parkin基因外显子和内含子DNA序列合成14对引物,以人基因组DNA为模板,巢式PCR扩增,扩增产物纯化后直接测序.通过与正常人相应的DNA序列比较,检测1例常染色体显性遗传帕金森病家系基因缺失位点.结果:该家系检测到染色体6q25.2-q27Parkin基因外显子3中110 bp的缺失,第4和第5外显子检测到部分碱基的变异.结论:Parkin基因外显子3缺失的检出对常染色体显性遗传帕金森病的早期诊断和基因治疗具有指导意义.     

常染色体显性遗传性听神经病家系全外显子组测序分析

目的：在多年围绕1个常染色体显性遗传性非综合征型听神经病家系开展系统分子遗传学研究的基础上,进一步探讨该家系耳聋的致病机制,以期发现新的听神经病致病基因和突变位点。方法：对3例耳聋患者和1例配偶进行全外显子组测序,初步筛选出与家系耳聋相关的候选致病基因。采用PCR-Sanger测序法,检测上述候选基因变异是否与家系表型共分离。最后,以50例与研究家系无关的听力正常人为对照,检测候选致病突变在正常群体中的突变频率和SNPs遗传多态性。结果：全外显子测序分析得到41个候选致病基因突变;用PCR-Sanger测序法对核心家系的9名成员和2名家系外听力正常人进行验证,仅发现1个基因突变（ALOX15B 7942797 C>T）与家系耳聋表型共分离。选取50例家系外正常对照的DNA样本对ALOX15B基因进行PCR扩增和序列分析,结果显示有2例听力正常人也检测到该基因的同一变异,提示该变异为SNPs遗传多态性。结论：对核心家系成员的全外显子组测序分析和Sanger测序法验证未发现有意义的突变位点,排除了该家系耳聋由基因编码区突变及Indels致病的可能性。     

家族性阿尔茨海默病早老素-1基因突变位点的检测

目的：探讨早老素－1基因突变在家族性阿尔茨海默病（FAD）发病中的作用。方法：应用聚合酶链反应－单链构象多态性（PCR－SSCP）、变性高效液相（DHPLC）及DNA直接测序技术检测技术,对130人的阿尔茨海默病（AD）家系和50例正常对照组的早老素－1（PS－1）基因第4、5外显子进行了检测。结果：在早老素基因的第5外显子上发现除5例AD患者外,还有4例家系内正常人（Ⅳ－30、37、41、43）PCR－SSCP出现泳动异常。DHPLC检测进一步验证以上9例均表现双峰,提示可能有突变存在。DNA序列分析表明,这9例的早老素－1基因第5外显子的136号密码子发生了GCT→GGT错义突变,使氨基酸由丙氨酸变为甘氨酸（Ala136Gly);第4外显子未发现突变。家系内其他人及正常对照组的PS1基因第4、5外显子经以上检测均未发现异常。结论：PS1基因第5外显子的突变点可能为中国FAD患者早老素基因突变位点之一。     

两个家系中X连锁视网膜色素变性的RP2 基因无义突变

目的 检测引起2个家系产生X连锁视网膜色素变性的RP2基因突变。方法 根据RP2基因外显子的内含子DNA序列合成8对引物，以人基因组DNA为模板，PCR扩增出包含RP2基因所有外显子的8个片段。扩增产物化后直接测序。通过比较病人和正常人相应的DNA序列，检测基因突变位点。结果 在2个家系中首次检测到RP2基因的同一个无义突变38C→T。突变位于RP2基因的第2外显子。它使该基因编码精氨酸的遗传密码CGA变为终止密码TGA，引起发病。结论 该突变的检出有助于RP2蛋白的功能分析和X连锁视网膜色素变性的基因诊断。     

STS gene in a pedigree with X-linked ichthyosis

To investigate the gene mutation in a pedigree with X-linked iehthyosis （XLI） and to explore the relationship between the mutation and its clinical manifestations, genomic DNA of affected members, the normal member of the pedigree and 50 unrelated normal members was extracted with a whole blood genomie DNA extraction kit and the DNA was used as a template for the polymerase chain reaction （PCR） mediated amplification of exon 1 and exon 10 of the STS gene. hHb6 （human hair basic keratin） gene was used as the internal control. Our results showed that the STS gene was deleted in affected members in the pedigree with X-linked ichthyosis. The normal member of the pedigree and 50 unrelated normal members had no such deletion. The proband and his mother had products in the internal control after PCR amplification. The blank control had no product. It is concluded that deletion of the STS gene existed in this pedigree with X-linked iehthyosis, and it is responsible for the unique skin lesions of X-linked ichthyosis.     

多重荧光定量PCR方法检测X-连锁鱼鳞病家系女性携带者

目的 分析一个汉族x-连锁鱼鳞病家系中类固醇硫酸酯酶(STS)基因的致病突变,明确家系中3名女性可能携带者身份,并比较不同方法在STS基因缺失突变检测中的应用.方法 采用普通PCR方法,对家系巾男性先证者进行STS基因10个外显子的扩增,明确是否存在缺失.采用多重荧光定量聚合酶链反应(QF-Pen)方法对x-连锁鱼鳞病家系部分女性成员进行STS基因定量分析.并应用荧光原位杂交(FISH)技术进行验证.结果 普通PCR方法检测到先证者STS基因第1～10号外显子缺失;多重QF-PCR方法榆测到先证者母亲为STS基因缺失突变携带者,先证者妹妹及表妹均不存在该缺失.FISH检测结果与QF-PCR结果相同.结论 对于STS基因完全缺失型患者及女性携带者,多重QF-PCR和FISH两种方法均能有效检测,但多重QF-PCR方法对STS基因缺失的检测操作方便、自动化程度高、检测通量高.     

人原发性肝癌中p16基因缺失突变研究

目的　探讨 p16基因缺失和突变在人原发性肝癌分子发病机理中所起的作用。方法　采用多重PCR和 PCR- SSCP对 31例人原发性肝癌、31例癌旁肝硬化组织以及 8例正常人白细胞中 p16基因第一 ,二外显子和部分第一 ,二内含子缺失和突变进行了研究。结果　在 31例人原发性肝癌中发现 4例 p16基因第一外显子和部分第一内含子区域缺失 ,缺失率为 13% ,第二外显子和部分第二内含子区域未见缺失 ;SSCP分析发现在肝癌和癌旁肝硬化组织中 p16基因第一内含子及其下游第二外显子 18bp区域存在三种单链构象 ,第一外显子、大部分第二外显子以及部分第二内含子未见异常的 SSCP区带 ,而在正常人白细胞中有两种单链构象。结论　在人原发性肝癌中 p16基因缺失频率较低 ,罕见突变     

Two novel STK11 mutations in three Chinese families with Peutz-Jeghers syndrome

Background Peutz-Jeghers syndrome (PJS) is an autosomal dominantly inherited disease. STK11/LKB1 gene germline mutations have been identified as responsible for PJS. In our study, we investigated the molecular basis of PJS and evaluated correlation between the STK11 mutations and the Chinese population.Methods We collected three pedigrees of PJS and screened the 9 exons and their flanking intronic sequences of STK11/LKB1 gene in the probands and normal individuals in the families using polymerase chain reaction (PCR) and direct sequencing.Results Sequencing of the STK11 gene in the probands of 3 families revealed two novel mutations (c180C→G and c998-1002delGCAGC) in exon 1 and exon 8, respectively. The mutation of c180C→G resulted in a premature termination codon. The other mutation, a deletion of five nucleotides (998-1002delGCAGC) in exon 8, predicted to generate a translational frameshift and a termination at codon 1070.Conclusions The growing number of mutations in PJS pedigrees suggests the molecular basis of PJS. STK11 gene mutation can be detected in most patients with PJS.     

Study of deletion and mutation of p16 gene in primary hepatocellular carcinoma]

OBJECTIVE: To investigate the role the deletion and mutation of p16 gene plays in the pathogenesis of human primary hepatocarcinoma. METHODS: Thirty-one cases of human hepatocarcinoma, 31 cases of adjacent noncancerous liver cirrhosis and the leukocytes of 8 normal human subjects were analyzed for deletion and mutation in p16 gene exons 1, 2 and introns 1, 2 with comparative multiple PCR and PCR-SSCP. RESULTS: Deletion of p16 gene exon 1 and partial intron 1 was found in 4 of 31 cases (13/%). No deletion of exon 2 or intron 2 was found. Three patterns of p16 gene intron 1 and 18 bp-flanking sequence in exon 2 at SSCP analysis were observed in hepatocellular carcinoma and corresponding adjacent noncancerous cirrhosis, and two patterns were found in human normal leukocyte DNA. No aberrant single strand at SSCP in p16 gene exon 1 or most part of exon 2 or intron 2 was detected. CONCLUSION: Low frequency of deletion and rare mutation of p16 suppressor gene occurred in hepatocellular carcinoma.     

Biochemical activity and gene analysis of inherited protein C and antithrombin deficiency in two Chinese pedigrees

Background We identified the gene mutations in two Chinese pedigree of type Ⅰ hereditary protein C deficiency and type Ⅰ hereditary antithrombin deficiency.Methods The plasma level of protein C activity (PC: A), protein C antigen ( PC: Ag) , protein S activity, antithrombin activity (AT: A) and antithrombin antigen (AT: Ag) of propositi and two family members were detected using ELISA and chromogenic assay, respectively. All exons and intron-exon boundaries of protein C gene and antithrombin gene were analyzed by direct sequencing of the corresponding amplified PCR products in DNA from the propositus.Results The plasma PC: A and PC: Ag of propositus 1 was 26% and 1.43 mg/dl, respectively. The PC: Ag and PC: A of his father were normal. The decreased PC: A level was seen in his mother and 4 of his maternal pedigree. PS: A and AT: A were all normal in pedigree 1 members. A C5498T heterozygous mutation in exon 3 of protein C gene, resulting in the substitution of Arg for Trp at the 15th amino acid, was identified in propositus 1 and 8 of his relatives. The plasma AT: A and AT: Ag of propositus 2 was 48.6% and 10.4 mg/dl, respectively. The reduced AT: A and AT: Ag levels were found in his father and 5 of paternal pedigree. PC: A, PC: Ag and PS: A were all in normal range. A heterozygous 13387-9G deletion in exon 6 of antithrombin gene was identified in propositus 2. This mutation introduced a frameshift and a premature stop at codon 426 and existed in 6 members of pedigree 2.Conclusion The C5498T heterozygous mutation in exon 3 of protein C gene, first reported in China,leads to type Ⅰ hereditary protein C deficiency. The 13387-9G deletion, a novel mutation, can cause antithrombin deficiency and thrombosis.     

中国人Peutz-Jeghers综合征STK11基因突变的研究

目的 对中国人Ｐｅｕｔｚ－Ｊｅｇｈｅｒｓ（ＰＪ）综合征患者ＳＴＫ１１基因进行突变分析,确定其特征,为基因诊断奠定基础。方法 应用聚合酶链反应－单链构象多肽分析（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）和ＤＮＡ测序的方法,对８个中国人ＰＪＳ家系ＳＴＫ１１基因进行研究。结果 在两个家系中分别新发现一个终止突变和剪接位点突变,推测最终导致产生截短型蛋白。结论 ＳＴＫ１１基因在中国人ＰＪＳ患者中可能以点突变为主,突变发生率较国     

中国人早发及多发糖尿病家系中筛查胰岛素启动因子1基因突变

目的 观察中国人早发及多发糖尿病家系胰岛素启动因子1(IPFl)基因的变异情况。方法 采用PCR-SSCP方法筛查154例早发及多发糖尿病家系先证者IPFl基因突变。采用PCR-RFLP方法检测突变家系其他成员及两组正常对照的该突变位点。结果 在多发糖尿病家系先证者中发现1例P239Q错义突变，该家系另有6人携带此突变，且口服葡萄糖耐量试验均在正常范围。P239Q突变未与糖尿病表型共分离。非糖尿病突变携带者餐后2h血糖水平明显高于非突变携带者(P=0．0249)。在“超正常”对照中亦检出1例P239Q突变，中国人糖尿病家系组和正常对照组突变频率分别为0．6％及0．5％。此频率与斯堪的纳维亚人群相似。结论 尽管IPF1基因突变不是中国人早发及多发糖尿病的主要致病基因，但IPF1基因P239Q突变可致轻度糖代谢紊乱，在其他遗传或环境因素的共同作用下参与糖尿病的发生。