2011-2020年上海地区犬只狂犬病本底状况回顾性分析

目的 为掌握上海市犬只狂犬病免疫状况、抗体水平和流行情况,评估犬只狂犬病流行风险。方法 利用统计学方法对上海市2011-2020年犬只狂犬病血清学和病原学检测数据进行回顾性分析。结果 上海市注册犬只狂犬病免疫抗体平均合格率为83.8%(95%CI:83.3%~84.3%),流浪犬抗体平均合格率为17.7%(95%CI:15.8%~19.6%),一犬伤多人事件(伤人数≥2)犬只狂犬病病毒阳性率高达94.1%;从时间、空间和群间分布情况看,各年份、各区、各监测场点犬只狂犬病抗体水平存在一定的差异性;流浪犬与城镇犬、示范村农村犬、养殖场犬等不同类型犬只之间的抗体水平差异有统计学意义(P<0.01)。结论 上海市注册犬只狂犬病免疫措施扎实,效果确实;上海属于狂犬病的自然疫源地,流浪犬未构筑有效免疫屏障,不足以阻断病毒在群内的传播,是当前上海狂犬病流行的最大风险点,建议进一步强化流浪犬的免疫研究和收容管理。     

遵义地区犬狂犬病毒血清抗体流行病学调查与大学生对该病的认知情况分析

目的 调查遵义地区犬RV血清抗体流行病学情况和大学生对狂犬病的认知情况。方法 采用RV生物素双抗原夹心ELISA试剂盒对遵义地区422份犬血清样品进行RV血清抗体检测,采用网络问卷对遵义地区大学生开展狂犬病认知情况调查。结果 共采集422份犬血清样本,其中宠物犬297例,192例免疫过狂犬疫苗,65例未免疫,40例免疫信息不详,125例流浪犬狂犬疫苗免疫信息不详。422份犬血清样品RV抗体总阳性率为43.36%(183/422),其中,宠物犬、流浪犬、雄性犬、雌性犬的RV抗体阳性率分别为56.57%(168/297)、12%(15/125)、41.63%(102/245)、45.76%(81/177),犬性别与RV抗体阳性率差异无统计学意义(χ²=0.714,P>0.05),宠物犬与流浪犬RV的抗体阳性差异存在统计学意义(χ²=71.143,P<0.05)。问卷调查显示大学生群体对狂犬病具有较高的认知水平。结论 遵义地区流浪犬RV抗体阳性率远低于宠物犬,应加强流浪犬管理,遵义地区大学生群体对狂犬病具有较高的认知水平,这对于本地区狂犬病的预防与控制具有积极意义。     

狂犬病基因工程灭活疫苗（HEP-Flury-dG株）的免疫效力

目的：为了检测狂犬病基因工程灭活疫苗（HEP-Flury-dG株）注射犬只后的免疫效力。方法：在广州市增城区某村进行狂犬病基因工程灭活疫苗（HEP-Flury-dG株）环境释放试验,登记该村所有家养犬的信息并存档,同时进行疫苗免疫。随机采集免疫前血清样品66份,免疫后21d仍获得血清样品66份,使用ELISA方法检测样品的抗体水平。结果：免疫前该村犬只抗体阳转率为26%,免疫后21d抗体阳转率达到83%。经统计分析表明免疫前后抗体水平差异具有统计学意义;性别不是影响抗体水平变化的因素,但年龄可影响抗体水平变化,成犬抗体水平的增加明显高于幼犬。结论：狂犬病基因工程灭活疫苗（HEP-Flury-dG株）免疫犬只后可提供足够的保护力,有效预防狂犬病的传播;为农村地区家养犬建立免疫档案,是预防农村地区狂犬病发生的一种可行、有效的方法。     

Vero细胞口服狂犬病疫苗的研究

本试验采用ＣＴＮ－１株经Ｖｅｒｏ细胞传１５代，病毒滴度均在７．０～８．０ｌｏｇＬＤ５０／ｍｌ之间。给８只犬分别口服８．１ｌｏｇＬＤ５０的疫苗３０天的中和抗体几何平均效价为１：１１０，中和抗体的平均国际单位为２．５９ＩＵ／ｍｌ，阳转率为１００％；给４只犬分别口服７．４３ｌｏｇＬＤ５０的疫苗，阳转率为５０％，中和抗体的平均国际单位为２．４８ＩＵ／ｍｌ。选用３５－６０日龄的乳犬１６只口服１０个剂量的疫苗，并在口服后５、１０、２０天、３个月各杀３只犬取脑及唾液腺分别在ＢＨＫ２１细胞上盲传２代，同时在昆明种小白鼠乳鼠脑内盲传２代，进行病毒分离，均为阴性，余下犬观察１２个月均正常。总之该口服狂犬病疫苗对犬具有较好的安全性及口服免疫原性。     

欧洲型PRRSV、PCV2二联重组痘苗病毒疫苗猪体免疫实验研究

目的评价实验室构建的欧洲型PRRSV和PCV2二联重组痘苗病毒猪体免疫效果。方法分别用重组痘苗病毒rVTT-PCV2-ORF2-EU-ORF3-ORF5和rVTT-EU-ORF3-ORF5进行猪体免疫试验,每周采血,分离血清,采用ELISA检测病毒特异性抗体、中和抗体检测及细胞因子水平,评价免疫效果。结果 rVTT-PCV2-ORF2-EU-ORF3-ORF免疫组35d时,猪血清欧洲型PRRSV GP3和GP5及PCV2ORF2特异性抗体,显著高于野毒组（t=6.61,t=9.21,t=10.34,P〈0.05）;猪血清中和抗体35d时,各免疫组均可产生较高的免疫水平,差异均无统计学意义（t=0.48,P〉0.05）;重组痘苗病毒疫苗rVV-ORF2-EU-ORF3-ORF5免疫可诱导IL-4和IFN-γ产生,增强猪体细胞免疫应答水平。结论欧洲型PRRSV、PCV2二联重组痘苗病毒疫苗能诱导猪体产生体液和细胞免疫应答,为欧洲型PRRSV、PCV2的新型疫苗研究奠定了实验基础。     

广州市国产冻干无佐剂狂犬病疫苗使用人群狂犬病毒抗体检测情况

目的了锯注射国产冻干无佐剂狂犬病疫苗使用后的免疫效果并与非冻干狂犬病疫苗比较。方法一部分冻干国产无佐剂狂犬病疫苗受免者与非冻干疫苗受免者一样在5针全程免疫后第14天抽血并采用免疫酶联吸附法检查狂犬病毒抗体阳转情况，另一部分则在注射完第4针后即进行检查，之后比较检查结果。结果使用国产冻干无佐剂狂犬病疫苗受免者抗体阳转率为96．13％（794／826），而使用非冻干狂犬病疫苗受免者狂犬病毒抗体阳转率为89．84％（115／128），经X^2检验，两者差异有非常显著性（P〈0．01）。此外使用冻干狂犬病疫苗受免者在5针全程免疫后过15天进行检查其狂犬病毒抗体阳转率为98．90％（179／181），与在注射完第4针后即进行检查的抗体阳转率79．14％（645／815）相比较，经X^2检验其差异也有显著性（P〈0．05）。结论本文资料说明国产冻干无佐剂狂犬病疫苗较之非冻干疫苗更有效，其5针全程免疫后过15天检查狂犬病毒抗体阳转率可达98％～100％，而且符合卫生部的要求不含AL（OH）辅助剂。     

5119例狂犬病疫苗全程免疫接种者血清抗体水平检测结果分析

目的了解狂犬病疫苗全程免疫后抗体产生情况及其影响因素,为狂犬病疫苗预防接种工作提供依据。方法采用ELISA法对5119例于我院全程接种狂犬病疫苗者进行抗狂犬病病毒抗体检测并分析结果。结果5119份血清标本中抗体阳性5035份,总阳性率98．36％。其中男性及女性阳性率分别为97．91％、98．75％;P〈0．05。0—19岁、20～59岁及〉60岁者抗体阳性率分别为99．3％、98、4％、96．3％,两两比较,P均〈0．05;即随着年龄增大,接种疫苗后抗体阳性率呈下降趋势。结论性别对狂犬疫苗接种后抗体的产生有影响;随着年龄的增长,注射疫苗后抗体阳性率逐渐下降。对接种后抗体阴性者应再次进行全程免疫。     

Vero细胞狂犬病疫苗的免疫原性研究

目的研究Ｖｅｒｏ细胞狂犬病疫苗的安全性和免疫原性。方法对１１例暴露狂犬病病人进行常规５针注射Ｖｅｒｏ细胞狂犬病疫苗（ＰＶＲＶ）,在注射后的不同时间抽取静脉血,用小鼠中和试验（ＭＮＴ）等方法检测病人体内的中和抗体水平。结果显示３种不同的方法在第０、７天时的体内中和抗体均未达到保护水平（＜０．５ＩＵ／ｍｌ）;１４天时病人的中和抗体全部阳转,ＧＭＴ为７．３２ＩＵ／ｍｌ;２８天时中和抗体达到最高值,ＧＭＴ为１４．５８ＩＵ／ｍｌ;９０天和１８０天的ＧＭＴ分别为８．４３和３．３８ＩＵ／ｍｌ,阳性率仍为１００％,抗体仍保持在较高水平。整个观察过程中无１例发性过敏反应。结论ＰＶＲＶ具有良好的安全性和免疫原性     

柯萨奇病毒B3的VP1 DNA疫苗与蛋白或重组腺病毒疫苗不同组合免疫方式的免疫效果观察

目的 观察柯萨奇病毒B3 (Coxsackievirus B3, CVB3)衣壳蛋白VP1 DNA疫苗初免后VP1蛋白或重组腺病毒rAd/VP1加强的prime-boost策略的免疫效果。方法 用CVB3 VP1的真核表达质粒pcDNA3/VP1初次免疫小鼠后,分别用VP1蛋白或重组腺病毒rAd/VP1加强免疫2次。检测免疫小鼠血清特异性IgG抗体、中和抗体滴度以及脾脏细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic lymphocytes,CTLs)杀伤活性;致死量CVB3攻击后,检测小鼠血中病毒滴度并观察动物的存活情况。结果 pcDNA3/VP1 +VP1蛋白组小鼠血清IgG抗体、中和抗体滴度以及动物生存率明显高于pcDNA3/VP1 + rAd/VP1组和pcDNA3/VP1质粒组（P<0.05）; pcDNA3/VP1 + rAd/VP1组和pcDNA3/VP1 +VP1蛋白组小鼠脾脏CTLs杀伤活性明显高于pcDNA3/VP1 质粒组（P<0.05）。结论 质粒pcDNA3/VP1初次免疫后,VP1蛋白或重组腺病毒rAd/VP1加强的prime-boost策略有较好的免疫效果,两者比较pcDNA3/VP1 +VP1蛋白prime- boost免疫策略的效果更为明显。     

狂犬病口服疫苗对消除人间狂犬病的重要作用北大核心CSCD

狂犬病严重威胁人类生命,控制狂犬病需要从病毒的源头着手。在狂犬病毒的多种宿主中,犬科动物所占比例最大。因此,消除狂犬病的关键是对犬的免疫覆盖率达到70%以上。事实证明,通过注射灭活疫苗对犬只形成免疫屏障是一件困难的事情。采用口服疫苗策略控制野生动物狂犬病的成功案例给大家提供了新的思路,因此世界卫生组织建议采用狂犬病口服疫苗对犬进行免疫,用以提高犬只的免疫覆盖率,从而达到2030年消除和控制狂犬病的目的。     

成都市95例狂犬病病例流行病学特征分析

目的 分析成都市狂犬病病例流行病学特征,探索狂犬病发病流行的影响因素,从而为调整综合防控策略及措施提供依据。方法通过分析2005-2012年95例狂犬病病例的流行病学特征,揭示成都市狂犬病的流行现状。结果 成都市狂犬病病例在人群流行病学上呈现以农村地区为主（90/95,占94.74%）,男性为主（68/95,占71.58%）以及年龄在30岁以上的人群为主（61/95,64.21%）的特征。而在暴露情况方面,伤人动物中,家养动物与流浪动物的比例,几乎各占一半;暴露后伤口未作任何处置比例高达44.21%;狂犬疫苗的接种率近为10.53%。结论 成都市农村地区是狂犬病防制的重点区域;流浪动物的管理是控制和消除传染源的关键环节;大众健康教育方面亟需加强农村地区工作,宣传知识要点重点突出犬伤暴露后伤口规范处置以及免疫制剂的使用。     

胶体金免疫层析检测犬、猫抗狂犬病病毒IgG抗体的研究

目的建立检测犬、猫抗狂犬病病毒(RV)IgG抗体的胶体金免疫层析方法。方法采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金用以标记SPA,同时将重组RVN蛋白、抗SPA抗体分别包被至硝酸纤维素膜的检测线与质控线上,制备一种检测犬、猫抗RVIgG抗体的胶体金检测卡,进行了特异性和灵敏度试验,并与ELISA同时检测临床样品、统计结果。结果 GICA试纸条检测灵敏度为0.5IU/mL,与犬瘟热病毒、犬细小病毒等阳性血清无交叉反应,并与ELISA相比,两者的符合率为94.6%。结论成功建立了检测犬、猫抗RVIgG抗体的通用型胶体金免疫层析方法 ,该方法灵敏度高,特异性强,检测速度快,操作简便,可广泛应用于基层。     

河南省人间狂犬病流行特征与防控策略探讨

目的 总结和分析河南省人间狂犬病流行特征,探讨防控策略。方法 收集并整理河南省1951-2015年人间狂犬病疫情相关资料,对2007-2015年病例进行流行病学调查,用SPSS17.0建立数据库并进行统计分析。结果 河南省人间狂犬病上世纪80年代曾严重流行、90年代得到有效控制。本世纪初以来疫情上升明显,近10年又有下降趋势。病例以农村地区居民为主,男多于女,多为35-65岁组及15岁以下组人群。7-9月份是发病高峰期。豫东和豫南是人间狂犬病病例较为集中区域。病例平均潜伏期为60 d,平均病程为3 d。病例暴露后约45.9%未作任何伤口处理,76.5%未曾接种疫苗,伤口肉眼可见出血的占93.6%,抗狂犬病免疫球蛋白注射率仅为0.64%。传染源98.7%是犬只,其中非栓养犬占82.1%以上。犬只狂犬病毒感染率为0.63%~6.00%。农村地区犬只免疫率为0.64%,人犬比值平均为6.50。结论 河南省是狂犬病流行地区,应开展以农村地区为重点的综合防控。     

狂犬病毒HEP-dG株的拯救

目的筛选免疫原性高、致病性低的狂犬病疫苗候选株。方法应用反向遗传技术,在狂犬病毒弱毒株HEP-Flury株全基因组3'-N-P-M-G-L-5'的假基因区域(G与L之间),插入一个G基因,构建携带双G基因的全长感染性克隆,其与辅助质粒共转染BHK-21细胞,盲传十代,用荧光抗体和RT-PCR鉴定病毒。结果成功获得携带双G基因的狂犬病毒HEP-dG株,该病毒在BHK-21细胞中稳定生长,其病毒滴度达到1010FFU/mL。结论HEP-dG株会为研制高效的狂犬病病毒基因工程口服疫苗提供了良好的疫苗候选株。     

Rabies in Thailand: 1990

Of the more than 100,000 courses of postexposure rabies treatment given in Thailand annually, 95% consist of brain tissue-derived vaccine without immune globulin. Rabies tissue culture vaccines and immune globulins are expensive by the standards of developing countries. When they are given according to either of two proven intradermal postexposure schedules, significant savings can be achieved without loss of efficacy. Purified equine rabies immune globulins account for approximately 10% of the cost of human products administered to exposed individuals and have been shown to be safe and effective. A canine preexposure immunogenicity study with a potent, inactivated tissue culture vaccine revealed that 12.5% of Thai dogs failed to develop protective antibody titers 2 months after one subcutaneous injection. Previous studies have shown significant antigenic differences between Thai street rabies virus and European and North African strains.     

4株狂犬病街毒的分离及其核蛋白和糖蛋白序列分析

目的以4株狂犬病街毒分离株及我国南北方不同地区狂犬病病毒街毒为研究对象,通过其核蛋白及糖蛋白基因的同源性及进化分析,比较我国狂犬病流行毒株与人用及兽用狂犬病疫苗株间的基因及抗原性差异,为相关疫苗的研究奠定理论基础。方法以直接免疫荧光法(DFA)检测疑似狂犬病的犬脑标本,以乳鼠颅内接种法(MIT)和细胞培养分离技术(CIT)分离狂犬病病毒,并进行TCID50和LD50测定;以RT-PCR法扩增其核蛋白(N)和糖蛋白(G)基因,克隆入T载体并测序后,下载GenBank内已有的狂犬病病毒数据资源,以(Clustal和MEGA3软件)进行基因同源性比对及系统发生分析。结果从广东、河北两省分离到狂犬病病毒街毒4株,分别命名为GN07、WJ07-1、WJ07-2、GC07;序列分析表明4株狂犬病病毒均为基因1型,其N基因与G基因核苷酸的同源性分别为89.5%~99.9%和87.9%~99.9%,其中GN07与WJ07-1、WJ07-2、GC07的同源性较低。与己知的基因1型狂犬病毒相比,WJ07-1、WJ07-2、GC07与湖南、湖北、云南、浙江等地分离株及印度尼西亚分离株核苷酸同源性最高,分别为97.8%~99.4%和92.2%;GN07与CTN疫苗株核苷酸同源性最高,为94.5%。系统发育分析表明,4株病毒与CTN疫苗株同源性较高,与人用狂犬病疫苗3aG、PV株及兽用狂犬病疫苗ERA株和Flury疫苗株的同源性相对较远。适应细胞培养后,四株街毒的LD50和TCID50最高者为GN07,而WJ07-1较低,差别较大。结论4株狂犬病分离株与我国南北方不同地区狂犬病流行毒株的基因和氨基酸序列存在一定差异,在进化关系上分属于不同的分支。     

河南省8株狂犬病毒磷蛋白基质蛋白基因分析

目的分析河南省8株狂犬病毒磷蛋白P及基质蛋白M的基因序列,探讨狂犬病毒流行株毒力与致病性变异的可能原因。方法以免疫荧光法检测2006年采自河南省的121份犬脑,取阳性犬脑组织悬液接种鼠脑分离病毒,以RT-nest-edPCR法扩增病毒P与M基因,克隆测序后进行生物信息学分析。结果分离到8株狂犬病毒,序列分析表明8株病毒均为基因1型狂犬病毒,8株病毒彼此之间P基因与M基因核苷酸序列同源性均为98.9%～99.8%,推导的氨基酸序列同源性分别为98.0%～99.3%和97.0%～99.5%。8株病毒与我国宁夏分离株CNX8511、CNX8601的同源性最高,P基因与M基因核苷酸同源性分别为89.1%～89.7%和91.1%～92.0%,氨基酸同源性分别为93.3%～94.3%和96.6%～98.0%。在核苷酸及氨基酸水平上,8株病毒与CTN疫苗株的P与M同源性均明显高于与其它疫苗株的相应同源性。系统发育分析表明,8株病毒与我国宁夏街毒株、CTN疫苗株、泰国及菲律宾等东南亚株进化关系最近,而与CTN以外的其它疫苗株、标准攻击毒CVS株,以及我国80年代初分离的DRV、MRV株进化关系较远。氨基酸对位分析表明,较之参比的其它基因1型毒株,河南省8株狂犬病毒的P与M出现多处变异。结论8株狂犬病毒仍属基因1型狂犬病毒,但其P基因及M基因在核苷酸及推导的氨基酸水平上均出现了明显变异。     

WHO recommended pre-exposure prophylaxis for rabies using Japanese rabies vaccine

After severe exposure to suspected rabid animal, WHO recommends a complete vaccine series using a potent effective vaccine that meets WHO criteria, and administration of rabies immunoglobulin (RIG). RIG is not available globally, and is not marketed in Japan. If pre-exposure prophylaxis for rabies is given, RIG is unnecessary even after severe exposure. It is thus important to give pre-exposure prophylaxis for rabies to people who plan to go to rabies-endemic areas. In Japan, pre-exposure prophylaxis for rabies consists of 3 doses of cell-culture rabies vaccine. The first two doses are given 4 weeks apart, and the third dose is given 6-12 months after the first dose, all of which are injected subcutaneously (standard regimen). People who plan to travel abroad to rabies-endemic areas may know of their destinations only 1 or 2 months in advance at best. Therefore, it is virtually impossible to complete the 3 dose regimen for rabies in Japan. Pre-exposure prophylaxis recommended by WHO consists of 3 doses given intramuscularly on days 0, 7, and 28, making it possible to complete pre-exposure prophylaxis in one month. This WHO recommended pre-exposure prophylaxis using Japanese cell-cultured rabies vaccine (PCEC-K) has not been studied, so we elected to fill the gap using PCEC-K, administered based on the WHO recommendation and examined its efficacy and safety. Subjects were 26 healthy volunteers with no previous rabies vaccination giving oral and written consent. Vaccine was administered on days 0, 7, and 28, and rabies antibody levels were tested on days 7, 28, and 42. On day 7, every antibody level was negative. On day 28, antibody levels were between 0.7-3.5 EU/ mL, with the exception of 3 cases still negative. On day 42, all cases, including the 3 negative cases, exceeded 1.6 EU/mL, providing sufficient protection against rabies. This result was not inferior compared to the standard regimen. Local adverse effects such as erythema and pain were noted, but none were serious. In conclusion, WHO recommended pre-exposure prophylaxis for rabies using PCEC-K is considered effective and safe.     

Epidemiology and prevention of animal bite and human rabies in a rural community-One health experiment

ObjectiveTo estimate the incidence of human rabies and animal bite/exposure; to describe the post exposure prophylaxis received by animal bite/exposure cases; to assess the safety and immunogenicity of rabies vaccine (purified chick embryo cell vaccine) administered as pre-exposure vaccination for school children and risk groups by intradermal route in the rural community and to demonstrate a decrease in the incidence of human rabies and animal bite/exposures through implementation of one health experiment.MethodsThis prospective interventional study was conducted over a period of 2 years (December 2009-November 2011) in a rural area near Bangalore, Karnataka, South India and consisted of six villages (project villages), three villages were identified as study villages with active interventions (Implementation of rabies awareness activities, post exposure prophylaxis, pre-exposure intradermal rabies vaccine) and three villages as control villages without any active interventions.ResultsA majority of the animal bite cases were category III exposures and all of them had received rabies immunoglobulin and anti-rabies vaccine as per WHO recommendation. A majority received 3 to 5 doses of vaccine. Three hundred and sixty eight subjects had received pre-exposure intradermal rabies vaccination thrice on days 0, 7 and 28 d.ConclusionsNo human rabies case was reported during the study period and there was 30% decrease in animal bite/exposure cases in study villages after the one health experiment project was implemented. Pre-exposure vaccination was safe and immunogenic.