Effects of Gene Tranfection with CH50 Polypeptide on the Invasion Ability of Bladder Cancer Cell Line BIU-87

Fibronectin(FN) ,a glycoprotein,possesses mul-tiple cell bioactivities such as influencing the cellularmorphology, controlling cellular migration,inducingcellular differentiation and affecting i mmune cell func-tions etc ,whichis closelyrelated withthe carcinogene-sis ,invasion and metastasis[1].CH50 polypeptide is composed of Cell I andHep II bifunctional-domain of human FN, main-tains the function of the original structure and doesnot formnovel function because of deletion of frag-ments a…     

新建人膀胱癌细胞系BIU-87的染色体分析

新建的人膀胱癌细胞系命名为BIU-87,本文研究其染色体及其G带的变化及临床意义。BIU-87细胞有明显的超4倍体特点,分析100个中期细胞得出染色体众数平均为101条。染色体形态结构与正常细胞相比有很大不同,可检出12个异常的标记染色体。其中最为明显的M_1和M_2标记染色体都与1号染色体有关。这将有助于临床辅助诊断膀胱癌。双小体的存在提示了细胞癌变和癌基因变化之间的关系。     

量子点对膀胱癌BIU-87细胞抗原的标记检测

目的:探讨不同的量子点免疫荧光组织化学方法对膀胱癌BIU-87细胞抗原特异性标记的效果,以优化细胞标记方法。方法:分别采用量子点免疫荧光组织化学三步法、二步法、一步法检测前列腺干细胞抗原(PSCA)在膀胱癌BIU-87细胞中的表达情况,观察并分析三种方法特异性标记的效果。结果:PSCA特异性的表达于BIU-87细胞胞质或膜,三种方法在紫外光激发下均能观察到表达部位明显的红色荧光,三步法实验技术成熟,量子点标记的链霉亲和素性质稳定,检测灵敏度高,背景清晰,但实验步骤繁琐,耗时较长,不宜用于活细胞标记;二步法实验步骤和操作时间都相对有所减少,但量子点标记的二抗性质不稳定,非特异吸附较强;一步法操作简便,省时,标记效果明显,特异性强,但是标记一抗成本较高,且对一抗的剂量要求较大。结论:三种量子点荧光标记方法均能对固定细胞表面抗原进行特异性标记,需根据不同实验需求选择合适的标记方法以达到最佳实验效果。特异性一步法量子点荧光标记在活细胞及活体靶向成像示踪中具有巨大的应用前景。     

PTEN基因对人膀胱癌细胞系BIU-87化疗敏感性影响的研究

目的研究抑癌基因PTEN转染对人膀胱癌细胞系BIU-87化疗敏感性的影响。方法将携有PTEN基因的重组真核表达质粒pBp-PTEN体外转染BIU-87细胞（pBp-PTEN-BIU87）,筛选稳定转染的细胞并扩增培养,以转染了空质粒pBp的BIU-87细胞（pBp-BIU87）和正常BIU-87细胞为对照,用RT-PCR检测PTEN的表达情况,应用MTT分别研究转染前、后膀胱癌细胞对不同浓度抗癌药物丝裂霉素MMC（1、10和100g/mL）、康朴赛星（0.25、2.5和25g/mL）和吡柔比星（2、20和200g/mL）的抑制率和敏感性的变化。结果 RT-PCR证实PTEN在转染的BIU-87细胞中能稳定表达。PTEN转染后,BIU-87细胞对MMC的药物抑制率和敏感性明显提高,对吡柔比星和康朴赛星的药物抑制率和敏感性无明显变化。结论 PTEN基因转染能提高人膀胱癌细胞系BIU-87对某些抗癌药物的敏感性,作用的强弱取决于药物的作用机制。     

温热与冬凌草液对人膀胱癌BIU-87细胞体外凋亡的影响

目的：探讨温热和冬凌草液对体外培养的人膀胱癌BIU-87细胞体外凋亡的影响。方法：通过对体外培养的BIU-87细胞进行加温（37℃、41．5℃、43．5℃）和冬凌草液（0g／L、0．15g／L、0．3g／L、0.6g／L、1.2g／L、2.4g／L）处理,采用形态学和流式细胞术观察温热和冬凌草液诱导的细胞凋亡效应,采用MTT法检测冬凌草作用后细胞的生长抑制率。结果：冬凌草液对BIU-87细胞具有明显的抑制生长作用。形态学观察到实验组中大量具有凋亡特征的细胞。流式细胞仪定量分析显示,随着冬凌草液浓度的增加和温度的升高,BIU-87细胞凋亡率亦呈升高趋势（P〈0．05）。结论：温热和冬凌草液具有协同诱导人膀胱癌BIU-87细胞凋亡的作用。     

PI3K抑制剂LY294002联合吡柔比星对膀胱癌BIU-87细胞增殖作用的影响

目的:探讨PI3K抑制剂联合吡柔比星对人膀胱癌BIU-87细胞增殖作用的影响。方法:用不同浓度的PI3K抑制剂LY294002联合吡柔比星对BIU-87细胞作用0、12、24、36 h后,通过MTT方法检测抑瘤率;通过Western blotting检测Caspase-3、Bax、Bcl-2及P-gp蛋白的表达。结果:THP能明显抑制BIU-87细胞的增殖,并且具有明显的时间的依赖性(P<0.05)。THP联合应用不同浓度LY294002组与单独使用同剂量的THP组比较,BIU-87细胞的增殖随着药物浓度的增加和时间的延长进一步受到抑制,而且,联合应用LY294002的低浓度THP组对BIU-87细胞抑制作用明显强于高剂量THP组(P<0.05)。此外,PI3K抑制剂LY294002联合应用THP后,BIU-87细胞Bax与Caspase-3表达都明显上升(P<0.05),Bcl-2与P-gp表达量明显降低(P<0.05)。结论:PI3K抑制剂联合THP比单独应用THP对人膀胱癌BIU-87细胞抑制作用效果明显。     

藏红花素对人膀胱移行细胞BIU-87细胞抗增殖作用研究

目的 研究藏红花素(crocin)对人膀胱移行细胞株BIU-87增殖的作用及机制.方法 MTT法测定crocin抗增殖效应,FCM分析细胞周期分布,RT-PCR技术测定Cyclin D1, p27kip1 mRNA表达变化,Western blot检测Cyclin D1,p27kip1蛋白表达变化.结果 crocin对细胞生长有抑制作用,且呈时间-剂量依赖关系.FCM检测显示,crocin可使细胞阻滞于G0/G1期;3.2mmol/L crocin作用于BIU-87细胞后RT-PCR结果显示,Cyclin D1 mRNA表达明显下调,p27 mRNA无显著变化;Western blot结果表明Cyclin D1蛋白明显下调;p27kip1蛋白表达显著增加.结论 crocin对细胞有抗增殖作用,可阻滞细胞于G0/G1期,其可影响Cyclin D1 mRNA转录,但并不影响p27 mRNA表达水平,并调控Cyclin D1、p27kip1蛋白表达.     

β-榄香烯对人膀胱癌BIU-87细胞磷脂代谢转换率及细胞脂膜流动性的影响

磷脂是细胞膜的重要组分,肌醇磷脂在细胞的功能调控中发挥重要的作用,并与细胞增殖及肿瘤形成关系密切。β-榄香烯是中药温莪术的有效抗癌成分,临床应用对许多恶性肿瘤的疗效确切,我们已经证明其可诱导人膀胱癌BIU-87细胞凋亡;本研究旨在进一步研究其对BIU-87细胞肌醇磷脂代谢转换及脂膜流动性的影响,探索凋亡的分子机制,结果报道如下。     

As2O3诱导人膀胱癌BIU-87细胞株凋亡及其对细胞周期的影响

目的:观察三氧化二砷(As2O3)对人膀胱癌BIU-87细胞株生长抑制作用,并探讨对细胞周期及凋亡的影响.方法:CellTiter 96 Aqueous One 试剂检测BIU-87细胞株增殖活力;荧光染色观察凋亡细胞的形态学变化;流式细胞术分析细胞周期及凋亡.结果:As2O3与BIU-87细胞株生长抑制率之间有明显的浓度依赖关系 (P<0.01),IC50为28.92 μmol/L;荧光显微镜下观察到经As2O3作用的BIU-87细胞核膜消失,核染色质呈大小不等的小圆形碎片;流式细胞术结果表明30 μmol/L的As2O3处理BIU-87细胞株48 h后,G0/G1期细胞比例下降,S期细胞比例增加,凋亡率为47.37%.结论:As2O3能显著抑制BIU-87细胞株增殖;使细胞阻滞在S期,并进一步诱导细胞凋亡.     

可调控STAT3干扰载体抑制BIU-87细胞侵袭的体外研究

目的 探讨可调控RNA干扰载体通过抑制STAT3信号通路对膀胱癌细胞BIU-87侵袭性的影响.方法 采用受CRE重组酶调控的RNA干扰载体pSico构建针对STAT3的shRNA表达载体,以pLVX-CRE作为CRE蛋白的表达载体,将BIU-87细胞分为pSico-shNeg、pSico-shNeg/CRE、pSico-shSTAT3、pSico-shSTAT3/CRE 4组,分别转染相应质粒,RT-PCR和Western blot法检测其干扰效率,Transwell实验检测其侵袭能力.结果 双酶切及测序证实载体构建正确;各组细胞在转染重组质粒后EGFP的表达受CRE调控;RT-PCR结果显示STAT3的表达在干扰之后有显著降低.Western blot结果显示,在无CRE时,pSico-shSTAT3组与pSico-shNeg组STAT3的表达无显著差异(P＞0.05),在有CRE时,pSico-shSTAT3组STAT3相对表达量下降为pSico-shNeg组的(43±4.2)％(P＜0.05);体外侵袭实验显示pSico-shNeg组透膜细胞数为(203.33±12.42)/视野、pSico-shNeg/CRE组(196.33±11.85)/视野、pSico-shSTAT3组(201.00±16.64)/视野,而pSico-shSTAT3/CRE组(42.00±3.00)/视野,较其他3组显著降低(P＜0.01).结论 由可调控RNA干扰载体介导的CRE依赖性STAT3表达载体能降低细胞内STAT3信号水平,并降低BIU-87细胞体外侵袭迁移能力.     

Apoptosis inducing effects of arsenic trioxide on human bladder cancer cell line BIU-87

Objective　To explore the apoptosis inducing effects of arsenic trioxide (As2O3) on human bladder cancer cells and elucidate possible mechanisms. Methods　After treatment with As2O3, the growth inhibition rates of human bladder cancer cell line BIU-87 were studied by MTT and cell counts methods. DNA synthesis rates were detected by 3　H-TdR assay. The morphological changes of cancer cells were observed by light and electronic microscopy and cell apoptosis rates were detected by TdT-mediated dUTP nick end labeling (TUNEL). bcl-2 gene expression of BIU-87 cells was observed by strept avidin-biotin complex (SABC) immunohistochemical method. Results　As2O3 could effectively inhibit the growth of BIU-87 (P&lt;0.05), which were time and concentration dependent. The inhibition rate of 4.0?μmol/L As2O3 for DNA synthesis of cancer cells was 55.64% (P&lt;0.01). Partial cancer cells presented the characteristic morphological changes of apoptosis which depended on the time of exposure to drug (P&lt;0.05). bcl-2 expression of BIU-87 cells was decreased significantly (P&lt;0.05). Conclusion　As2O3 can significantly induce apoptosis in bladder cancer cells by down-regulating the expression of the bcl-2 gene and inhibiting DNA synthesis. This provides a potentially effective method for prevention and cure of human bladder cancer.     

三氧化二砷诱导膀胱癌BIU-87细胞凋亡作用的研究

目的 探讨三氧化二坤（As2O3)诱导膀胱癌BIU－87细胞凋亡作用。方法 应用倒置相差显微镜、透射电子显微镜、自动酶标仪、细胞免疫组化法，分别对不同浓度加药组及对照组BIU－87细胞的形态学改变，细胞的存活及Bcl-2、Bax蛋白的表达进行观察和测定。结果 生长曲线显示，18．8μg/ml,37.6μg/ml和94．0μg/ml As2O3均能抑制膀胱癌BIU－87细胞的生长增殖。透射电镜观察，膀胱癌细胞表面的突起减少或脱失；部分细胞核染色质聚焦，边移；线粒体膜结构模糊不清。细胞免疫组化法测定Bcl-2、Bax蛋白的表达均有变化，与对照组细胞相比，18．8μg/ml,37.6μg/ml As2O3组Bcl-2和Bax蛋白表达率均升高。结论 三氧化二砷不仅抑制膀胱癌BIU－87细胞增殖，而且诱导细胞凋亡。诱导细胞凋亡与Bax蛋白的表达升高有关。     

PTEN基因转染对人膀胱癌细胞BIU-87凋亡的影响

目的：研究外源性抑癌基因PTEN转染对人膀胱癌细胞系BIU-87凋亡的影响,探索膀胱癌基因治疗的新途径.方法：将携有PTEN基因的真核表达载体体外转染BIU-87细胞,筛选稳定转染的细胞并扩增培养,用逆转录聚合酶链反应法（RT-PCR）检测PTEN的表达情况,应用细胞原位凋亡检测试剂盒和流式细胞仪分别研究PTEN基因转染前、后膀胱癌细胞凋亡的变化.结果：转染PTEN基因的膀胱癌细胞系BIU-87中PTEN mRNA能稳定表达,肿瘤细胞凋亡明显增多,与对照组比较有显著性差异.结论：转染外源性PTEN基因能显著诱导膀胱癌细胞凋亡,从而达到抑制肿瘤发生、发展的目的.     

人膀胱癌BIU87细胞株中低氧诱导CD105表达

目的 研究人膀胱癌BIU87细胞株中低氧与常氧状态下CD105表达,为膀胱癌的抗血管治疗提供理论依据.方法 在人膀胱癌BIU87细胞株中用免疫组织化学检测常氧与低氧状态下CD105蛋白的表达.结果 人膀胱癌BIU87细胞株CD105蛋白在低氧组和常氧组阳性表达率分别为(90.4±8.2)％和(61.0±7.5)％.结论 人膀胱癌BIU87细胞株中低氧诱导CD105表达.