神经母细胞瘤细胞周期素D1的表达检测

目的 探讨细胞周期素Ｄ１表达与神经母细胞瘤（ＮＢ）发生发展的关系及意义。方法 应用原位杂交技术对２０例ＮＢ标本检测。结果 １７例可检测到ｃｙｃｌｉｎ Ｄ１表达，表达指数（ＣＥＩ）４．３％￣５５．３％。年龄〈１岁和神经节神经母细胞瘤标本中ＣＥＩ低于年龄〉１岁及ＮＢ，但无显著性差异。Ⅲ￣Ⅳ期、ＵＦ型及肿瘤广泛转移标本中ＣＥＩ显著高于Ｉ￣Ⅱ及ⅣＳ期、Ｆ型和肿瘤切除者。ＣＥＩ与ＭＫＩ呈正相关，与术后生存时     

神经母细胞瘤细胞周期素依赖激酶抑制因子p27表达检测及其意义

目的探讨细胞周期素依赖激酶(CDKs)抑制因子p27表达对神经母细胞瘤(NB)发生发展的影响。方法检测26例NB标本中p27基因表达,结合增殖细胞核抗原(PCNA)表达和细胞凋亡检测结果进行分析。结果I～II及IVS期、神经节母细胞瘤(GNB)、预后好组织（FH）型标本p27表达指数(EI)为27.28±13.61、34.60±12.16、26.29±14.71,显著高于Ⅲ～Ⅳ期、NB、预后差组织(UFH)型标本15.81±12.92、18.77±14.77、13.34±13.79(P值均<0.05）;Ⅰ～Ⅱ或IVS期、GNB、FH型标本PCNAEI为9.47±8.43、0.83±0.57、11.05±10.71则显著低于Ⅲ～Ⅳ期、NB、UFH型标本27.05±19.24、24.44±17.42、32.09±17.04(P值均<0.05）。p27EI与有丝分裂核碎裂指数(MKI)呈负相关（n=26,r=-0.513）,与NB细胞凋亡指数呈正相关（n=17,r=0.490）,与存活时间呈正相关（n=12,r=0.635）;PCNAEI与MKI呈正相关（n=20,r=0.903）。结论p27抑制细胞增殖周期及诱导细胞凋亡的功能,在NB的发病机制中可能具有重要作用。     

肾母细胞瘤和神经母细胞瘤p53蛋白表达研究

作者应用ＡＢＣ免疫组化方法，对４８例肾母细胞瘤，３２例神经母细胞瘤进行ｐ５３蛋白表达检测。结果显示１１例肾母细胞瘤呈阳性反应，３２例神经母细胞均为阴性。在与临床病理指标的相关分析中发现，肾母细胞瘤ｐ５３蛋白异常表达与ＮＷＴＳ－Ⅱ分类、ＮＷＴＳ－Ⅲ临床病理分期以及有无转移呈显著性相关。结果表明，ｐ５３蛋白表达不仅与肾母细胞瘤的发生有关，而且在肾母细胞瘤的细胞分化和转移中起重要作用，可作为临床预后判断的指标之一；在神经母细胞瘤的发生发展中可能不起重要作用。     

黏附分子T-cadherin抑制C6胶质母细胞瘤增殖与p21表达相关

目的探讨T-cadherin分子表达抑制胶质母细胞瘤C6细胞增殖的分子机制。方法利用脂质体将pcDNA3和pcDNA3．T-cadherin表达质粒转染C6细胞，筛选出表达T-cadherin的C6克隆3、4和5以及转染空载体后不表达T-cadherin的C6克隆1和2，以Westerrl Bolt检测各克隆的p21和p27的表达；同时，以pcDNA3和pcDNA3．T-cadherin表达质粒分别转染野生型（p21＋／＋）和p21缺失突变型（p21-／-）成纤维细胞，研究T-cadherin分子介导的细胞增殖抑制是否依赖细胞周期蛋白p21的表达。结果转染pcDNA3．T-cadherin质粒后表达T-cadherin分子的C6克隆3、4和5的p21表达水平明显升高，而p27的表达与C6细胞是否表达T-cadherin无关。另外。转染pcDNA3．T-cadherin质粒的野生型表达p21的成纤维细胞的增殖显著受抑。而转染pcDNA3．T-cadherin质粒对p21缺失突变的成纤维细胞的增殖不产生抑制作用。结论T-cadherin分子抑制胶质母细胞瘤C6细胞的增殖与p21表达密切相关，且T-cadherin分子对成纤维细胞的增殖抑制作用依赖于p21的表达。     

在胆管癌组织中检测p53,p21WAF1的表达

目的 研究胆管癌中ｐ５３,ｐ２１＾ＷＡＦ１基因表达以及它们之间的关系。以期为找到一种早期诊断及判断胆管癌预后的方法找下一个基础。方法 本研究采用３０例人胆管癌及癌旁组织配对资料,应用原位杂交及免疫组化方法检测、ｐ５３、ｐ２１＾ＷＡＦ１基因表达经们之间的关系。进而分析它们与临床病理资料之间的相关性。结果 原位杂交检测３０例胆管癌中有１４例（１４／３０,４６．７％）呈ｐ５３阳性,１２例（１２／３０,４０．０％）ｐ２１＾ＷＡＦ１阳性。ｐ５３,ｐ２１＾ＷＡＦ１原位杂交结果与胆管癌的临床病理资料无明显相关性。免疫组化检测３０例胆管癌中,Ｐ５３蛋白表达阳性率明显高于无局部淋巴结转移组;临床Ⅲ期的病人Ｐ５３蛋白阳性率明显高于临床Ⅰ和Ⅱ期的病人,并且有Ｐ５３蛋白表达的病人其生存期明显短于无Ｐ５３蛋白表达的病人。ｐ２１＾ＷＡＦ１     

神经母细胞瘤细胞凋亡和BCl-2蛋白表达检测及其临床意义

目的 探讨细胞凋亡对Ｂｃｌ－２蛋白表达与神经母细胞瘤（ＮＢ）发生发展和预后的关系。方法 应用ＬＳＡＢ免疫组化及ＴＵＮＥＬ技术对１７例ＮＢ中Ｂｃｌ－２蛋白表达及细胞凋亡进行检测。结果 年龄〈１岁，１～Ⅱ及ⅣＳ期，Ｆ型ＮＢ凋亡指数（ＡＩ）显著高于年龄〉１岁，Ⅲ～Ⅳ期及ＵＦ型，ＡＩ与ＢＥＩ呈负相关，结论 ＢＥＩ与ＡＩ可作为判断ＮＢ生物学特性和预后的重要指标。     

p21^waf1基因真核表达载体的构建和对人胆管癌细胞生长 …

目的 探讨ｐ２１＾ｗａｆ１基因过表达在人胆管癌细胞增殖和凋亡中的作用。方法 包含２．１ｋｂ的ｐ２１＾ｍａｆ１ｃＤＮＡ片段经阳离子脂质体ＤＯＴＡＰ包裹转染人胆管癌细胞ＱＢＣ９３９中，并得到稳定表达，通过聚合酶链反应（ＰＣＲ）、逆转录－ＰＣＲ（ＲＴ－ＰＣＲ）、流式细胞仪及免疫组织化学等方法检测ｐ２１＾ｗａｆ１基因表达、细胞生长和细胞凋亡等情况。结果 ｐ２１＾ｗａｆ１基因转染后，细胞生长明显受抑制，细胞     

髓母细胞瘤周期蛋白基因D1、p16的表达及其与临床病理特点的关系

目的　通过检测髓母细胞瘤周期蛋白基因 (cyclin)D1和 p16的表达 ,探讨它们与传统临床病理特点之间以及cyclinD1和 p16之间的相互关系。 方法　应用免疫组织化学方法并用图像分析系统测定染色的积分吸光度 (IOD)检测cyclinD1和p16在髓母细胞瘤和正常小脑组织中的表达情况 ;应用统计学方法分析它们与临床病理特点的相互关系 ,以及cyclinD1和 p16之间的相互关系。结果　 (1)正常小脑组织cyclinD1表达较低 ,髓母细胞瘤表达较高 (IOD值分别为 0 .2 93 1、1.0 712 ) ;p16在正常小脑组织中则呈现高表达 ,而髓母细胞瘤出现降低 (IOD值分别为 1.6815、1.0 10 9) ;(2 )髓母细胞瘤cyclinD1和 p16表达情况与肿瘤年龄、部位、病理类型、是否伴坏死、分化程度及分化方向有关 ;(3 )在纤维增生型髓母细胞瘤中cyclinD1和p16呈正相关关系 (r =0 .5 3 4,P <0 .0 5 ) ,而在经典型髓母细胞瘤中呈负相关关系 (r =-0 .40 7,P <0 .0 1)。结论　髓母细胞瘤临床病理特点的不同更深层次的原因之一是肿瘤细胞cyclinD1和 p16发生了不同变化从而导致肿瘤细胞形成各自不同的细胞周期改变     

乳腺癌p21 WAF1基因多态性及其临床意义

目的探讨乳腺癌组织p21 WAF1基因多态性及其临床意义.方法采用聚合酶链反应单链构象多态性技术(PCR-SSCP)法检测100例乳腺癌组织p21 WAF1基因的结构变异,同时应用免疫组织化学SP法检测乳腺癌组织p21 WAF1的蛋白表达.结果 5%(2/40)的对照组组织出现多态性,18%(18/100)的乳腺癌组织出现两种多态性,两组间差异有显著性(x2=30.94,P＜0.05);p21 WAF1基因多态性与蛋白表达(r=0.576,P＜0.01)和组织学分级(r=0.360,P＜0.01)呈正相关.结论 p21 WAF1基因多态性在乳腺癌组织中明显增加;p21 WAF1基因多态性可能与促进细胞增殖和增强对癌的易感性有关.     

E-box元件在p21基因表达调控中作用的研究

目的：通过p21基因调控序列E-box位点的突变分析,研究E-box位点对p21基因表达调控的作用。方法：将人野生型p21基因启动子全长序列构建到荧光素酶报告基因载体pGL3-basic,并进一步对重组载体pGL3-p21p启动子E-box位点做定点突变,构建突变载体E1、E2、E3,分别转染人脐静脉血管内皮细胞株（ECV304细胞）,DLR系统测定荧光素酶活性,并观察E-box位点突变前后荧光素酶活性变化。结果：测序结果表明野生型pGL3-p21p及突变载体E1、E2、E3构建成功。野生型pGL3-p21p荧光素酶活性（105.82±16.55）明显高于空载体pGL3-basic（1.56±0.62）;突变载体E1、E2、E3的荧光素酶活性（70.71±16.46、37.87±3.26、83.25±11.48）较野生型载体不同程度下降（P〈0.01）。结论：p21基因启动子某些E-box位点参与了p21基因的表达调控。     

神经母细胞瘤Survivin基因表达和细胞凋亡的研究

目的：探讨神经母细胞瘤（NB）Survivin表达和细胞凋亡。方法：应用免疫组织化学技术和DNA原位末端标记技术检测26例NB中Survivin基因表达和细胞凋亡。结果：NB中15例有Survivin表达阳性细胞检出，阳性检出率57．7％。神经节母细胞瘤（GNB）的阳性检出率为20．0％，NB为66．7％；预后差组织（UFH）组为88．9％，预后好（FH）组这41．2％；I－Ⅱ及ⅣS期为27．3％，Ⅲ－Ⅳ期为80．0％。NB组、UFH组、Ⅲ-Ⅳ期标本Survivin阳性表达率高于GNB、FH、I－Ⅱ及ⅣS期标本，P值分别为0．0823、0．0243、0．0105。17例有凋亡细胞检出NB中12例有Survivin阳性表达，Survivin标记指数与凋亡指数（AI）呈负相关（n=12,γ=-0.591）、与生存时间呈负相关（n=12,γ=-0.629），AI与生存时间则呈正相关（n=16,γ=0.563）。结论：Survivin引起的凋亡抑制与NB发生发展关系密切，是患者预后的重要指标。     

人骨肉瘤中P21~(wafl/cipl)基因表达的初步研究

目的:探讨P21~(wafl/cipl)基因在人骨肉瘤中的作用,了解其在骨肉瘤、骨软骨瘤和正常骨组织中的表达。方法:应用免疫组化LASB法和原位杂交方法,检测了P21~(wafl/cipl)蛋白及P21~(wafl/cipl)基因在40例骨肉瘤、20例骨软骨瘤和20例正常骨组织中的表达。结果:骨肉瘤组织中P21~(wafl/cipl)蛋白的阳性反应和阳性反应强度均明显高于骨软骨瘤和正常骨组织,其差异有显著付(P<0.05)。而骨肉瘤组织中P21~(wafl/cipl)基因的阳性表达率却低于骨软骨瘤和正常骨组织,但骨肉瘤阳性反应的41.2％为中度和强阳性表达;骨软骨瘤和正常骨组织中均为弱或微弱的阳性表达。结论:人骨肉瘤中存在P21~(wafl/cipl)蛋白的积聚和P21~(wafl/cipl)基因的过表达。     

p53,p21在乳癌中的表达及意义

目的 探讨p53,p21蛋白在乳癌中表达的临床意义。方法 用免疫组化SP法对20例癌旁乳腺组织和69例乳癌组织中p53和p21蛋白进行半定量检测。结果 癌旁乳腺组织中p53和p21表达阴性;乳腺癌组织中p53和p21阳性率分别为47．8％和43．5％;随细胞分化程度降低;p53表达阳性率明显升高,p21表达的阳性率明显降低。p21表达的阳性率在有、无淋巴结转移组差异显著（P＜0．05）;p53阳性、p21阴性组术后5年无瘤生存率明显低于p53阴性、p21阳性组（P＜0．05）;在乳癌组织中p21表达与p53明显相关（P＜0．05）。结论 p53和p21在乳癌中的表达可判断乳癌细胞分化程度及患者预后。     

甲状腺癌中p53基因248位密码子突变及其蛋白过度表达的临床意义

对５４例甲状腺癌标本分别用ＤＮＡ聚合酶链反应－限制性片段长度多态性分析（ＰＣＲ－ＲＦＬＰ）法检测ｐ５３基因第２４８位密码子的突变及免疫组化法检测ｐ５３蛋白，并用时序检验分析ｐ５３基因突变和ｐ５３蛋白表达与甲状腺癌的关系。结果发现，甲状腺癌中１５例（２７８％）有ｐ５３基因突变和３０例（５５６％）有ｐ５３蛋白过度表达，临床分期晚、分化程度低的甲状腺癌突变率较高，ｐ５３抑癌基因突变和ｐ５３蛋白阳性的病例有较高的复发率和死亡率。表明ｐ５３基因突变及其蛋白过度表达在甲状腺癌的发生和发展过程中起重要作用，是预后不良的标志。     

脑胶质瘤中CDK4基因扩增与p16基因缺失的相关性研究

目的　探讨ｐ１６ 基因、 Ｃ Ｄ Ｋ４ 基因异常与脑胶质瘤发生发展的相关性。方法　应用 Ｐ Ｃ Ｒ分子杂交技术（ Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｂｌｏｔ 和 Ｓｌｏｔ Ｂｌｏｔ） 检测４３ 例不同病理分级的脑胶质瘤中 Ｃ Ｄ Ｋ４ 基因扩增与ｐ１６基因缺失情况。结果　ｐ１６ 基因在Ⅰ～Ⅱ、Ⅲ级、Ⅳ级肿瘤中的缺失率分别为９ ％ （１／１１） 、２９ ％ （５／１７） 、４０ ％ （６／１５） ; Ｃ Ｄ Ｋ４ 基因扩增主要出现于Ⅲ级肿瘤（２５ ％ ） ,频发于Ⅳ级肿瘤（５５ ％ ） ,扩增状况与恶性程度呈正相关。结论　 Ｃ Ｄ Ｋ４ 基因扩增、ｐ１６ 基因缺失的细胞周期监控失调与脑胶质瘤发生发展关系密切, Ｃ Ｄ Ｋ４ 基因作用的强化与ｐ１６ 基因的功能失活,均可促发脑胶质细胞的癌性增殖或脑胶质瘤细胞的恶性演进。     

SPHK1在神经母细胞瘤中的表达及其临床意义

目的 探讨鞘氨醇激酶1(SPHK1)在神经母细胞瘤中的表达及其临床意义.方法 通过免疫组织化学方法观察SPHK1在1995年1月至2009年10月我科连续收治的142例神经母细胞瘤石蜡切片的表达,分析其与神经母细胞瘤临床分期、预后等之间的关系.结果 142例神经母细胞瘤中SPHK1低表达69例,高表达73例.SPHK1的表达和神经母细胞瘤的INSS分期明显相关(P＜0.01),和生存亦明显相关(P＜0.01).结论 SPHK1在神经母细胞瘤中的表达和其临床分期及预后明显相关,可以作为神经母细胞瘤的肿瘤标记物.     

胆囊癌组织细菌L型的检测与p21及p53基因突变的关系

目的 探讨胆囊癌的发生与细菌L型感染和p21及p53基因突变的关系。方法 采用免疫组化SP法和革兰氏染色技术，对40例胆囊癌及40例慢性胆囊炎组织中的细菌L型和突变型p53蛋白及p21蛋白进行检测，并对胆囊癌组织中的细菌L型阳性伴p21及p53蛋白阳性表达结果和细菌L型阴性伴p21及p53蛋白阳性表达结果进行对比分析。结果 胆囊癌组织中革兰氏染色细菌L型检出率为77．5％(31／40)，明显高于胆囊炎的57．5％(23／40)，P＜0．05，且与免疫组化细菌L型抗原表达阳性率[80．0％(32／40)]具有一致性；胆囊癌组织中的p21及p53蛋白表达阳性率分别为62．5％(25／40)和65．0％(26／40)，明显高于胆囊炎组织中的p21及p53蛋白表达阳性率[2．5％(1／40)和5.0％(2／40)]，P＜0．05；胆囊癌组织中的细菌L型阳性者其p21及p53蛋白表达阳性率分别为75．0％(24／32)和78．1％(25／32)，明显高于细菌L型阴性者的p21及p53蛋白的表达阳性串率[12.5％(1／8)，12．5％(1／8)]，P＜0。05。结论 细菌L型参与了p21及p53基因的突变，并在胆囊癌的发生中可能起协同作用。     

Cyclin A和p21cip1在增生性瘢痕成纤维细胞中的表达及与细胞周期相关性的探讨

目的 探讨增生性瘢痕(HS)不同时期成纤维细胞(FB)中细胞周期素A(Cyclin A)、细胞周期蛋白-激酶的抑制因子p21cip1基因及蛋白的表达与同时期FB所处的细胞周期的相关性,为细胞周期相关基因的干预用于HS的防治提供前期理论依据.方法 采集HS不同时段(3、6、12、24个月)瘢痕标本32例,每个时段8例,并以8例正常皮肤作为对照组.利用实时荧光定量PCR法、蛋白质免疫印迹(Western blotting)法检测HS及正常皮肤中Cyclin A和p21cip1的mRNA、蛋白表达水平;用流式细胞术检测HS中FB的细胞周期情况.结果 HS中CyclinA的mRNA及蛋白质表达量在3、6、12、24个月组分别为19.34±2.41、0.99±0.11,19.30±1.42、0.96±0.09,10.73±2.93、0.66±0.58,9.29±0.97、0.65±0.14.p21cip1的mRNA及蛋白质表达量在3、6、12、24个月组分别为2.8±0.69、0.35±0.07;4.95±1.82、0.44±0.07;9.98±1.19、0.56±0.06;10.25±1.46、0.59±0.06.Cyclin A的mRNA和蛋白的表达,3与6个月组比较差异无统计学意义(P>0.05);3、6个月组分别与12、24个月和正常组比较差异有统计学意义(P<0.05);12、24个月与正常组比较差异无统计学意义(P>0.05).p21cip1的mRNA和蛋白的表达,3个月组低于6个月组(P<0.05);3、6个月组分别与12、24个月和正常组比较表达明显降低(P<0.05);12、24个月和正常组比较差异无统计学意义(P>0.05).流式细胞仪检测结果显示3、6个月增生性瘢痕中细胞主要分布在S、G2/M期;而12、24个月组增生性瘢痕及正常皮肤中的细胞多处于G0/G1期.结论 随着HS的发展,HS中CyclinA的mRNA和蛋白的表达强度呈由强至弱的变化,p21cip1的mRNA和蛋白的表达则呈由弱至强的变化.不同时期HS中CyclinA和p21cip1各自的mRNA和蛋白的表达趋势基本一致;不同时期HS中FB的细胞周期分布情况与CyclinA和p21cip1 mRNA和蛋白表达强弱相对应;在HS发生早期对这两个基因进行干预,有可能在控制增生性瘢痕的发生和发展中发挥作用.