肝硬化形成过程中大鼠肝组织组织胺1、2受体mRNA表达的变化

目的研究肝硬化形成过程中大鼠肝组织组织胺1受体（H1R）和组织胺2受体（H2R）mRNA表达的变化。方法用内对照逆转录定量聚合酶链反应（RT-PCR）对经四氯化碳诱导的肝硬化形成过程中2周、4周、6周、8周（各12只）和对照组大鼠（12只）肝组织H1R和H2R的mRNA表达进行研究。结果H1R的mRNA水平：对照组（2．308±0．202）显著高于肝硬化形成过程中的2周（0．756±0．130）、4周（O．999±0．207）、6周（1．127±0．217）、8周（1．564±0．130）（P＜0．01），肝硬化各组间差异有显著性（P＜0．05）。H2R的mRNA水平：对照组（0．851±0．208）显著高于肝硬化形成过程中的2周（0．263±0．104）、4周（0．244±0．092）、6周（0．225±0．047）、8周（0．243±0．062）（P＜0．01），肝硬化形成过程各组间差异无显著性（P＞0．05）。结论大鼠肝组织以H1RmRNA的表达为主，肝硬化形成过程中肝细胞上的H1R和H2RmRNA的表达明显减少。     

肝硬变门静脉高压症大鼠肝组织内皮素—1基因的mRNA表达研究

目的：研究肝硬变大鼠肝组织内皮素－1（ET－1）的基因mRNA表达的变化。方法：半定量逆转录多聚酶链反应（SqRT-PCR)。结果：经SqRT-PCR测定大鼠肝组织ET－1基因的mRNA（integral optical density,IOD)值：各期肝硬变大鼠模型制作2周、4周、6周、8周分别为68330±1096、73836±1125、85712±1283、89215±1366，均明显高于正常对照鼠37745±1066（P＜0．01），但肝硬变大鼠各组之间的差异无统计学意义（P＞0．05）。结论：肝硬变门静脉高压症时大鼠肝组织内ET－1基因的mRNA表达明显增加。     

肝硬化门静脉高压症患者肝脏组织α1紧上腺素受体亚型的mRNA表达

目的 探讨肝硬化门静脉高压症患者肝脏组织α１肾上腺素受体亚型ｍＲＮＡ的表达。方法 应用半定量逆转录聚合酶链反应检测了１２例乙型肝炎后肝硬化门静脉高压症患者和１５例无高血压,无肝脏疾患的胆石症或胃肠道肿瘤患者肝脏组织α１肾上腺素受体亚型ｍＲＮＡ的表达。在同一体系中同时逆转录并扩增α１肾上腺素受体亚型特异性片段和内参ＧＡＰＤＨ片段,以二者的积分密度比值作为该受体亚型的ｍＲＮＡ相对表达量。结果 肝脏组织     

大鼠肝硬化门静脉高压形成过程中内皮素A受体mRNA的表达

目的：观察Wistar大鼠肝硬化门静脉高压形成过程中内皮素A受体（ETA）mRNA在肝脏中的表达,探讨内皮素（ET）及其受体对肝硬化门静脉高压大鼠肝脏的调节机制。方法：CCL4法制备模型。实验共分4组：正常对照组（13只）、肝细胞变性坏死期组（20只）、肝细胞结节状增生期组（20只）、假小叶形成期组（18只）。应用mRNA原位杂交技术确定ETA的部位,从而发现ET在肝脏的作用位点,并对ETAmRNA进行定量分析。结果：Wistar大鼠肝硬化门静脉高压形成过程中,肝脏发生特征性病理改变：肝细胞变性坏死、结节状增生、假小叶形成;门静脉压力呈梯度性升高;外周及门静脉血浆ET水平随门静脉压力升高而降低;肝脏ETAmRNA表达增多,表达主要位于汇管区门静脉小静脉、肝小动脉血管壁,小静脉表达明显高于小动脉,表达水平随ET浓度的降低、门静脉压力的升高而增加。结论：大鼠肝硬化门静脉高压形成过程中外周及门静脉血浆ET水平进行性降低;肝脏微循环ETAmRNA表达量增加,呈现上调趋势;表达部位随肝硬化进展发生特征性变化。     

内皮素受体拮抗剂对肝硬化、门静脉高压大鼠内皮素受体mRNA表达的影响

内皮素(ET) 1是强力缩血管物质,在门静脉压力升高和维持中起重要作用[1] ,ET 1通过与其受体结合而发挥作用。ET受体至少可分为两种亚型,即ETA受体(ETRA)和ETB受体(ETRB) ,其中ETRB根据介导的舒张和收缩作用又分为ETRB1和ETRB2 [2 ] 。本实验旨在观察CCl4诱导的肝硬化、门静脉高压大鼠门静脉压力、肝组织ET受体mRNA表达的变化以及ETA受体拮抗剂(BQ 12 3 )、ETB受体拮抗剂(BQ 788)及两者联合应用对研究结果的影响。一、材料与方法1.实验对象:雄性SD大鼠,体重3 70～40 0 g ,参照文献[3 ]方法制备肝硬化、门静脉高压模型…     

肝硬化大鼠肝组织生长抑素受体亚型mRNA表达的研究

目的 研究在大鼠肝硬化门静脉高压症形成过程中，肝组织生长抑素５种受体亚型ｍＲＮＡ的表达变化。方法 将大鼠３０只随机分为对照组，急性坏死组和肝硬化组。提取样本肝组织总ＲＮＡ，进行逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）后，琼脂糖凝胶电泳条带经过计算机图像分析处理，检测大鼠生长抑素受体亚型ｍＲＮＡ的表达。结果 正常肝组织中ｒＳＳＴＲ４ ｒＳＳＴＲ１，ｒＳＳＴＲ５的ｍＲＮＡ表达量均明显高于ｒＳＳＴＲ３，ｒＳ     

肝硬化形成过程中大鼠肝组织结构上H1,H2受体的放射自显影研究

用光学放射自显影术对四氯化碳诱导的大鼠肝硬化形成过程中肝组织结构上的Ｈ１、Ｈ２受体进行定位研究。结果发现，Ｈ１、Ｈ２受体广泛分布于肝细胞和肝内血管壁上；肝硬化形成过程中，肝组织结构上的Ｈ１、Ｈ２受交对照组显著减少，小叶下肝静脉壁上的Ｈ１受体更明显，受体的上述变化可能是四氯化碳对肝细胞的毒性作用和血管壁上的受体发生了“下行调节”的结果。     

诱生型一氧化氮合成酶基因mRNA在肝硬变门静脉高压症大鼠胃粘膜中的表达

一些文献报道ＮＯ与肝硬变门静脉高压症（ＣＰＨ）高动力循环有关,但诱生型一氧化氮合成酶（ｉＮＯＳ）基因ｍＲＮＡ在ＣＰＨ胃粘膜中的表达情况及酶的活性变化尚不十分清楚,为此我们进行了该方面研究,结果报道如下。 材料和方法 １．动物模型和标本的采集 雄性ＳＤ大鼠３０只,体重１７５～２２０ｇ,平均１９１ｇ。２０只用于制备ＣＰＨ模型,皮下注射６０％ＣＣｌ油性溶液（６０％ＣＣｌ、４０％中性茶油）０．３ｍｌ／１００ｇ体重（首次剂量０．５ｍｌ／１００ｇ体重）,每周注射两次,共注射８周,常温下饲养（１８～２２℃）, １…     

eNOS基因治疗对肝硬化大鼠肝窦容积的影响

目的:观察以eNOS基因导入肝硬化门静脉高压症大鼠后,肝内eNOS表达和肝窦容积的变化;探讨eNOS基因转染对肝窦容积的影响。方法:①建立CC14肝内型肝硬化大鼠模型,分别取10只肝硬化大鼠和10只正常大鼠肝组织,用免疫组化、图像分析系统测定eNOS含量和肝窦容积;②取30只肝硬化大鼠,随机分成3组:内eNOS治疗组(n=10)、Tris对照组(n=10)和空质粒对照组(n=10)。分别经门静脉注射脂质体-eNOS质粒、Tris缓冲液脂质体-空质粒5d后,用RT-PCR和免疫组化方法检测3组大鼠肝内eNOSmRNA、eNOS含量和肝窦容积;结果:①硬化肝内eNOS含量和肝窦容积分别为(3.81±1.09)%和(3.51±0.72)%,均显著低于正常对照组的(14.78±3.06)%和(9.32±1.05)%(P<0.01);两组大鼠肝内eNOS含量与肝窦容积之间均呈显著正相关,相关系数r分别为0.676(P<0.05)和0.703(P<0.05)。②经门静脉注射各组之规定内容5d后,eNOS基因治疗组大鼠肝内eNOSmRNA、eNOS含量和肝窦容积分别为(1.22±0.14)U、(17.38±4.62)%和(5.77±1.49)%,均显著高于Tris处理组或空质粒处理组(P<0.01);3组的eNOS含量与肝窦容积之间均呈显著正相关,r分别为0.799(P<0.01)、0.767(P<0.01)和0.748(P<0.05)。结论:肝硬化时,因肝窦内皮细胞受损,肝内eNOS含量减少,肝内NO产量减少,从而使肝窦收缩     

大鼠肝硬化形成过程中胃黏膜微循环内皮素A受体mRNA的表达及其意义

目的观察大鼠肝硬化门静脉高压形成过程中内皮素A受体mRNA在胃黏膜微循环血管上的表达 ,探讨内皮素及其受体对肝硬化门静脉高压大鼠胃黏膜微循环的调节机制。方法应用mRNA原位杂交确定内皮素A受体的部位 ,并进行半定量分析。结果大鼠肝硬化门静脉高压形成过程中门静脉及外周血浆内皮素水平随门静脉压力升高而降低。胃黏膜内皮素A受体mR NA主要在黏膜基底部的微循环前微动脉和后微静脉血管壁表达 ,其中动脉表达明显强于静脉。其表达与门静脉压力呈正相关 (r =0 86 9,P <0 0 5 ) ,与门静脉及外周血内皮素水平呈负相关 (r =-0 797、- 0 74 1,P <0 0 5 )。结论大鼠肝硬化门静脉高压形成过程中外周及门静脉血浆内皮素水平进行性降低 ;胃黏膜微循环内皮素A受体mRNA表达量增加 ,呈现上调趋势 ;内皮素及其受体mR NA表达变化可能与胃黏膜微循环功能障碍有关。     

肝硬化大鼠肝脏内皮素受体基因的表达与门静脉压力的关系

目的　研究四氯化碳诱导的肝硬化大鼠肝脏内皮素(endothelin, ET)受体基因的表达,并探讨其与门静脉压力的关系。方法　采用逆转录多聚酶链反应(RT PCR)测定大鼠肝组织 ETA受体和ETB受体mRNA的表达水平, 并测量门静脉压力。结果　肝硬化大鼠肝组织 ETA受体(0 4245±0 0612 vs 0 2792±0 1115,P<0 05) 和 ETB受体(0 5984±0 1047 vs 0 2938±0 1399,P< 0 05) mRNA 的表达均较对照组均显著升高;肝硬化大鼠门静脉压力较正常大鼠明显升高(16 08±2 19 vs8 25±2 56 cmH2O,P<0 05),并且ETA受体mRNA的表达与门静脉压力显著正相关(r=0 8074,P<0 05)。结论　四氯化碳诱导的肝硬化大鼠肝组织ET受体 mRNA的表达显著升高,并且 ETA受体 mRNA的表达与门静脉压力显著正相关, 表明 ET受体的高表达在门静脉高压症的发病机制中起重要作用。     

iNOS基因治疗肝硬化门静脉高压症的实验研究

目的探讨iNOS基因治疗肝硬化门静脉高压症(PHT)的效果。方法用脂质体介导真核表达质粒peDNA,／iNOS体外转染肝窦内皮细胞(SEC),检测其转染效率及基因的表达。用CCl4腹腔内注射方法建立肝内型PHT大鼠模型,观察脂质体-pcDNA3/iNOS、脂质体-pcDNA3空质粒、Tris缓冲液门静脉注射治疗后肝内iNOS表达、NO产量及门静脉压力的变化差异。结果真核表达质粒peDNA,／iNOS能有效地转染SEC并表达相应的基因产物;与对照组比较,基因治疗组大鼠肝内iNOS表达和NO产量明显增加,门静脉压力显著降低。结论iNOS基因治疗能增加肝内iNOS的表达,使肝内NO产量增加,肝窦舒张,从而降低肝内阻力和门静脉压力。     

重组Akt腺病毒对CCl4诱导的肝硬化门静脉高压症大鼠模型的影响

目的 研究重组Akt腺病毒对CCl4诱导的大鼠肝硬化门静脉高压症的影响及其作用机制.方法 以细胞内同源重组法构建重组腺病毒Ad-myr-HA-Akt;采用四氯化碳复合法制备肝硬化门静脉高压症大鼠模型.将大鼠模型分为二部分:用于组织学检测的大鼠,在制备大鼠模型的第2周和第6周自尾静脉导入Ad-myr-HA-Akt.第8周时应用Western blot法检测各组大鼠肝组织内Akt,p-Akt,Fas,DR5蛋白的表达.用于检测肝硬化门静脉高压症大鼠,在肝硬化模型的第9周自尾静脉导人生理盐水和Ad-myr-HA-Akt,3 d后测定各组的门静脉压力、平均动脉压和心率.结果 Ad-myr-HA-Akt治疗后Akt组组织学病变减轻,Fas蛋白的表达明显低于肝硬化组、生理盐水组和增强型绿色荧光蛋白(enhance green fluorescent protein,EGFP)组,血清ALT和AST及羟脯氨酸(hydroxyproline,Hyp)均显著低于其他各组,p-Akt蛋白的表达明显高于其他各组,Fas和HSC活化的指标DR5蛋白含量降低.EGFP组在Ad-EGFP转染后,肝组织中可见大量绿色荧光,肺和肾组织中仅见少量荧光,而其他实质器官未见EGFP表达.结论 Akt重组腺病毒能够阻断大鼠肝硬化的发展,可能是防治肝硬化的一条有效途径.     

eNOS基因治疗对肝硬化大鼠肝内血流阻力的影响

目的　探讨内皮性一氧化氮合酶 (endothelialnitricoxidesynthase ,eNOS)对肝硬化大鼠肝内血流阻力 (intrahepaticvascularresistance ,IHVR)和门静脉压力 (portalvenouspressure ,PVP)的影响。方法　 (1 )建立原位肝脏灌流模型 (insituliverperfusion ,ISLP) ,观察去甲肾上腺素 (noradrenalin ,NE)、NG 单甲基 L 精氨酸 (NG monomethyl L arginine,L NMMA)和精氨酸 (L arginine ,L Arg)对肝硬化大鼠门静脉灌注压 (portalperfusionpressure,PP)的影响。 (2 )观察活体门静脉注射L NMMA对肝硬化大鼠PVP的影响。结果　 (1 )ISLP模型中 ,对照组大鼠灌流液中加入L NMMA后PP对NE的反应性显著增加 ,PP峰值增高至 (2 6 .7± 0 . 9)mmHg ;如预先给予L Arg后再加L NMMA ,PP对NE反应性显著低于单用L NMMA时 ,其PP峰值降为 (2 3 .2± 0 . 9)mmHg。eNOS基因治疗 5d后 ,PP对NE的反应性显著低于对照组 (P <0 .0 1 ) ,其PP峰值为 (1 9. 9± 1 .0 )mmHg ;加入L NMMA后PP峰值虽升至 (2 3.5± 2 .0 )mmHg,但仍显著低于对照组PP(P <0 0 1 )。 (2 )活体门静脉注射L NMMA后 ,eNOS治疗组PVP虽由 (1 3. 9±0 . 7)mmHg升至 (1 9. 3± 1 . 0 )mmHg ,但仍显著低于对照组PVP(P <0 .0 1 ) ,活体试验与原位灌注结果相符。结论　e     

正常脾脏与肝硬化脾脏组织基因表达概况分析

目的 了解正常脾脏与肝硬化脾脏的基因表达概况，寻找在两者之间的差异表达基因。方法 以正常脾脏及肝硬化脾脏组织的总RNA反转录合成含有α-^32P dATP的cDNA为探针，与Atlas微阵列表达分析膜进行差异杂交。结果 放射自显影结果经AtlasImage^TM软件分析显示：在所分析的588种已知基因中，CK8、ICE－LAP6、PISSLARE等32个在肝硬化脾脏组织中表达上调，byglycan、Caspase-10、CRAF－1等45个表达下调，参与细胞增殖、凋亡、分化、细胞间相互作用，与细胞侵袭相关的基因表达水平发生了明显改变。结论 通过Atlas微阵列系统分析发现的这些基因的表达改变组成了一个不同情况下脾脏特异的基因表达谱，是人类首次全面系统地研究脾脏的基因表达改变，一些与脾脏变化有关的差异表达基因，对彻底了解脾脏在肝硬化过程中的变化及其所发挥的作用有重要的意义。Altas微阵列技术的应用将为人类了解疾病的发生、发展过程提供一个较好的方法。     

肝硬变门静脉高压症患者肝组织中组胺H1和H2受体变化的研究

目的研究肝硬变门静脉高压症患者肝组织组胺Ｈ１和Ｈ２受体的变化。方法光学放射自显影术。结果Ｈ２受体密度在肝硬变患者肝细胞１６８４±２２６显著低于对照组５１１９±３７６（Ｐ＜００１）;肝静脉２３８８±４０７显著低于对照组３１３０±５２４（Ｐ＜００１）;肝动脉５５６±７１显著低于对照组１７５４±２６１（Ｐ＜００１）;门静脉５２０±５４显著低于对照组１６６４±１７７（Ｐ＜００１）;肝硬变患者Ｈ１受体密度在肝细胞、肝静脉、肝动脉和门静脉与对照组相比差异均无显著性意义（Ｐ＞００５）。结论肝硬变门静脉高压症患者肝细胞及肝内各血管壁的Ｈ２受体显著降低     

前列腺癌与良性前列腺增生中NFKBIA及SREBF2的表达

目的 以实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)技术研究良性前列腺增生(BPH)与前列腺癌(PCa)组织标本NFKBIA及SREBF2 mRNA相对值,探讨NFKBIA及SREBF2比值在前列腺癌诊断中的特异性意义.方法 通过实时荧光定量PCR检测63例PCa、37例BPH及3例正常前列腺组织NFKBIA及SREBF2的表达,比较其在PCa与BPH组织中定量的差异.结果 与BPH比较,PCa组织NFKBIA及SREBF2 mRNA的定量表达值分别下调0.520和上调2.547,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 实时荧光逆转录(RT)-PER定量检测NFKBIA及SREBF2 mRNA为前列腺癌的诊断提供了参考.     

门静脉高压症患者肝外血管平滑肌细胞增生与c-myc基因表达的相关性研究

目的　研究门静脉高压症患者肝外血管平滑肌细胞增生与c mycmRNA表达的关系。方法　应用RT PCR和免疫组化法对 2 8例门静脉高压症患者的脾静脉、12例正常血管分别进行c mycmRNA和增殖细胞核抗原 (PCNA)的检测。结果　门静脉高压症患者脾静脉PCNA蛋白表达阳性指数为 (2 9 8± 4 2 ) % ;c mycmRNA在PCNA蛋白表达阳性组和阴性组分别为 (7.6 1± 1 0 4 ) %和(3 82± 0 92 ) % ,正常对照组血管中PCNA蛋白无表达、c mycmRNA表达为 (1 0 4± 0 2 1) % ,两者同时与对照组比较 ,差异有显著意义 (P <0 0 1)。结论　c myc基因是门静脉高压症患者肝外血管平滑肌细胞增殖的起动基因 ,门静脉血流动力学紊乱激活脾静脉壁平滑肌细胞中原癌基因 ,促使血管平滑肌细胞增殖、迁移和表型改变 ,导致脾静脉血管重塑 ,使血管对缩血管物质反应降低。