人arresten基因转染对自体移植静脉内膜增生的影响

目的:探讨体内转染arresten基因对自体移植静脉内膜增生的影响。方法:建立大鼠自体静脉移植模型。血管吻合术前，用脂质体介导重组质粒pSecTag2-AT（Ⅰ组），空载体pSecTag2转染（Ⅱ组）移植血管，等体积脂质体溶液处理移植血管(空白对照组，Ⅲ组）。各组动物均于4周后切取移植血管，RT-PCR检测移植血管中arresten mRNA的表达；常规HE，Verhoeff弹力纤维染色；计算机图象分析检测移植静脉血管内膜及中膜面积、厚度；免疫组化检测移植血管内膜α-SMA及PCNA的表达；Western blot检测TGF-β1蛋白的表达。结果:Ⅰ组转染的移植静脉中有目的基因mRNA的表达, 而Ⅱ、Ⅲ组无Ⅰ组内膜、中膜面积小均于Ⅱ组和Ⅲ组，差异有显著性（P<0.05）。而内膜面积/中膜面积3组间无统计学差异（P>0.05）；Ⅰ组内膜厚度小于Ⅱ组和Ⅲ组，组间比较有统计学差异（P<0.01）；α-SMA染色表明增生内膜中的细胞是血管平滑肌细胞；PCNA阳性细胞数及表达指数Ⅰ组均低于Ⅱ组和Ⅲ组（P<0.05）；Ⅰ组TGF-β1蛋白的表达明显低于Ⅱ组和Ⅲ组。结论:移植血管转染arresten基因，可有效抑制自体移植静脉内膜的增生，在防治血管移植术后再狭窄方面显示出良好的临床应用前景。     

转染survivin反义寡脱氧核苷酸对移植血管内膜增生的影响

目的研究survivin基因的反义寡脱氧核苷酸（ASODN）对移植血管内膜增生的影响。方法Wistar大鼠60只，建立自体静脉移植模型，术后随机分为5组：对照组，survivin ASODN 50μg组，200μg组，正义对照组，lipoectin＋pluronic组。分别施加不同的处理因素，在移植后1，2周取材。用组织形态学方法比较内膜增生程度；用半定量RT-PCR检测survivin基因的mRNA表达；Western blot检测survivin基因的蛋白产物表达；免疫组化方法检测survivin及增殖细胞核抗原（PCNA）的表达，TUNEL法检测血管平滑肌细胞（VSMC）凋亡。结果静脉移植1～2周内膜增生明显，局部转染50μg survivin ASODN后明显抑制内膜增生（P〈0．05），200μg组受抑制程度较50μg组更为显著（P〈0．05）。静脉移植后，对照组survivin的mRNA及蛋白产物表达显著增加，而survivin ASODN组却显著减少（P〈0．05），VSMC中PCNA表达也同时减少，而TUNEL阳性细胞明显增加。结论survivin ASODNs可显著抑制移植静脉的内膜增生；其作用可能是通过抑制survivin的基因及蛋白产物表达，促进VSMC凋亡而实现的。     

纤维蛋白胶联合转染金属蛋白酶组织抑制剂-1预防自体移植静脉再狭窄

目的 为减少冠状动脉旁路移植术后移植静脉再狭窄,探讨术中应用纤维蛋白胶联合转染金属蛋白酶组织抑制剂-1(TIMP-1)对自体移植静脉再狭窄的影响及其作用机制.方法 将24只新西兰大耳白兔随机分为3组,每组8只,即非支架组(NS组)、纤维蛋白胶外支架组(FS组)、纤维蛋白胶联合转染TIMP-1组(TS/FS组) 建立兔颈外静脉颈总动脉旁路移植术模型.术后28 d取出移植静脉桥,进行组织病理分析移植静脉内膜厚度、中膜厚度及内膜面积、中膜面积,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot法检测各组移植静脉中TIMP-1基因的表达.结果 术后28d,TS/FS组移植静脉内膜厚度及内膜面积分别为(37.98 ±4.19) μm及(0.557±0.049) mm2,与NS组的( 76.87±4.32) μm、(1.025 ±0.103)mm2及FS组的(50.28 ±4.69) μm、(0.743±0.052) mm2比较,明显减少(P＜0.05);TS/FS组移植静脉中膜厚度及中膜面积分别为(28.45 ±3.01) μm及(0.458 ±0.053) mm2,与NS组的(55.98±4.33) μm、(0.944±0.084) mm2及FS组的(36.46±4.36) μm、(0.643 ±0.056)mm2比较,差异有统计学意义(P＜0.05).与NS组和FS组比较,TS/FS组TIMP-1基因的mRNA和蛋白表达明显增强,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 纤维蛋白胶联合血管外膜TIMP-1转染能够实现移植静脉TIMP-1基因的过表达;纤维蛋白胶外支架联合TIMP-1对移植静脉内膜和中膜增生有协同抑制作用.     

吡格列酮对静脉旁路血管内膜增生的影响

目的 探讨吡格列酮(PIO)对静脉旁路血管内膜增生的影响及可能机制.方法 将32只SD大鼠随机分为2组,分别予(3mg·kg-1·d-1)的PIO或盐水灌胃,1周后行自体右颈外静脉-颈总动脉移植术,术后持续给药2、4周后取静脉旁路血管.应用图像分析软件计算内膜增厚情况,westernbolt检测ERK1/2激活情况.体外培养人大隐静脉平滑肌细胞,采用CCK-8法检测细胞增殖,TUNEL法检测细胞凋亡.结果 与同期对照组相比,PIO明显减少术后2周[(8.56±1.64)μm对(25.44±0.89) μm,P＜0.01]和4周[(10.51 ±1.47) μm对(35.69±1.07) μm,P＜0.01]静脉旁路血管内膜厚度,抑制ERK1/2活性.PIO显著抑制PDGF-BB诱导的细胞增殖并促进细胞凋亡.结论 PIO能有效抑制静脉旁路血管术后内膜增生,可能与其下调ERK1/2活性,抑制血管平滑肌细胞增殖并促进凋亡密切相关.     

人组织因子途径抑制因子基因转染对移植静脉新生内膜的影响

目的 为减少冠状动脉旁路移植术后移植静脉再狭窄,探讨人组织因子途径抑制因子(tissue factor pathway inhibitor,TFPI)基因转染对移植静脉内膜增生的影响. 方法 构建真核表达质粒pCMV-(Kozak)TFPI.将48只日本大耳白兔随机分为3组,每组16只,即TFPI转染组、空载体对照组和空白对照组.建立颈总动脉旁路移植模型.吻合前,TFPI转染组移植静脉内采用阳离子脂质体pCMV-(Kozak)TFPI(400μg)和腔内加压灌注法(30 min)转染,空载体对照组以空质粒pCMV(400 μg)代替pCMV-(Kozak)TFPI,空白对照组不予干预.术后3 d,用RT-PCR、Westernblot和免疫组织化学法检测外源基因在移植静脉中的表达.术后30 d,血管多普勒测最移植静脉管腔内径和管壁厚度;组织病理标本测量内膜面积和中膜面积,并计算其比值;透射电镜观察移植静脉新生内膜的细胞构成. 结果 TFPI转染组移植静脉中有人TFPI基因mRNA和蛋白表达,两对照组未见表达.TFPI转染组移植静脉管腔内径为(2.68±0.32)mm,大于空载体对照组(2.41±0.23)mm和空白对照组(2.38±0.21)mm,差异均有统计学意义(P＜0.05).TFPI转染组管壁厚度为(1.09±0.11)mm,小于空载体对照组(1.28±0.16)mm和空白对照组(1.34±0.14)mm,差异均有统计学意义(P＜0.01).TFPI转染组移植静脉内膜面积和内膜、中膜面积比值分别为(0.62±0.05)mm2及0.51±0.08,均小于两对照组的(0.70±0.05)mm2、0.58±0.06及(0.72±0.04)mm2、0.59±0.08(P＜0.05);中膜面积各组差异无统计学意义(P＞0.05).透射电镜观察,TFPI转染组移植静脉内膜未见甲滑肌细胞,两对照组均见甲滑肌细胞. 结论 人TFPI基凶转染减少移植静脉内膜增生.     

微泡造影剂结合超声介导一氧化氮合成酶基因转染防治移植静脉再狭窄

目的 探讨微泡造影剂及超声辐照介导内皮型一氧化氮合成酶(eNOS)基因转染防治移植静脉血管桥再狭窄的可行性.方法 重组真核表达载体pcDNA3.1-eNOS经微泡造影剂及超声辐照介导体外转染大鼠颈外静脉,再将静脉段间置植入颈总动脉,建立SD大鼠颈外静脉-颈总动脉移植模型.于术后4周取移植静脉标本分别进行苏木素-伊红(HE)染色,免疫组织化学染色及Western blot法分析,观察eNOS基因在静脉桥中的功能表达和静脉桥新生内膜的增生.结果 Western blot法分析表明微泡造影剂及超声辐照介导eNOS基因转染组的移植血管桥内eNOS表达最明显;增殖细胞核抗原( PCNA)检测阳性率为(21.04±3.51)％,细胞凋亡指数为(12.11±1.23)％,新生内膜厚度(25.0±3.5) μm,内膜/中膜比值为0.43,均明显低于其他组(P＜0.05).结论 微泡造影剂及超声辐照介导eNOS基因转染可以有效抑制移植静脉桥新生内膜的增生.     

eNOS基因转染预防静脉移植血管再狭窄

目的 应用含牛内皮型一氧化氮合成酶(eNOS)基因重组腺病毒(Ad5CMVNOSⅢ)转染静脉移植血管、观察eNOS基因预防静脉移植血管再狭窄的作用。方法 将21只杂种犬分为3组，手术对照组、Ad5CMVLac—Z(含大肠杆菌β半乳糖苷酶基因重组腺病毒)对照组和Ad5CMVNOSⅢ干预组。在犬颈静脉、颈动脉旁路血管移植术中分别应用Ad5CMVNOSⅢ病毒液或Ad5CMVLac—Z病毒液常温浸泡法感染静脉移植血管30分钟，术后28天病理切片观测移植血管新内膜增生状况。结果 与正常犬颈外静脉相比，手术对照组、Ad5CMVLac—Z对照组和Ad5CMVNOSⅢ干预组颈外静脉移植血管内膜／中膜比较均有不同程度增加(P＜0．05)，但Ad5CMVNOSⅢ组内膜／中膜比显著低于另外2个对照组(P＜0．05)，新内膜增生明显减轻。结论 Ad5CMVNOSⅢ感染静脉旁路移植血管对预防再狭窄有一定作用。     

反义寡核苷酸抑制Survivin基因表达对移植静脉内膜增生的影响

目的研究反义寡脱氧核苷酸（ASODN）抑制Survivin基因表达对移植静脉内膜增生的抑制作用。方法Wistar大鼠60只，建立自体静脉移植模型，术后随机分为：对照组、Survivin ASODN 50、200μg组、正义对照组、Lipofectin＋pluronic等五个组，施加不同的处理因素，在移植后1、2周取材。组织形态学方法比较内膜增生程度，逆转录．聚合酶链反应（RT-PCR）检测Survivin基因的mRNA表达，Westem blot检测Survivin基因的蛋白产物表达，免疫组织化学方法检测Survivin及增殖细胞核抗原（PCNA）的表达，脱氧核苷酸转移酶末端标记法（TUNEL）检测血管平滑肌细胞（VSMC）凋亡的变化。结果移植后1、2周内膜增生明显，局部转染50μg Survivin ASODN组内膜增生明显受抑制（P〈0．05），200μg组受抑制程度更为明显（P〈0．05）；与对照组相比，Survivln ASODN组Survivin的mRNA及蛋白产物表达显著减少（P〈0．05），PCNA阳性表达同时减少，而TUNEL阳性细胞却明显增加。结论Survivin ASODN可显著抑制移植静脉的内膜增生，其作用可能是通过抑制Survivin基因及其蛋白产物表达，从而抑制VSMC增殖、促进其凋亡而实现的。     

脂质体与腺病毒转染EDRz抑制自体移植静脉内膜增生的比较研究

目的探讨以脂质体和腺病毒为载体,早期生长反应基因-1 DNA酶(Egr-1 DNA enzyme,EDRz)局部外用对自体移植静脉血管平滑肌(VSMC)增殖和内膜增生的抑制作用。方法大鼠建立自体静脉移植模型后随机分为脂质体组、腺病毒组和对照组,两实验组分别用脂质体-EDRz和腺病毒-EDRz涂抹移植静脉行在体转染。于术后1,2,6,24 h及3,7,14,28 d取材,荧光显微镜检测移植静脉的转染情况;采用原位杂交方法检测Egr-1 mRNA的表达;用免疫组织化学方法检测Egr-1蛋白表达,同时进行组织形态学观察。结果术后1 h,EDRz主要位于移植静脉的外膜、中膜和部分内皮细胞。脂质体组荧光灰度值为70.3±13.5,腺病毒组荧光灰度值为60.5±11.2。术后2～24 h,EDRz主要位于移植静脉的中膜;移植7 d,EDRz主要位于移植静脉的内膜。移植早期Egr-1蛋白表达主要位于中膜的血管平滑肌细胞(VSMC)和部分单核细胞、内皮细胞;移植后期未检测到Egr-1 DNA酶的表达。移植后期在中膜和新生内膜的VSMC均未检测到Egr-1蛋白的表达。移植2 h阳性表达率,脂质体组为(15.3±4.2)%,腺病...     

局部应用紫杉醇预防兔移植静脉再狭窄

目的探讨局部应用紫杉醇对移植静脉再狭窄的预防作用。方法将96只兔随机分为3组，对照组，组Ⅰ，组Ⅱ，每组32只。3组兔均行颈外静脉与颈总动脉旁路移植术，紫杉醇与生物蛋白胶混合物局部喷涂于组Ⅰ（紫杉醇1μg）和组Ⅱ（紫杉醇8μg）移植血管表面，对照组单纯喷涂生物蛋白胶。分别于术后1，2，4和6周采集颈静脉标本，进行形态学和免疫组织化学分析。结果术后1，2，4和6周组Ⅱ移植血管内膜厚度均较对照组减少（30．10±4．50pmVS．48．20±9．16μm，40．70±6．91μmVS．54．20±8．67μm，54．70±7．11FmVS．68．60±13．72μm，68．70±8．24μmVS．76．40±12．98μm，P〈0．05）；组Ⅰ和组ⅡCD8和金属硫蛋白阳性细胞表达在各时间段均较对照组显著减少（P〈0．05）。结论在兔颈动脉旁路移植模型中，静脉移植血管周围应用紫杉醇可以抑制移植血管新生内膜的增生。     

抗生素和血清制剂治疗小鼠脓毒症时对血浆内毒素和细胞因子的影响

目的通过观察脓毒症小鼠的治疗过程,研究抗生素和血清制剂对血中内毒素脂多糖（ＬＰＳ）和细胞因子的影响。方法脓毒症模型采用ＮＨ１小鼠,腹腔大肠杆菌。治疗分３组,先锋霉素５（ＣＥＦ）,新生小牛血清（ＮＢＳ）,生理盐水（ＮＳ）。结果ＮＢＳ组的７２小时生存率明显高于ＮＳ组（Ｐ＜０．０５）。ＣＥＦ组３小时白细胞计数低于ＮＳ组（Ｐ＜０．０５）。ＮＢＳ组的１、３小时ＬＰＳ水平低于ＮＳ对照组（Ｐ＜０．０５）,血ＩＬ１和ＴＮＦ低于ＮＳ组（Ｐ＜０．０５）。结论抗生素对抑制白细胞升高起主导作用,对ＬＰＳ和细胞因子活性无明显抑制作用。血清制剂可能同时具有抗休克和抗炎症的双重作用,对提高早期生存率起重要作用。     

高张氯化钠右旋糖酐液在犬烧伤休克延迟复苏中的作用

目的从血流动力学、心肌力学及代谢等方面探讨高张氯化钠右旋糖酐液（７．５％氯化钠＋６％右旋糖酐７０，ＨＳＤ）在烧伤休克延迟复苏中的作用。方法采用犬３５％ＴＢＳＡⅢ度烧伤模型，伤后６ｈ分别用乳酸林格液及ＨＳＤ进行复苏，并以每ｈ尿量为１０ｍｌ／ｋｇ及心输出量为伤前值的７０％～８０％来调整输液速度及输液量，观察ＨＳＤ在复苏中容量负荷、左心室等容收缩期最大压力变化速率及左心室舒张期压力下降最大变化速率（±ｄｐ／ｄｔｍａｘ）、心脏指数（ＣＩ）、氧供给（ＤＯ２）及氧消耗（ＶＯ２）等的变化。结果ＨＳＤ在烧伤休克延迟复苏伤后第一个２４ｈ输液量比乳酸林格液复苏少３０５６％，其中复苏后４ｈ的输液量比乳酸林格液少５９５０％，在复苏后０５～２ｈ，＋ｄｐ／ｄｔｍａｘ、ＣＩ、ＤＯ２及ＶＯ２的增加幅度明显高于乳酸林格液复苏。结论ＨＳＤ在烧伤休克延迟复苏中具有容量负荷小、改善心肌功能及促进组织代谢等作用。     

大鼠胰岛移植物制备与异种移植

增加胰岛收获量，提高胰岛纯度一直是胰岛移植中面临的重要问题，本实验经胰管注射胶原酶，胰静止消化分离成年大鼠胰岛纯度一直是胰岛葡聚糖离心纯化。纯化后胰岛收获量为６１０－８２０个／胰纯度达９２％；胰岛形态结构完整，内分泌细胞超微结构保持良好，对葡萄糖刺激反应胰岛素释放量是基本分泌水平的８倍；异种移植可逆转实验性糖尿病小鼠的高血糖达一周。     

同供体肝细胞预先输入对异种胰岛移植物存活影响的实验研究

应用胶原酶消化分离大鼠胰岛细胞，以Ｆｉｃｏｌｌ密度梯度离心纯化，同时分离大鼠肝细胞。以链脲霉素制备小鼠糖尿病模型２４只。随机分为３组。实验组小鼠预先输入供体大鼠肝细胞，６在后再经门静脉植入同供体经培养的胰２岛细胞。对照１组为空白对照组，不予任何处置，对照２组单纯植入胰岛细胞。     

Endostatin抑制高转移性人肝癌皮下移植瘤的生长

目的　探讨Ｅｎｄｏｓｔａｔｉｎ 对高转移潜能肝癌ＬＣＩＤ２０ 生长的抑制作用。方法　ＬＣＩＤ２０ 组织植入裸鼠皮下,分别采用不同剂量的Ｅｎｄｏｓｔａｔｉｎ、顺铂以及二者联合治疗。每５ 天测量肿瘤的长短径。结果　２ ｍｇ·ｋｇ－ １·ｄ－ １ 的Ｅｎｄｏｓｔａｔｉｎ 对肿瘤生长无作用,４ ｍｇ·ｋｇ－１·ｄ－ １ 的Ｅｎｄｏｓｔａｔｉｎ 和１ ｍｇ·ｋｇ－ １·ｄ－ １的顺铂对肿瘤生长有抑制作用,而联合用药组对肿瘤生长的抑制更强。结论　足量血管形成抑制剂可抑制肝癌生长;与细胞毒性药物联合应用可提高疗效。     

Rxa对L02细胞增殖的细胞周期分析和对Ki-67、CyclinD1、PCNA蛋白表达的影响

目的　探讨丹参提取物Ｒｘａ 对正常肝细胞（Ｌ０２ 细胞） 增殖速率的影响。方法　应用流式细胞术（ＦＣＭ）分别测定Ｌ０２ 细胞Ｒｘａ 处理组（Ｌａ 组） 和未处理组（Ｌ组）０、２、４、８、１２ 小时Ｇ０Ｇ１ 、Ｓ、Ｇ２Ｍ 期细胞指数,同步进行Ｋｉ６７、Ｃｙｃｌｉｎ Ｄ１ 、ＰＣＮＡ 蛋白表达的免疫组化分析。结果　Ｌａ 组细胞增殖速率较快,Ｋｉ６７ 抗原表达相对较强,ＣｙｃｌｉｎＤ１、ＰＣＮＡ 表达相对提前。结论　Ｒｘａ 可能促进Ｌ０２ 细胞增殖。     

内源性NO对烧伤休克大鼠微循环的保护作用

目的探讨ＮＯ在烧伤休克发病中的作用及机制。方法采用大鼠４０％体表面积深Ⅱ度烫伤模型，观察ＮＯ合成酶抑制剂Ｌ－ＮＡＭＥ和ＮＯ合成前体Ｌ－Ａｒｇ对动物平均动脉压、肌肉微循环、血浆中ＮＯ－２／ＮＯ－３浓度和存活时间的影响。结果烧伤后ＮＯ合成增多，同时平均动脉压下降，肌肉微循环紊乱；抑制ＮＯ生成可提升血压，但却加重微循环紊乱，加速动物死亡；促进ＮＯ合成则明显改善微循环，延长动物存活时间。结论ＮＯ大量合成是机体在烧伤早期的一种保护性反应     

乳腺粘液癌临床病理分析

作者分析了２９４例乳腺癌手术中８例粘液癌的临床病理特点。粘液癌是临床上少见的特殊组织类型，以粘液产生为特征，分单纯型和混合型，与通常型乳腺癌相比，其淋巴结转移低（２５％），预后良好。分析其原因①粘液对癌浸润形成防御屏障；②癌细胞自身产生的粘液阻碍其代谢。一般对混合型以根治术为原则，单纯型可以考虑缩小手术。     

丹参对大鼠缺血后残肝有效血流量的影响

目的　探讨丹参对大鼠缺血后残肝有效血流量的影响。方法　应用ＳＰＥＣＴ测定鼠残肝有效血流量变化。结果　肝部分切除术后残肝有效血流量下降（ Ｐ＜ ０ ．００１） ;缺血组残肝有效血流量明显低于对照组（ Ｐ＜０ ．００１）,术后第７ 天仍低于术前水平（Ｐ＜ ０．０５）;丹参组残肝有效血流量明显高于缺血组（ Ｐ＜ ０．００１）,术后第７ 天达正常水平。结论　缺血残肝有效血流量下降,丹参能增加缺血残肝有效血流量,对残肝再生产生有益的影响。     

Ki-67抗原在胆囊良恶性肿瘤中的表达

目的 观察Ｋｉ－６７抗原在胆囊良恶性肿瘤中的表达强度与肿瘤的分级分期、治疗效果和预后的关系。方法 采用免疫组织化学（ＡＰＡＡＰ）方法,用抗人Ｋｉ－６７抗原的等８效抗体ＭＩＢ－１比较研究Ｋｉ６７蛋白在良恶性胆囊肿瘤和正常胆囊组织中的表达情况,对比较不同胆囊组织中细胞增殖的情况。结果 Ｋｉ－６７蛋白在胆囊癌组织中表达的阳性指数率显著高于胆囊良性肿瘤及正常胆囊组织（Ｐ〈０．０５）。但Ｋｉ－６７蛋白的表达