抗纤软肝颗粒药物血清对肝星状细胞整合素信号及凋亡的影响

目的：探讨抗纤软肝颗粒药物血清对肝星状细胞增殖、凋亡的影响及整合素信号通路的下游信号分子FAK在其中的作用。方法：将传代培养的大鼠肝星状细胞系（HSC—T6）与中药复方抗纤软肝颗粒药物血清（5％、10％、20％）共同培养48h后，应用MTT法测定细胞增殖；应用流式细胞仪测定细胞凋亡；采用逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）方法检测FAKmRNA的表达。结果：抗纤软肝颗粒药物血清，均能显著抑制HSC—T6增殖，20％药物血清组作用最强（P〈0．05）；流式细胞仪测定结果显示抗纤软肝颗粒药物血清均可诱导HSC凋亡（P〈0.05）；抗纤软肝颗粒药物血清能够使HSC的FAKmRNA的表达下调。结论：抗纤软肝颗粒能够抑制HSC增殖及诱导凋亡HSC。其作用可能与其抑制整合素信号通路下游信号分子FAKmRNA的表达有关。     

抗纤软肝颗粒含药血清对肝星状细胞黏着斑激酶mRNA、蛋白表达的影响

目的:探讨抗纤软肝颗粒含药血清对肝星状细胞黏着斑激酶(FAK)mRNA、蛋白表达的影响。方法:运用细胞培养技术,以hsc-t6细胞系为研究对象,分为(1)空白包被+10%生理盐水血清组;(2)纤维连接蛋白(FN)+10%生理盐水血清组;(3)FN+5%抗纤软肝颗粒含药血清(kxr)组;(4)FN+10%kxr组;(5)FN+20%kxr组。按以上分组进行药物干预,干预后继续培养48h。应用免疫细胞组织化学方法检测FAK蛋白的表达,采用RT-PCR法测定FAKmRNA的表达。结果:kxr组肝星状细胞的FAKmRNA、蛋白表达均显著下调,分别减少了72.78%和27.88%,78.82%和44.85%,85.51%和57.58%,与对照组及FN组相比,5%kxr组(P<0.05),10%kxr组、20%kxr组(P<0.01)。结论:kxr能在转录及翻译水平抑制FAKmRNA、蛋白的表达,从而阻抑了整合素激活的FAK途径的信号转导。     

抗纤软肝颗粒对肝星状细胞整合素α5β1蛋白表达的影响

目的观察抗纤软肝颗粒对肝星状细胞整合素α5β1、蛋白表达的影响。方法运用细胞培养技术,以HSC-T6细胞系为研究对象,分为空白包被+10%生理盐水组,纤维连接蛋白(FN)+10%生理盐水组,FN+5%抗纤软肝颗粒含药血清(KXR)组,FN+10%KXR组,FN+20%KXR组。按以上分组进行药物干预,干预后继续培养48h。采用MTT法检测细胞增殖,甲苯胺蓝染色方法测定细胞黏附率,流式细胞仪测定HSC凋亡;应用免疫细胞组织化学方法检测整合素α5β1蛋白的表达。结果抗纤软肝颗粒含药血清组HSC的整合素α5β1蛋白表达显著下调,与对照组及FN组相比有显著性差异(P0.05,P0.01)。结论抗纤软肝颗粒能够下调HSC整合素α5β1的表达,可能是其阻抑整合素信号转导的位点之一。     

抗纤软肝冲剂药物血清对肝星状细胞增殖的影响

目的从细胞学水平探讨抗纤软肝冲剂抗肝纤维化的作用机制.方法采用酶消化法、密度梯度离心法,分离正常大鼠肝星状细胞(HSC),培养、鉴定及传代.制备抗纤软肝冲剂药物血清,温育传一代HSC,并设生理盐水组和秋水仙碱组为对照.3H-proline掺入法测定细胞活力;3H-TdR掺入法和MTT比色法测定细胞增殖.结果抗纤软肝冲剂组药物血清对细胞形态无影响,还能明显提高细胞的3H-proline掺入(P＜0.01),明显抑制细胞的3H-TdR掺入量和MTT转化(P＜0.01),且对MTT的抑制作用呈浓度依赖性递增趋势.结论抗纤软肝冲剂能提高细胞活力,无细胞毒性作用;能抑制HSC的增殖,这可能是该方抗肝纤维化的细胞学机制之.     

抗纤软肝颗粒对肝星状细胞细胞外信号调节激酶1mRNA、蛋白表达的影响

目的:探讨抗纤软肝颗粒对肝星状细胞细胞外信号调节激酶1(ERK1)mRNA、蛋白表达的影响。方法:运用细胞培养技术,以hsc-t6细胞系为研究对象,分为(1)空白包被+10%生理盐水组、(2)纤维连接蛋白(FN)+10%生理盐水组、(3)FN+5%抗纤软肝颗粒含药血清(kxr)组、(4)FN+10%kxr组、(5)FN+20%kxr组。按以上分组进行药物干预,干预后继续培养48h。应用免疫细胞组织化学方法检测ERK1蛋白的表达,采用RT-PCR法测定ERK1mRNA的表达。结果:与FN组相比,kxr组肝星状细胞的ERK1mRNA、蛋白表达均显著下调,分别减少了54.36%(35.98%)、66.08%(49.59%)、72.82%(59.15%),均有显著性差异。结论:kxr能够在转录及翻译水平抑制ERK1mRNA、蛋白的表达,从而阻抑了整合素激活的MAPK途径的信号转导。     

抗纤软肝颗粒对肝星状细胞增殖与凋亡的影响

目的:研究抗纤软肝颗粒(KXR)对肝星状细胞增殖、凋亡及凋亡相关蛋白的影响.方法:传代培养的大鼠肝星状细胞系HSC-T6与中药复方抗纤软肝颗粒(终浓度为5mg/ml、2.5mg/ml、1.25mg/ml)及药物血清(5%、10%、20%)共同培养48小时后,应用MTT法测定细胞增殖,TUNEL法及流式细胞仪测定细胞凋亡、免疫组化检测凋亡相关蛋白Bcl-2/Bax.结果:抗纤软肝颗粒无论是药物还是含药血清,均能显著抑制HSC-T6增殖,并使细胞周期阻滞于S期,在安全浓度范围内,5mg/ml组和10%药物血清组作用最强(P＜0.01); 并可诱导HSC凋亡, 且凋亡抑制分子Bcl-2表达下调, 促凋亡分子Bax表达增强(P＜0.01).结论:抗纤软肝颗粒抗肝纤维化的作用机制可能在于抑制肝星状细胞增殖,并通过下调Bcl-2/Bax比率,促进HSC凋亡.     

抗纤软肝冲剂药物血清对肝星状细胞增殖和胶原合成的影响

我们既往的研究表明 [1,2 ] ,抗纤软肝冲剂对于肝硬变患者和实验性肝纤维化大鼠 ,都具有良好的治疗作用。本实验采用血清药理学方法 ,观察该方对肝星状细胞 ( HSC)增殖和胶原合成的影响 ,从细胞学水平探讨该方抗肝纤维化的作用机理。1　材料和方法1 .1　材料1 .1 .1　动物　 Wisitar大鼠 1 5只 ,体重 40 0 g～5 0 0 g,购自湖北医工所 ,普通饲料喂养。1 .1 .2　药物　抗纤软肝冲剂 (海藻 30 g,鳖甲 30 g,牡蛎 30 g,丹参 2 0 g,莪术 1 0 g) ,由湖北中医学院附院制剂科制成煎剂 ,每毫升含生药 2 .4g;秋水仙碱 ,由上海化学试剂站进口分装 ,批…     

抗纤软肝冲剂药物血清对肝星状细胞胶原代谢及其相关基因表达的影响

目的 :从细胞分子学水平探讨抗纤软肝冲剂抗肝纤维化的作用机制。方法 :抗纤软肝冲剂药物血清温育传一代HSC ,以生理盐水和秋水仙碱为对照。ELISA测定细胞上清Ⅰ型胶原 ,并测定细胞层总蛋白以校正胶原含量 ;半定量法RT -PCR法检测Ⅰ型胶原、间质胶原酶 (MMP1)的mRNA表达。结果 :抗纤软肝冲剂组细胞上清中的Ⅰ型胶原含量明显低于其它两组 (P <0 .0 1) ;能明显抑制细胞的Ⅰ型胶原mRNA表达 (P <0 .0 1) ,且能促进MMP1的mRNA表达 (P <0 .0 1)。结论 :抗纤软肝冲剂能明显抑制HSC的胶原基因表达和促进间质胶原酶基因表达 ,从而可达到抑制胶原合成 ,促进胶原降解 ,这可能是抗纤软肝冲剂抗肝纤维化的细胞分子学机制之一。     

抗纤软肝中剂药物血清对肝星状细胞胶原代谢及其相关基因表达的影响

目的从细胞分子学水平探讨抗纤软肝中剂抗肝纤维化的作用机制.方法抗纤软肝中剂药物血清温育传一代HSC,以生理盐水和秋水仙碱为对照.ELISA测定细胞上清Ⅰ型胶原,并测定细胞层总蛋白以校正胶原含量;半定量法RT-PCR法检测Ⅰ型胶原、间质胶原酶(MMP1)的mRNA表达.结果抗纤软肝冲剂组细胞上清中的Ⅰ型胶原含量明显低于其它两组(P＜0.01);能明显抑制细胞的Ⅰ型胶原mRNA表达(P＜0.01),且能促进MMP1的mRNA表达(P＜0.01).结论抗纤软肝冲剂能明显抑制HSC的胶原基因表达和促进间质胶原酶基因表达,从而可达到抑制胶原合成,促进胶原降解,这可能是抗纤软肝冲剂抗肝纤维化的细胞分子学机制之一.     

抗纤软肝冲剂药物血清对激活肝星状细胞表达Ⅰ型前胶原及TGF-β_1 mRNA的影响

目的 :探讨抗纤软肝冲剂抗肝纤维化的作用机理。方法 :分离正常大鼠肝星状细胞 ,并传代培养。用抗纤软肝冲剂给正常大鼠灌胃 ,制备药物血清 ,温育培养细胞 72h ,提取细胞总RNA ,RT PCR法分析Ⅰ型前胶原、TGF β1mRNA的表达。结果 :抗纤软肝冲剂药物血清能显著抑制肝星状细胞的Ⅰ型前胶原及TGF β1mRNA的表达。结论 :抗纤软肝冲剂抗肝纤维化的机理之一是调控肝星状细胞的Ⅰ型前胶原及TGF β1mRNA的表达     

抗纤软肝冲剂对肝星状细胞胶原降解相关基因表达的影响

目的 从细胞分子水平研究抗纤软肝冲剂对肝星状细胞(HSC)胶原降解的影响。方法 抗纤软肝冲剂药物血清温育传一代HSC，以生理盐水和秋水仙碱为对照。ELISA法测定细胞上清I型胶原，并测定细胞层总蛋白以校正胶原含量；半定量RT—PCR法检测间质胶原酶(MMN)和金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1）的mRNA表达。结果 抗纤软肝冲剂组细胞上清中的I型胶原含量明显低于其他两组(P＜0．05或P＜0．01)；明显促进细胞MMN的mRNA表达(P＜0．05或P＜0.01)，显著抑制细胞TIMP-1的mRNA表达(P＜0．05或P＜0．01)。结论 抗纤软肝冲剂能促进MMN基因表达，抑制TIMP-1基因表达，从而促进胶原降解，这可能是该方抗肝纤维化的细胞分子学机制之一。     

抗纤软肝冲剂对肝星状细胞自分泌转化生长因子β1的影响

目的：从细胞分子水平研究抗纤软肝冲剂对肝星状细胞(HSC)表达转化生长因子β1(TGF-β1)的影 响。方法：抗纤软肝冲剂药物血清温育传一代HSC,以生理盐水和秋水仙碱为对照。免疫细胞化学分析TGF-β1 的 蛋白合成；半定量RT-PCR 法检测TGF-β1 的mRNA 表达量。结果：抗纤软肝冲剂能明显抑制HSC 的自分泌TGF-β1 及其mRNA 表达(P<0.01)。结论：抗纤软肝冲剂能抑制HSC 的TGF-β1 的基因和蛋白表达,阻断其自分泌放大活化 效应,这可能是该方抗肝纤维化的细胞分子学机制之一。     

软肝丸药物血清对肝星状细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的影响

目的研究软肝丸药物血清对肝星状细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的影响。方法传代培养大鼠肝星状细胞(HSC)系HSC-76与不同剂量软肝丸(大、中、小剂量组)共同培养48小时,应用Annexin-V-碘化丙锭染色检测软肝丸对大鼠HSC凋亡的影响;免疫组化检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax水平。结果软肝丸能使大鼠HSC凋亡明显增多,同时可使凋亡抑制分子Bcl-2表达下调,使凋亡分子Bax表达增强(P0.01)。结论软肝丸可下调Bcl-2/Bax比率,促进HSC凋亡。     

丹芍化纤胶囊对体内外活化肝星状细胞增殖的影响

目的:研究中药复方制剂丹芍化纤胶囊对体内外活化肝星状细胞(HSCs)增殖的影响.方法:(1)体内实验:雄性Wistar大鼠57只分为正常组、模型组、治疗组.除正常组外,其余各组采用CCl4、饮酒、高脂低蛋白饮食等复合病因刺激制备肝纤维化动物模型8周,然后治疗组给予丹芍化纤胶囊(1g/kg体重)灌胃治疗8周.实验结束时部分大鼠用于测定肝功能及肝脏纤维化程度;部分用于分离HSCs,流式细胞仪检测细胞周期百分比.(2)体外实验:制备丹芍化纤胶囊大鼠药物血清;分离培养大鼠HSCs,并分为小牛血清组、正常大鼠血清组、丹芍化纤药物血清组,分别加入5%、10%、20%以上3种血清干预培养的HSCs,MTT比色法测定原代HSCs增殖情况.结果:(1)体内实验:治疗组较模型组肝功能、肝脏纤维化程度及HSCs增殖明显减轻.(2)体外实验:丹芍化纤药物血清组较同浓度小牛血清组、正常大鼠血清组明显抑制HSCs增殖,且此作用呈剂量依赖性.结论:丹芍化纤胶囊能显著抑制体内外HSCs增殖.     

苦杏仁苷对大鼠肝星状细胞HSC—T6增殖和Bax基因表达的影响

目的：研究苦杏仁苷对大鼠肝星状细胞HSC—T6增殖的影响和对凋亡基因Bax的调控作用。方法：利用噻唑蓝染色法动态检测不同浓度的苦杏仁苷对大鼠HSC—T6细胞增殖的影响。利用PCR法检测苦杏仁苷对HSC—T6细胞凋亡基因Bax的表达水平。结果：苦杏仁各实验浓度组对HSC—T6细胞的增殖无直接抑制作用,但其高浓度10^－3mol／L和中浓度10^-4mol／L可以使HSC—T6细胞提前到达增殖高峰期;而各浓度组对HSC—T6细胞的Bax基因都有一定的诱导作用,并且存在量效关系。结论：苦杏仁苷不能直接抑制HSC—T6细胞的增殖,但可能通过诱导或上调凋亡基因Bax的过度表达,使细胞提前进入凋亡程序阶段,最终使活化的HSC—T6发生细胞凋亡,以起到抗肝纤维化的作用。     

补髓生血颗粒对慢性再生障碍性贫血患者骨髓FAK表达及FAK磷酸化水平的影响

目的:观察补髓生血颗粒对CAA患者骨髓单个核细胞中FAK表达及FAK磷酸化水平变化,探讨补髓生血颗粒治疗CAA的作用机制。方法:将60例CAA患者予以补髓生血颗粒治疗6个月,另取20例健康志愿者作为正常对照组。采用蛋白质印迹方法(Western-blot)观察CAA患者治疗前后骨髓单个核细胞中FAK及FAK pY397的表达水平。结果:CAA患者治疗前骨髓单个核细胞FAK及FAKpY397的表达均低于正常对照组(P均0.05),经补髓生血颗粒治疗后,FAK及FAK pY397的表达均所上升,与治疗前比较均具有显著性差异(P均0.05)。结论:CAA患者骨髓单个核细胞FAK及FAKpY397的水平均呈低水平表达,提示FAK与CAA发病密切相关,补髓生血颗粒可能通过调节FAK及FAK pY397的表达来改善CAA骨髓造血微环境。