HpaⅡ—PCR检测急性白血病降钙素基因高度甲基化

应用聚合酶链反应结合ＨｐａⅡ限制性内切酶消化法检测７８例急性白血病患者降下素基因的甲基化状态。病例组待检细胞ＤＮＡ经ＨｐａⅡ消化后，再用两对ＣＴ基因特异性引物作ＰＣＲ扩增，分别产生长度为５６６ｂｐ和１．４ｋｂ特异片段。     

用聚合酶链反应检测急性非淋巴细胞白血病微量残留细胞

目的：探讨用多聚酶链反应（ＰＣＲ）检测急性非淋巴细胞白血病微小残留病的意义。方法：利用ＰＣＲ扩增降钙素（ＣＴ）基因５′端第４个甲基化位点附近的ＤＮＡ序列，所有样本ＤＮＡ在做ＰＣＲ前用过量的限制性内切酶消化，检测２５例初治或复发的急性非淋巴细胞白血病（ＡＮＬＬ），１０例完全缓解期患者。细胞系ＨＬ－６０作阳性对照，正常对照组１０例。结果：２５例ＡＮＬＬ中，１７例阳性（６４％），１０例缓解期骨髓标本，４例可检测到残留的白血病克隆，有１例在复发前２个月出现持续的残留白血病克隆。结论：用ＰＣＲ方法检测ＣＴ基因甲基化是非常有潜力的检测ＡＮＬＬＭＲＤ的方法，对预测复发有重要临床意义。     

用聚合酶链反应检测急性非淋巴细胞白血病微量残留细胞

目的：探讨用多聚酶链反应（ＰＣＲ）检测急性非淋巴细胞白血病微小残留病的意义。方法：利用ＰＣＲ扩增降钙素（ＣＴ）基因５＇端第４个甲基化位点附近的ＤＮＡ序列，所有样本ＤＮＡ在做ＰＣＲ前用过量的限制性内切酶消化，检测２５例初治或复发的急性非淋巴细胞白血病（ＡＮＬＬ），１０例完全缓解期患者。细胞系ＨＬ－６０作阳性对照，正常对照组１０例。结果：２５例ＡＮＬＬ中，１７例阳性（６４％），１０例缓解期骨髓标本，４     

PCR检测恶性血液病降钙素基因高度甲基化

以甲基化敏感酶（ＨｐａⅡ）消化ＤＮＡ，应用ＰＣＲ扩增方法敏感地检测了７４例恶性血液病病人降钙素（ＣＴ）基因的甲基化程度，发现７０％（７／１０）ＡＬＬ，７２．７％（１６／２２）ＡＮＬＬ，５２％（１２／２３）ＣＭＬ，８０％（８／１０）ＭＤＳ，３例（３／３）恶性淋巴瘤（ＭＴ）和１例（１／１）恶性组织细胞增生症（ＭＨ）病人出现ＣＴ基因高度甲基化阳性。结果表明，ＣＴ基因高度甲基化可作为恶性血液病恶性克隆增殖     

降钙素基因甲基化对白血病前期基因诊断的研究

目的：探讨降钙素（ＣＴ）基因甲基化对白血病前期基因诊断的价值。方法：利用多聚酶链反应（ＰＣＲ），扩增ＣＴ基因５’端第４个甲基化位点附近的ＤＮＡ序列，所有样本ＤＮＡ在做ＰＣＲ前用过量的限制性内切酶ＨＰａⅡ消化。检测２１例骨髓增生异常综合征（ＭＤＳ）及１２例再障患者，细胞系ＨＬ－６０作阳性对照，５例正常人骨髓作正常对照组。结果：再障组与正常对照组ＣＴ基因处于正常甲基化状态。２１例ＭＤＳ中１６例ＣＴ基因高度甲基化。３例ＣＴ基因高度甲基化的ＭＤＳ转化成ＡＭＬ。ＣＴ基因高度甲基化与原始细胞计数无相关性（ｒ＝００４２）。结论：ＣＴ基因高度甲基化可作为ＭＤＳ基因诊断的一个指标，为探知ＭＤＳ的发病机理以及与白血病的关系提供了有价值的诊断方法。     

急性淋巴细胞白血病初发和难治复发时基因重排类型改变 …

目的：为进一步了解难治复发急性淋巴细胞白血病（ＡＬＬ）基因类型的变化。方法：应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术检测５６例初治及其中２２例难治复发ＡＬＬ患者ＩｇＨ，ＴＣＲＶγＩ－Ｊγ和ＴＣＲＶδ２－Ｄδ３基因重排。结果：７１．４％（４０／５６），８０．４％（４５／５６）及５８．９％（３３／５６），初始ＡＬＬ存在ＩｇＨ，ＴＣＲＶγＩ－Ｊγ和ＴＣＲＶδ２－Ｄδ３基因重排，４０例ＩｇＨ基因重排阳性病人中，１７     

聚合酶链反应方法检测急性白血病p15基因高度甲基化

目的 探讨ｐ１５基因高度甲基化在急性白血病发病中的作用。方法 用甲基化敏感的限制性核酸内切酶消化结合聚合酶链反应技术。结果 在３６例急性白血病患中有２２例（６１．１％）存在ｐ１５基因高度甲基化,其中２６例急性非淋巴细胞白血病（ＡＮＬＬ）有１７（６５．４％）,１０例急性淋巴细胞白血病有５例（５０．０％）存在ｐ１５基因高度甲基化。结合临床资料分析,有ｐ１５基因甲基化的ＡＮＬＬ患有较高的外周血白细胞     

PCR检测骨髓增生异常综合征降钙素基因的高度甲基化

ＰＣＲ检测骨髓增生异常综合征降钙素基因的高度甲基化禹华玮刘祥荣谭齐贤乔宏降钙素（ＣＴ）基因位于人类１１号染色体短臂１１ｐ１５。约９０％的非霍奇金Ｔ和Ｂ细胞淋巴瘤和９５％的急性非淋巴细胞白血病（ＡＮＬＬ）的肿瘤细胞，其ＣＴ基因５′端ＣＣＧＧ位点高度甲基...     

骨髓增生异常综合征降钙素基因甲基化的定量研究

目的：探讨降钙素（ＣＴ）基因高甲基化能否作为骨髓增生异常综合征（ＭＤＳ）向白血病转化的分子标志。方法：采用设有内、外参照的多聚酶链反应（ＰＣＲ），结合限制性内切酶和激光扫描技术，检测２７例ＭＤＳ和６例由ＭＤＳ转化的急性髓细胞白血病（ＡＭＬ）患者骨髓细胞的ＣＴ基因５′端甲基化率（ＣＴＭＲ）。结果：ＭＤＳ患者ＣＴＭＲ为３３．６５％±２３．３７％，显著高于对照组（８．０１％±４．２５％，Ｐ＜０．００１），其中ＲＡＥＢｔ组显著高于对照组和ＲＡ组，已随访３～１０年的ＲＡ患者５例均在正常范围，且无白血病转化。９例ＲＡＥＢｔ的ＣＴＭＲ均＞３０％，随访８例中７例于２个月内转化为ＡＭＬ。结论：ＣＴＭＲ对早期预测ＭＤＳ向白血病转化可能是一个有用的指标。     

用逆转录－多聚酶链反应检测白血病患者多药耐药基因的表达

作者应用逆转录－多聚酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）检测２５例急性白血病患者骨髓细胞中ｍｄｒ＿１基因的表达。以Ｋ５６２敏感细胞和体外诱导的耐药细胞株Ｋ５６２／Ａ０２分别作为阴性和阳性对照，发现复发和未缓解患者中ｍｄｒ＿１表达增高者占９０．９％（１０／１１），而初治患者中仅为２１．４％（３／１４），ｍｄｒ＿１表达增高者化疗效果差。应用单克隆抗体ＪＳＢ－１检测Ｐ－１７０结果与ＲＴ－ＰＣＲ一致。此ＲＴ－ＰＣＲ具有高度敏感性，可以检出２Ｐｇ的ｍｄｒ＿１ｃＤＮＡ，对于检测白血病ｍｄｒ＿１的表达是一种灵敏、特异的方法。     

p15^INK4B基因甲基化在急性普细胞白血病和慢性粒细胞白血病中的研究

为探索ｐ１５＾ＩＮＫ４Ｂ基因在ＣｐＧ岛高甲基化对白血病发病机制的重要作用,应用敏感的甲基化特异的ＭＳＰ－ＰＣＲ的测定方法,测定了ｐ１５＾ＩＮＫ４Ｂ基因在急性粒细胞白血病（ＡＭＬ）和慢性粒细胞白血病（ＣＭＬ）中甲基化的表达变化,研究结果表明,ｐ１５＾ＩＮＫ４Ｂ基因操纵区在ＡＭＬ和ＣＭＬ中的甲基化发生率分别为８３．９％（２６／３１）和０％（０／２８）。结论提示：甲基化是ｐ１５＾ＩＮＫ４Ｂ基因在ＡＭＬ中主要的失活方式之一,并可在病程进展中出现甲基化,使病情加重,在ＣＭＬ中无基化的发生,说明ｐ１５＾ＩＮＫ４Ｂ基因的功能在ＣＭＬ中可能是完整的。     

双温PCR法检测淋巴细胞白血病微小残留病

免疫球蛋白重链（ＩｇＨ）重排可作为Ｂ淋巴系肿瘤的基因标志，应用ＰＣＲ方法检测此重排可进行淋巴细胞白血病微小残留病（ＭＲＤ）的研究。我们通过基因释放剂提取ＤＮＡ及双温ＰＣＲ循环，建立一种快速可靠ＰＣＲ方法检测３８例淋巴细胞白血病ＩｇＨ重排基因，２８／３８（７３．７％）阳性，敏感度为１０￣（－４）～１０￣（－５）水平。此方法简便、快捷且成本低，更适于临床检测实际需要。     

用逆转录—多聚酶链反应检测白血病患者多药耐药基因的表达

作者应用逆转录－多聚酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）检测２５例急性白血病患者骨髓细胞中ｍｄｒ１基因的表达。以Ｋ５６２敏感细胞和体外诱导的耐药细胞株Ｋ５６２／Ａ０２分别作为阴性和阳性对照，发现复发和未缓解患者中ｍｄｒ１表达增高者占９０．０％（１０／１１），而初治患者中仅为２１．４％（３／１４），ｍｄｒ１表达增高化疗效果差。应用单克隆抗体ＪＳＢ－１检测Ｐ－１７０结果与ＲＴ－ＰＣＲ一致。此ＲＴ－ＰＣＲ具有高度敏     

HpaⅡ—PCR检测急性白血病降钙素基因高度甲基化

应用聚合酶链反应(PCR)结合HpaⅡ限制性内切酶消化法(HpaⅡ—PCR)检测78例急性白血病(AL)患者降钙素(CT)基因的甲基化快态。病例组待检细胞DNA经 HpaⅡ消化后,再用两对CT基因特异性引物作 PCR扩增,分别产生长度为 566 bp和1.4 kb特异片段。急性淋巴细胞白血病阳性率 68.8％(33/48),急性非淋巴细胞白血病73.3％(22/30),敏感性达10~(-3)。证明CT基因5’高度甲基化是白血病细胞克隆的特异标志。本方法对恶性血液病的诊断治疗及其微小残留病(MRD)的检测都具有重要意义。     

降钙素基因甲基化对白血病前期基因诊断的研究

探讨降钙素基因甲基化对白血病基因诊断的价值。方法：利用多聚酶链反应，扩增ＣＴ基因５‘端第４个甲基化位点的ＤＮＡ的序列，的有样本ＤＮＡ在做ＰＣＲ前用过量的这内切酶ＨＰａⅡ消化。检测２１例骨髓增生异常综合征及１２例再障患者，细胞系ＨＬ－６０作阳性对照，５例正常人骨髓作正常对照组。     

用多种特异性基因标志跟踪检测儿童微量残留白血病的研究

用多聚酶链反应技术，以Ｔ细胞受体（ＴＣＲ）γ、ＴＣＲδ、ＩｇＨ基因的Ｖ－（Ｄ）－Ｊ结合部Ｎ顺序三种克隆特异基因标志；ＳＩＬ－ＴＡＬ－１、ＨＲＸ基因相关的融合基因和ｂｃｒ／ａｂ１融合基因作为肿瘤特异标志，对２３例急性淋巴细胞白血病（ＡＬＬ）患儿完全缓解后的微量残留病（ＭＲＤ）作系统的跟踪检测。结果表明，所有小儿ＡＬＬ缓解后均存在ＭＲＤ。６个月内复查的１２例ＡＬＬ中６例（５０％）在缓解６个月内ＭＲＤ测定阴性，１８例（７８．３％）在１２个月内、１９例（８２．６％）在２４个月内ＭＲＤ测定阴性。若持续ＭＲＤ检测阳性或由阴性转阳性则提示将发生骨髓复发。检测的灵敏度是１０－２～１０－６。提示白血病ＭＲＤ的跟踪检测有重要的临床意义。     

免疫球蛋白重链基因指纹图谱分析小儿急性淋巴细胞白血病的克隆性

目的：探讨小儿急性淋巴细胞白血病（ＡＬＬ）免疫球蛋白重链（ＩｇＨ）基因重排形式的种类，以及是否存在几个克隆并存的情况。方法：应用多聚酶链反应（ＰＣＲ）和单链构象多态性（ＳＳＣＰ）技术，构建ＩｇＨ－ＰＣＲ－ＳＳＣＰ基因指纹（ｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔｉｎｇ），分析３４例ＡＬＬ患儿ＩｇＨ基因重排的基因指纹图谱。结果：单克隆的ＩｇＨ基因重排中除了单等位基因重排９例（３２．１４％）外，有１５例（５３．５７％）是双等位基因重排；４例（１４．２９％）白细胞数高、免疫表型是早期Ｂ细胞的病例表现寡克隆性ＩｇＨ重排。结论：从基因水平证实，小儿ＡＬＬ多发生ＩｇＨ双等位基因重排，且有多个克隆并存的现象。     

用逆转录酶／聚合链反应方法检测急性粒细胞白血病AML1—ETO副合基因

用筑巢式逆转录／聚合酶链反应（ＲＴ／ＰＣＲ）方法检测伴ｔ（８；２１）染色体易位的Ｍ２ｂ型白血病ＡＭＬ１－ＥＴＯ融合基因转录本，该方法具有高度敏感性，可以从１０＾４－１０＾５个正常细胞ＲＮＡ中检出１个白血病细胞，对于Ｍ２ｂ型白血病的诊断及监测是一种快速，灵敏，特异的方法。我们研究的１１例Ｍ２ｂ型白血病中有１例未检测到的ＰＣＲ产物，可能与该型患中基因重组的分子异质性有关。     

自体骨髓移植治疗急性白血病73例疗效分析

目的：评价自体骨髓移植（ＡＢＭＴ）治疗急性白血病的疗效。方法：自１９８６年１０月至１９９７年１２月，用ＡＢＭＴ治疗急性白血病７３例，中位年龄２５．５（９～４８）岁。其中急性非淋巴细胞白血病（ＡＮＬＬ）４３例（ＣＲ１３５例，ＣＲ２或早期复发８例），急性淋巴细胞白血病（ＡＬＬ）３０例（ＣＲ１２５例，ＣＲ２或早期复发５例）。预处理方案包括环磷酰胺（ＣＴＸ）１２０ｍｇ／ｋｇ＋单次全身照射（ＳＴＢＩ）９～１０Ｇｙ或马利兰（Ｂｕ）１６ｍｇ／ｋｇ或马法兰（Ｍｅｌ）１６０～１８０ｍｇ／ｍ２＋阿糖胞苷（ＡｒａＣ）４ｇ／ｍ２。结果：所有患者移植后均重建造血，中位随访时间８０６（３２～３４００）天，移植相关死亡７例（９．５％），ＡＮＬＬ、ＡＬＬＣＲ１期移植者３年无病生存率分别为５４９％±７．７％和６７．０％±１０６％，复发率３９．３％±９．３％和２３．７％±１０．６％。结论：为降低白血病复发率和提高患者无病生存率，无骨髓供者的ＣＲ１期急性白血病患者适合接受ＡＢＭＴ。     

小儿急性T淋巴细胞白血病tal－1基因缺失分析

根据ｔａｌ－１基因缺失上下游序列设计一对引物，应用多聚酶链反应（ＰＣＲ）技术对１０株人白血病细胞株和７０例小儿急性白血病骨髓标本进行ｔａｌ－１基因缺失分析。结果ＣＥＭ、ＨＢＳ－２和ＲＰＭＩ－８４０２三株Ｔ细胞白血病（Ｔ－ＡＬＬ）细胞株以及３／１６例Ｔ－ＡＬＬ发现ｔａｌ－１基因缺失，５４例其它类型急性白血病均未见基因缺失，而且具ｔａｌ－１基因缺失的Ｔ－ＡＬＬ细胞均为胸腺发育Ｉ期，免疫表型特征为ＣＤ＿２＋、ＣＤ＿７＋、ＣＤ＿１￣－、ＣＤ＿４￣－和ＣＤ＿８￣－。ＰＣＲ方法敏感性达１０￣（－４）。说明ｔａｌ－１缺失发生于部分Ｔ－ＡＬＬ中，可用于微小残留病的检测。