银染结合反转录PCR检测丙型肝炎病毒核酸

银染结合反转录ＰＣＲ检测丙型肝炎病毒核酸郑文婕王升启孙志贤（军事医学科学院放射医学研究所，北京１００８５０）关键词银染色法反转录ＰＣＲ丙型肝炎病毒本文建立了银染技术结合反转录ＰＣＲ检测丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）的方法，并以ＨＣＶ阴、阳性血清衡量了本方法的...     

聚合酶链反应凝胶呈像技术检测乙型肝炎病毒

目的建立聚合酶链反应（ＰＣＲ）凝胶呈像（ｇｅｌｄｏｃｕｍｅｎｔａｔｉｏｎｓｙｓｔｅｍｓ，ＧＤＳ）技术，并应用于临床检测乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）核酸ＤＮＡ。方法用凝胶呈像技术对血清ＨＢＶＤＮＡＰＣＲ扩增产物的电泳凝胶进行摄像、分析，并与紫外灯下的肉眼观察结果相比较，对肉眼未判断出阳性而凝胶呈像分析出阳性的血清标本，用定量ＰＣＲ（ＱＰＣＲ）方法检测ＨＢＶＤＮＡ。结果通过３８份血清标本的检测，发现用凝胶呈像技术判断的结果比单纯肉眼观察的阳性率高。前者１９份阳性（５０％），后者１６份阳性（４２．１％），符合率为９２．１％。经χ２检验（χ２＝０．４７７，Ｐ＞０．０５），说明两种方法有很好的一致性。凝胶呈像分析为阳性，而肉眼观察阴性的３份血清标本，经定量ＰＣＲ检测为阳性。结论应用凝胶呈像技术比ＰＣＲ产物电泳后紫外灯下肉眼观察的灵敏度高、客观性强，能避免与紫外线接触，并可长期保留检测结果。     

聚合酶链反应凝胶呈像技术检测乙型肝炎病毒

目的 建立聚合酶链反应（ＰＣＲ）－凝胶呈像（ｇｅｌｄｏｃｕｍｅｎｔａｔｉｏｎｓｙｓｔｅｍＧＤＳ）技术,并应用于临床检测乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）核酸ＤＮＡ。方法 用凝胶呈像技术对血清ＨＢＶ－ＤＮＡＰＣＲ扩增产物的电泳凝胶进行摄像,分析,并与紫外灯下的肉眼观察结果相比较,对肉眼未判断出阳性而凝胶呈像分析邮阳性的血清标本,用定量ＰＣＲ（ＱＰＣＲ）方法检测ＨＢＶ－ＤＮＡ。结果 通过３８份血清标本的检测,发现     

应用地高辛标记核酸探针检测巨细胞病毒

应用地高辛标记核酸探针检测巨细胞病毒史金阳，刘兰青，吕绳敏，吉耀华，刘庆聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术的应用大大简化了目的基因片段制备程序。我们用ＰＣＲ技术制备地高辛标记巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）ＤＮＡ探针，并用此探针检测肝炎综合征患儿尿中ＨＣＭＶＤＮＡ，现...     

PCR检测外周血细胞中结核分枝杆菌核酸

ＰＣＲ检测外周血细胞中结核分枝杆菌核酸杨朝国陈川①张明清②（四川省卫生管理干部学院，成都６１００４１）关键词结核分枝杆菌核酸外周血聚合酶链反应检测结核分枝杆菌核酸的几种ＰＣＲ方法特异性和灵敏度均不相同〔１～３〕，用痰样品制备ＤＮＡ较麻烦，且常常是ＰＣ...     

荧光定量PCR与RT-PCR技术检测HCV-RNA的比较观察

目的 比较荧光定量ＰＣＲ与ＲＴ－ＰＣＲ（定性）检测不同检材中的ＨＣＶ－ＲＮＡ,评价荧光定量ＰＣＲ技术测定ＨＣＶ－ＲＮＡ水平的价值。方法 采用荧光定量ＰＣＲ及ＲＴ－ＰＣＲ（定性）技术同时检测了７１例血液透析患者的血清,血浆,淋巴细胞、尿液标本中ＨＣＶ－ＲＮＡ。结果 血清、淋巴细胞,尿液标本中ＨＣＶ－ＲＮＡ的荧光定量ＰＣＲ检出率（４６．３８％,８０．００％）,分别高于相应标本中ＨＣＶ－ＲＮＡ的ＲＴ－Ｐ     

PCR技术检测的质控问题经验谈

ＰＣＲ技术检测的质控问题经验谈丁柳秦山华西医科大学附属第一医院传染科聚合酶链反应（Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ，ＰＣＲ）是一种选择性体外扩增核酸片段的方法，自从１９８４年Ｍｕｌｉｓ发明该技术后，取得了突飞猛进的发展，已在临床检测如感...     

PCR检测宫颈良恶性病变组织中HPV与HSV核酸

ＰＣＲ检测宫颈良恶性病变组织中ＨＰＶ与ＨＳＶ核酸朱美玲陈汝光（深圳宝安西乡人民医院检验科，深圳５１８１０２）邹红艳（深圳宝安西乡人民医院妇产科）关键词宫颈病变人乳头瘤病毒人疱疹病毒聚合酶链反应近年来，国内外学者利用ＰＣＲ技术研究发现宫颈良、恶性病变组...     

混合样品中微量SRY基因的毛细管电泳检测

目的建立一种灵敏度高、重现性好的检测混合样品中微量目的基因的方法。方法采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增混合样品中微量男性ＤＮＡ的ＳＲＹ序列，分别通过琼脂糖凝胶电泳和毛细管电泳检测ＰＣＲ扩增产物，比较二者的检测灵敏度。结果毛细管电泳可检测到２０ｐｇ男性模板ＤＮＡ（相当于３～４个细胞中的ＤＮＡ含量）ＰＣＲ扩增产物总量的１／６００，琼脂糖凝胶电泳可检测到７４ｐｇ男性模板ＤＮＡ（相当于１３个细胞中的ＤＮＡ含量）ＰＣＲ扩增产物总量的１／３。毛细管电泳检测微量目的基因扩增产物的综合灵敏度是琼脂糖凝胶电泳的７５０倍。结论毛细管电泳灵敏度高、重现性好，与ＰＣＲ技术结合可广泛用于各种混合样品中微量核酸分子的检测。     

PCR法标记地高辛探针用于原位杂交检测

ＰＣＲ法标记地高辛探针用于原位杂交检测郑兴武肖桂元饶颖竹戴盛明周少雄（湛江中心人民医院，广东湛江５２４０３７）关键词人乳头瘤病毒聚合酶链反应原位杂交对于地高辛（Ｄｉｇ）核酸探针的标记，经典的方法是随机引物法，ＰＣＲ技术的兴起和发展带来了新的手段。本研...     

样品处理与临床PCR检测

样品处理与临床ＰＣＲ检测江凌晓综述冯永清审校（第一军医大学附属珠江医院分子生物学实验室，广州５１０２８２）关键词聚合酶链反应样品处理聚合酶链反应（ＰｏｌｙｍｅｒａｓｅＣｈａｉｎＲｅａｃｔｉｏｎ，ＰＣＲ）是检测特异性核酸片断的最敏感的方法之一。现已用于...     

PCR技术临床实验室应用价值的评价

随着分子生物学技术的发展，聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术已广泛应用于遗传性疾病、肿瘤及感染性疾病的诊断，如检测临床标本中病原体核酸序列、肿瘤基因突变情况、人类白细胞表面抗原（ＨＬＡ）配型、法医学方面的鉴定工作等。现就是否所有的临床实验室都需要开展ＰＣＲ技术及ＰＣＲ技术检测病原微生物的临床意义谈谈我们的看法。１目前国内临床实验室应用ＰＣＲ技术存在的问题在设施方面，如仪器显示的温度与孔内的温度不一致，有孔间差；自动化程度较低，人工操作人为误差较大；实验室布局不合理，不能满足３个分开的房间进行分阶段操作（…     

乙型肝炎病毒感染性病人及携带者的HBV DNA诊断研究

核酸分子杂交技术，能直接从血清中检出１０－１Ｐｇ的ＨＢＶＤＮＡ，最近发展起来的聚合酶链式反应（ＰＣＲ）技术能检出１０－３Ｐｇ的ＨＢＶＤＮＡ。本文所介绍的ＰＣＲ与染色技术的结合于１９９７年８月检测４１６人ＨＢＶＤＮＡ，并与溴化乙锭（ＥＢ）染色进行对比分...     

原位PCR实验技术及其应用前景

原位ＰＣＲ（ＩｎＳｉｔｕＰＣＲ）技术自１９９０年Ｈａａｓｅ〔１〕等人建立以来,在最近几年得到了快速的发展和应用。聚合酶链反应（ＰＣＲ）是一种快速测定核酸的高效、敏感方法,已在许多疾病的研究与诊断中得到了广泛应用。但是,ＰＣＲ技术须从混合的组织细胞中提取核酸,由于无法将扩增的核酸片段在特定的组织细胞中定位分析,所以难以肯定扩增产物的真正细胞来源。原位杂交虽具有细胞内定位能力,但对于核酸中个别少数变异或差异的序列和细胞内靶核酸含量少时则难以鉴别出来,而且有假阳性的干扰。原位ＰＣＲ技术把ＰＣＲ和原位杂…     

PCR检测淋病奈瑟菌、沙眼衣原体和解脲支原体的核酸

ＰＣＲ检测淋病奈瑟菌、沙眼衣原体和解脲支原体的核酸金小丽杨君瑞（温州市第三人民医院，浙江温州３２５０００）关键词聚合酶链反应淋病奈瑟菌沙眼衣原体解脲支原体核酸我们对８９７２例泌尿生殖系统感染的尿道及阴道分泌物和慢性前列腺炎的前列腺液用ＰＣＲ检测淋病奈...     

定量PCR

随着分子生物学在医学领域的广泛应用，对检测标本的核酸定量已显得十分必要，ＰＣＲ技术是一种较为理想的方法，本文介绍了近几年国外在这方面的研究进展。     

FQ-PCR价测HBV的应用

近年来乙肝病毒的分子生物学研究进展很快 ,ＦＱ -ＰＣＲ (荧光探针定量基因检测技术 )利用了ＰＣＲ技术的核酸高效扩增 ,探针技术的高特异性和光谱技术的敏感性及计量性的优点 ,同时又克服了ＰＣＲ技术易污染和不能定量之不足。因此我们用ＦＱ -ＰＣＲ检测乙肝患者中ＨＢＶ -ＤＮＡ含量 ,有利于了解病情和合理用药及疗效观察。1.材料与方法1.1标本来源　 86例乙肝患者 ,均为近年来我院门诊及住院病人。血清于 - 2 0℃保存。1.2材料来源　ＨＢＶ五项指标检测试剂由中山生物制品公司提供。ＦＱ -ＰＣＲ试剂由中山医科大学达安基因诊断中心提…     

荧光定量聚合酶链反应检测乙型肝炎病毒

目的 用荧光定量聚合酶链反应（ＦＱ－ＰＣＲ）方法准确地定量检测血清中乙型肝炎疾病（ＨＢＶ）的数量和免疫指标以指导临床,方法 设计合成了ＨＢＶＦＱ－ＰＣＲ诊断试剂盒,以一种完全闭管式的ＰＣＲ和荧光探针杂交技术相结合产生的实时检测定量ＰＣＲ方法,检测了５３２份临床血清标本,结果 经ＦＱ－ＰＣＲ检测,１５８份ＨＢＶ的ｓ抗原,ｅ抗原,ｃ抗体（ＨＢｓＡｇ,ＨＢｅＡｇ,ＨＢｃＡｂ）都阳性的标本,其血清标本ＨＢ     

曲霉感染的PCR检测

由于各种原因造成的免疫抑制或免疫缺陷患者的不断增多，曲霉感染的发病率迅速上升，死亡率很高，然而其早期诊断甚为困难。聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术的问世为此提供了一个颇有前途的工具。本文就ＰＣＲ检测曲霉核酸的引物设计、标本处理、扩增程序、扩增产物的分析及临床应用效果予以综述。     

EB病毒－脱氧核糖核酸检测对鼻咽癌早期诊断的应用

ＥＢ病毒－脱氧核糖核酸检测对鼻咽癌早期诊断的应用中国人民解放军广州军区广州总医院耳鼻喉科郭小谦，陈勇挺我们应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术检测了７１例免疫球蛋白（Ｉｇ）Ａ／病毒壳膜抗原（ＶＣＡ）阳性（＞１：５）患者的鼻咽脱落细胞中ＥＢ病毒（ＥＢＶ）脱氧...