超声介导微泡破裂法促进外源性基因在小鼠NIH3T3细胞中的表达

目的观察超声介导微泡破裂法对目的基因重组人骨形态发生蛋白- 2（hBMP- 2）转染靶细胞NIH3T3效率的影响。方法复苏NIH3T3细胞并传至3~4代,待细胞生长状态良好后接种至六孔培养板;将六孔板中细胞随机分为2组,分别采用质粒DNA和脂质体法（脂质体组）,质粒DNA、超声和微泡法（超声介导微泡破裂组）转染目的基因;转染24~48 h后在荧光倒置显微镜下对各组细胞分别计数以计算转染效率,并采用ELISA实验测定转染后hBMP- 2蛋白质量浓度;使用SPSS 11.5软件包分析实验结果。结果脂质体组的转染效率为（7.30±1.58）%,超声介导微泡破裂组为（11.77±3.16）%（P<0.05）;脂质体组转染后hBMP- 2蛋白质量浓度为（1 164.35±724.67）pg/mL,超声介导微泡破裂组为（2 932.70±656.27）pg/mL（P<0.05）。结论超声介导微泡破裂法可以明显提高外源性基因hBMP-2在体外NIH3T3细胞中的转染效率和蛋白质量浓度,可以为牙周再生基因治疗提供一种新型基因转移系统。     

微泡的研究进展

微泡,一种富含mRNA,micRNA及HSP70,HIA-I和NY—ESO-1等多种蛋白,并可能作为细胞间交流及基因传递的物质,在肿瘤转移、复发、诊断及治疗方面的作用越来越多地受到重视,其包含的内容物是导致细胞转化的主要因素,可能作为肿瘤转移及复发的新途径,也可能成为肿瘤治疗的新方向。本文对微泡的概念、产生、诊断及治疗等相关方面的研究作一综述。     

载药脂质体-微泡复合物超声导向治疗头颈鳞癌的体外实验研究

目的 体外研究一种具有靶向性、副作用少、同时具备诊断和治疗作用的针对头颈鳞癌治疗的微泡颗粒。方法 分别制备载吉非替尼脂质体-微泡模型和载氯喹脂质体-微泡模型。将HN-30细胞分为5组,即PBS缓冲液组、载吉非替尼脂质体+载氯喹脂质体(GE-Lipo+CQ-Lipo)组、载吉非替尼脂质体-微泡模型(MB-GE-Lipo)组、载氯喹脂质体-微泡模型(MB-CQ-Lipo)组和载吉非替尼脂质体-微泡模型+载氯喹脂质体-微泡模型(MB-GE-Lipo+ MB-CQ-Lipo)组。检测各组细胞的增殖抑制效果。采用SPSS 17.0软件包对数据进行统计学分析。结果 当卵磷脂酰胆碱(egg phosphatidylcholine)∶胆固醇(Cholesterol)=2∶1时,与8∶1组相比,包封率无显著差异(P>0.05),2∶1与5∶1、10∶1、20∶1组相比,差异有统计学意义(P<0.05);5∶1、8∶1、10∶1、20∶1 4组之间两两比较,无显著差异(P>0.05)。对于HN-30细胞的增殖抑制作用,(MB-GE-Lipo+ MB-CQ-Lipo)组与PBS组相比,差异有统计学意义(P<0.05);(MB-GE-Lipo+ MB-CQ-Lipo)组与(MB-GE-Lipo)组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 当EPC∶Chol=5∶1时,载吉非替尼脂质体包封率较高,且胆固醇比例合适,脂质体较稳定。MB-GE-Lipo+ MB-CQ-Lipo联合超声对HN-30细胞的增殖抑制作用明显。     

超声微泡破裂法促进骨形态发生蛋白-2在小鼠骨骼肌表达的研究

目的探讨超声微泡破裂法对基因重组人骨形态发生蛋白-2（rhBMP-2）质粒pIRES-rhBMP2-EGFP在小鼠骨骼肌的转染、表达的促进作用。方法24只BALB/c小鼠随机分为4组,每组6只。A组和B组选择右侧胫前肌为注射点,其中A组注射质粒,B组注射质粒与微泡造影剂混合物后用超声辐照,质粒注射量为30 μg;C组和D组选择右侧股四头肌为注射点,其中C组注射质粒,D组注射质粒和微泡造影剂混合物后用超声辐照,质粒注射量为100 μg。7 d后处死A组和B组小鼠,取胫前肌在荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白的表达情况;14 d后处死C组和D组小鼠,取股四头肌行免疫组化检测rhBMP-2表达情况。结果7 d后B组阳性肌纤维百分率高于A组（P<0.05）;14 d 后,C组和D组都可检测到rhBMP-2的表达,但D组rhBMP-2表达量比C组多。结论超声介导微泡破裂法能增加外源性rhBMP-2基因在小鼠体内骨骼肌转染率和表达水平,有望为牙周病的基因治疗提供一种新型方法。     

微泡与肿瘤发展进程的研究进展

大多数类型的活细胞都可以分泌产生微泡,包括肿瘤细胞。细胞微泡是有脂质膜所包裹的直径在40～100nm之间的膜性囊泡。微泡内含有丰富的mRNA、miRNA、蛋白质分子以及脂质分子,其内所含内容物的种类和数量取决于来源的细胞种类。微泡在各种生理和病理过程中起着非常重要的作用。近30年来,对肿瘤细胞所分泌的微泡在肿瘤生长、侵袭、血管生成、免疫调节以及信息交流传递等方面进行了大量研究。本文总结近年来的文献,就细胞微泡的性质和生物学作用以及在肿瘤进展中的潜在作用做一综述,并对微泡在肿瘤临床治疗中的潜在价值做一讨论。     

病毒转染技术在骨组织细胞研究中的应用

［摘要］随着病毒转染技术的发展,运用病毒转染骨组织细胞的方法来研究骨组织代谢及其相关的基因治疗已经越来越热门。本文总结了近年来运用病毒在体内外转染骨组织细胞的研究进展,为选择最合适的病毒载体及最佳的转染方式提供有价值的参考,为研究骨组织细胞的调控机制及代谢提供更有效的研究手段。     

造影剂在干燥综合征腮腺造影中的应用比较

目的:研究干燥综合征患者腮腺造影的造影剂选择。方法:对诊断为干燥综合征的患者进行随机分组,分别利用40%的碘化油和76%的泛影葡胺进行腮腺造影,对图像满意程度和患者造影术中的痛苦程度进行比较。结果:!碘化油组图像的满意程度明显高于泛影葡胺组(P<0.005);造影术中患者痛苦程度两组均以轻中度为主,但两组有差异性(P<0.005),碘化油组疼痛显著。结论:干燥综合征患者进行腮腺造影时,造影剂应首选碘化油。     

转染骨形成蛋白2基因对细胞凋亡影响的实验观察

目的：探讨骨形成蛋白（ＢＭＰ）与细胞凋亡的关系及意义。方法：利用脂质体转染方法将ＢＭＰ２真核表达载体ｐＢＫ－Ｂ２导入ＮＩＨ３Ｔ３细胞,通过Ｇ－４１８筛选获得阳性细胞克隆。细胞原位杂交和免疫组化检测ＢＭＰ２基因的稳定转染及表达,并利用ＴＵＮＥＬ法观察细胞凋亡情况。结果：ＢＭＰ２基因成功导入ＮＩＨ３Ｔ３细胞并得到表达。转染细胞的凋亡细胞阳性率与未转染细胞相比有显著性差异。结论：ＢＭＰ２能够诱导细胞凋亡,且这种作用与细胞所处的生长分化状态密切相关。     

兔胸锁乳突肌介导的基因转染及其最优化方案的研究

目的　建立基因转染兔胸锁乳突肌和确定其最优化方案。方法　采用大规模提纯的 p Blac Z质粒制备分子外科注射液 ,选择与临床密切相关的因素进行基因转染最优化方案的研究。通过手术切开 ,暴露兔胸锁乳突肌 ,模拟临床操作 ,进行分子外科注射术转染外源基因的试验 ,同时利用正交试验设计分析 X- gal染色切片。结果　基因转染实验侧含 p Blac Z质粒的肌肉组织有 lac Z基因的表达 ,4周、纵向、2 0 0 μl可获得最高的基因表达效率。结论　胸锁乳突肌可摄取和表达外源质粒 ,是一个潜在的分子外科转基因部位。     

颞下颌关节腔内基因转染的生物安全性实验研究

目的研究阳离子脂质体介导人白介素-1受体拮抗剂(hIL-1Ra)基因在颞下颌关节腔内基因转染后对全身其它脏器的影响。方法20只新西兰白兔随机分为4组,每组5只。第一、二、三组颞下颌关节腔内连续3次间隔24h注射生理盐水,第一组的生理盐水内含50μL阳离子脂质体介导的100μgpcDNA3.1-hIL-1Ra基因的质粒,第二组的生理盐水内含100μL阳离子脂质体介导的200μgpcDNA3.1-hIL-1Ra基因的质粒,第三组的生理盐水内含50μL阳离子脂质体介导的100μgpcDNA3.1的质粒,第四组不进行任何处理,注射完4周后处死所有动物。各组兔获取颞下颌关节、心、肝、脾、肺、肾、胰标本。首先行大体观察有无变化,接着取部分关节和脏器组织用逆转录-聚合酶链反应法(RT-PCR)来检测是否有hIL-1Ra基因的表达,最后行组织学观察。结果各组大体观未见异常,经RT-PCR法证实第一、二组颞下颌关节组织有hIL-1Ra基因的表达,而第三、四组颞下颌关节组织及各组其它脏器均无hIL-1Ra基因的表达,各组脏器标本无明显组织病理变化。结论阳离子脂质体介导hIL-1Ra基因进行兔颞下颌关节腔内基因转染,有良好的生物安全性。     

绿色荧光蛋白基因转染骨髓基质干细胞的瞬时表达检测

目的　检测绿色荧光蛋白基因(EGFP)的表达载体pEGFP对MSCs的转染效率及瞬时表达,为利用 pEGFP构建骨形成蛋白(BMP)表达载体并转染骨髓基质干细胞(MSCs)提供依据。方法　在体外扩增并酶切鉴定 pEGFP质粒;抽取兔骨髓,应用贴壁法培养MSCs;质粒与脂质体按照不同的比例混合,以脂质体介导法转染pEGFP, 应用荧光显微镜观察转染效率及瞬时表达情况。结果　转染效率与脂质体和质粒的比例有关,绿色荧光蛋白在基因转染24 h后开始表达,48~72 h最高,1周后表达逐渐减弱,但3~4周后仍有少量表达。结论　按照合适的质粒和脂质体比例,pEGFP转染MSCs的效率可达到30%,并能持续表达3周以上,是转染MSCs较为理想的瞬时表达载体。     

Fas基因转染对舌鳞癌细胞系Tca8113凋亡的影响

目的探讨外源性Fas基因介导舌鳞癌细胞凋亡的可行性及其可能的分子机制。方法脂质体法将重组人Fas真核表达载体转染人舌鳞癌细胞系Tca8113，抗Fas单克隆抗体诱导其凋亡，Western blotting检测转染前后Tca8113细胞Fas蛋白表达水平，TUNEL法检测转染前后细胞凋亡水平。结果转染后Tca8113细胞Fas蛋白表达上调；抗Fas单克隆抗体可诱导Tca8113细胞凋亡，凋亡指数升高。结论上调Fas基因表达及应用抗Fas单克隆抗体可诱导肿瘤细胞凋亡，有可能作为肿瘤基因治疗的新途径。     

低频超声对细菌生物膜作用的研究进展

生物膜可引起多种微生物感染性疾病,已成为近期研究的热点问题。它可帮助细菌逃避宿主免疫反应,降低周围微环境变化对膜的影响,如阻止抗生素进入、形成耐药等群体反应行为,成为临床治疗的难点问题。而超声用于抗菌研究已有数十年历史,2015年在欧洲临床微生物学和传染病学年会上也提出超声联合抗生素可能有效治疗生物膜感染,多项研究和临床应用表明超声作用微创、便捷,效果显著,可作为临床有效抗菌治疗方法,但其参数不同效果有所差异。本文将对低频超声作用于细菌生物膜的效果及机制进行综合阐述。     

bFGF基因转染对骨髓基质细胞生物学特性的影响

目的:研究碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)基因转染对骨髓基质细胞(BMSCs)生物学特性的影响,探讨细胞因子在骨缺损基因治疗的可行性,为进一步体内实验奠定基础。方法:利用脂质体将bFGF-pcDNA3重组真核表达载体导入体外培养的BMSCs中,对稳定表达bFGF的BMSCs从形态、增殖特性(MTT法)和细胞周期、碱性磷酸酶活性等生物学特性方面进行观察。采用SPSS10.0统计软件包进行t检验、方差分析,以P<0.05为差异有显著性。结果:转染bFGF-pcDNA3后,细胞生长曲线上移,倍增时间缩短,与未转染细胞相比,两者有显著差异(P<0.05),表明转染bFGF-pcDNA3后,细胞生长加快;细胞周期中增殖期细胞比例明显增大;而细胞形态和碱性磷酸酶活性无明显改变。结论:表达bFGF的BMSCs能促进自身的增殖,并不抑制细胞向成骨细胞方向分化。     

FGF2基因转染对人牙周膜细胞生物学性状的影响

目的:探讨碱性成纤维细胞生长因子(Fibroblast Growth Factor 2,FGF2)基因转染对人牙周膜细胞(Periodontalligament cells,PDLCs)生物学性状的影响.方法:将FGF2基因转入PDLCs,通过免疫组化SABC及免疫印记法检测其稳定表达,并检测转基因细胞增殖活力及碱性磷酸酶合成情况.结果:免疫细胞化学证实转染与未转染细胞均在胞浆内表达FGF2,但转染FGF2细胞较未转染组染色深,免疫印迹杂交结果显示转染前后均表达17KD FGF2,但转染后表达量增高.FGF2基因转染可增强细胞增殖能力,但碱性磷酸酶活性未见明显变化(P＞0.05).结论:FGF2基因能被转入PDLCs并得到稳定表达,转基因细胞增殖与合成明显增强,但转染FGF2基因不能促进细胞分化.     

磷酸钙/硅酸钙/泡铋矿复合盖髓材料的理化性能研究

目的探讨并比较磷酸钙/硅酸钙/泡铋矿复合水门汀（CPCSBi）与Dycal、氢氧化钙（CH）用作盖髓剂时的理化机械性能。方法采用X射线衍射（XRD）、红外光谱（FTIR）、扫描电镜（SEM）分析CPCSBi主要物相组成,研究其凝固时间、抗压强度、溶解率、pH值及累积释放浓度。结果 SEM、FTIR、XRD分析CPCSBi主要包含羟基磷灰石、磷酸四钙、泡铋矿、硅酸钙等物相。CPCSBi和Dycal的固化时间分别为13 min50 s及2 min 25 s,抗压强度、溶解率无统计学差异（P<0.05）。浸泡24h后,CPCSBi的pH值（10.9）低于CH（11.6）和Dycal（12.5）。CPCSBi释出Bi³⁺、Ca²⁺、PO₄^2-、Si⁴⁺离子浓度随时间延长逐渐增加。结论 CPCSBi的理化机械性能基本能满足盖髓材料的要求。     

基因强化组织工程骨在颌骨修复重建中的研究进展

组织工程骨修复颌骨缺损是当前的研究热点,但外源性的成骨生长因子半衰期短、生物活性差,基因强化组织工程能使成骨生长因子在局部稳定、持续、高效地表达,从而促进颌骨的修复和重建.     

Semaphorin3F基因转染舌鳞状细胞癌细胞的方法研究

目的：探讨阳离子脂质体介导转染舌癌细胞的可行性，筛选含有Semaphorin3F（SEMA3F）的舌鳞状细胞癌细胞，检测SEMA3F基因在舌癌细胞中的表达。方法：应用阳离子脂质体转染方法将SEMA3F导入Tca8113细胞中，G418筛选阳性克隆，用RT—PCR检测转染组细胞中SEMA3F基因的表达。结果：Tea8113细胞中SEMA3F基因表达下调。筛选14d后，含有SEMA3F的转染组细胞克隆形成，SEMA3F在转染组细胞中表达稳定。结论：阳离子脂质体介导转染的外源性基因SEMA3F在Tea8113细胞获得稳定表达，为进一步实验奠定了基础。     

转染人骨形成蛋白2基因对NIH3T3细胞生物学行为的影响

目的从分子水平探讨骨形成蛋白２（ｂｏｎｅｍｏｒｐｈｏｇｅｎｅｔｉｃｐｒｏｔｅｉｎ２,ＢＭＰ２）对细胞分化的调节作用,并为ＢＭＰ２基因疗法的建立提供依据。方法用脂质体转染法将人ＢＭＰ２噬菌粒表达载体ｐＢＫＢ２导入ＮＩＨ３Ｔ３细胞,Ｇ４１８筛选获得阳性细胞克隆。原位杂交、免疫组化及夹心ＥＬＩＳＡ法检测ＢＭＰ２基因的稳定转染及表达分泌,并检测转染细胞增殖活力及碱性磷酸酶和骨钙素的含量。结果转染细胞有ＢＭＰ２ｍＲＮＡ的转录及其蛋白的表达分泌,转染细胞的增殖能力减弱但碱性磷酸酶和骨钙素的含量增加。结论ＢＭＰ２基因在ＮＩＨ３Ｔ３细胞中得到表达并参与了其向成骨样细胞分化的过程。     

牙本质基质蛋白1基因转染猪体细胞的实验研究

目的构建牙本质基质蛋白1(DMP1)绿色荧光融合蛋白pEGFP-DMP1,确定该重组质粒转染猪口腔粘膜成纤维细胞(POMFs)及骨髓间质干细胞(MSCs)的最佳条件,评价DMP1转基因修饰对细胞生物学特性及DMP1基因表达的影响。方法构建pEGFP-DMP1真核表达载体,使用不同参数评价脂质体介导基因修饰POMFs及MSCs的转染效率,检测转染后细胞的DMP1基因表达及蛋白表达情况。结果成功构建DMP1真核表达载体pEGFP-DMP1,酶切后得到4.7kb和1.5kb的片段,当脂质体用量为5μl、质粒2μg、转染细胞密度为30%时,DMP1基因的表达比例最高,POMFs及MSCs的最佳转染时间分别为3h和45min。转基因48h后的细胞可见有DMP1基因表达,免疫组化染色显示DMP1阳性。结论选择合适的转染条件可使pEGFP-DMP1绿色荧光融合蛋白重组质粒高效转染POMFs及MSCs,并可检测到DMP1基因及DMP1蛋白表达。