勃起功能障碍糖尿病大鼠模型的建立

目的 建立勃起功能显著低于正常水平的糖尿病(DM)大鼠模型.方法 30只10周龄SD雄性大鼠随机分成对照组(n=12)和实验组(n=18).实验组大鼠腹腔注射链脲佐菌素(STZ)溶液60 mg/kg,对照组腹腔注射相应剂量的0.1 M pH4.5枸椽酸钠溶液.注射后3 d,于尾静脉采血测血糖,后每2 wk测血糖1次.STZ注射后10 wk,测定两组大鼠体重和基础阴茎内压(ICP)及神经刺激诱导ICP.结果 (1)一般情况STZ注射后第5 wk有1只大鼠死亡.2只大鼠于第8、10 wk血糖未达糖尿病标准,糖尿病表现不明显,判为STZ抵抗.18只大鼠中DM模型制作成功15只(定为DM组),成功率83.3%;(2)血糖、体重DM组STZ注射后各时间点的血糖水平均显著高于对照组(P＜0.001);STZ注射前DM组和对照组的体重无显著性差异(P＞0.05),而注射后10 wk DM组的体重显著低于对照组(P＜0.001),平均体重较对照组低31.9%;(3)两组大鼠间ICP比较STZ注射后10 wk,DM组的基础ICP和神经刺激诱导ICP分别为8.9±3.5和56.3±15.8 cmH2O,分别显著低于对照组的36.8±11.2和156.3±38.4 cmH2O(P＜0.001),DM组的基础ICP和神经刺激诱导ICP较对照组分别低75.8%和64.0%.结论 以STZ60 mg/kg腹腔注射建立DM大鼠模型操作方便、成功率高,而且所制作的DM大鼠模型阴茎的基础ICP和神经刺激诱导ICP均显著低于正常大鼠,能成为理想的DMED研究的动物模型.     

维药伊木萨克片对大鼠性功能与阴茎组织中一氧化氮合酶活性的影响

目的:探讨维药伊木萨克片对雄性大鼠阴茎勃起功能的影响及其机制。方法:取具有正常性功能SD雄性大鼠20只,随机分为正常对照组(n=10)和伊木萨克组(n=10),用等量溶剂与伊木萨克片(250mg·kg-1.d-1)分别对2组大鼠连续干预6周后,进行阿朴吗啡(APO)阴茎勃起实验和交配实验,并检测阴茎海绵体窦压(ICP);用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测阴茎组织中的一氧化氮合酶(NOS)活性。结果:(1)与正常对照组比较,伊木萨克组阴茎勃起所需时间显著缩短(P<0.01),插入次数明显增加(P<0.01),且基础ICP值与电刺激诱导ICP值均显著升高(P<0.05);(2)NOS活性在伊木萨克组显著高于正常对照组(P<0.01)。结论:维药伊木萨克片能够显著提高正常大鼠的阴茎勃起功能,其机制与提高NOS活性有关。     

糖尿病勃起功能障碍大鼠血清睾酮的变化及意义

目的:探讨睾酮在糖尿病大鼠勃起功能障碍(ED)发生中的意义。方法:3月龄Wistar雄性大鼠18只(SPF级),随机分为正常对照和糖尿病组,每组9只,采用链脲佐菌素(STZ)建立糖尿病大鼠模型,3月后检测大鼠阴茎海绵体内压(ICP)和平均动脉压(MAP)以评价勃起功能,然后分别行ELISA法检测血清睾酮水平和阴茎海绵体组织中cGMP浓度的变化,Masson法检测阴茎海绵体平滑肌密度的变化。结果:糖尿病组大鼠海绵体内压为(58±11) mmHg,低于正常对照组(115±13) mmHg,差异有统计学意义(P<0. 05),同时糖尿病组大鼠的血清睾酮水平[(17. 45±2. 54) pmol/mL]较正常组[(338. 46±63. 80) pmol/mL]明显下降(P<0. 05);且我们还发现糖尿病组大鼠阴茎海绵体平滑肌密度和阴茎海绵体组织中cGMP浓度均明显下降,差异有统计学意义(P<0. 05)。结论:糖尿病大鼠血清睾酮水平明显下降,可能通过降低阴茎海绵体平滑肌的密度和大鼠阴茎海绵体组织中cGMP含量,从而在糖尿病ED的发生过程中发挥一定的作用。     

糖尿病性ED大鼠建模优化

目的 探讨优化建立糖尿病性勃起功能障碍大鼠模型高成模率的方法.方法 41只8~10周龄雄性SD大鼠,随机分为对照组(n=9)和实验组(n=32),实验组大鼠又分为糖尿病(DM)组和糖尿病未成模组(NDM组).实验组大鼠腹腔注射65 mg/kg的链脲佐菌素(streptozotocin,STZ),对照组腹腔注射相应剂量的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液.注射后第3天(即造模第4天),4、8、12 周全部大鼠尾静脉采血测随机血糖和体重.12周后,应用阿扑吗啡(apomorphin,APO)100 μg/kg全部大鼠皮下注射后观察阴茎勃起情况而筛选出勃起功能障碍(ED)模型.结果 (1)STZ致糖尿病大鼠的一次成模率90.6%(29/32),阿扑吗啡筛选DM组大鼠ED模型的成模率为84.6%(22/26);(2)DM组在注射STZ后各时间点的随机血糖均显著高于NDM组、对照组(P<0.05);同一时间点体重相比较:除造模第4天,其余时间点,DM组体重水平显著低于NDM组、对照组(P<0.05),NDM组与对照组相比无差异(P＞0.05);(3)阴茎质量及睾丸质量比较,DM组显著低于NDM组、对照组(P<0.05).结论 采用各种措施可优化糖尿病ED大鼠模型的建立,12周可作为APO筛选ED模型的最佳时间.     

糖尿病大鼠阴茎海绵体线粒体氧化应激损伤与保护

目的：观察糖尿病大鼠阴茎海绵体线粒体氧化应激损伤变化和还原型谷胱甘肽（reduced glutathione,GSH）对其氧化损伤的影响,探讨阴茎海绵体氧化应激的保护机制以及氧化应激在糖尿病勃起功能障碍发病机制中的作用。方法：成年雄性SD大鼠42只,随机取32只予以腹腔注射大剂量链脲佐菌素(streptozotocin,STZ),建成糖尿病大鼠模型25只,随机分为糖尿病组（n＝13）、还原型谷胱甘肽治疗组(n＝12),另10只设为正常对照组;饲养8周后用电刺激各组大鼠勃起神经测定海绵体内压评价勃起功能;采用黄嘌呤氧化酶法检测阴茎海绵体组织中超氧化物氧化酶（superoxide dismutase,SOD）活性,硫代巴比妥酸法测丙二醛（malondialdehyde,MDA）含量;光镜下观察Masson染色切片; Emaus法检测线粒体膜电位。结果：糖尿病组较正常对照组,阴茎海绵体MDA含量显著增高［（6.15±1.07）vs.（3.52±0.94）nmol/mg蛋白,P<0.01］,SOD活性显著下降［（73.34±6.56）vs.（114.22±6.34）U/mg蛋白,P<0.05］,海绵体内压（intracavernous pressure, ICP）峰值显著降低［（50.80±9.80）vs.（90.42±7.02）mmHg,P<0.05］;GSH可使海绵体MDA含量明显降低［（3.90±0.96）vs.（6.15±1.07）nmol/mg蛋白,P<0.05］,显著提高其SOD值［（95.74±4.65）vs.（73.34±6.56）U/mg蛋白, P<0.05］及ICP值［（74.20±5.69）vs.（50.80±9.80）mmHg,P<0.05］。糖尿病组大鼠阴茎组织中细胞线粒体膜电位减低［（727.98±68.33）vs.（1 223.15±222.92）,P<0.01］,而GSH则能提高线粒体膜电位［（930.30±48.36）vs.（727.98±68.33）,P<0.05］。结论：糖尿病大鼠阴茎海绵体存在氧化应激损伤,抗氧化治疗起着保护阴茎组织细胞线粒体功能的作用,从而减轻勃起组织的氧化应激损伤,提高勃起能力;氧化应激在糖尿病性勃起功能障碍发病过程中起到了重要作用。     

富血小板血浆对大鼠阴茎海绵体神经再生的影响

目的 探讨富血小板血浆(PRP)是否促进大鼠海绵体神经再生.方法 24只SD雄性大鼠分成假手术组、双侧海绵体神经切断后立即显微缝合组(单纯缝合组)及缝合后立即局部应用组(PfuP应用组),术后3个月通过电刺激观察海绵体内压的变化来反映其勃起功能,随后取海绵体神经干进行甲苯胺蓝染色,观察轴突的变化来反映神经再生情况.结果 术后3个月,海绵体神经单纯缝合组最大海绵体内压为(46±8)cmH2O,明显低于假手术组(109±13)cmH2O(P＜0.01);而PRP应用组为(94±13)em H2O,明显高于单纯缝合组(P＜0.01).甲苯胺蓝染色PRP应用组轴突个数为(121±16),明显高于单纯缝合组(70±14)(P＜0.01),但仍低于假手术组(181±21)(P＜0.01).结论 局部应用PRP能明显促进受损阴茎海绵体神经的神经再生和勃起功能的恢复.     

胰岛素治疗对糖尿病大鼠阴茎组织中miR-126、VEGF、eNOS表达的影响

目的:研究胰岛素治疗对糖尿病大鼠阴茎组织中miR-126、VEGF、eNOS表达的影响。方法:8周龄雄性Sprague-Dawley（SD）大鼠30只,采用随机数字表将其分为正常对照组（NC组）、糖尿病组 （DM组）和胰岛素治疗组（Insulin组）。腹腔内注射链脲佐菌素（STZ）建立糖尿病（DM）大鼠模型,Insulin组于成模后开始注射胰岛素,连续8周。治疗结束后,检测各组大鼠的体重、血糖、阴茎海 绵体内压（ICP）、平均颈动脉内压（MAP）及ICP与MAP比值（ICP/MAP）,阴茎海绵体中内皮型一氧化氮合酶（eNOS）、血管内皮生长因子（VEGF）及miR-126的表达量。结果:胰岛素治疗后,Insulin组 的体重较DM组明显增加（t=-10.481,P<0.001）,血糖较DM组显著降低（t=4.356,P<0.001）;Insulin组的ICP/MAP较DM组明显增加（t=-14.349,P<0.001）;Western印迹结果显示,Insulin组阴茎海 绵体中eNOS及VEGF蛋白表达量均较DM组显著增加（t=-6.786,-21.177,均P<0.001）。RT-PCR结果显示,Insulin组阴茎海绵体中eNOS、VEGF和miR-126的表达量均较DM组显著增加（t=-6.994、- 8.238、-10.665,均P<0.001）。但上述指标均未达到NC组水平。结论:胰岛素治疗可增加阴茎组织中miR-126、VEGF及eNOS的表达水平。     

一氧化氮合酶在大鼠糖尿病性勃起功能障碍中的作用研究

目的:研究一氧化氮合酶(NOS)在糖尿病性勃起功能障碍中的作用。方法:对正常对照组(n=10)、糖尿病组(DM组,n=10)和链脲佐菌素组(STZ组,n=10)大鼠于造模9周后进行阿朴吗啡阴茎勃起实验,用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测阴茎组织中一氧化氮合酶(NOS)活性。结果:DM组大鼠阴茎勃起率较正常对照组及STZ组明显降低(P<0.01),NOS活性亦显著降低(P<0.01),但正常对照组与STZ组之间的差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:糖尿病可引起勃起性功能障碍,NOS活性的下降可能参与了DM时勃起性功能障碍的发生。     

高选择性脊神经后根切断对SD大鼠膀胱和阴茎勃起功能的影响

目的：探讨高选择性切断脊神经后根小束对SD大鼠膀胱和阴茎勃起功能的影响。方法：清洁级成年雄性SD大鼠40只,体重300~350 g,其中10只电刺激L6和S1后根,观察膀胱内压（intravesical pressure, IVP）和海绵体内压（intracavernous pressure, ICP）的变化以确定膀胱和海绵体的主要神经传导支;另外30只随机分成A、B两组,每组各15只,A组高选择性切断S1后根传导膀胱逼尿肌的小束,B组高选择性切断S1后根传导阴茎海绵体的小束,观察并记录切断前后IVP和ICP的变化情况。结果：分别电刺激L6和S1后根,IVP变化的差异不显著（P=0.972）,ICP变化的差异显著,电刺激L6后根的ICP升高值为（6.88±2.76）cmH₂O(1 cmH₂O=0.098 kPa),电刺激S1后根的ICP升高值为（13.05±8.41）cmH₂O(P<0.01)。分别电刺激S1左右两侧引起IVP和ICP的变化差异无统计学意义（P值分别为0.623和0.828）。A组S1后根小束切断前后电刺激下IVP的变化差异有统计学意义,切断前的IVP升高值为（14.37±4.89）cmH₂O,切断后的IVP升高值为（3.25±1.29）cmH₂O(P<0.001),而ICP的变化差异无统计学意义（P=0.153）;B组S1后根小束切断前后电刺激下ICP的变化差异有统计学意义,切断前的ICP升高值为（11.97±4.41）cmH₂O,切断后的ICP升高值为（2.68±1.01）cmH₂O(P<0.001),而IVP的变化差异无统计学意义（P=0.162）。结论：通过显微解剖及电刺激可以区别SD大鼠S1后根主要传导膀胱逼尿肌或阴茎海绵体的不同小束,高选择性切断后可以分别改变膀胱内压和海绵体内压,或可为临床治疗脊髓损伤后痉挛性膀胱同时最大限度保留反射性阴茎勃起功能提供实验基础。     

动脉性阴茎勃起功能障碍大鼠模型的建立及发生机制

目的：建立动脉性阴茎勃起功能障碍（ED）动物模型,并探讨其发生机制。方法：选取雄性Wistar大鼠30只,通过结扎大鼠双侧髂内动脉设立实验组(n=15),采用假手术设立对照组(n=15)。饲养4 周后,对2组大鼠行注射阿朴吗啡(APO)实验和电刺激海绵体神经 (ICP) 实验,评价其勃起功能;利用电镜观察2组大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞的超微结构;采用免疫组织化学方法检测2组大鼠阴茎组织中一氧化氮合成酶（NOS）的表达。结果：在APO实验中实验组大鼠的勃起次数明显少于对照组(P<0.01);大鼠打哈欠次数两组之间无变化（P>0.05）;在ICP实验中实验组ICP增幅明显低于对照组(P<0.01);电镜显示实验组大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞超微结构发生基底膜增厚、细胞膜平整、空泡增多、核固缩和染色质积聚改变;免疫组织化学结果显示实验组阴茎组织中NOS染色弱于对照组。结论：采用结扎雄性大鼠双侧髂内动脉方法建立ED 动物模型较为简便、可行且可靠;动脉性ED的发生与阴茎组织细胞超微结构改变和NOS低表达有关。