探讨RhD阴性表型中个体D基因多态性研究

目的:探讨RhD阴性表型中个体D基因的多态性.方法:随机抽取2014年11月至2015年10月采集的135例无亲缘关系的RhD阴性血液样本作为研究对象.采用抗人球蛋白试验(又称Coombs试验)来检测RhD阴性表型个体,并运用序列特异引物引导的PCR反应(简称PCR-SSP方法)对RhD阴性表型中个体基因结构特点进行分析与统计.结果:135例经Coombs试验检测为阴性表型个体中,检测结果显示为外显子完全缺失有75例,占比55.56%(75/135),外显子部分缺失29例,占比21.48%(29/135),外显子完整31例,占比22.96%(31/135);采用PCR-SSP法进行基因分型,RHD基因完整中RhD(1227A)占比16.30%(22/135),弱D15型占比0.74%(1/135),RHD阳性占比5.19%(7/135);检测RHD基因部分缺失中RHD-CE(2-9)-D占比5.93%(8/135),DVa(Has)占比0.741%(1/135),DVIⅢ占比0.74%(1/135).结论:我国RhD阴性人群的RhD基因基础结构呈现多态性特征,且不同地区的人群有着相同的Rh血型遗背景,今后可以尝试采用血清学与基因分型联合方法检测RhD阴性中的D抗原.     

PCR-SSP RHD基因定型方法的初步应用

目的采用序列特异性引物PCR技术(PCR-SSP)进行RHD基因定型.方法采用新近报道的PCR-SSP RHD定型方法检测10例RhD阳性个体,包括2例哈萨克族人、2例蒙古族人、2例藏族人和4例维吾尔族人,以及11例RhD阴性个体(汉族10例、维吾尔族人1例),并通过测序和内含子检测分析1例汉族个体的RHD基因型.结果全部样品的PCR-SSP检测结果与血清学表型相符,1例汉族RhD阴性个体鉴定为D放散型,携带RHD1227A等位基因,1例个体的检测结果提示携带融合RHD基因.测序分析显示该融合基因的第1、2和第10外显子序列与正常RHD基因相应外显子相同,而缺失其余外显子,由于RHD基因和RHCE(e)基因的第2外显子序列相同,笔者采用PCR方法检测RHD基因第2内含子,结果为阴性,说明该个体携带的融合基因为RHD-CE(2-9)-D2等位基因.结论 PCR-SSP可用于中国人Rh血型D抗原基因定型.     

人RHD基因结构研究及意义

目的：研究RHD基因结构,重点检测启动子区,探究RHD基因的表达机制．方法：采用PCR—SSP方法,设计3对序列特异性引物,对60例无血源关系RhD( )汉族人样本、98例无血源关系RhD(-)汉族人样本和2例弱D型汉族人样本RHD基因启动子区约1000bp范围内的4个RHD基因特异性多态性位点进行检测．结果：RhD表型(-)／RHD基因型(一)个体启动子区全缺失,表型RhD阴性基因型为部分缺失或不缺失型个体启动子区都不缺失．结论：RhD表型(-)／RHD基因型(-)个体符合RhD阴性的普遍机制,表型RhD阴性基因型为部分缺失或不缺失型个体存在另一种RhD阴性机制。     

安徽地区RHD(-)个体D基因外显子多态性检测

目的分析安徽地区RHD(-)个体的D基因的多态性。方法用PCR-SSP技术,对50例经血清学试验证实的真实RHD(-)个体3例弱D表现型个体15例DEL型个体进行外显子检测。结果发现本地区RHD(-)个体D基因外显子存在明显的多态性:15例DEL型个体D基因外显子均全部完整存在;3例弱D型个体中有2例存在完整的D基因,1例为缺失大部分外显子的DVIⅢ型;50例真实RHD(-)个体中,90%为外显子完全缺失,4%为外显子完整存在,但不表达D抗原;4%为缺失大部分外显子(存在第1、10外显子),不表达D抗原;另有2%为缺失两边外显子(存在第3、4、5外显子),不表达D抗原。结论PCR-SSP技术可用于RHD基因的研究,在本地区血清学鉴定的RHD阴性个体中存在较高比例的DEL型个体,同时,常规血清学RHD(-)个体D基因存在多态性。     

安徽地区RHD（-）个体D基因外显子多态性检测

目的分析安徽地区RHD（-）个体的D基因的多态性。方法用PCR—SSP技术，对50例经血清学试验证实的真实RHD（-）个体3例弱D表现型个体15例DEL型个体进行外显子检测。结果发现本地区RHD（-）个体D基因外湿子存在明显的多态性：15例DEL型个体D基因外显子均全部完整存在；3例弱D型个体中有2例存在完整的D基因，1例为缺失大部分外显子的D^Ⅵ Ⅲ型；50例真实RHD（-）个体中，90％为外显子完全缺失，4％为外显子完整存在，但不表达D抗原；4％为缺失大部分外显子（存在第1、10外显子），不表达D抗原；另有2％为缺失两边外显子（存在第3、4、5外显子），不表达D抗原。结论PCR—SSP技术可用于RHD基因的研究，在本地区血清学鉴定的RHD阴性个体中存在较高比例的DEL型个体，同时，常规血清学RHD（-）个体D基因存在多态性。     

天津地区RhD阴性围产期妇女RHD基因分型及Rh表型分析

目的 研究天津地区RhD阴性围产期妇女RHD基因分型,并分析不同基因型的RhC、c、E、e分布特征。方法 收集2017年1月至2019年12月在天津市第五中心医院就诊的RhD阴性围产期妇女标本104例,应用血清学方法进行Rh C、c、E、e表型鉴定;使用PCR-SSP法对间接抗人球蛋白试验(IAT)确认为Rh D阴性的样本进行RHD基因分型。结果 104例RhD初筛阴性个体中RhC/E血型分型结果显示,ccee 57例(54.8%),Ccee 29例(27.9%),cc Ee 10例(9.6%),CCee 4例(3.8%),CcEe 3例(2.9%),ccEE 1例(1%);RHD基因分型结果显示,全缺失RHD基因型70例(67.3%),DEL RHD 1227A纯合型13例(12.5%),RHD-CE(2-9)-D型10例(9.6%),弱D15型5例(4.8%),DEL RHD 1227A杂合型2例(1.9%),RhD阳性2例(1.9%),2例(1.9%)不能用此PCR-SSP方法确定其基因型。结论 RhD阴性围产期妇女的RHD基因型分子机制具有丰富的多态性,主要为RHD全缺失型,其...     

人RHD基因外显子多态性研究

目的 研究人RHD基因外显子多态性，探讨中国人RhD阴性个体遗传学机制。方法 用PCR-SSP法检测40例RhD( )、120例RhD(-)和2例弱D型样本的10个外显子。结果 40例RhD阳性和2例弱D型样本均检出R}tD基因的10个外显子，120例RhD阴性样本中28例样本的10个外显子全存在(占23．33％)，19例样本10个外显子部分存在(占15．83％)，大部分为中间缺失型，73例样本10个外显子全缺失(占60．83／％)。从120例RhD阴性样本中检出的19例Del型样本均能检出RHD基因的10个外显子。结论 RhD表型阴性个体的RHD基因外显子结构具有多态性．主要表现为RHD基因全缺失、RHD基因部分缺失、RHD基因不缺失3种。     

山东临沂地区RhD阴性无偿献血人群中RHD基因变异体的分析

目的 探讨临沂地区RhD阴性无偿献血人群RHD基因的变异体及其分子背景。方法 2011年采集24875人份全血,获得RhD初筛阴性标本111例,提取DNA后,采用序列特异性引物-多聚酶链反应(SSP PCR),进行以下三步实验：① 检测出缺失RHD基因的RhD阴性、DEL1227G＞A突变以及其他变异体;② 鉴定其他变异体的具体类型;③ 对有突变位点未检出型别的变异体进行测序。结果 临沂地区无偿献血人群中RhD阴性比例为0.45%,在111例RhD初筛阴性标本中,检测到1～10外显子全缺失76例,2～9外显子缺失9例,845G＞A突变3例,3～6外显子缺失3例,1227G＞A 突变18例,RHD(711DELC) 1例,Dva(Hus)1例。结论 临沂地区常规血清学筛查RhD阴性无偿献血人群中RHD基因存在多态性。     

RhDel表型与RHEC表型的相关性研究

目的分析广东汉族人群RhD阴性个体中,RhDel表型个体RHEC表型的分布情况和两者的相关性,以及PCR—SSP技术在RhDel基因检测中的应用价值。方法对400份广东汉族人群中血型血清学检测为RhD阴性的标本。采用血型血清学方法对RhDel表型和RHEC表型进行检测,并采用PCR—SSP方法进行RHD1227G〉A基因检测。结果在400份RhD阴性标本中,89例（22．25％）检测到RhDel表型,主要分布在CCee、CeEe和Ccee表型的个体,在CCEe、ccEE、ccEe和ccee表型中未发现。在RhDel表型的标本中,同时检测到RHD1227G〉A基因。结论RhDel表型与RHEC表型具有一定的相关性;应用PCR—SSP技术能够对RhDel基因进行检测;与传统的间接抗人球蛋白实验和吸收放散实验相比,PCR．SSP技术能够快速、便捷筛查RhDel献血者和受血者,避免抗．D抗体引发的同种免疫反应和RhD阴性血液的浪费。     

新疆和田地区维吾尔族、汉族人群Rh血型分布调查与比较

目的对和田维吾尔族和汉族人群的Rh血型分布进行调查并与既往的维吾尔族Rh血型调查资料进行比较分析。方法采用流行病学方法普查2 907人Rh血型,其中维吾尔族2251人、汉族656人。对ABO血型采用正定玻片法、Rh血型采用血清学盐水介质法测定,另外对RhD阴性个体检测Rh血型血清学表型。结果共检出106例RhD阴性个体,RhD阴性率为4.71%, D基因频率为0.217,其Rh表型除1例为ccdEe型外其余为ccdee型。维吾尔族RhD阴性个体的ABO血型与随机抽取维吾尔族个体的ABO血型的比较结果显示,RhD阴性个体中B型者偏高、而A、O型者偏低。结论维吾尔族的Rh血型的基因频率较高,且Rh表型具有特殊性。     

中国人群真实RhD阴性个体和RhDel型RHD基因研究

为观察中国人群真实RhD阴性个体和RhD^el型RHD基因存在情况，采用常规盐水法和抗人球蛋白试验筛选RhD阴性捐血者，通过吸收放散试验性确定其中RhD^el和真实RhD阴性，并采用PCR技术检测RHD基因第4内含子，对吸收放散试验结果与基因检测结果不符的样本进一步采用序列特异性引物PCR(PCR-SSP)技术测定RHD基因第3，4，5，6，7，9和10个外显子，观察基因变异。筛选获得104名RhD阴性捐血者，吸收放散试验鉴定25名（24.0％）为RhD^el型，79名（76.0％）为真实RhD阴性；25例RhD^el全部检测到D基因exon4-intro4-exon5区域，79名真实RhD阴性个体中有5名（6.3％）个体（2名Ccdee，2名ccdEe）检测到D基因第4内含子；PCR-SSP结果显示5名个体中，4名存在全部被检测的D基因区域，1名个体（ccdEe）第5外显子检测阴性。结果表明抗人球蛋白试验确认的RhD阴性中国人存在高比率的RhD^el型，且均可检测出RHD基因第4内含子；若排除RhD^el，携带D基因的RhD阴性中国人的比率明显降低，且这些个体并非如经往报道的均为C抗原阳性。     

新疆和田地区维吾尔族、汉族人群Rh血型分布调查与比较

目的 对和田维吾尔族和汉族人群的Rh血型分布进行调查并与既往的维吾尔族Rh血型调查资料进行比较分析。方法 采用流行病学方法普查2907人Rh血型，其中维吾尔族2251人、汉族656人。对ABO血型采用正定玻片法、Rh血型采用血清学盐水介质法测定，另外对RhD阴性个体检测Rh血型血清学表型。结果 共检出106例RhD阴性个体，RhD阴性率为4．71％，D基因频率为0．217，其Rh表型除1例为ccdEe型外其余为ccdee型。维吾尔族RhD阴性个体的ABO血型与随机抽取维吾尔族个体的ABO血型的比较结果显示，RhD阴性个体中B型者偏高、而A、O型者偏低。结论 维吾尔族的Rh血型的基因频率较高，且Rh表型具有特殊性。     

蚌埠地区124例RhD阴性献血者的RHCE表型及DEL型的分布与基因研究

目的研究蚌埠地区RhD阴性献血者的RHCE表型,DEL的表型、分布和RHD基因的外显子存在情况。方法通过使用抗-D（IgM）试剂筛查出RhD（IgM）阴性献血者;再使用3个厂家或不同批号的抗-D（IgG）试剂,经间接抗人球蛋白试验（IAT）确认RhD阴性样本;然后采用吸收放散试验筛选其中的DEL型,同时检测其表现型,并对15份DEL型样本采用PCR方法进行基因扩增和产物分析。结果124例RhD阴性献血者中ccee表型为77例（62．1％）,Ccee为38例（30．6％）,CCee为8例（3．3％）,ccEe为1例（0．1％）;DEL型共15例占RHD阴性样本的12．1％,其中ccee2例,Ccee11例,Ccee2例;并检测出15例DEL型样本的5、4、5、6、7、9、10共7个特异性外显子。结论蚌埠地区RhD阴性献血者中Rh表型存在多态性,eeee表型的比例达62．1％;DEL型的比例低于相关报道,DEL型具有全部RHD基因外显子。     

8例Rh Del型研究

目的：了解常规血清学试验为RhD阴性者中RhDel(D极弱型）的情况,并探讨其临床价值。方法：采用PCR-SSP技术,检测33例常规血清学试验为RhD阴性,18例为RhD阳性样本的D基因外显子。并对33例RhD阴性样本进行吸收放散试验。结果：33例RhD阴性样本D基因外显子有8例无缺失、5例部分缺失、20例完全缺失,其中8例无缺失样本可以吸收并放散出D抗体,为RhDel型。18例RhD阳性样本D基因无缺失。结论：RhDel型常规血清学试验易被误认为RhD阴性,其D抗原虽然表达极弱,但外显子无缺失。提示凡常规血清学方法检测为RhD阴性的供血者,必须进一步作吸收放散试验作Del排除,以确保输血安全。     

人RHD基因外显子多态性研究

目的 研究人RHD基因外显子多态性,探讨中国人RhD阴性个体遗传学机制。方法 用PCR-SSP法检测40例RhD(+)、120例RhD(-) 和2例弱D型样本的10个外显子。结果 40例RhD阳性和2例弱D型样本均检出RHD 基因的10个外显子,120例RhD阴性样本中28例样本的10个外显子全存在(占23.33%),19例样本10个外显子部分存在(占15.83%),大部分为中间缺失型,73例样本10个外显子全缺失(占60.83/%)。从120例RhD阴性样本中检出的19例Del型样本均能检出RHD 基因的10个外显子。结论 RhD表型阴性个体的RHD基因外显子结构具有多态性,主要表现为RHD基因全缺失、RHD基因部分缺失、RHD基因不缺失3种。     

新乡地区Rh阴性无偿献血者Rh表型分布及RhD变异型基因型分析

目的 分析新乡地区Rh阴性无偿献血者Rh表型分布及RhD变异型基因型。方法 选择2018年1月至2019年12月于新乡市中心血站无偿献血的110 667名无偿献血者为研究对象。采用试管法ABO正反定型试验检测ABO血型，采用试管法Rh抗原分型试验检测Rh表型并初筛RhD阴性受试者，采用间接抗人球蛋白试验对初筛RhD阴性受试者进行RhD阴性确认，并检出RhD变异型受试者。采用聚合酶链式反应法扩增RhD变异型受试者RHD基因外显子E1～E10,将扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳，观察相应的外显子区域有无特异性条带出现。采用Sanger测序法对RhD变异型受试者的RHD基因外显子E1～E10的特异性扩增产物进行基因测序，应用SeqMan软件分析基因序列，根据单核苷酸多态性位点确定RhD变异型。结果 110 667名受试者中，初筛RhD阴性269例(0.24%)。269例初筛RhD阴性受试者中，Rh阴性256例(95.17%),RhD变异型13例(4.83%)。256例RhD阴性受试者中，ABO血型为A型78例(30.47%)、B型92例(35.94%)、O型64例(25.00%)、AB型22例(8...     

RhD阴性患者的弱D、DEL的分布及RhCE表型分析

目的:研究RhD阴性患者的弱D、DEL的分布比例,并对RhCE的表型进行分析。方法:选取常规血清学方法初筛RhD阴性的标本,用抗人球蛋白试验检测弱D,阴性情况下应用吸收放散试验检测DEL。结果:在129例RhD阴性患者标本中经抗人球蛋白试验确认为弱D型者9例(6.9%),其表型分别为ccDuee型5例,CcDuee型3例,ccDuEe型1例。经吸收放散试验确认为Del者24例(18.6%),其表型分别为CcDELee型12例,CcDELEe型7例,CCDELee型2例,CCDELEe型3例。结论:在采集的初筛为RhD阴性的标本中,DEL阳性标本所占的比例高,应引起重视,其RhCE表型比例符合相关文献报道。故于常规血清学检测RhD阴性者,应当再用抗人球蛋白试验及吸收放散试验检测是否为弱D及DEL。     

1例Rh抗原变异体分子机理研究

目的:研究RhD抗原阳性(变异)、产生IgG-D抗体致新生儿溶血病个体的RHD基因结构。方法:采用常规血清学方法,检测1例RhD抗原,鉴定个体体内引发新生儿溶血病抗体的性质。采用PCR-SSP方法检测分析RHD/RHCE基因。结果:RhD抗原检测符合部分D类,体内存在IgG-D抗体。基因分析发现RHD与RHCE基因交换形成一种新的RHD-CE(3~6)-D融合基因。RHD杂合性试验显示为RHD /RHD-。结论:该个体Rh血型为RH DVIⅢ型(部分D类)。     

RhD阴性个体遗传多态性与抗-D同种免疫关系研究

目的：研究血清学RhD阴性个体的基因多态性与抗-D同种免疫的关系,探讨不同基因型个体的个性化输血策略。方法用盐水法及间接抗人球方法（IAT）确定RHD阴性个体,采用序列特异性引物（SSP-PCR）技术分析样本的RHD基因同时进行抗体筛选和抗体鉴定确定产生抗-D的样本。结果在有免疫史的336例入组者样品中,249例（74.1%）个体完全缺失RhD基因,l68例（20.2%）个体携带RHD1227A等位基因,19例（5.6%）携带RHD-CE（2-9）-D融合基因。抗体鉴定产生IgG抗-D的个体68例,63例（92.6%）完全缺失RhD基因,5例（7.4%）携带RHD-CE（2-9）-D融合基因,携带RHD1227A等位基因未检出产生抗-D的个体。结论血清学确定RhD阴性个体的RHD基因型具有丰富的多态性和不同的遗传学背景。真实RhD阴性和部分D个体有D抗原免疫时存在同种免疫风险,作为受血者应输用阴性血。基因型为RHD1227A患者不会产生抗-D,在输血时可输用阳性血。     

番禺地区RhD阴性献血者Del表型的基因分型研究

目的 研究分析番禺地区RhD阴性献血者Del表型的基因分型特征.方法 采用120孔微量板法对参加无偿献血的样本进行RhD阴性筛查;采用抗人球蛋白法进行确认,采用吸收放散实验进行Del表型筛选;采用RH基因变异体基因分型检测试剂盒(PCR-SSP法)对确认阴性样本进行RH DEL基因分型.结果 在26 172例献血者中筛选出60例RhD阴性,经确认59例为RhD阴性,阴性频率为0.23％;吸收放散实验检出10例Del表型;基因分型检测出10例RHD 1227A DEL基因型.结论 番禺地区RH DEL发生频率约为16.9％(10/59),以RHD 1227A DEL为主.吸收放散实验联合PCR-SSP法检测,能进一步提高RH DEL鉴定的准确性.