洛阳地区无偿献血人群中疱疹病毒8型的检测

目的 了解洛阳地区无偿献血人群中疱疹病毒8型(human herpesvirus 8,HHV-8)的感染情况.方法 采用荧光定量PCR法检测外周血单核细胞中HHV-8 DNA,同时采用ELISA方法检测血清中HHV-8抗体.结果 480份无偿献血者标本血清中HHV-8 DNA检出率为6.7％ (32/480),HHV-8抗体检出率为6.5％(31/480);HHV-8 DNA和HHV-8抗体的检出率有随年龄增加而增高的趋势.结论 洛阳地区无偿献血人群中存在有一定比例的HHV-8感染者,建议对无偿献血者增加HHV-8感染筛查.     

鼻咽癌组织DNA聚合酶β基因突变与EBV感染相关

目的: 研究探讨鼻咽癌中DNA聚合酶β(DNA polymerase β, polβ)的变异情况及与EBV感染有无相关关系. 方法: 采用RT-PCR法(逆转录-DNA聚合酶链反应)、PCR-SSCP(聚合酶链-单链构象多态性分析)、DNA序列分析法对26例鼻咽癌组织及癌旁组织标本进行polβ基因突变研究. 用特异性EBV引物PCR扩增法检测EB病毒,分析出现EBV-PCR阳性与polβ突变及鼻咽癌发生之间的相关性. 结果: polβ-SSCP结果显示癌旁组织标本中polβ无突变;26例鼻咽癌组织标本中存在polβ基因变异的有8例,突变率为30.8%. polβ基因变异的鼻咽癌标本测序结果显示:核苷酸序列有多种形式的改变. 提取DNA用EBV引物进行扩增,26例鼻咽癌标本中出现阳性的有24例,阳性率为92.3%. 结论: 首次发现在鼻咽癌中存在多种形式的polβ突变,有polβ突变的病例均有EBV感染.     

百色市献血者中人类疱疹病毒8型病毒DNA的PCR检测

目的聚合酶链反应检测百色市献血者中人类疱疹病毒8型的感染。方法取-80℃冻存的献血者肘静脉血679份,其中男性356份,女性323份。提取DNA,PCR法扩增血液标本中的HHV-8 DNA,PCR产物经1.2%琼脂糖凝胶电泳,出现369bp条带者为阳性。结果 679份血液标本中有9份标本检出HHV-8 DNA,阳性率为1.33%。其中356份男性献血者的血液标本中检出阳性标本5份,阳性率为1.40%;323份女性献血者的血液标本中检出阳性标本4份,阳性率为1.24%。χ2检验分析男性与女性献血者之间的HHV-8 DNA检出率P>0.05。结论百色市献血者中存在HHV-8感染,不同性别献血者之间的感染率差异无显著性。     

荧光定量PCR检测献血人员外周血白细胞中人疱疹病毒DNA

目的 调查献血人员外周血白细胞中8种人疱疹病毒的DNA分布情况,为我国献血者健康标准要求的完善提供参考性实验数据.方法 收集献血人员外周血标本427例,分离外周血白细胞后提取DNA,使用Taqman探针法荧光定量PCR检测方法对8种疱疹病毒DNA的阳性率和病毒载量进行检测.结果 427例标本中未检测到单纯疱疹病毒1型(HSV1)、HSV2、水痘-带状疱疹病毒(vZv)和人疱疹病毒8型(HHV-8)的DNA,EB病毒(EBV)、人巨细胞病毒(HCMV)、HHV-6、HHV-7阳性率分别为51.4％、6.5％、50.6％、21.1％,其中HCMV、EBV和HHV-6均阳性的标本占6.5％,EBV和HHV-6均阳性的标本占25.1％,EBV与HHV-7均阳性的标本占4.0％,HHV-6和HHV-7均阳性的标本占6.9％.EBV、HCMV、HHV-6、HHV-7的病毒载量中位数分别为559、336、4 683、1 126 gqe/ml外周血.在不同性别和年龄组中EBV、HHV-6和HHV-7在三个年龄组中的检出率差异无统计学意义,但CMV的检出率随年龄的增加逐渐升高,差异有统计学意义(P＜0.05).市区与郊区人群相比EBV、HCMV、HHV-6和HHV-7的检出率均显著较低(OR=0.657、0.798、0.889、0.721,95％ CI:0.147 ～2.451、0.224～2.196、0.221 ～2.703、0.194 ～ 2.445,P ＜0.05).结论 在献血人员外周血白细胞中可以检出多种疱疹病毒DNA,提示我国献血者健康标准要适时考虑献血者疱疹病毒感染的情况.     

新疆Kaposi肉瘤与皮肤鳞状细胞癌感染HHV-8阳性率的比较研究

目的 探讨Kaposi肉瘤与皮肤鳞状细胞癌(SCC)感染人类疱疹病毒8型(HHV-8)的差异.方法 用巢式PCR分别扩增30例鳞状细胞癌和30例Kaposi肉瘤组织皮损中的HHV-8 DNA.结果 30例皮肤鳞状细胞癌皮损组织有5份为阳性(16.7%),30例Kaposi肉瘤组织有28份为阳性(93.3%).结论 鳞状细胞癌感染HHV-8的阳性率较低,但并不除外HHV-8为新疆皮肤鳞状细胞癌的病因之一.     

口腔鳞状细胞癌与人类疱疹病毒6型感染的相关性研究

目的:研究人类疱疹病毒6型(HHV-6)感染与口腔鳞癌的相关性?方法:用PCR和间接免疫荧光方法分别检测口腔鳞癌患者和健康志愿者唾液HHV-6 DNA和血清抗HHV-6 IgG抗体?免疫组化法检测口腔鳞癌组织及癌旁组织标本中HHV-6糖蛋白B(glycoprotein B,gB)抗原?结果:118份口腔鳞癌唾液标本中PCR阳性率为65.3%,高于正常人群的40%(P < 0.05)?HHV-6感染与患者病历资料无显著相关性?18份口腔鳞癌患者和20份健康人血清中HHV-6 IgG抗体的几何平均滴度分别为1∶102.17和1∶101.50(P < 0.05)?免疫组化法检测,11例口腔鳞癌标本中6例出现的阳性结果,胞质内出现弥散性的黄色颗粒,在癌巢内特异性浓集,而间质为阴性?8例相应癌旁组织中3例出现阳性染色结果,但阳性强度较癌组织弱且弥散?1例gB组化阳性肿瘤组织细胞经分离后接种裸鼠,移植瘤组织也检测到HHV-6抗原?结论:本研究说明HHV-6与口腔鳞癌的发生存在相关性,但不与患者临床资料分布相关?本研究亦提示荷瘤裸鼠作为HHV-6动物模型的可能性?     

人疱疹病毒6型感染与神经胶质瘤关系的初步研究

目的:研究人疱疹病毒6型(human herpesvirus-6,HHV-6)感染与神经胶质瘤的关系?方法:巢式PCR法检测40例神经胶质瘤样本和13例正常脑组织样本中HHV-6?人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)?HHV-7 DNA序列?免疫组化染色法检测神经胶质瘤样本和正常脑组织样本中HHV-6?HCMV?HHV-7抗原的表达?结果:巢式PCR法检测结果显示,神经胶质瘤组织HHV-6 DNA阳性率为42.5%,正常脑组织HHV-6 DNA阳性率为7.7%(P = 0.020),神经胶质瘤组织HCMV?HHV-7 DNA阳性率分别为20.0%和5.0%,正常脑组织未检测到HCMV和HHV-7 DNA(P值分别为0.087和0.566)?进一步用免疫组化染色法检测HHV-6早期抗原p41的表达,神经胶质瘤组织阳性率为27.5%,正常脑组织未见阳性表达(P = 0.030)?同时检测HHV-6晚期抗原gp116/64/54的表达,神经胶质瘤组织阳性率为32.5%,正常脑组织未见阳性表达(P = 0.014)?用HCMV pp65抗体进行免疫组化染色后发现其在神经胶质瘤中阳性率为12.5%,正常脑组织未见阳性表达(P = 0.229)?HHV-7 pp85抗原在神经胶质瘤样本和正常脑组织样本中均未检出阳性表达?结论:根据PCR和免疫组化的检测结果,HHV-6感染在神经胶质瘤和正常脑组织中具有显著性差异,HHV-6感染在神经胶质瘤的病因和发展过程中起了一定作用?     

献血者EBV、HHV-6和HHV-7 DNA检测对输血意义

目的 了解青岛地区献血者单个核细胞（PBMC）和唾液标本中EB病毒（EBV）、人疱疹病毒6型（HHV6）和人疱疹病毒7型（HHV-7）的感染情况。方法采用PCR-Southern blotting检On,4109名健康无偿献血者外周血PBMC和唾液标本中EBVDNA,巢式PCR技术检测HHV-6和HHV7DNA,限制性酶切分析分别对HHV6、HHV-7进行分型和鉴定。结果109名献血者外周血PBMC中EBVDNA检出率为21．10％（23／109）,HHV-6DNA检出率为50．46％（55／109）,HHV-7DNA检出率为57．80％（63／109）。唾液标本中EBV、HHV-6和HHv7DNA检出率分别为24．77％（27／109）、66．06％（72／109）和90．83％（99／109）。PBMC中EBV、HHV-6和HHV-7均阳性者7例,占6．4％;唾液标本中均阳性者17例,占15．6％。酶切分析结果显示,55例献血者外周血PBMCHHV-6阳性标本中HHV-6A型占18．2％（10／55）,HHV -6B型占81．8％（45／55）;72例唾液HHV-6阳性标本中HHV6A型占16．7％（12／72）,HH~6B型为83．3％（60／72）。结论外周血PBMC和口咽部上皮细胞是EBV、HHv6和HHV-7潜伏的重要部位,献血员中存在上述病毒的共感染。     

人类疱疹病毒-8与嗜伊红性淋巴瘤样增生无相关性

背景:嗜伊红性淋巴瘤样增生(ALHE)是一种血管感染性皮损,典型皮疹好发于头颈部,由单一或多个红丘疹或结节组成,ALHE的病因属反应性或肿瘤性尚不清楚。文献报道多数卡波济肉瘤患者有人类疱疹病毒-8(HHV-8)DNA表达,也有相反的数据表明该病毒与ALHE无关。方法:对23例组织学证实为ALHE的患者石蜡包埋皮损组织进行HHV-8免疫组织化学检测,还对其中的14例患者进行HHV-8DNA的聚合酶链反应法(PCR)测定,并对这两种方法进行对照。结果:23例用免疫组化方法测定的ALHE患者HHV-8结果均为阴性,14例进一步应用PCR分析的结果也不能肯定为H…     

类风湿性关节炎患者关节炎支原体的感染状况

目的：了解类风湿性关节炎(RA)患者关节炎支原体(Mar)的感染状况。方法：用套式聚合酶链反应(nPCR)法对本院2001年1月—2002年9月72例RA患者的咽拭子、睑结膜拭子、尿道拭子以及血液和关节液标本中的Mar核酸进行检测，并测定阳性株的DNA序列。结果：在48例咽拭子、37例睑结膜拭子、19例尿道拭子以及48例血液标本和26例关节液标本中，各检出1例阳性株，阳性率分别为2．1％、2．7％、5．3％、2．1％和3．8％。上述5例Mar nPCR阳性株的DNA序列与国际典型株完全一致。结论：RA患者体内存在Mar感染。     

Detection of human herpesvirus 8 DNA in acute leukemia patients

目的　了解人类疱疹病毒 8型 (HHV 8)在急性白血病 (AL)患者的感染情况。方法　采用聚合酶链反应 (PCR)法对 5 0例AL患者的外周血单个核细胞 (PBMC)和骨髓单个核细胞 (BMMC)、30例健康献血员的PBMC以及 9株人血源细胞系进行HHV 8DNA特异序列的检测。结果　 5 0例被检测AL患者中 ,一例急性髓系白血病 (AML)检出HHV 8DNA ,该患者的骨髓、外周血和血清均为阳性。在所检测的健康献血员和人血源细胞系中未发现HHV 8DNA。结论　中国AL患者中HHV 8的感染率很低。     

献血员、肝炎患者TTV DNA检测及部分TTV基因序列分析

目的了解献血员、肝炎患者中的输血传递病毒(TTV)感染状况及基因型别。方法设计合成引物采用半套式聚合酶链反应（hemi-nestPCR）方法,对195份献血员血清、72份不同型别的肝炎患者血清进行了TTVDNA的PCR检测,并对部分阳性株进行序列测定及计算机分析。结果①在血清丙氨酸转氨酶（ALT）异常,HBsAg及抗HCV阴性的99份献血员血清标本中,检出TTVDNA阳性标本36份,阳性检出率为36.3%;而在ALT正常的96份献血员血清标本中,检出TTVDNA阳性标本16份,阳性检出率为16.6%,明显低于ALT异常献血者。②在72例不同肝炎患者中,共检出39例TTVDNA阳性血清,总检出率为54.16%,在非甲-非庚型肝炎患者中TTVDNA阳性率为87.5%,而在明确诊断为甲-庚型肝炎的患者中TTVDNA阳性率为50%,两组相比差异显著（P<0.05）。对8株阳性株序列分析结果显示,测序的8个分离株与9个G1、G2代表株核酸的同源性为60.4%～99.1%,氨基酸的同源性为55.4%～98.6%。经系统发育分析表明,这8个TTV分离株中有7株可分属于G1、G2两个基因型的5个亚型,而另1株为G1型的新亚型。结论①献血者中存在TTV感染,提示TTV可以导致感染个体的肝功能异常,TTV可能与HBV感染相似,亦存在“健康携带状态”。②非甲-非庚型肝炎患者的TTV感染率明显高于明确病原的甲-庚型肝炎患者,TTV感染与肝炎有关,可能是非甲-非庚型肝炎的病原之一。③8个TTV分离株中7个分属于G1、G2两个基因型中的5个亚型,另有1株为G1型的新亚型。     

青岛地区人疱疹病毒6型毒株的分离与初步鉴定

①目的分离培养人疱疹病毒6型(HHV-6)青岛地方株并进行初步鉴定。②方法取20例青岛地区健康献血员唾液标本，接种至预激活的脐带血单个核细胞(CBMC)中进行病毒分离培养。出现典型细胞病变(CPE)的标本采用电镜观察，并提取病毒DNA，应用聚合酶链反应(PCR)扩增HHV-6基因组保守区特异性片段，然后应用限制性核酸内切酶技术进一步鉴定。③结果唾液分离培养得到1例具有典型CPE的标本，电镜观察显示细胞内存在具有疱疹病毒特征的病毒颗粒，酶切产物电泳结果显示66bp和97bp两条带，初步鉴定为HHV-6B毒株。④结论成功分离培养得到1例HHV-6青岛地方株，为进一步研究青岛地区HHV-6的流行及致病性奠定了实验基础。     

HHV-8 ORF50启动子区序列分离、鉴定及在293细胞中启动活性分析

目的：分离和鉴定人类疱疹病毒8型(HHV-8)ORF、50基因上游启动子区序列，评价其在293细胞中启动活性。方法：以佛波酯(TPA)刺激的BCBL-1细胞总DNA为模板，PCR扩增HHV-8 ORE50启动子区序列，克隆进pGL-3基本载体中虫荧光素酶(Luciferase)报告基因上游多克隆位点，分别构建含正反双向ORE50启动子重组报告质粒，并分别转染293细胞，作Lu-ciferase活性检测，计算相对Luciferase活性单位(RLU)。结果：①克隆的HHV-8 ORF50启动子区序列长655碱基(bp)，含多个潜在推测AP1、SP1和ERE等转录因子结合序列；②ORF50启动子与正常pGL-3基本载体相比，其RLU增加了26．3倍；③TPA刺激后ORF50启动子与刺激前相比启动活性增加了4．1倍。结论：HHV-8 ORF50启动子区序列在293细胞中具有较强的启动活性；TPA可以作为一有效的阳性对照刺激物用于进一步鉴定ORF50启动子特性。     

基于HIV检测分析对无偿献血人群HIV筛查策略及归队的探讨

目的 对陕西省域内无偿献血者进行人类免疫缺陷病毒（human immunodeficiency virus,HIV）检测,分析省域内无偿献血人群HIV流行情况,以期为制定适宜的血液筛查策略和献血者归队方法提供数据与理论依据。方法 选定有区域代表性的陕西省西安市、延安市与安康市3家中心血站的无偿献血者血液样本进行2种四代酶联免疫吸附试验（enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）和病毒核酸检测（nucleic acid testing,NAT）HIV,将所有检测呈反应性的样本进行确证试验。结果 对290 341例无偿献血者进行HIV筛查,总计352例初检结果为不合格（含1例ELISA-/NAT+有反应性）,筛查反应率0.12%;所有样本送至属地市疾控中心检测,最终确证阳性11例（含核酸检测阳性1例）,确证阳性符合率3.79/10万。结论 陕西省域内无偿献血者中HIV阳性符合率低,提示目前无偿献血者HIV的血液筛查策略有待改进,同时也为献血者归队提供一定的理论支持。     

不同采血模式无偿献血者HBsAg阳性率的调查

目的了解2002～2007年柳州市149035名无偿献血者血液HBsAg感染状况和民族分布,以确保输血安全和保护受血者利益。方法使用ELISA法对2002～2007年33个民族149035名无偿献血者进行HBsAg测定。结果检测无偿献血者149035人次,不合格1762人次,HBsAg阳性率为1．18％,不同采血模式无偿献血者血清学样本HBsAg阳性率比较有显著性差异。模式2中首次献血者血清样本HBsAg阳性率为1．57％。重复献血者血清样本HBsAg阳性率为0．62％,两者比较有显著性差异;但模式1中两者比较无统计学意义。结论严格无偿献血者HBsAg检测,对减少医疗纠纷的发生,避免输血后感染起到重要作用。     

2012～2013年广州市人感染恙虫病东方体基因型分析

目的了解广州市人感染恙虫病东方体基因型的分布及特点。方法收集2012~2013年广州市恙虫病临床诊断病人全血,测定型特异性抗原基因部分序列,并进行基因序列同源性及系统进化分析。结果 133份标本中检测到40份阳性,其中Karp型21株,Kato型10株,Gilliam型5株,TA763型3株,未知型别1株。同源性分析显示其传播来源可能与台湾、日本、泰国等有关。结论广州市恙虫病东方体流行型别具多样性,来源复杂,开展更多分子流行病学研究将有助于其防控。     

无偿献血血液不同筛查模式应用效果研究

目的评价临床用血血样不同筛查模式的应用效果，以降低无偿献血血液报废率，提高临床输血安全性。方法对不同时期临床用血采用不同传染性救病筛查模式进行筛查，并考核其安全性。结果自1997年开始，按照国家规定，临床用血安全性筛查项目包括HbsA异、抗-HCV、ALT、梅毒和抗-HIV。1997年检测个体卖血血样3442份，报废血样3份，报废率为0．08％。无偿献血血样28650份，报废血样4077份，报废率为14．23％；1998～2002年检测无偿献血血样206948份，报废血样12479份，报废率下降到6．03％：2003年检测无偿献血血样44529份，报废血样1465份，报废率再次下降到3．29％；2004年起对16592例无偿献血HBsA异、抗-HCV、抗-HIV ELISA方法检测阴性的标本进行PCR法复检，重新发现HBsA异阳性标本8例，为0．048％。结论对无偿献血者采血前进行快速筛查，能有效降低无偿献血的报废率，提高临床用血安全性，减少临床用血安全事故发生。     

献血者中TTV感染情况调查及部分序列分析

目的调查了解淮阴地区献血者中一种新的肝炎相关病毒——TTV的感染情况.方法用巢式聚合酶链反应(nest-PCR)技术对淮阴地区220名专业献血者进行血清中输血传播病毒(TTV)的检测,并在PUC18中对其开放读码框2(ORF2)基因进行了克隆.结果序列分析表明,该序列与国内外发现的TT病毒AB008394(日本株)、AF079173(中国河北株)对应位置核苷酸同源性为98%和97%,献血者中TT病毒阳性率为18%.结论病毒ORF2基因高度保守,献血者中有较高的TTV感染率.